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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十三次全国会员代表大会暨第十七次学术研讨会

作者：侯斌姜楠刘瑾哈斯苏荣内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古骆驼研究院

目的伊维菌素是目前临床应用较为广泛的兽用抗寄生虫药,但目前还没有针对骆驼寄生虫病的推荐剂量。本研究通过建立HPLC荧光检测法测定伊维菌素在双峰驼体内的血浆药物浓度,研究其在双峰驼体内的药代动力学特征,为双峰驼临床合理用药提...

目的伊维菌素是目前临床应用较为广泛的兽用抗寄生虫药,但目前还没有针对骆驼寄生虫病的推荐剂量。本研究通过建立HPLC荧光检测法测定伊维菌素在双峰驼体内的血浆药物浓度,研究其在双峰驼体内的药代动力学特征,为双峰驼临床合理用药提供基础数据。

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1株阿尔巴斯绒山羊源产气荚膜梭菌的毒素型鉴定和16S rRNA基因的遗传进化分析

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黑龙江畜牧兽医 2022年第6期 68-71,76页

作者：李琦白伟琴李杰李宏赵利军孟克訾占飞格日勒图吉林台王金玲卡楚拉内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010010 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010010 伊金霍洛旗动物疫病预防控制中心内蒙古鄂尔多斯017200

为了了解1例经诊断为产气荚膜梭菌病而死亡的阿尔巴斯种绒山羊感染的产气荚膜梭菌的毒素型和16S rRNA基因的遗传进化特性,试验设计5对特异性毒素引物,采用PCR方法进行毒素型的鉴定,对16S rRNA基因扩增和测序,对测序结果进行遗传进化分... 详细信息

为了了解1例经诊断为产气荚膜梭菌病而死亡的阿尔巴斯种绒山羊感染的产气荚膜梭菌的毒素型和16S rRNA基因的遗传进化特性,试验设计5对特异性毒素引物,采用PCR方法进行毒素型的鉴定,对16S rRNA基因扩增和测序,对测序结果进行遗传进化分析。结果表明:只有α毒素引物扩增出约475 bp长的目的条带,阿尔巴斯绒山羊梭菌性肠炎的致病菌毒素为α毒素,为A型产气荚膜梭菌,其16S rRNA基因序列与天津地区产气荚膜梭菌(登录号为KP944160.1)位于同一分支,亲缘关系最近,核苷酸相似性为98.53%。说明此次阿尔巴斯绒山羊感染的产气荚膜梭菌的毒素型是A型,且鉴定菌株与天津地区产气荚膜梭菌(登录号为KP944160.1)起源于共同的祖先。

关键词：阿尔巴斯绒山羊产气荚膜梭菌毒素型 16S rRNA基因遗传进化

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溶血性曼氏杆菌PlpE基因原核表达及间接ELISA方法的建立

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黑龙江畜牧兽医 2022年第2期 79-84页

作者：张智刘泽杜宇乌吉斯古楞刘重阳宋庆庆关平原任旭荣金宇保灵生物药品有限公司/兽用疫苗国家工程实验室呼和浩特010020 内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了建立一种能够方便、高效检测溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的方法,试验将溶血性曼氏杆菌重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,然后经IPTG诱导表达并纯化。以重组蛋白PlpE为包被抗原,通过优化抗原最佳包被浓度... 详细信息

为了建立一种能够方便、高效检测溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的方法,试验将溶血性曼氏杆菌重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,然后经IPTG诱导表达并纯化。以重组蛋白PlpE为包被抗原,通过优化抗原最佳包被浓度、一抗及二抗最佳稀释度、最佳反应时间和最佳显色时间等试验条件,建立了检测PlpE抗体的间接ELISA方法。结果表明:重组质粒pET-32a-PlpE转化至感受态细胞BL21(DE3)后利用IPTG诱导,重组蛋白主要在沉淀中大量表达,经包涵体纯化试剂盒纯化后获得纯度较高的目的蛋白。重组蛋白PlpE具有良好的反应性,且蛋白大小符合预期。确定的检测条件为抗原包被浓度2μg/mL,一抗稀释度1∶300,酶标二抗稀释度1∶80 000,反应时间45 min,一抗反应时间30 min,显色时间15 min。用该方法检出溶血性曼氏杆菌阳性血清的最低效价可达1∶1 280,检测牛病毒性腹泻病毒阳性血清、牛传染性鼻气管炎病毒阳性血清、口蹄疫病毒阳性血清、副结核分枝杆菌阳性血清、布鲁氏杆菌阳性血清,结果均为阴性;批内重复性试验和批间重复性试验变异系数分别为0.70%~4.70%和0.50%~5.60%,均小于6.00%,该方法重复性较好。说明本试验建立的检测PlpE抗体的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,可用于临床牛血清抗体的检测。

关键词：牛溶血性曼氏杆菌 PlpE基因原核表达间接ELISA

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布氏杆菌S2疫苗株特有基因trbJ的LAMP检测方法建立

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畜牧与兽医 2021年第11期53卷 80-84页

作者：穆嘉明毛晓伟石雅琴秦云王文龙内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为了建立一种快速、准确地检测布氏杆菌S2疫苗株的环介导等温扩增(LAMP)方法,将S2基因组与牛种、羊种野毒株基因组比较,筛选出S2疫苗特有基因trbJ作为检测靶标序列,设计LAMP特异性引物,在对该反应组分、反应条件进行单因素优化的同时,... 详细信息

为了建立一种快速、准确地检测布氏杆菌S2疫苗株的环介导等温扩增(LAMP)方法,将S2基因组与牛种、羊种野毒株基因组比较,筛选出S2疫苗特有基因trbJ作为检测靶标序列,设计LAMP特异性引物,在对该反应组分、反应条件进行单因素优化的同时,还对该引物特异性、灵敏度、重复性进行测试。结果显示,该方法在65℃等温条件下扩增,反应结束后加入SYBR Green I荧光染料,即可通过肉眼直接观察结果。该方法灵敏性、特异性、重复性良好,能准确鉴别出S2疫苗,与对照菌株无交叉反应。与普通PCR技术相比,LAMP检测灵敏度高100倍,最低可检测出6.89 pg/μL的DNA模板,并且不同批次试剂间的重复性良好。本试验成功建立了一种快速、准确、可视化地检测S2疫苗的LAMP方法。

关键词：布氏杆菌 S2疫苗 trbJ基因环介导等温扩增技术

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中国奶牛牛支原体流行病学调查分析

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中国农业大学学报 2022年第3期27卷 75-82页

作者：温靖李丹郭婷武春霞周雅坪田广原罗玉霞郝永清内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010010 内蒙古自治区生态与农业气象中心呼和浩特010052 阿拉善左旗农牧区生态管理综合行政执法局内蒙古巴彦浩特753000

为调查中国奶牛养殖地区牛支原体(Mycoplasma bovis)的流行情况,从2013—2019年,在中国6个奶牛养殖区域集约化牧场,通过随机采样收集犊牛鼻拭子1878份,对样品进行***分离鉴定,并分析***阳性率时间分布,空间分布以及犊牛日龄与***阳性率... 详细信息

为调查中国奶牛养殖地区牛支原体(Mycoplasma bovis)的流行情况,从2013—2019年,在中国6个奶牛养殖区域集约化牧场,通过随机采样收集犊牛鼻拭子1878份,对样品进行***分离鉴定,并分析***阳性率时间分布,空间分布以及犊牛日龄与***阳性率的关系。结果表明:1)空间上,中国不同奶牛养殖地区,***阳性率是不同的。其中西北区(38.7%)高于华东区(35.6%)、华北区(33.6%)、华中区(30.8%)、华南区(29.9%)和西南区(27.1%)。2)时间上,2013—2015年***阳性率平均值为47.9%,三年间***阳性率差异不显著(P>0.05)。2016—2019年,***阳性率平均值为21.1%,四年间***阳性率无显著性差异。2013—2015年***阳性率显著高于2016—2019年***阳性率(P<0.05)。3)季节上,夏秋季节***平均阳性率为31.3%,冬春季节***阳性率平均值为33.9%,不同季节***阳性率差异不显著(P>0.05)。4)通过线性回归分析,表明***阳性率与犊牛日龄呈正相关。综上,2013—2019年,中国奶牛养殖地区***阳性率平均值为32.6%,***在中国呈长期流行趋势。季节并不影响***在犊牛中的流行。***阳性率与犊牛日龄呈线性正相关。本研究丰富了中国奶牛养殖地区牛支原体流行情况数据,从病原学角度为预防和临床用药提供重要的数据支撑。

关键词：犊牛牛支原体流行病学调查

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微生物发酵饲料对奶牛瘤胃发酵功能及饲粮营养物质体外消化率的影响

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动物营养学报 2021年第3期33卷 1513-1522页

作者：徐子萱李冬芳于春微李松建高民胡红莲刘大程内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古农牧业科学院动物营养研究所呼和浩特010031

本试验旨在用体外法评价不同添加水平微生物发酵饲料对奶牛瘤胃发酵功能的影响,确定其适宜添加水平,并在此基础上研究微生物发酵饲料对饲粮营养物质体外消化率的影响。采用体外发酵试验,培养底物的精粗比为5∶5,微生物发酵饲料添加水平... 详细信息

本试验旨在用体外法评价不同添加水平微生物发酵饲料对奶牛瘤胃发酵功能的影响,确定其适宜添加水平,并在此基础上研究微生物发酵饲料对饲粮营养物质体外消化率的影响。采用体外发酵试验,培养底物的精粗比为5∶5,微生物发酵饲料添加水平分别为0(对照组)、3%、5%、7%、9%。结果表明:1)7%组的产气量及总挥发性脂肪酸(TVFA)、乙酸、丙酸、丁酸、氨态氮(NH 3-N)、菌体蛋白(BCP)浓度平均值显著高于对照组(P<0.05),微生物发酵饲料适宜添加水平为7%。2)添加7%微生物发酵饲料提高了饲粮干物质体外消化率(IVDMD)、粗蛋白质体外消化率(IVCPD)、中性洗涤纤维体外消化率(IVNDFD)、酸性洗涤纤维体外消化率(IVADFD),分别比对照组提高0.80%、1.43%、3.76%、1.98%(P>0.05)。由此可见,饲粮添加7%微生物发酵饲料可促进瘤胃发酵功能,提高饲粮营养物质体外消化率。

关键词：微生物发酵饲料瘤胃发酵功能体外消化率奶牛

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复合菌培养物及β-葡聚糖对肉羊抗氧化能力与炎症因子含量的影响

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动物营养学报 2021年第5期33卷 2964-2970页

作者：李冬芳刘世雄于春微郝凌魁陈灰高民胡红莲刘大程内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古农牧业科学院动物营养与饲料研究所呼和浩特010031

本试验旨在研究复合菌培养物及β-葡聚糖对肉羊抗氧化能力与炎症因子含量的影响。选取50日龄断奶健康羔羊30只,随机分为3个组,包括2个试验组和1个对照组,每组5个重复,每个重复2只羔羊。对照组饲喂全混合日粮(TMR);复合菌培养物组在TMR... 详细信息

本试验旨在研究复合菌培养物及β-葡聚糖对肉羊抗氧化能力与炎症因子含量的影响。选取50日龄断奶健康羔羊30只,随机分为3个组,包括2个试验组和1个对照组,每组5个重复,每个重复2只羔羊。对照组饲喂全混合日粮(TMR);复合菌培养物组在TMR中添加复合菌培养物,前期每千克饲粮添加量为50 g,中期与后期每千克饲粮添加量为70 g;β-葡聚糖组在TMR中添加β-葡聚糖,每千克饲粮添加量为75 mg。试验期为97 d,其中预试期7 d,正试期90 d。分别在试验第1、30、60和90天采集血样,测定抗氧化指标和炎症因子含量。结果表明:与对照组相比,复合菌培养物组肉羊血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性及白细胞介素-lβ(IL-lβ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)含量显著提高(P<0.05),丙二醛(MDA)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)含量显著降低(P<0.05);β-葡聚糖组血清中总抗氧化能力(T-AOC)、SOD活性及TNF-α、IL-6含量显著提高(P<0.05),MDA、IL-10含量显著降低(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加复合菌培养物与β-葡聚糖均可以提高肉羊的抗氧化能力与炎症因子含量,并且添加复合菌培养物在提高抗氧化能力方面的效果优于添加β-葡聚糖。

关键词：复合菌培养物 β-葡聚糖肉羊抗氧化能力炎症因子

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捻转血矛线虫丙硫咪唑敏感虫株和耐药虫株miRNA-mRNA关联比较分析

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中国农业大学学报 2021年第6期26卷 90-99页

作者：王腾宇陈昕迪翟帅石雅琴刘春霞王文龙内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古农业大学生命科学院呼和浩特010018

旨在比较分析捻转血矛线虫敏感虫株和耐药虫株miRNA表达谱,探讨miRNA与捻转血矛线虫丙硫咪唑耐药性相关基因之间的调控机制。运用Illumina Hiseq2000平台进行测序并进行cDNA文库的构建,利用RNAhybrid、Miranda和TargetScan对测序得到的... 详细信息

旨在比较分析捻转血矛线虫敏感虫株和耐药虫株miRNA表达谱,探讨miRNA与捻转血矛线虫丙硫咪唑耐药性相关基因之间的调控机制。运用Illumina Hiseq2000平台进行测序并进行cDNA文库的构建,利用RNAhybrid、Miranda和TargetScan对测序得到的数据进行靶基因预测,并取交集作为miRNA的靶基因预测结果,使用Bowtie、RepeatMasker、MIREAP、Rfam、miRBase和DAVID等生物信息学分析软件和权威数据库系统,筛选出差异的miRNA以及与捻转血矛线虫耐药相关的miRNA并进行靶基因预测,同时对KEGG pathway和GO功能富集到的靶基因和可能参与调控的通路进行预测分析。结果表明,敏感虫株和耐药虫株共筛选显著差异表达的miRNA共294个,其中113个上调,181个下调。对miRNA和其靶向调节的mRNA进行关联分析,共关联到1770个miRNA-mRNA对为负调控关系,其中涉及到274个差异的miRNA和603个差异的mRNA。显著差异表达的miRNA靶基因被注释到了1430条GO terms和327条KEGG pathway,富集到FoxO信号通路(FoxO signaling pathway),mTOR信号通路(mTOR signaling pathway),PI3K-Akt信号通路(PI3K-Akt signaling pathway)等与耐药相关的一些抗性通路。综上,通过对miRNA表达谱分析以及miRNA-mRNA靶向分析,发现捻转血矛线虫敏感虫株和耐药虫株显著差异表达的miRNA和其对应的靶基因,并对部分耐药相关通路中存在的靶基因及显著差异的靶基因所在的通路进行筛选和分析,为后续进一步通过转录组学深层次挖掘捻转血矛线虫产生耐药性的关键基因及相关调控分子提供科学依据。

关键词：捻转血矛线虫丙硫咪唑耐药性转录组 miRNA

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绵羊肺腺瘤病毒完整囊膜蛋白的多克隆抗体制备与特异性检测

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中国兽医科学 2021年第12期51卷 1548-1553页

作者：陈思旭王多智徐先达刘淑英内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区基础兽医学重点实验室内蒙古呼和浩特010018

本研究旨在构建绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的囊膜基因(env)原核表达载体,制备多克隆抗体并对其特异性进行鉴定。以笔者所在实验室构建的pEGFP-C1/JSRV-env质粒为模板,PCR扩增env基因全长1848 bp,构建原核表达质粒并命名为pET-32a/JSRV-env,... 详细信息

本研究旨在构建绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的囊膜基因(env)原核表达载体,制备多克隆抗体并对其特异性进行鉴定。以笔者所在实验室构建的pEGFP-C1/JSRV-env质粒为模板,PCR扩增env基因全长1848 bp,构建原核表达质粒并命名为pET-32a/JSRV-env,进行双酶切鉴定和测序分析后,转化到*** Transetta(DE3),经IPTG诱导及亲和层析法对其纯化。将纯化蛋白常规免疫成年新西兰大白兔制备多克隆抗体,通过Western-blot方法鉴定多克隆抗体的特异性,免疫组化方法评价其临床检测效果。双酶切鉴定及测序结果表明,已成功构建pET-32a/JSRV-env重组质粒且包含编码YXXM基序的基因序列,成功表达及纯化该蛋白,其大小约89 ku。以制备的多克隆抗体为一抗,经Western-blot检测自然感染绵羊肺腺瘤病(OPA)的病肺组织,在89 ku处出现单一特异性条带。免疫组化结果显示,OPA病肺肿瘤细胞可见棕黄色的阳性信号。结果表明,成功构建JSRV-env原核表达质粒,制备的多克隆抗体特异性较好,可用于生产实践中OPA的检测,且制备简便、成本低廉。同时也为进一步探讨JSRV Env的功能提供了实验基础。

关键词：绵羊肺腺瘤病毒原核表达多克隆抗体免疫组化

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PGD_(2)/DP_(1)途径对细菌感染奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和PAFR表达的影响

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中国畜牧兽医 2021年第6期48卷 2169-2176页

作者：杨效林韩润林毛伟包海霞刘昆吴金迪曹金山刘博内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了研究前列腺素D2(prostaglandin D2,PGD2)/DP1受体途径对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染奶牛子宫内膜组织中炎症介质HMGB-1和PAFR的表达及对组织损伤程度的影响,试验以体外培养奶牛子宫内... 详细信息

为了研究前列腺素D2(prostaglandin D2,PGD2)/DP1受体途径对大肠杆菌(Escherichia coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染奶牛子宫内膜组织中炎症介质HMGB-1和PAFR的表达及对组织损伤程度的影响,试验以体外培养奶牛子宫内膜组织为研究对象,应用1×10-6 mol/L DP1受体激动剂(BW-245C和15d-PGJ2)和等量(1×106 CFU/mL)大肠杆菌、金黄色葡萄球菌共同处理奶牛子宫内膜组织,采用实时荧光定量PCR、免疫组化和HE染色法检测奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和PAFR的表达并评价组织损伤情况。结果显示,与空白对照组相比,大肠杆菌和金黄色葡萄球菌感染奶牛子宫内膜组织中HMGB-1和PAFR表达量显著升高(P<0.05),而DP1受体激动剂与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌共处理奶牛子宫内膜组织中DP1受体激动剂显著抑制奶牛子宫组织中HMGB-1和PAFR的表达(P<0.05)。HE染色结果显示,大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染的奶牛子宫内膜组织上皮细胞和腺上皮细胞完全脱落、坏死、崩解;而DP1受体激动剂、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌共同处理奶牛子宫内膜组织中,DP1受体激动剂的加入显著减轻奶牛子宫内膜组织的损伤程度(P<0.05)。免疫组化染色法结果与以上两种方法结果一致。结果表明,PGD2能够抑制大肠杆菌与金黄色葡萄球菌感染的奶牛子宫内膜组织中损伤相关因子HMGB-1、PAFR的表达,减轻组织损伤程度,这一作用可能是由DP1受体所介导的。

关键词：奶牛子宫内膜组织大肠杆菌金黄色葡萄球菌炎症 HMGB-1 PAFR

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