检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物检疫 2022年第8期39卷 112-119页

作者：侯丽娜于明华刘春羽赵洪哲郑秉武温永俊王凤雪内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 呼和浩特市动物园内蒙古呼和浩特010050

为获得牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gI蛋白单克隆抗体,构建了gI截短基因重组原核表达质粒pET-32a-gI,并对其进行了诱导表达和纯化,通过SDS-PAGE和Western blot验证了gI蛋白在大肠杆菌内的表达... 详细信息

为获得牛传染性鼻气管炎病毒(infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gI蛋白单克隆抗体,构建了gI截短基因重组原核表达质粒pET-32a-gI,并对其进行了诱导表达和纯化,通过SDS-PAGE和Western blot验证了gI蛋白在大肠杆菌内的表达情况。将纯化的gI蛋白免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合、筛选及亚克隆,得到针对IBRV gI蛋白的单克隆细胞株gI14。利用体内诱生法制备抗IBRV gI蛋白单克隆抗体腹水,使用Western blot和间接免疫荧光(IFA)对单克隆抗体特异性进行检测和验证。Western blot结果显示:原核表达的gI融合蛋白相对分子质量为34 ku,gI蛋白单克隆抗体与gI表达蛋白反应性良好,与pET-32a(+)空载体蛋白无特异性结合;天然表达的gI蛋白相对分子质量为45 ku,gI蛋白单克隆抗体与细胞内感染的IBRV所表达的gI蛋白反应性良好。IFA结果显示,gI蛋白单克隆抗体及阳性对照组IBRV多抗均能与细胞内感染的IBRV发生特异性结合,使细胞出现特异性绿色荧光信号,而空白及阴性对照组均未见绿色荧光信号。结果表明,本研究基于高效表达的gI蛋白,成功制备了1株能稳定表达gI单克隆抗体的细胞株gI14,获得的gI蛋白单克隆抗体与原核表达的gI蛋白及IBRV全病毒均能特异性结合,这为进一步研制IBRV诊断试剂盒及探究IBRV gI蛋白抗原表位及蛋白功能奠定了基础。

关键词：牛传染性鼻气管炎病毒 gI蛋白原核表达单克隆抗体

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胆酸对代谢性炎症模型大鼠糖及脂代谢的影响

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黑龙江畜牧兽医 2021年第13期 109-115页

作者：孙苗何秀玲石琳琳牛春宇郝普国李培锋内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 鄂尔多斯生态环境职业学院内蒙古鄂尔多斯017010

为探讨胆酸对代谢性炎症模型大鼠糖及脂代谢的影响,试验用饲喂60 d高脂饲料的48只SD大鼠建立代谢性炎症模型,均分为模型组和胆酸高(150 mg/kg)、中(50 mg/kg)、低剂量(16.7 mg/kg)组,连续灌胃给药30 d,并以饲喂基础饲料的12只SD大鼠作... 详细信息

为探讨胆酸对代谢性炎症模型大鼠糖及脂代谢的影响,试验用饲喂60 d高脂饲料的48只SD大鼠建立代谢性炎症模型,均分为模型组和胆酸高(150 mg/kg)、中(50 mg/kg)、低剂量(16.7 mg/kg)组,连续灌胃给药30 d,并以饲喂基础饲料的12只SD大鼠作为阴性对照组,分别在停药第1天、第3天检测葡萄糖耐量及胰岛素耐量,停药第5天测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)活性,白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、总胆酸(TBA)、胆固醇(CHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)含量,计算大鼠增重率,测定脂肪湿重(WAT)并计算脂肪系数。结果表明:与阴性对照组相比,模型组增重率、脂肪系数、WAT、TG含量极显著升高(P<0.01)、ALP活性显著升高(P<0.05);与模型组相比,胆酸高剂量组增重率、WAT、FFA、TG含量极显著降低(P<0.01),胆酸中、低剂量组的ALP活性及FFA含量显著降低(P<0.05),胆酸中剂量组的增重率显著降低(P<0.05)。给予葡萄糖120分钟时,模型组血糖值较阴性对照组显著上升(P<0.05),而较胆酸高、中、低剂量组极显著降低(P<0.01)。腹腔内注射胰岛素后120分钟时,模型组血糖值较阴性对照组显著上升(P<0.05),胆酸高剂量组血糖值较模型组显著降低(P<0.05)。说明高剂量胆酸对代谢性炎症模型大鼠起到降脂、抑制体重增长并改善胰岛素敏感性的作用。

关键词：胆酸代谢性炎症脂代谢糖代谢胰岛素耐量葡萄糖耐量

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科右翼前旗地区绵羊消化道线虫感染调查及耐药性检测

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中国兽医杂志 2021年第7期57卷 29-32,37页

作者：王腾宇翟帅王强林洋毛晓伟呼和巴特尔王文龙内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区科右翼前旗动物疫病预防控制中心内蒙古科右翼前旗137705

为了解科右翼前旗地区绵羊消化道线虫流行情况及对常用驱虫药物的耐药性情况,采用饱和盐水漂浮法和麦克马斯特氏计数法对该地区11个苏木乡镇、2个国营农牧场的1334只绵羊进行调查研究,并选择234只高感染率,即每克粪便虫卵数(EPG)≥800... 详细信息

为了解科右翼前旗地区绵羊消化道线虫流行情况及对常用驱虫药物的耐药性情况,采用饱和盐水漂浮法和麦克马斯特氏计数法对该地区11个苏木乡镇、2个国营农牧场的1334只绵羊进行调查研究,并选择234只高感染率,即每克粪便虫卵数(EPG)≥800的绵羊进行耐药性检测。调查结果显示,该地区羊群感染消化道线虫现象普遍,共检到捻转血矛线虫、夏伯特线虫、奥斯特线虫、细颈线虫、食道口线虫、毛圆线虫和仰口线虫共7种线虫,感染率分别为90.4%、27.7%、19.1%、8.1%、14.5%、9.0%和6.5%,优势虫种为捻转血矛线虫,耐药性试验检测表明,虫体对伊维菌素和阿苯达唑均已产生了耐药性,对氯氰碘柳胺钠相对敏感。

关键词：消化道线虫耐药性绵羊科右翼前旗

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伪狂犬病病毒gB和gE蛋白重组表达及抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国动物传染病学报 2022年第1期30卷 98-105页

作者：张洪亮郝占武解倩倩王凤雪张志韩先杰单虎温永俊青岛农业大学动物医学院山东省新兽药创制协同创新中心青岛市兽医生物技术工程研究中心青岛266109 内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 中国动物卫生与流行病学中心青岛266032

本研究利用PCR扩增伪狂犬病病毒(PRV)Bartha-K61株gB基因核心抗原区和闵A株gE基因核心抗原区,构建了重组质粒pET-32a-gB和pET-32a-gE,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导进行表达。SDS-PAGE分析表明,pET32a-gB蛋白分子... 详细信息

本研究利用PCR扩增伪狂犬病病毒(PRV)Bartha-K61株gB基因核心抗原区和闵A株gE基因核心抗原区,构建了重组质粒pET-32a-gB和pET-32a-gE,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导进行表达。SDS-PAGE分析表明,pET32a-gB蛋白分子量约为44 kDa,pET32a-gE蛋白分子量约为41 kDa。分别以gB和gE重组蛋白作为包被抗原,建立了PRV抗体间接ELISA检测方法。该方法中重组蛋白仅与PRV阳性血清发生特异性反应,检测敏感性可达到1∶1600,批内重复性和批间重复性变异系数均小于10%。本研究建立的间接ELISA方法可用于PRV抗体的监测,鉴别疫苗免疫抗体和野毒感染抗体,有利于猪伪狂犬病净化工作。

关键词：猪伪狂犬病病毒 gB基因 gE基因蛋白表达间接ELISA

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不同耐伊维菌素捻转血矛线虫国内分离株耐阿苯达唑特性

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中国兽医学报 2021年第7期41卷 1301-1309,1347页

作者：罗晓平王鹏龙李军燕杨晓野耿万恒冯新港刘威李超刘阳王瑞内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区农牧业科学院内蒙古呼和浩特010031 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

为了解捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)耐伊维菌素(ivermectin,IVM)国内分离株是否同时存在对阿苯达唑(albendazole)的双重耐药性,本试验通过虫卵孵化幼虫试验和Ⅰ型β微管蛋白基因多态性分析方法,对实验室已分离保存的4个耐伊维菌... 详细信息

为了解捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)耐伊维菌素(ivermectin,IVM)国内分离株是否同时存在对阿苯达唑(albendazole)的双重耐药性,本试验通过虫卵孵化幼虫试验和Ⅰ型β微管蛋白基因多态性分析方法,对实验室已分离保存的4个耐伊维菌素虫株及1个伊维菌素敏感虫株进行了阿苯达唑耐药性检测。结果显示,在虫卵孵化幼虫试验中,阿苯达唑对伊维菌素耐药株的EC_(50)值均大于0.1 mg/L,而对敏感株的EC_(50)小于0.1 mg/L。在阿苯达唑Ⅰ型β微管蛋白基因多态性分析试验中,所有耐伊维菌素分离株种群内有超过10%的个体携带198位点纯合耐药基因型;同时,还有超过10%的个体在198位点和200位点同时存在杂合子基因型;而在敏感分离株中,这2个指标均低于10%。结果表明,4个对伊维菌素耐药的捻转血矛线虫国内分离株对阿苯达唑同样耐药;而1个伊维菌素敏感分离株对阿苯达唑也敏感。

关键词：捻转血矛线虫阿苯达唑耐药性虫卵孵化幼虫试验 Ⅰ型β微管蛋白单核苷酸多态性

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枯草芽孢杆菌培养上清液对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响

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畜牧与饲料科学 2023年第5期44卷 8-14页

作者：白绥明辛雅明齐盟胡亮杨银凤内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 清涧县动物疫病预防控制中心陕西榆林718399 鄂尔多斯市动物疫病预防控制中心内蒙古鄂尔多斯017000 巴彦淖尔市农牧业科学研究所内蒙古巴彦淖尔015000

[目的]探究枯草芽孢杆菌培养上清液对绵羊瘤胃上皮细胞(ovine ruminal epithelial cells,ORECs)中绵羊β-防御素-1(sheepβ-defesin-1,SBD-1)表达的影响。[方法]采用Cell Counting kit-8(CCK-8)方法筛选对ORECs无明显毒性作用的枯草芽孢杆菌培养上清液刺激浓度范围与刺激时间范围。用筛选出的无明显毒性作用的不同浓度枯草芽孢杆菌对应的培养上清液刺激ORECs 8 h后,采用荧光定量PCR(qPCR)技术和酶联免疫吸附(ELISA)检测方法筛选枯草芽孢杆菌培养上清液诱导SBD-1表达的最佳刺激浓度,以该浓度枯草芽孢杆菌对应的培养上清液刺激ORECs不同时间,采用qPCR技术和ELISA检测方法确定枯草芽孢杆菌培养上清液诱导SBD-1表达的最佳刺激时间。[结果]①对ORECs无明显毒性作用的枯草芽孢杆菌对应的培养上清液浓度范围为10^(7)~10^(11) CFU/mL,刺激时间范围为2~24 h。②利用qPCR技术和ELISA检测方法筛选出最佳刺激浓度为10^(11) CFU/mL枯草芽孢杆菌对应的培养上清液。③以该浓度枯草芽孢杆菌对应的培养上清液刺激ORECs不同时间,采用qPCR技术和ELISA检测方法确定枯草芽孢杆菌培养上清液诱导SBD-1表达的最佳刺激时间为24 h。[结论]枯草芽孢杆菌培养上清液可以诱导ORECs SBD-1的表达。

关键词：绵羊瘤胃上皮细胞枯草芽孢杆菌培养上清液 β-防御素-1 荧光定量PCR

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金黄色葡菌球菌脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞免疫作用的影响

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中国畜牧兽医 2021年第8期48卷 3079-3086页

作者：张静钱英红张凯吴金迪刘博毛伟曹金山内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古自治区农牧业科学院呼和浩特010018

本研究旨在阐明金黄色葡萄球菌脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞免疫作用的影响,为金黄色葡萄球菌致病性研究提供理论参考。以金黄色葡萄球菌野生株SA113(WT SA113)和SA113 lgt::ermB脂蛋白表达缺失菌株(SA113Δlgt株)体外感染M1型小鼠... 详细信息

本研究旨在阐明金黄色葡萄球菌脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞免疫作用的影响,为金黄色葡萄球菌致病性研究提供理论参考。以金黄色葡萄球菌野生株SA113(WT SA113)和SA113 lgt::ermB脂蛋白表达缺失菌株(SA113Δlgt株)体外感染M1型小鼠骨髓源巨噬细胞,分为3组:空白对照组、WT SA113感染组(MOI:3∶1)、SA113Δlgt感染组(MOI:3∶1)。采用ELISA法检测M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、趋化因子(RANTES)和白细胞介素10(IL-10)的水平,实时荧光定量PCR检测Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)和含NLR家族Pyrin域蛋白3(NLRP3)基因的表达,免疫荧光法检测脂蛋白对M1型小鼠骨髓源巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌作用的影响。结果显示,与空白对照组相比,WT SA113感染组和SA113Δlgt感染组均可显著上调M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、RANTES、IL-10分泌量以及WT SA113感染组TLR2、NLRP 3基因表达水平(P<0.05),而TLR 4基因表达量显著降低(P<0.05);与WT SA113感染组相比,SA113Δlgt感染组M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中TNF-α、IL-1β、RANTES、IL-10分泌量以及TLR2(12 h除外)、NLRP 3基因表达水平显著降低(P<0.05)。免疫荧光结果显示,M1型巨噬细胞对SA113Δlgt株的吞噬作用显著低于对WT SA113株的吞噬作用(P<0.05)。综上,金黄色葡萄球菌的脂蛋白在M1型小鼠骨髓源巨噬细胞中主要通过激活TLR2和NLRP3受体,诱导细胞因子TNF-α、IL-1β、RANTES和IL-10的产生和释放。

关键词：金黄色葡萄球菌脂蛋白骨髓源巨噬细胞细胞因子

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致奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌Csa1A、Hlɑ和EsxA-B重组蛋白的表达及免疫效果的评价

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中国预防兽医学报 2021年第8期43卷 867-872页

作者：王宇段跃强李建云内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古华希生物科技有限公司内蒙古呼和浩特010111 内蒙古综合疾病预防控制中心内蒙古呼和浩特010031

为评价金黄色葡萄球菌(S. aureus)Csa1A、Hlɑ和EsxA-B蛋白的免疫保护作用,本研究构建了重组质粒p GEX-4T-2-Csa1A、pET-22b-Hlα、pGEX-4T-2-EsxA-B并分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导并利用相应层析柱纯化后,采用SDS-PAGE检测重组蛋白的表达。结果显示,获得了纯度较高的重组蛋白Csa1A(rCsa1A)、Hlɑ(r Hlɑ)和EsxA-B(r EsxA-B),纯度分别为89%、95%、85%,大小分别为54 ku、33 ku和39 ku。以纯化的r Csa1A、rHlɑ和rEsxA-B 60μg/只分别免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔14 d,采用间接ELISA法检测各组小鼠免疫后14 d的抗体效价。结果显示,3种重组蛋白免疫后均能刺激小鼠产生较高效价的抗体,三免后抗体效价分别为1:14 700(rCsa1A)、1:16 890(rHlɑ)、1:15 760(rEsxA-B)。利用5型NM2株(2×10^(7)cfu/只)、8型LZ145株(2×10^(7)cfu/只)、336型XJ44株(2×10^(7)cfu/只)3种血清型S. aureus分别经尾静脉注射攻菌,观察并统计各组小鼠的发病和死亡率,评价各重组蛋白的免疫保护率。结果显示,分别经原核表达了rCsa1A、rHlɑ和rEsxAB。攻菌后对照组小鼠全部死亡;3组重组蛋白免疫组96 h内死亡的小鼠在攻菌48 h后出现精神沉郁,食欲不振等症状,而存活小鼠未出现临床症状。r Csa1A、rHlɑ和rEsxA-B免疫组小鼠提供的抵抗NM2、LZ145、XJ44菌株攻击的保护率分别为60%、60%、50%;80%、70%、70%;50%、60%、60%,其中rHlα的免疫保护效果最佳,其对3种攻毒菌株提供的平均保护率为73.3%,是较为理想的亚单位疫苗候选抗原。以上结果表明,S. aureus rHlα能够刺激免疫小鼠产生抗体,对小鼠提供不同程度的保护力。本研究为奶牛乳腺炎S. aureus亚单位疫苗的研制和应用提供参考依据。

关键词：奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌 α-溶血素亚单位疫苗免疫原性免疫保护力

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绵羊肺腺瘤病毒Gag蛋白的生物信息学分析及抗原表位预测

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中国病原生物学杂志 2021年第5期16卷 502-506页

作者：王宇李建云武健刘淑英内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区农业基因组大数据工程研究中心内蒙古自治区综合疾病预防控制中心

目的探讨绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)Gag蛋白的组成结构及生物学功能。方法从NCBI数据库中获取JSRV的gag基因序列及其编码蛋白的氨基酸序列,利用ExPASy,ProtScale,Signal 5.0,TMHMM Server,NetPhos Server,NetNGlyc,SOPMA,Prediction,Swiss-Model和DNAStar等生物信息学软件分析Gag的氨基酸序列组成、理化性质、亲疏水性、信号肽、跨膜区、磷酸化位点、糖基化位点、蛋白功能区域、二、三级结构和B、T细胞抗原表位等。结果Gag蛋白是由611个氨基酸构成富含脯氨酸的亲水蛋白,分子式为C3024H4708N834O898S27,相对分子质量为67.981×103,理论等电点为7.14;二级结构以无规则卷曲居多,占48.77%;无信号肽且无跨膜区,存在33个磷酸化位点,1个糖基化位点,含有2个超级家族保守结构域和1个锌指结构。预测该蛋白含有17个B细胞优势抗原表位和25个优势CTL表位。结论生物信息学分析JSRV Gag蛋白属于亲水蛋白,含有多个抗原表位,可能具有免疫原性,可作为潜在抗原用于诊断方法的建立与疫苗的研制。

关键词：绵羊肺腺瘤病绵羊肺腺瘤病毒 Gag蛋白抗原表位生物信息学

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蓝刺头多糖B对胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及AMPK表达的影响

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畜牧与兽医 2020年第2期52卷 67-72页

作者：李旭东任书男青格尔高珍珍杨英内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为了探究蓝刺头多糖B(ETPB)对棕榈酸(PA)诱导的胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响,体外培养大鼠L6成肌细胞,诱导分化为骨骼肌细胞并进行分化鉴定;采用CCK8法检测细胞存活率,筛选PA和ETPB的安全浓度;葡... 详细信息

为了探究蓝刺头多糖B(ETPB)对棕榈酸(PA)诱导的胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响,体外培养大鼠L6成肌细胞,诱导分化为骨骼肌细胞并进行分化鉴定;采用CCK8法检测细胞存活率,筛选PA和ETPB的安全浓度;葡萄糖氧化酶法检测各组细胞耗糖量;实时荧光定量PCR法检测AMPK mRNA基因表达水平,Western blot法检测AMPK蛋白表达量。结果显示:PA诱导L6骨骼肌细胞发生胰岛素抵抗的最适造模浓度为0.4 mmol/L,ETPB的最大安全浓度为200 mg/mL;ETPB可显著提高胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖量(P<0.05),上调AMPK mRNA表达水平,增加AMPK蛋白表达量。提示:ETPB可以通过提高AMPK基因及蛋白表达而促进胰岛素抵抗L6骨骼肌细胞耗糖,这可能是ETPB改善骨骼肌胰岛素抵抗的作用机制之一。

关键词：蓝刺头多糖B L6骨骼肌细胞棕榈酸胰岛素抵抗腺苷酸活化蛋白激酶

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