检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2023年第6期43卷 1263-1269,1296页

作者：张良黄家荣孙志伟李慧萍刘淑英内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区基础兽医学重点实验室内蒙古呼和浩特010018

绵羊肺腺瘤(ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)是一种由绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的慢性、接触传染性肺脏肿瘤疾病。为了探究细胞凋亡在OPA发展过程中的作用,本研究利用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹... 详细信息

绵羊肺腺瘤(ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)是一种由绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的慢性、接触传染性肺脏肿瘤疾病。为了探究细胞凋亡在OPA发展过程中的作用,本研究利用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹等方法检测了凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3及其对应的凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3在健康和自然感染JSRV绵羊肺组织中的表达情况。结果显示:与对照组相比,OPA肺组织中Bcl-2基因和蛋白表达量均显著上调,而Bax和Caspase-3基因和蛋白表达量均显著下调。此外,免疫组织化学显示,Bcl-2、Bax、Caspase-3主要表达于腺瘤灶内增生的Ⅱ型肺泡上皮细胞中。结果表明,细胞凋亡在OPA肺组织中的活动受到抑制,提示绵羊肺腺瘤病毒可能通过调节细胞凋亡活动影响OPA的发生发展。

关键词：绵羊绵羊肺腺瘤绵羊肺腺瘤病毒细胞凋亡 Bcl-2

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蓝刺头黄酮对小鼠血液生理、生化指标和脏器指数、组织病理学的影响

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黑龙江畜牧兽医 2023年第21期 107-110,116,134页

作者：王宇王涵肖乾齐雅清刘睿宁张宇超张馨月李舒涵林定邦内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了研究蓝刺头黄酮对昆明小鼠血液生理、生化指标及脏器指数的影响,评价蓝刺头黄酮的安全性,试验将80只昆明小鼠分为4组,每组20只,即高、中、低剂量组(分别按体重灌胃蓝刺头黄酮400 mg/kg、200 mg/kg、100 mg/kg)和对照组(灌胃纯化水0.... 详细信息

为了研究蓝刺头黄酮对昆明小鼠血液生理、生化指标及脏器指数的影响,评价蓝刺头黄酮的安全性,试验将80只昆明小鼠分为4组,每组20只,即高、中、低剂量组(分别按体重灌胃蓝刺头黄酮400 mg/kg、200 mg/kg、100 mg/kg)和对照组(灌胃纯化水0.5 mL/只),连续用药30 d,试验结束时对小鼠进行眼球采血,测定血液生理、生化指标,处死各组小鼠,计算脏器指数并取肝脏、肾脏制备病理组织学切片,观察病理组织学变化。结果表明:高、中、低剂量组间血常规指标均无显著差异(P>0.05);高剂量组平均红细胞数显著高于对照组(P<0.05),高剂量组和中剂量组血红蛋白含量均显著高于对照组(P<0.05);各组血常规指标均在正常范围内。高、中、低剂量组间血液生化指标无显著差异(P>0.05);高剂量组总胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05),高剂量组和中剂量组天门冬氨酸氨基转移酶活性、三酰甘油含量均显著低于对照组(P<0.05)。高、中、低剂量组间脏器指数差异不显著(P>0.05),但高剂量组肝脏、肺脏和心脏指数显著高于对照组(P<0.05)。高、中、低剂量组肝脏、肾脏未发生明显病理组织学变化。说明蓝刺头黄酮对昆明小鼠无毒副作用,按体重灌胃蓝刺头黄酮400 mg/kg能够提高小鼠脏器指数,增加小鼠携氧能力,降低小鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶活性和三酰甘油、总胆固醇含量。

关键词：蓝刺头黄酮脏器指数生理指标生化指标组织病理学

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布鲁氏菌S2疫苗株间接ELISA检测方法的建立

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黑龙江畜牧兽医 2023年第19期 66-71页

作者：毛晓伟孙柯石雅琴穆嘉明王文龙呼和巴特尔内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了区分布鲁氏菌S2疫苗株和布鲁氏菌野毒株,试验通过比对NCBI上公布的布鲁氏菌S2疫苗株和M28野毒株全基因组序列,筛选出S2疫苗株特有基因GL_0002189,对该基因进行克隆、原核表达及蛋白质纯化,以纯化的重组蛋白作为抗原建立间接ELISA检... 详细信息

为了区分布鲁氏菌S2疫苗株和布鲁氏菌野毒株,试验通过比对NCBI上公布的布鲁氏菌S2疫苗株和M28野毒株全基因组序列,筛选出S2疫苗株特有基因GL_0002189,对该基因进行克隆、原核表达及蛋白质纯化,以纯化的重组蛋白作为抗原建立间接ELISA检测方法,对该方法的反应条件进行优化后确定判定点,同时对建立的间接ELISA检测方法进行重复性验证、特异性和敏感性试验,并对部分曾接种过布鲁氏菌S2疫苗的83份牛血清进行检测。结果表明:重组蛋白GL_0002189同时以可溶形式和包涵体形式表达,经纯化得到大小为29.2 ku的重组蛋白;在建立的间接ELISA检测方法中,最适重组蛋白包被浓度为2.5 ng/μL,最适血清稀释度为1∶100,最佳酶标二抗稀释度为1∶5 000,判定点为0.586,该方法的特异性为95.0%,敏感性为93.3%,且具有较好的重复性。利用建立的间接ELISA检测方法对83份牛血清进行检测,检出率为7.2%。说明试验建立的间接ELISA检测方法可区分布鲁氏菌S2疫苗免疫牛血清和布鲁氏菌野毒感染牛血清。

关键词：布鲁氏菌疫苗间接ELISA 鉴别诊断原核表达

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产气荚膜梭菌Alpha毒素突变体的表达及单克隆抗体制备

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中国畜牧兽医 2025年第1期52卷 442-450页

作者：韩凤烨刘莹潘晨帆张乾义陈小云朱真印春生温永俊王凤雪杜吉革内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010000 中国兽医药品监察所北京100081

[目的]获得产气荚膜梭菌Alpha毒素(Clostridium perfringens alpha-toxin, CPA)的重组突变体,评价其毒力和抗原性,进而制备针对CPA的单克隆抗体,并评价单克隆抗体特性。[方法]通过人工合成含6个氨基酸突变(第56和130位的天冬氨酸突变为... 详细信息

[目的]获得产气荚膜梭菌Alpha毒素(Clostridium perfringens alpha-toxin, CPA)的重组突变体,评价其毒力和抗原性,进而制备针对CPA的单克隆抗体,并评价单克隆抗体特性。[方法]通过人工合成含6个氨基酸突变(第56和130位的天冬氨酸突变为甘氨酸、第275、307和331位的酪氨酸突变为苯丙氨酸、第336位的天冬氨酸突变为天冬酰胺)的CPA基因片段,并将其克隆至pET-30a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达与纯化,获得重组蛋白rCPA_(m6),并检测其毒力与免疫原性。将rCPA_(m6)作为包被抗原建立CPA抗体的间接ELISA检测方法,并用灭活的天然CPA作为免疫原按照常规方法免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,对其功能进行鉴定。[结果]重组蛋白rCPA_(m6)在大肠杆菌BL21(DE3)感受态中能够以可溶性和包涵体两种形式表达。毒力测定结果显示,100μg/只rCPA_(m6)攻毒后,小鼠全部存活。免疫原性分析结果显示,1×最小致死量(MLD)的天然CPA攻毒后,对照组小鼠全部死亡,10和20μg/只rCPA_(m6)免疫组小鼠存活率为100%。利用rCPA_(m6)成功建立了CPA抗体的间接ELISA检测方法,并筛选获得4株分泌抗CPA的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别命名为6E3、6B8、10A11、13D10,且4种细胞上清抗体效价均≥1∶3 200,其中单克隆抗体6B8细胞上清能中和天然CPA,且能与rCPA_(m6)发生反应。[结论]试验成功获得具有良好的安全性和免疫原性的重组蛋白rCPA_(m6),制备的CPA单克隆抗体6B8具有一定的中和活性及较高的特异性和敏感性。研究结果为CPA亚单位疫苗的研制提供了候选抗原,同时为CPA中毒症的治疗以及抗原/抗体检测方法的建立提供了物质基础。

关键词：产气荚膜梭菌Alpha毒素(CPA) 突变体原核表达单克隆抗体

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EGFRvⅢ胞外区基因重组腺病毒的构建及单域抗体的制备

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生物工程学报 2022年第9期38卷 3551-3562页

作者：张慧敏徐嘉奇程艺付山刘艳龙胡宇靖杜雅楠包福祥内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古农业大学农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

本研究旨在构建能够表达人表皮生长因子EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒,并通过免疫骆驼构建噬菌体单域抗体库,筛选和制备EGFRvⅢ胞外区特异性单域抗体并对其进行鉴定。从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模... 详细信息

本研究旨在构建能够表达人表皮生长因子EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒,并通过免疫骆驼构建噬菌体单域抗体库,筛选和制备EGFRvⅢ胞外区特异性单域抗体并对其进行鉴定。从人前列腺癌细胞系PC-3细胞中提取总RNA,反转录为cDNA,以cDNA为模板扩增EGFRvⅢ胞外区基因,并连接pAdTrack-CMV质粒载体,转化含有pAdEasy-1的大肠杆菌(Escherichia coli)BJ5183感受态细胞,获得同源重组质粒转染HEK293A细胞,得到表达EGFRvⅢ胞外区蛋白的重组腺病毒。利用重组腺病毒免疫双峰驼,构建EGFRvⅢ胞外区特异性噬菌体单域抗体库,并以EGFRvⅢ蛋白为筛选抗原,对其进行筛选,对筛选得到的单域抗体进行诱导表达、纯化及鉴定。结果表明获得了表达EGFRvⅢ胞外区基因的重组腺病毒。构建得到的EGFRvⅢ特异性噬菌体单域抗体库的库容为1.4×109;经过3轮富集和筛选,通过噬菌体ELISA筛选出31个与EGFRvⅢ胞外区蛋白结合的阳性克隆,并对OD450值较高的重组单域抗体E14进行了表达和纯化。经ELISA鉴定,重组单域抗体E14可与EGFRvⅢ胞外区蛋白产生抗原抗体结合反应,具有较高的亲和力。说明制备的EGFRvⅢ特异性噬菌体单域抗体库具有较高的库容和多样性,且筛选得到的单域抗体具有较高的抗原活性和免疫学反应性,为今后以EGFRvⅢ为靶点的恶性肿瘤的诊断和治疗提供新的实验依据。

关键词： EGFRvⅢ EGFRvⅢ胞外区蛋白重组腺病毒单域抗体抗体库

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蓝刺头黄酮对小鼠血清免疫指标和抗氧化指标的影响

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饲料研究 2023年第20期46卷 89-92页

作者：王宇王涵齐雅清肖乾张宇超张馨月李舒涵林定邦内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

试验旨在研究蓝刺头黄酮对小鼠免疫指标和抗氧化指标的影响。选取80只昆明小鼠,随机分为4组,每组20个重复,每个重复1只鼠。低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠分别灌服100、200、400 mg/kg蓝刺头黄酮溶液,空白对照组灌服等量蒸馏水。试验... 详细信息

试验旨在研究蓝刺头黄酮对小鼠免疫指标和抗氧化指标的影响。选取80只昆明小鼠,随机分为4组,每组20个重复,每个重复1只鼠。低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠分别灌服100、200、400 mg/kg蓝刺头黄酮溶液,空白对照组灌服等量蒸馏水。试验期30 d。结果显示,与对照组相比,各剂量组小鼠胸腺、脾脏指数均升高(P>0.05),高剂量组小鼠胸腺指数显著高于对照组(P<0.05)。高剂量组小鼠血清中免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白A(IgA)含量显著高于对照组(P<0.05),免疫球蛋白M(IgM)含量略高于对照组(P>0.05);中剂量组小鼠血清中IgA含量显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,高剂量组、中剂量组小鼠血清中白细胞介素-1β(IL-1β)含量极显著降低(P<0.01),高剂量组小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著降低(P<0.05),中剂量组小鼠血清IL-6含量显著降低(P<0.05)。高、中、低剂量组小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性均显著高于对照组(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著高于对照组(P<0.01);高、低剂量组小鼠血清总抗氧化能力(T-AOC)极显著高于对照组(P<0.01),高剂量组小鼠血清丙二醛(MDA)含量极显著低于对照组(P<0.01)。研究表明,蓝刺头黄酮能够促进小鼠免疫器官发育,增强小鼠机体抗氧化能力,从而有效改善机体免疫功能,灌服400 mg/kg蓝刺头黄酮溶液效果最佳。

关键词：蓝刺头黄酮小鼠脏器指数抗氧化指标细胞因子免疫指标

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山羊副结核病的诊断和分型鉴定

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中国兽医杂志 2024年第5期60卷 56-62页

作者：孟维康赵维宏李梦园马薇丁玉林吉林台赵丽刘永宏内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010000 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010000 国家乳业技术创新中心内蒙古呼和浩特010000

为了对1起山羊感染副结核分枝杆菌(MAP)的病例进行诊断,并对其感染的MAP菌株进行分型鉴定,本试验通过病史调查、尸体剖检观察和组织病理学检查对其进行初步诊断,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增MAP特异性IS900和IS1311基因,并在测序后进行... 详细信息

为了对1起山羊感染副结核分枝杆菌(MAP)的病例进行诊断,并对其感染的MAP菌株进行分型鉴定,本试验通过病史调查、尸体剖检观察和组织病理学检查对其进行初步诊断,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增MAP特异性IS900和IS1311基因,并在测序后进行菌株鉴定、序列分析和IS900基因系统进化树构建。结果显示,病羊极度消瘦,血液稀薄;空肠和回肠肠壁增厚、黏膜面形成皱襞呈脑回样;肠系膜淋巴结肿大,呈灰黄色,切面可见灰白色病灶。肠道组织苏木素-伊红染色可见空肠、回肠黏膜固有层和黏膜下层有大量的上皮样细胞和淋巴细胞增生;肠系膜淋巴结皮质区可见大量上皮样细胞增生,副皮质区有淋巴细胞增生;抗酸染色可见聚集在上皮样细胞内红染的小杆菌。PCR扩增IS900和IS1311基因产物均与目的基因片段预期大小一致;基因序列分析和IS900基因系统进化树显示,与本试验所得分离株同源性最高的参考序列均为Ⅱ型MAP,且同源性均高于98%。综上所述,该羊场发病羊确诊患副结核病,感染菌株为Ⅱ型MAP。本试验为副结核病的诊断和防治提供了参考。

关键词：副结核病山羊诊断基因分型

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羊源牛恶性卡他热的病理学观察及病原核酸检测

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动物医学进展 2024年第1期45卷 52-59页

作者：申丹妮金山娜仁其木格希尼尼根海鹰吉林台内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 乌审旗动物疫病预防控制中心内蒙古乌审旗017300

羊源恶性卡他热(SA-MCF)是一种由绵羊γ疱疹病毒2型(OvHV-2)引起的可致反刍动物死亡的淋巴增生性疾病。通过病理学检查和病原体核酸检测,对发生于内蒙古鄂尔多斯市某牧场的疑似恶性卡他热的2头病牛进行诊断,同时对同群饲养的绵羊鼻拭子... 详细信息

羊源恶性卡他热(SA-MCF)是一种由绵羊γ疱疹病毒2型(OvHV-2)引起的可致反刍动物死亡的淋巴增生性疾病。通过病理学检查和病原体核酸检测,对发生于内蒙古鄂尔多斯市某牧场的疑似恶性卡他热的2头病牛进行诊断,同时对同群饲养的绵羊鼻拭子进行病原体核酸检测。结果表明,2头病死牛生前高热,并伴有失明流泪,鼻腔和口腔黏膜糜烂等头部黏膜炎症,病理剖检后发现呼吸道和消化道黏膜潮红脱落形成假膜等病理变化,具有典型的恶性卡他热病特征。组织病理学显示,病死牛伴随有非化脓性脑炎,重要的是淋巴结、肺脏、肾脏、脾脏等多个器官组织出现明显的小血管坏死性炎症。病原体核酸检测结果显示,2头牛的多种组织和绵羊鼻拭子中均扩增出OvHV-2病毒的ORF75 DNA片段,这些发现表明2头病死牛患有由OvHV-2引起的恶性卡他热,且极有可能是羊源OvHV-2传播到了牛。

关键词：恶性卡他热绵羊γ疱疹病毒2型诊断组织病理学

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Nesfatin-1对禁食小鼠多巴胺奖赏系统的影响

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黑龙江畜牧兽医 2023年第19期 8-12页

作者：罗雨晨么宏强谢志凤陈宇飞王铭玉斯日古楞内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了探究Nesfatin-1对禁食小鼠多巴胺奖赏系统的影响,试验将40只C57BL/6小鼠随机分为阴性对照组、禁食24 h组、禁食48 h组、禁食24 h+Nesfatin-1组、禁食48 h+Nesfatin-1组,每组8只。禁食24 h、48 h组小鼠分别禁食24 h及48 h;禁食24 h+N... 详细信息

为了探究Nesfatin-1对禁食小鼠多巴胺奖赏系统的影响,试验将40只C57BL/6小鼠随机分为阴性对照组、禁食24 h组、禁食48 h组、禁食24 h+Nesfatin-1组、禁食48 h+Nesfatin-1组,每组8只。禁食24 h、48 h组小鼠分别禁食24 h及48 h;禁食24 h+Nesfatin-1组及禁食48 h+Nesfatin-1组小鼠分别在禁食24 h及48 h基础上按体重120 mg/kg腹腔注射Nesfatin-1;阴性对照组小鼠腹腔注射等体积的PBS。注射Nesfatin-1后等待观察4 h,各组小鼠眼球采血后断颈处死,解剖取脑组织,采用ELISA方法检测各组小鼠血清Nesfatin-1及多巴胺含量;应用实时荧光定量PCR方法检测各组小鼠脑组织酪氨酸羟化酶(TH)基因和即刻早期基因(cFOS基因)的相对表达量。结果表明:与阴性对照组相比,禁食24 h组及禁食48 h组小鼠血清Nesfatin-1、多巴胺含量显著降低(P<0.05);与禁食24 h组相比,禁食24 h+Nesfatin-1组小鼠血清Nesfatin-1、多巴胺含量极显著升高(P<0.01);与禁食48 h组相比,禁食48 h+Nesfatin-1组小鼠血清Nesfatin-1、多巴胺含量极显著升高(P<0.01)。与阴性对照组相比,禁食24 h组及禁食48 h组小鼠脑组织TH基因的相对表达量极显著下降(P<0.01),cFOS基因的相对表达量极显著升高(P<0.01);与禁食24 h组相比,禁食24 h+Nesfatin-1组小鼠脑组织TH及cFOS基因相对表达量极显著升高(P<0.01);与禁食48 h组相比,禁食48 h+Nesfatin-1组小鼠脑组织TH及cFOS基因相对表达量显著升高(P<0.05)。说明Nesfatin-1对禁食小鼠多巴胺奖赏系统有一定影响。

关键词： Nesfatin-1 禁食多巴胺酪氨酸羟化酶即刻早期基因

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携带eGFP基因的重组牛结节性皮肤病病毒的构建及其生长特性研究

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中国畜牧兽医 2024年第12期51卷 5479-5488页

作者：莘若兰周祉玉张嘉雯杜吉革印春生王凤雪陈小云温永俊朱真内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010000 中国兽医药品监察所北京100081

【目的】筛选可高效率表达重组牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)的不同启动子/细胞组合,据此构建携带增强绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组LSDV,并探究其生长特性,为后续抗病毒药物的开发以及病毒复制和作用机制的研究... 详细信息

【目的】筛选可高效率表达重组牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)的不同启动子/细胞组合,据此构建携带增强绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组LSDV,并探究其生长特性,为后续抗病毒药物的开发以及病毒复制和作用机制的研究奠定基础。【方法】利用融合PCR方法分别将羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)启动子、LSDV启动子与eGFP基因进行连接,用以替换LSDV 005基因,构建同源重组片段,并将其分别转染至感染LSDV的非洲绿猴肾细胞(Vero)、非洲绿猴肾细胞衍生株(Vero-E6)、牛肾细胞(MDBK)、仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)、羊睾丸细胞(LT)和原代羊睾丸细胞(PLT)6种细胞中,通过荧光显微镜观察转染效果,并使用ImageJ软件统计荧光面积百分比,筛选出最优启动子/细胞组合。以筛选出的最优组合进行重组病毒转染,并检测病毒纯化效果,进一步探究重组病毒的生长特性和稳定性。【结果】在6种细胞中LSDV启动子的转染效果均优于ORFV启动子,且在PLT细胞中,LSDV启动子的荧光面积百分比最高(8.38%),与其他组细胞相比差异显著(P<0.05)。使用LSDV启动子/PLT细胞组合构建重组病毒LSDV-Δ005/eGFP,纯化后在倒置荧光显微镜下观察到所有病变部位均带有绿色荧光,荧光面积百分比约为50.8%。病毒的生长特性和稳定性分析结果显示,重组病毒LSDV-Δ005/eGFP在6种细胞中的病变效应以及病毒滴度随时间变化的趋势与野生毒株LSDV/Heilongjiang/2022相似,且在PLT细胞上连续传代10次eGFP基因稳定表达。【结论】利用LSDV启动子/PLT细胞组合构建重组LSDV时效率最佳,据此构建的重组病毒LSDV-Δ005/eGFP生长特性与LSDV野生毒株一致,经10次传代后遗传稳定性良好。

关键词：牛结节性皮肤病病毒细胞转染重组病毒生长特性

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