检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2022年第5期 30-33页

作者：王铭玉斯日古楞罗雨晨张雅文张光杰么宏强内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

脂肪组织主要包括白色脂肪组织和棕色脂肪组织。白色脂肪组织的主要功能是储存能量,棕色脂肪组织的主要功能是产热耗能。白色脂肪棕色化的信号通路复杂多样,其相关的转录因子有过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-acti... 详细信息

脂肪组织主要包括白色脂肪组织和棕色脂肪组织。白色脂肪组织的主要功能是储存能量,棕色脂肪组织的主要功能是产热耗能。白色脂肪棕色化的信号通路复杂多样,其相关的转录因子有过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors, PPARs)、PR结构域蛋白16(PR domain containing 16, PRDM16)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1α, PGC-1α),同时也受骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins, BMPs)和鸢尾素(irisin)的调节。白色脂肪棕色化能够激活米色细胞,增加机体的产热耗能,是治疗肥胖、胰岛素抵抗、脂肪肝、心脑血管疾病等的新方向。然而,白色脂肪棕色化是一把双刃剑,可能引起动脉粥样硬化、恶病质和肝脂肪变性等多种疾病。因此,文章对白色脂肪棕色化的调控因素、信号通路及其对疾病的影响进行综述,以期为发挥白色脂肪棕色化的优势、减少其对机体的消极作用提供参考。

关键词：脂肪组织白色脂肪棕色化过氧化物酶体增殖物激活受体疾病肥胖

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鸽I型腺病毒SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立

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中国预防兽医学报 2022年第10期44卷 1066-1070页

作者：杨俊杰韩晓语刘春羽王亚新郭昊温永俊王凤雪内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为建立鸽I型腺病毒(PIAdV-I)的快速检测方法,本研究根据PIAdV-I Fiber 2基因的保守区域设计特异性引物,通过优化反应条件,建立了快速检测PIAdV-I的SYBR Green I荧光定量PCR(qPCR)方法。建立的SYBR Green I qPCR方法的标准曲线结果显示,... 详细信息

为建立鸽I型腺病毒(PIAdV-I)的快速检测方法,本研究根据PIAdV-I Fiber 2基因的保守区域设计特异性引物,通过优化反应条件,建立了快速检测PIAdV-I的SYBR Green I荧光定量PCR(qPCR)方法。建立的SYBR Green I qPCR方法的标准曲线结果显示,重组质粒标准品pMD19-Fiber在1×10^(3)拷贝/μL^(1)×10^(8)拷贝/μL时和Ct值之间的线性关系良好,相关系数R~2=0.995,扩增效率为90%。利用建立的qPCR方法对鸽II型腺病毒(PIAdV-II)Fiber 2基因保守区质粒标准品、鸽圆环病毒(PICV)、新城疫病毒(NDV)、多杀性巴氏杆菌(PM)和禽致病性大肠杆菌(APEC)的检测结果均为阴性,仅PIAdV-I检测为阳性,特异性强;该方法对浓度为1×10^(0)拷贝/μL^(1)×10^(8)拷贝/μL的重组质粒标准品进行检测,结果显示最低检测限为1×10^(2)拷贝/μL,而普通PCR最低检测限为1×10^(4)拷贝/μL,表明qPCR方法的敏感性更强;该方法批内、批间重复性试验的变异系数分别小于1%和2%,重复性好。利用建立的qPCR方法和普通PCR方法对从呼和浩特市某赛鸽公棚随机采集的30份鸽肝脏样品进行PIAdV-I检测,结果显示前者的阳性检测率为63.3%(19/30),普通PCR方法的阳性率为36.7%(11/30),两种方法的阳性符合率均为100%。本研究首次建立PIAdV-I的q PCR检测方法,为鸽PIAdV-I的感染提供了敏感、快速的检测手段。

关键词：鸽I型腺病毒 SYBR Green I荧光定量PCR Fiber 2基因

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牛结节性皮肤病病毒L1R基因的原核表达及多克隆抗体的制备

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黑龙江畜牧兽医 2022年第20期 70-74页

作者：侯丽娜刘晓婷郭昊刘春羽赵洪哲温永俊王凤雪内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了获得牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)L1R蛋白及其多克隆抗体,试验根据GenBank已公布的LSDV L1R蛋白的编码区合成序列,将合成序列插入原核表达质粒pET-32a,构建pET32a-L1R重组阳性质粒,转化至BL21(DE3)大肠杆菌... 详细信息

为了获得牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)L1R蛋白及其多克隆抗体,试验根据GenBank已公布的LSDV L1R蛋白的编码区合成序列,将合成序列插入原核表达质粒pET-32a,构建pET32a-L1R重组阳性质粒,转化至BL21(DE3)大肠杆菌感受态,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。对诱导表达的重组蛋白采用镍离子亲和层析柱进行纯化,通过透析进行纯化蛋白的复性,用Western-blot对复性后的蛋白进行鉴定。将鉴定成功的蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA测定多克隆抗体的效价。结果表明:L1R蛋白在大肠杆菌中高效表达,在1 mmol/L IPTG、37℃、200 r/min条件下,主要以包涵体的形式表达且纯度较高,表达的蛋白质分子质量约为40 ku,与预期的蛋白质大小一致。纯化后的L1R重组蛋白能被His单克隆抗体及山羊痘阳性血清识别,反应原性良好。制备的小鼠抗LSDV L1R多克隆抗体效价可达1∶102400,免疫原性良好。说明试验成功在大肠杆菌中表达LSDV L1R重组蛋白,并制备获得多克隆抗体。

关键词：牛结节性皮肤病病毒 L1R蛋白原核表达蛋白纯化包涵体

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牛抗体中超长CDR H3结构的研究进展

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黑龙江畜牧兽医 2023年第18期 28-32,134,135页

作者：赵绮欢高敏付山昭日格图包福祥内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010010 赤峰市农牧科学研究所内蒙古赤峰024031 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010010

牛体内具有超长CDR H3结构的抗体占总抗体的10%,长度约为70个氨基酸,包含特殊的β-带状柄结构和富含二硫键的旋钮结构,其形成与IGHV1-7区域的短核苷酸复制及IGHD8-2基因有关。牛超长CDR H3结构的抗原结合活性高且具有多样性,其中旋钮结... 详细信息

牛体内具有超长CDR H3结构的抗体占总抗体的10%,长度约为70个氨基酸,包含特殊的β-带状柄结构和富含二硫键的旋钮结构,其形成与IGHV1-7区域的短核苷酸复制及IGHD8-2基因有关。牛超长CDR H3结构的抗原结合活性高且具有多样性,其中旋钮结构与抗体结合活性有关,抗体结构、二硫键位置和数量、半胱氨酸数量、体细胞突变等与超长CDR H3结构多样性有关。牛独特的超长CDR H3结构为其免疫应答、免疫治疗和新型疫苗制备等方面提供了新的研究思路。笔者概述了牛超长CDR H3结构的形成机制、特性、抗原结合特性,并总结了其应用前景,以期为新型抗体的研发和应用提供参考。

关键词：牛抗体超长CDR H3结构 β-带状柄结构旋钮结构半胱氨酸 IGHV1-7 IGHD8-2

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猴痘病毒蛋白的原核表达及免疫效果评价

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病毒学报 2024年第4期40卷 772-778页

作者：王雪琛李涛杨晓岚孙娅坤王慧王凤雪内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全全国重点实验室北京100071

猴痘是由猴痘病毒引起的一种人兽共患疾病。研发特异性预防和治疗猴痘的疫苗或药物成为目前全球研究重点之一。本研究以猴痘主要抗原蛋白其中的A29L、E8L、M1R为研究基础,加入His标签构建质粒、原核表达、纯化,并对表达蛋白进行SDS⁃PAGE... 详细信息

猴痘是由猴痘病毒引起的一种人兽共患疾病。研发特异性预防和治疗猴痘的疫苗或药物成为目前全球研究重点之一。本研究以猴痘主要抗原蛋白其中的A29L、E8L、M1R为研究基础,加入His标签构建质粒、原核表达、纯化,并对表达蛋白进行SDS⁃PAGE及Western blot鉴定其特异性。后续将3种抗原蛋白与CpG⁃ODN 1826单佐剂、铝单佐剂或CpG与铝复合佐剂三次免疫小鼠,通过酶联免疫吸附实验及病毒蚀斑减少中和实验测定三价疫苗的结合抗体和中和抗体能力。结果表明,重组蛋白A29L、E8L、M1R诱导后均可溶性表达且表达量及纯度良好。三价疫苗以CpG⁃ODN 1826佐剂联合铝佐剂施行肌肉注射一组表现出较好的结合抗体和中和抗体能力。本研究为研发特异性针对猴痘的疫苗或药物提供基础。

关键词：猴痘猴痘病毒原核表达蛋白纯化佐剂

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牛嵴病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

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福建农业学报 2023年第7期38卷 851-856页

作者：赵润涛特木尔巴根郭宇武娅楠王旭芬侯琳张贺赵洋张志丹周伟光内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区动物疫病预防控制中心内蒙古呼和浩特010020

【目的】建立一种快速、准确且能定量分析牛嵴病毒(Bovine kobuvirus,BKoV)的检测方法。【方法】根据GenBank上发布的牛嵴病毒3D基因序列设计合成一对特异性引物和一条探针,通过优化反应体系建立牛嵴病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法... 详细信息

【目的】建立一种快速、准确且能定量分析牛嵴病毒(Bovine kobuvirus,BKoV)的检测方法。【方法】根据GenBank上发布的牛嵴病毒3D基因序列设计合成一对特异性引物和一条探针,通过优化反应体系建立牛嵴病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法,并对临床样品进行检测。【结果】该方法最佳上下游引物浓度均为300nmol·L^(-1),探针浓度为400 nmol·L^(-1),在1×10^(1)~1×10^(8)copies·μL^(-1)呈现良好的线性关系,线性相关系数R^(2)=0.999,扩增效率为103%;特异性较强,在多个犊牛腹泻相关病原中,只检测出牛嵴病毒;敏感性较高,对BKoV质粒标准品最低检测下限为1×10^(1)copies·μL^(-1),而普通RT-PCR对BKoV质粒标准品最低检测下限为1×10^(2)copies·μL^(-1);重复性较好,组内变异系数和组间变异系数均小于3%。2021年3~5月采自内蒙古地区牧场的37份犊牛粪样中BKoV的检出率为24.3%,通过标准曲线计算其病毒载量,其中腹泻粪样平均病毒载量为3.7×10^(5)copies·μL^(-1),健康犊牛粪样平均病毒载量为8.65×10^(3)copies·μL^(-1)。【结论】建立的牛嵴病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法特异性强、稳定性好、灵敏度高,为BKoV的检测和分子流行病学调查提供了有力的手段。

关键词：牛嵴病毒荧光定量RT-PCR 犊牛腹泻特异性敏感性重复性

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羊副结核病临床案例在家畜病理解剖学教学中的应用

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兽医导刊 2024年第1期 18-20页

作者：王金玲丁玉林内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

家畜病理解剖学是一门实践性很强的临床性质课程,临床案例教学对提高课程的教学质量至关重要。笔者在兽医临床实践中积累了1例羊副结核病临床案例并以该案例进行教学,取得了良好的效果。通过对案例病理学诊断和发病机制分析,使学生掌握... 详细信息

家畜病理解剖学是一门实践性很强的临床性质课程,临床案例教学对提高课程的教学质量至关重要。笔者在兽医临床实践中积累了1例羊副结核病临床案例并以该案例进行教学,取得了良好的效果。通过对案例病理学诊断和发病机制分析,使学生掌握羊副结核病典型临床症状、病理变化和诊断要点以及疾病的诊断思路和方法,并运用萎缩、心功能不全、心力衰竭、水肿、坏死、增生性肠炎、增生性淋巴结、副结核杆菌、抗酸染色等病理学知识和事物运动发展的观点来分析疾病的病理变化和发病机理。通过本案例教学培养了学生认识病变、分析病变和诊断疾病的能力,同时也培养学生把病理学理论知识与实践相结合来分析病变、病理过程和发病机制的思路和方法。

关键词：羊副结核病家畜病理解剖学教学应用

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羊肝静脉血栓形成案例在家畜病理学教学中的应用

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兽医导刊 2024年第2期 54-57页

作者：王金玲丁玉林内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

家畜病理学是一门具有临床性质的课程,课程的理论知识均来自大量实践病例的积累、分析、归纳和总结。因此,理论教学与临床案例教学结合是高质量的家畜病理学教与学的最有效方法。基础病理学是家畜病理学课程的重点,但知识偏于基础,教学... 详细信息

家畜病理学是一门具有临床性质的课程,课程的理论知识均来自大量实践病例的积累、分析、归纳和总结。因此,理论教学与临床案例教学结合是高质量的家畜病理学教与学的最有效方法。基础病理学是家畜病理学课程的重点,但知识偏于基础,教学时若能结合典型临床案例把各章节知识联系起来,可提高学生学习兴趣,明显提高教学效果。作者在实践中系统性诊断了1例羊肝静脉血栓形成导致羊只死亡的案例,案例疾病的发生、发展和转归过程中机体表现出局部血液循环障碍(充血、淤血、出血、血栓形成和栓塞)、水和电解质代谢障碍、酸碱平衡紊乱、缺氧、组织细胞的损伤、修复、炎症和休克等基础病理学知识。通过9年的教学实践表明,使用该病例教学促进了学生对基础病理学知识的理解和掌握,提高了学生的兴趣和积极性,也培养了学生认识病变、分析病变和诊断疾病的理论联系实践的能力。

关键词：羊肝静脉血栓形成案例教学家畜病理学应用

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BHV-1感染牛巨噬细胞对CD300a转录的影响

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中国兽医学报 2023年第2期43卷 253-259页

作者：王旭芬安冬侯琳赵润涛张贺赵洋张志丹周伟光内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 呼伦贝尔市海拉尔区疫病预防控制中心内蒙古呼伦贝尔021000

为探究抑制性受体CD300a在牛Ⅰ型疱疹病毒(bovine herpesvirus 1,BHV-1)免疫调控机制中的作用,分离鉴定了1株BHV-1内蒙古株,并建立CD300a基因的荧光定量PCR方法,检测BHV-1感染牛单核巨噬细胞后0,6,12,24,48,72 h 6个时间点以及空白对照... 详细信息

为探究抑制性受体CD300a在牛Ⅰ型疱疹病毒(bovine herpesvirus 1,BHV-1)免疫调控机制中的作用,分离鉴定了1株BHV-1内蒙古株,并建立CD300a基因的荧光定量PCR方法,检测BHV-1感染牛单核巨噬细胞后0,6,12,24,48,72 h 6个时间点以及空白对照组CD300a基因的转录变化。将β-actin基因作为内参,使用双标准曲线法计算攻毒组与对照组CD300a基因各时间段的相对表达量,分析CD300a在攻毒前、后的表达差异。结果显示,BHV-1分离株在MDBK细胞上出现典型细胞病变效应,测得其病毒滴度为107.23TCID50/mL。本研究建立的CD300a基因荧光定量PCR检测方法,CD300a基因和β-actin基因标准品的Ct值与模板浓度之间均具有良好的线性关系,溶解曲线均为特异单峰,最低检测限均为10拷贝/μL,具有良好的灵敏性,可以准确检测出BHV-1攻毒后巨噬细胞内的CD300a基因表达量。经计算,攻毒组CD300a表达量均高于对照组,其中,6,12,24 h的表达差异倍数显著高于0,72 h(P<0.05),表达差异倍数在12 h时达到最高,且显著高于其他各组(P<0.05),表达差异倍数从6 h时开始巨幅增长,12 h达到最大,48 h开始趋于稳定。结果表明CD300a基因作为巨噬细胞表面的抑制性受体,表达量在BHV-1入侵时会显著变化,推测CD300a基因为协助病毒进入宿主细胞或免疫逃逸也相应增多,在抗病毒免疫机制中起到一定作用。

关键词：传染性鼻气管炎牛Ⅰ型疱疹病毒 CD300a 荧光定量PCR 单核巨噬细胞

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塞内卡病毒CH/ZZ/2016株cDNA感染性克隆的构建

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中国动物传染病学报 2023年第2期31卷 67-72页

作者：韩宇王秀明刘建奇刘亭岐乌吉斯古楞张斌宋庆庆关平原内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 金宇保灵生物药品有限公司兽医疫苗国家工程实验室呼和浩特010020

为构建塞内卡病毒(Senecavirus A)CH/ZZ/2016株的感染性克隆,采用RT-PCR技术分3个cDNA片段对SVA/CH/ZZ/2016株全基因组进行扩增,并克隆至pcDNA3.1(+)真核表达质粒中。获得重组质粒pSVA-CH/ZZ经NheⅠ、KpnⅠ酶切及测序鉴定后,转染BHK-21细胞并转至PK-15细胞上进行盲传,直至出现细胞病变(CPE)。对出现CPE的细胞上清液进行RT-PCR扩增、酶切、测序、间接免疫荧光试验鉴定。结果显示,成功构建了含SVA全长cDNA克隆的重组质粒,转染BHK-21细胞经PK-15细胞盲传至F5代出现SVA的典型CPE。细胞上清液经RT-PCR扩增、酶切、测序结果表明拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记。间接免疫荧光试验进一步表明拯救了SVA病毒。病毒蚀斑形成和生长曲线表明,拯救毒株和亲本毒株的复制能力及增殖特性相似。本研究构建的CH/ZZ/2016株感染性克隆为进一步研究SVA的致病机理、基因功能及疫苗的研发奠定基础。

关键词：塞内卡病毒全长cDNA 转染病毒拯救

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