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中国病原生物学杂志 2021年第5期16卷 502-506页

作者：王宇李建云武健刘淑英内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区农业基因组大数据工程研究中心内蒙古自治区综合疾病预防控制中心

目的探讨绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)Gag蛋白的组成结构及生物学功能。方法从NCBI数据库中获取JSRV的gag基因序列及其编码蛋白的氨基酸序列,利用ExPASy,ProtScale,Signal 5.0,TMHMM Server,NetPhos Server,NetNGlyc,SOPMA,Prediction,Swiss-Model和DNAStar等生物信息学软件分析Gag的氨基酸序列组成、理化性质、亲疏水性、信号肽、跨膜区、磷酸化位点、糖基化位点、蛋白功能区域、二、三级结构和B、T细胞抗原表位等。结果Gag蛋白是由611个氨基酸构成富含脯氨酸的亲水蛋白,分子式为C3024H4708N834O898S27,相对分子质量为67.981×103,理论等电点为7.14;二级结构以无规则卷曲居多,占48.77%;无信号肽且无跨膜区,存在33个磷酸化位点,1个糖基化位点,含有2个超级家族保守结构域和1个锌指结构。预测该蛋白含有17个B细胞优势抗原表位和25个优势CTL表位。结论生物信息学分析JSRV Gag蛋白属于亲水蛋白,含有多个抗原表位,可能具有免疫原性,可作为潜在抗原用于诊断方法的建立与疫苗的研制。

关键词：绵羊肺腺瘤病绵羊肺腺瘤病毒 Gag蛋白抗原表位生物信息学

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伪狂犬病毒gB和gE蛋白重组表达及抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国动物传染病学报 2021年

作者：张洪亮郝占武解倩倩王凤雪张志韩先杰单虎温永俊青岛农业大学动物医学院山东省新兽药创制协同创新中心青岛市兽医生物技术工程研究中心内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室中国动物卫生与流行病学中心

摘要：本研究利用PCR扩增伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株gB基因核心抗原区和闵A株gE基因核心抗原区，构建了重组质粒pET-32a-gB和pET-32a-gE，并转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，经IPTG诱导进行表达。SDS-PAGE分析表明，pET32a... 详细信息

摘要：本研究利用PCR扩增伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株gB基因核心抗原区和闵A株gE基因核心抗原区，构建了重组质粒pET-32a-gB和pET-32a-gE，并转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中，经IPTG诱导进行表达。SDS-PAGE分析表明，pET32a-gB蛋白分子量约为44 kDa，pET32a-gE蛋白分子量约为41 kDa。分别以gB和gE重组蛋白作为包被抗原，建立了PRV抗体间接ELISA检测方法。该方法中重组蛋白仅与PRV阳性血清发生特异性反应，检测敏感性可达到1:1600，批内重复性和批间重复性变异系数均＜10%。本研究建立的间接ELISA方法可用于PRV抗体的监测，鉴别疫苗免疫抗体和野毒感染抗体，有利于猪伪狂犬病净化工作的实施。

关键词：猪伪狂犬病毒 gB基因 gE基因蛋白表达间接ELISA

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Dectin-2和TLR-2在酿酒酵母甘露聚糖诱导SBD-1表达过程中的作用

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中国兽医学报 2020年第1期40卷 122-128页

作者：金鑫张曼王云鹤魏方温婧怡杨银凤内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为了探索膜受体Dectin-2和TLR-2在酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ovine ruminal epithelial cells,ORECs)β-防御素-1(sheepβ-defensin-1,SBD-1)表达过程中的作用。本研究首先利用免疫组化、RT-PCR和Western blot方法确定Dectin-2是否在ORECs内表达;然后采用qPCR和Western blot方法检测甘露聚糖刺激ORECs后Dectin-2和TLR-2的表达变化;最后用qPCR和ELISA方法检测不同质量浓度(0.1,1.0,10.0 mg/L)的Dectin-2和TLR-2特异性封闭抗体对甘露聚糖诱导SBD-1表达的影响。结果显示:ORECs内表达Dectin-2,且甘露聚糖刺激ORECs后Dectin-2和TLR-2的表达量均显著增加(P<0.01);同时甘露聚糖可以诱导SBD-1的表达(P<0.01),但是该表达过程可以被不同质量浓度的Dectin-2封闭抗体和TLR-2封闭抗体所抑制(P<0.05),且随着抗体浓度的增加,这种抑制作用越明显。此外,在封闭抗体质量浓度相同时,Dectin-2封闭抗体比TLR-2封闭抗体抑制SBD-1表达的作用更明显(P<0.05)。结果表明,酿酒酵母甘露聚糖诱导SBD-1的表达与Dectin-2和TLR-2受体有关,但是Dectin-2在此过程中发挥更主要的作用。

关键词：甘露聚糖 β-防御素-1 绵羊瘤胃上皮细胞 Dectin-2 TLR-2

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枯草芽孢杆菌培养上清液对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响

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畜牧与饲料科学 2023年第5期44卷 8-14页

作者：白绥明辛雅明齐盟胡亮杨银凤内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 清涧县动物疫病预防控制中心陕西榆林718399 鄂尔多斯市动物疫病预防控制中心内蒙古鄂尔多斯017000 巴彦淖尔市农牧业科学研究所内蒙古巴彦淖尔015000

[目的]探究枯草芽孢杆菌培养上清液对绵羊瘤胃上皮细胞(ovine ruminal epithelial cells,ORECs)中绵羊β-防御素-1(sheepβ-defesin-1,SBD-1)表达的影响。[方法]采用Cell Counting kit-8(CCK-8)方法筛选对ORECs无明显毒性作用的枯草芽孢杆菌培养上清液刺激浓度范围与刺激时间范围。用筛选出的无明显毒性作用的不同浓度枯草芽孢杆菌对应的培养上清液刺激ORECs 8 h后,采用荧光定量PCR(qPCR)技术和酶联免疫吸附(ELISA)检测方法筛选枯草芽孢杆菌培养上清液诱导SBD-1表达的最佳刺激浓度,以该浓度枯草芽孢杆菌对应的培养上清液刺激ORECs不同时间,采用qPCR技术和ELISA检测方法确定枯草芽孢杆菌培养上清液诱导SBD-1表达的最佳刺激时间。[结果]①对ORECs无明显毒性作用的枯草芽孢杆菌对应的培养上清液浓度范围为10^(7)~10^(11) CFU/mL,刺激时间范围为2~24 h。②利用qPCR技术和ELISA检测方法筛选出最佳刺激浓度为10^(11) CFU/mL枯草芽孢杆菌对应的培养上清液。③以该浓度枯草芽孢杆菌对应的培养上清液刺激ORECs不同时间,采用qPCR技术和ELISA检测方法确定枯草芽孢杆菌培养上清液诱导SBD-1表达的最佳刺激时间为24 h。[结论]枯草芽孢杆菌培养上清液可以诱导ORECs SBD-1的表达。

关键词：绵羊瘤胃上皮细胞枯草芽孢杆菌培养上清液 β-防御素-1 荧光定量PCR

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微生物固态发酵蛋白补充料工艺条件的优化

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内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2020年第2期41卷 1-7页

作者：杨晶晶张政张琪炜苏星李冬芳刘世雄刘大程内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

本试验旨在固态发酵条件下研究微生物发酵蛋白补充料的工艺条件。以物料堆积高度、初始含水量、翻料温度和发酵时间4个因素为条件,利用DPS软件混料试验方案设计出8种不同发酵工艺,分别进行固态堆积发酵,以物料pH值、有机酸含量,酵母菌... 详细信息

本试验旨在固态发酵条件下研究微生物发酵蛋白补充料的工艺条件。以物料堆积高度、初始含水量、翻料温度和发酵时间4个因素为条件,利用DPS软件混料试验方案设计出8种不同发酵工艺,分别进行固态堆积发酵,以物料pH值、有机酸含量,酵母菌活菌数及3种营养活性物质含量为综合评价指标来确定最佳发酵工艺。结果显示:微生物发酵蛋白补充料最佳发酵工艺条件为:堆积料高为30 cm,初始含水量为47.3%,翻料温度为45℃和发酵周期48 h,此时物料中酵母菌活菌数达到9.77×10~7CFU/g、β-葡聚糖含量55.95 mg/g、甘露聚糖28.03 mg/g、多肽1.39 mg/g和有机酸4.70 mg/g。

关键词：微生物发酵蛋白补充料固态发酵发酵工艺

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莫诺拉韦在体外/体内抗H1N1流行性感冒病毒感染特点的研究

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中国感染控制杂志 2025年第4期24卷 478-485页

作者：冯茜莉王进千杨宣叶胡欣妍丁玉林马晓霞西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730010 内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

目的分析莫诺拉韦在体内和体外对流行性感冒(流感)病毒的抗病毒效果。方法检测莫诺拉韦对流感病毒H1N1 PR8毒株在体外和体内的抗病毒能力。以人源非小细胞肺癌细胞系(A549细胞)作为PR8感染的体外模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-... 详细信息

目的分析莫诺拉韦在体内和体外对流行性感冒(流感)病毒的抗病毒效果。方法检测莫诺拉韦对流感病毒H1N1 PR8毒株在体外和体内的抗病毒能力。以人源非小细胞肺癌细胞系(A549细胞)作为PR8感染的体外模型,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫印迹试验(WB)、噬斑的方法,分析莫诺拉韦体外对病毒复制、蛋白合成及病毒颗粒形成方面的抗病毒效果。以PR8滴鼻感染C57BL/6雌性小鼠为体内感染模型,分别从病毒载量、病理变化及免疫组化方面,对对照组、给药组、接毒组和接毒-给药组进行检测,以评估莫诺拉韦的抗病毒能力。结果体外试验结果显示,莫诺拉韦对流感病毒的复制、蛋白合成及病毒颗粒形成没有明显抑制作用(均P>0.05)。小鼠体内试验结果显示,与单纯感染H1N1小鼠相比,接受莫诺拉韦治疗的小鼠肺组织病毒载量明显下降,病理变化程度较轻,免疫组化检测显示核蛋白(NP)抗原信号明显减弱,干扰素(IFN)-α、白细胞介素(IL)-4和IL-6在肺中的表达水平较低(均P<0.01)。结论作为具有抗病毒活性的前体物,莫诺拉韦无法在体外培养的肺源细胞中发挥抗病毒活力,但可以在宿主体内转化为活性形式,显著降低H1N1流感病毒在肺增殖的能力,进而减轻病毒对肺组织的损伤。

关键词：莫诺拉韦流行性感冒抗病毒感染模型病理变化 H1N1

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电针刺激对大鼠痛阈的影响

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内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2021年第2期42卷 1-4页

作者：彭中栋史晓宇刘笑杨英内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

以下丘脑脑啡肽和β-内啡肽基因mRNA相对表达量为指标,探讨电针在不同频率和不同穴组刺激下对大鼠痛阈的影响。将100只Wistar大鼠分为10组,分别为空白对照组和9个频率穴位组合组,电针频率为2 Hz、50 Hz和100 Hz时,分别依次均刺激后会穴... 详细信息

以下丘脑脑啡肽和β-内啡肽基因mRNA相对表达量为指标,探讨电针在不同频率和不同穴组刺激下对大鼠痛阈的影响。将100只Wistar大鼠分为10组,分别为空白对照组和9个频率穴位组合组,电针频率为2 Hz、50 Hz和100 Hz时,分别依次均刺激后会穴配尾根穴、后会穴配巴山穴、后会穴配关元穴,统计分析各组大鼠电针前后痛阈值,筛选出痛阈提高率最高组、痛阈提高率最低组和对照组大鼠,剖取大鼠下丘脑,对脑啡肽和β-内啡肽基因mRNA表达量进行测定。结果表明频率对痛阈提高率的影响极显著(P<0.01),而穴位组对痛阈提高率的影响不显著(P>0.05);电针各组痛阈提高率显著高于对照组(P<0.05),电针频率为2 Hz刺激后会穴配尾根穴组的痛阈提高率显著高于电针频率为50 Hz刺激后会穴配巴山穴组(P<0.05);各组间,下丘脑内镇痛物质脑啡肽和β-内啡肽mRNA表达差异不显著(P>0.05)。电针刺激可以提高动物机体的痛阈,其中电针频率为2 Hz的效果最好,但痛阈的提高可能不是通过刺激下丘脑部脑啡肽和β-内啡肽表达实现的。

关键词：频率穴位组脑啡肽 β-内啡肽

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牛结节性皮肤病病毒L1R基因标准质粒的构建

牛结节性皮肤病病毒L1R基因标准质粒的构建

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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会暨中国畜牧兽医学会生物制品学分会2021年学术论坛

作者：侯丽娜郭昊刘春羽温永俊王凤雪内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室

牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease,LSD)是由牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)引起牛的急性、亚急性或慢性传染病。被世界动物卫生组织(OIE)列为必须通报的动物疫病。与山羊痘病毒感染症状类似,需要鉴别诊断。牛奶... 详细信息

牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease,LSD)是由牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)引起牛的急性、亚急性或慢性传染病。被世界动物卫生组织(OIE)列为必须通报的动物疫病。与山羊痘病毒感染症状类似,需要鉴别诊断。牛奶产量减少、动物皮肤受损、流产、公牛暂时或永久性不育和死亡造成的直接损失,也有因贸易限制以及实验室诊断、支持性治疗、场所消毒和疫苗接种费用造成的间接损失。因此建立有效便捷的检测方法势在必行。为定量检测牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)的拷贝数,本研究参照GenBank中发表的LSDV全基因组序列,设计并合成了LSDV L1R基因标准质粒及其引物,通过荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)得到质粒标准品的标准曲线方程。构建的标准品质粒qPCR结果显示:相同浓度复孔间Ct值重复性高,熔解曲线峰值单一,得到的标准曲线方程为y=-0.2322x+11.93289,R2=0.984。本研究成功构建了检测LSDV的质粒标准品,通过qPCR发现其具有稳定性好、灵敏度高等优点,可应用于LSDV拷贝数的定量检测。对内蒙地区采集和送检的部分临床样品进行检测,结果均为LSDV阴性。

关键词：牛结节性皮肤病病毒 qPCR 标准质粒

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血浆硝碘酚腈LC-MS/MS检测方法的建立及在鄂尔多斯细毛羊体内的药动学研究

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内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2022年第6期43卷 1-6页

作者：马雪妮白玉廷海鹰吉日嘎浪图阿拉腾敖日格乐哈斯苏荣内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 乌审旗动物疫病预防控制中心嘎鲁图017300 乌审旗光芒农牧有限公司嘎鲁图017300

本文研究硝碘酚腈注射液在鄂尔多斯细毛羊体内的动力学特征,为临床合理用药提供依据。随机选取9只3~4周岁、体重相近、临床健康的鄂尔多斯细毛羊,按10 mg·kg^(-1)颈部皮下注射硝碘酚腈,按照事先设定好的16个不同时间点采集血液并... 详细信息

本文研究硝碘酚腈注射液在鄂尔多斯细毛羊体内的动力学特征,为临床合理用药提供依据。随机选取9只3~4周岁、体重相近、临床健康的鄂尔多斯细毛羊,按10 mg·kg^(-1)颈部皮下注射硝碘酚腈,按照事先设定好的16个不同时间点采集血液并分离血浆。血浆样品采用液液萃取结合固相萃取进行预处理,借助液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定样品中的硝碘酚腈动态浓度,并利用Phoenix WinNolin 7.0软件处理血药浓度数据。硝碘酚腈在浓度25.00~2 000.00 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好(R^(2)=0.999 7),定量下限为25.00 ng·mL^(-1),硝碘酚腈和内标的提取回收率均高于84%,日内、日间的RSD均小于3%,满足药代动力学研究的方法学要求。羊皮下注射硝碘酚腈注射液(10 mg·kg^(-1))后,在羊体内吸收良好,达峰时间(T_(max))约为(15.56±6.46)h,达峰浓度(C_(max))约为(31.74±1.73)μg·mL^(-1),药时曲线下面积(AUC)为(17 563.71±2 188.05)h·μg·mL^(-1),半衰期(T_(1/2))为(250.66±50.44)h,平均驻留时间(MRT)为(431.06±34.80)h,表观分布容积(V_(d))为(201.32±40.52)mL·kg^(-1)。本研究成功建立了硝碘酚腈血药浓度的LC-MS/MS测定方法,并发现硝碘酚腈注射液在鄂尔多斯细毛羊体内吸收良好、消除缓慢、平均驻留时间长、组织分布广、药效维持时间长。

关键词：硝碘酚腈注射液鄂尔多斯细毛羊 LC-MS/MS 药物动力学特征

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布氏杆菌S2弱毒疫苗株的S2JY3基因生物信息学分析及原核表达

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畜牧与兽医 2020年第6期52卷 76-80页

作者：苏倩白丽艳孙柯林洋呼和巴特尔王文龙内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为分析布氏杆菌S2弱毒疫苗特有的S2JY3基因的功能和作为诊断抗原的可能性,应用PCR技术扩增S2JY3基因,用限制性内切酶对目的片段与pET30a(+)原核表达载体进行双酶切,构建重组表达载体,用IPTG诱导表达,蛋白纯化,并进行Western blot检测;... 详细信息

为分析布氏杆菌S2弱毒疫苗特有的S2JY3基因的功能和作为诊断抗原的可能性,应用PCR技术扩增S2JY3基因,用限制性内切酶对目的片段与pET30a(+)原核表达载体进行双酶切,构建重组表达载体,用IPTG诱导表达,蛋白纯化,并进行Western blot检测;利用生物信息学软件对该基因理化性质、结构特点进行分析。结果表明,S2JY3基因全长1257 bp,编码418个氨基酸,蛋白质理论大小值为43 kDa,理论等电点为9.73,蛋白质不稳定系数为36.31,是稳定蛋白,总平均亲水性为-0.577,为亲水性蛋白;跨膜结构和信号肽分析表明S2JY3蛋白无跨膜区,无信号肽区域。本研究成功构建了重组表达蛋白rS2JY3,Western blot结果表明rS2JY3与布氏杆菌S2疫苗免疫羊血清发生特异性结合反应,不与自然感染羊血清反应,具有良好的抗原性和特异性。该研究为羊布氏杆菌S2疫苗免疫和自然感染快速检测和鉴定等提供理论依据。

关键词：布氏杆菌 S2JY3基因原核表达生物信息学分析

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