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中国畜牧兽医 2018年第6期45卷 1645-1652页

作者：赵学亮王梦雅孙柯冯陈晨王文龙内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古农业大学动物科学学院呼和浩特010018

试验旨在克隆斯氏副柔线虫糖蛋白(glycoprotein,GP)抗原基因,并对其进行生物信息学分析。提取斯氏副柔线虫组织RNA,反转录合成cDNA,设计特异性引物以扩增GP基因CDS区,同时将其插入到克隆载体pMD19-T后测序,并对该基因编码蛋白的抗原表... 详细信息

试验旨在克隆斯氏副柔线虫糖蛋白(glycoprotein,GP)抗原基因,并对其进行生物信息学分析。提取斯氏副柔线虫组织RNA,反转录合成cDNA,设计特异性引物以扩增GP基因CDS区,同时将其插入到克隆载体pMD19-T后测序,并对该基因编码蛋白的抗原表位、理化性质、信号肽、跨膜结构域等进行生物信息学预测。结果表明,GP基因开放阅读框(ORF)全长1 149bp,编码382个氨基酸,其分子式为C1760H2878N458O590S1760,理论分子质量约为40.15ku,等电点为4.37,无信号肽,总平均亲水性为0.032,不稳定系数为42.43,是疏水、不稳定蛋白;其磷酸化位点分布位于丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)残基上;二级结构分析显示,斯氏副柔线虫GP蛋白以α-螺旋和无规则卷曲为主,与三级结构预测结果一致;抗原表位预测表明,GP蛋白可能有6个B细胞抗原表位和8个T细胞抗原表位,有望用作免疫诊断抗原和疫苗候选抗原。本研究成功克隆了斯氏副柔线虫GP基因,同时进行了系统的生物信息学分析和抗原表位预测,为斯氏副柔线虫病iELISA诊断方法的建立和DNA疫苗的研究提供理论依据。

关键词：斯氏副柔线虫 GP基因抗原表位生物信息学

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穴位埋线对非酒精性脂肪肝模型大鼠脂质代谢及AdipoR2-PPARα-CPT1a信号通路mRNA表达水平的影响

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中国兽医学报 2018年第10期38卷 1989-1993页

作者：杨茜雯王岩杨英内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

试验选用48只雌性Wistar大鼠,随机分为对照组和模型组。高脂饲料饲喂8周诱导非酒精性脂肪肝模型。模型验证后,将大鼠分为空白对照组、空白埋线A组、空白埋线B组、模型组、模型埋线A组、模型埋线B组,每组6只。埋线组进行穴位埋线,A组：... 详细信息

试验选用48只雌性Wistar大鼠,随机分为对照组和模型组。高脂饲料饲喂8周诱导非酒精性脂肪肝模型。模型验证后,将大鼠分为空白对照组、空白埋线A组、空白埋线B组、模型组、模型埋线A组、模型埋线B组,每组6只。埋线组进行穴位埋线,A组：肝俞、胆俞、后海;B组：肝俞、胆俞、后海、后三里。2周后检测血清TG、TC、FFA、LDL-C、HDL-C、ADPN含量及肝脏TG、TC、FFA、ACC、FAS含量;RT-PCR检测肝脏AdipoR2、PPARα、CPT-1a mRNA表达水平。结果显示：与模型组相比,模型埋线A、B组血清HDL-C、ADPN含量显著升高,TC/HDL-C、TG/HDL-C比值显著降低;模型埋线A、B组肝脏TG含量显著降低;模型埋线B组肝脏FFA、FAS含量显著降低;模型埋线A、B组肝脏PPARαmRNA表达水平显著升高（P〈0.05）。结果表明：穴位埋线对非酒精性脂肪肝模型大鼠血脂指标有一定的改善作用,能有效降低肝脏TG、FAS含量,调节肝脏脂质的合成,其机理可能与其参与PPAR通路调节有关。

关键词：穴位埋线非酒精性脂肪肝肝俞胆俞后海后三里 FAS PPARα

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蓝刺头多糖B对H_2O_2诱导INS-1细胞凋亡研究

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动物医学进展 2018年第11期39卷 66-70页

作者：王岩杨茜雯杨英内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

探究蓝刺头多糖B(ETPB)对由H2O2造成INS-1细胞凋亡的影响。采用ETPB分别作用于INS-1细胞24h、48h后,使用H2O2作用24h,MTT检测细胞存活率,ETPB组与阳性对照组相比可显著提高细胞存活率(P<0.05)。使用ETPB与阳性药物VC进行AO/EB染色试... 详细信息

探究蓝刺头多糖B(ETPB)对由H2O2造成INS-1细胞凋亡的影响。采用ETPB分别作用于INS-1细胞24h、48h后,使用H2O2作用24h,MTT检测细胞存活率,ETPB组与阳性对照组相比可显著提高细胞存活率(P<0.05)。使用ETPB与阳性药物VC进行AO/EB染色试验,ETPB、VC各组凋亡细胞少于阳性对照组,提示ETPB对H2O2引起的INS-1细胞凋亡有保护作用,效果与VC相近。检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax mRNA表达量,ETPB各组与阳性对照组相比能显著提高Bcl-2表达量(P<0.05),显著降低Bax表达量(P<0.05);Western blot检查Bcl-2和Bax蛋白表达量,结果与mRNA检测结果一致。说明ETPB可显著改善由H2O2造成的细胞凋亡,这种作用可能与Bcl-2和Bax基因有关。

关键词：蓝刺头多糖B INS-1细胞凋亡 Bcl-2 Bax

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四种分子伴侣促进牛支原体膜蛋白在大肠杆菌中可溶性表达研究

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中国农业大学学报 2018年第12期23卷 75-83页

作者：王艳芳周雅坪张新竹李松建麻昌姣黄海碧郝永清内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 包头医学院基础医学与法医学院内蒙古包头014060 内蒙古农业大学农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为研究分子伴侣是否可以促进牛支原体膜蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达及表达的蛋白是否具有活性,应用原核表达和Western blot方法进行检测,结果表明:1)牛支原体一个膜蛋白M1的截短片段在大肠杆菌表达系统中以包涵体形式表达,改变诱... 详细信息

为研究分子伴侣是否可以促进牛支原体膜蛋白在大肠杆菌中以可溶性形式表达及表达的蛋白是否具有活性,应用原核表达和Western blot方法进行检测,结果表明:1)牛支原体一个膜蛋白M1的截短片段在大肠杆菌表达系统中以包涵体形式表达,改变诱导时间、温度以及诱导剂浓度均未改变其表达形式;2)将4种分子伴侣pGKJE8、pGro7、pG-Tf2和pTf16分别与含有目的蛋白的重组质粒在表达工程菌(BL21)中共表达,当加入终浓度为1.0mmol/L IPTG以及0.5mg/mL L-阿拉伯糖或5.0ng/mL四环素的诱导剂,37℃诱导5h,发现分子伴侣pGTf2和pG-KJE8能显著提高M1截短片段的可溶性表达,其他2种分子伴侣未改变M1的表达形式;3)可溶性表达的M1截短片段与牛支原体阳性血清可以发生特异性反应。因此,研究发现2种分子伴侣可以使牛支原体膜蛋白在大肠杆菌表达系统中以可溶性形式表达,但未改变其生物活性,该研究结果可为建立牛支原体有效的血清学诊断方法及亚单位疫苗的研制奠定基础。

关键词：分子伴侣牛支原体膜蛋白可溶性表达原核表达系统

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骆驼斯氏副柔线虫NCC基因原核表达载体的构建及生物信息学分析

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动物医学进展 2018年第10期39卷 24-30页

作者：赵学亮冯陈晨孙柯王梦雅王文龙内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古呼和浩特010018

本试验旨在构建原核表达载体pET30a(+)-NCC,对斯氏副柔线虫NCC基因特性进行生物信息学分析。应用RT-PCR技术扩增斯氏副柔线虫NCC基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+),利用生物信息学软件对序列结构与抗原表位进行分析。结果显示,NCC... 详细信息

本试验旨在构建原核表达载体pET30a(+)-NCC,对斯氏副柔线虫NCC基因特性进行生物信息学分析。应用RT-PCR技术扩增斯氏副柔线虫NCC基因,将其克隆至原核表达载体pET-30a(+),利用生物信息学软件对序列结构与抗原表位进行分析。结果显示,NCC基因全长711bp,编码237个氨基酸,蛋白质理论大小值为25.252ku,理论等电点为6.33,蛋白质不稳定指数为40.08;跨膜结构和信号肽分析表明NCC蛋白存在1个跨膜区,无信号肽区域,其磷酸化位点分布位于丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)和酪氨酸(Tyr)残基上。NCC蛋白是一种抗原性较高的亲水性蛋白,既含有较多潜在的B细胞抗原表位又存在较多的T细胞抗原表位,本试验为斯氏副柔线虫诊断方法的建立及免疫防控提供参考。

关键词：斯氏副柔线虫 NCC基因原核表达生物信息学分析

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斯氏副柔线虫免疫相关基因CSY原核表达载体的构建及生物信息学分析

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中国兽医学报 2018年第10期38卷 1901-1907页

作者：赵学亮孙柯王梦雅白丽艳冯陈晨王文龙内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古农业大学动物科学学院内蒙古呼和浩特010018

采用RT-PCR克隆斯氏副柔线虫CSY基因的CDS区,限制性内切酶对目的片段与pET30a（＋）原核表达载体进行双酶切,构建重组表达载体,利用生物信息学软件对该基因理化性质、结构特点进行分析。结果显示：CSY基因全长774bp,编码255个氨基酸,蛋... 详细信息

采用RT-PCR克隆斯氏副柔线虫CSY基因的CDS区,限制性内切酶对目的片段与pET30a（＋）原核表达载体进行双酶切,构建重组表达载体,利用生物信息学软件对该基因理化性质、结构特点进行分析。结果显示：CSY基因全长774bp,编码255个氨基酸,蛋白质理论大小值为29 240,理论等电点为7.53,蛋白质不稳定指数为40.09;跨膜结构和信号肽分析表明CSY蛋白无跨膜区,无信号肽区域。结果表明：成功构建了pET-30a（＋）-CSY重组表达载体;生物信息学分析表明CSY蛋白是一种抗原性较高的亲水性蛋白,可能有7个B细胞抗原表位和8个T细胞抗原表位,有望用于斯氏副柔线虫的免疫诊断抗原和疫苗候选抗原。

关键词：斯氏副柔线虫 CSY基因抗原表位生物信息学分析

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双峰驼CYP2J cDNA全长克隆、序列信息及组织表达分析

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畜牧兽医学报 2018年第10期49卷 2133-2144页

作者：贾志鹏彭小彬罗查干哈斯苏荣内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古骆驼研究院阿拉善右旗737300

旨在研究双峰驼CYP2J基因及其编码蛋白的结构和功能。本试验首先通过RACE和RT-PCR技术,扩增得到双峰驼CYP2J基因cDNA全长。然后利用生物信息学方法,对该基因编码的蛋白特征进行分析,并使用MEGA 6软件构建双峰驼CYP2J蛋白与相关物种CYP2... 详细信息

旨在研究双峰驼CYP2J基因及其编码蛋白的结构和功能。本试验首先通过RACE和RT-PCR技术,扩增得到双峰驼CYP2J基因cDNA全长。然后利用生物信息学方法,对该基因编码的蛋白特征进行分析,并使用MEGA 6软件构建双峰驼CYP2J蛋白与相关物种CYP2J蛋白的进化树。最后利用实时荧光定量PCR测定CYP2J基因在双峰驼各组织的表达量差异。结果表明,双峰驼CYP2J基因cDNA全长为1 770bp,其中完整开放阅读框(ORF)为1 509bp,共编码502个氨基酸。生物信息学分析结果表明,其ORF编码的蛋白为一种稳定的亲水性蛋白,且不具有信号肽识别功能,但有一个跨膜区域(12~35位氨基酸残基),主要定位在内质网上。该蛋白一些重要的理化特性如分子式、等电点(pI)、相对分子质量、正电荷的氨基酸残基数(Arg+Lys)和负电荷的氨基酸残基数(Asp+Glu)分别为C_(2645)H_(4099)N_(713)O_(726)S_(15)、8.45、57 983、59、56。其二级结构主要由46.41%的α-螺旋、13.15%的延伸链和40.44%的无规则卷曲组成。进一步进化树分析表明,双峰驼CYP2J蛋白与羊和牛的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR检测表明,CYP2J基因在所检测的双峰驼各组织均有表达,其中在肝和胰腺的表达量高,其次是肾、肺、心、小肠和血管,而在脾和大肠的表达量较低。因此,本研究成功获得了双峰驼CYP2J基因cDNA的全序列及其开放阅读框(ORF)所编码蛋白的生物学信息,为下一步双峰驼CYP2J蛋白和抗体的制备奠定了基础。

关键词：双峰驼 CYP2J 生物信息学分析组织表达

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阿拉善双峰驼阴道蝇蛆的形态结构观察

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动物医学进展 2019年第1期40卷 47-52页

作者：安希文额尔敦木图崔阿拉腾乌拉布仁巴依尔萨日娜支立康王超宝山内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 阿拉善左旗巴润别立动物卫生监督所内蒙古巴彦浩特750308 阿拉善左旗动物卫生监督所内蒙古巴彦浩特750300 阿拉善盟动物卫生监督所内蒙古巴彦浩特750306 巴彦淖尔市家畜改良工作站内蒙古巴彦淖尔015000

阿拉善双峰驼阴道蝇蛆病是由黑须污蝇(Wohlfahrtia magnifica)幼虫寄生而引起的一种疾病,论文对阿拉善双峰驼阴道蝇蛆形态结构进行了观察。一期幼虫为从野外捕捉的黑须污雌蝇体内获得或从双峰驼阴门附近采集雌蝇刚排出的一期幼虫;在患... 详细信息

阿拉善双峰驼阴道蝇蛆病是由黑须污蝇(Wohlfahrtia magnifica)幼虫寄生而引起的一种疾病,论文对阿拉善双峰驼阴道蝇蛆形态结构进行了观察。一期幼虫为从野外捕捉的黑须污雌蝇体内获得或从双峰驼阴门附近采集雌蝇刚排出的一期幼虫;在患病驼阴道病灶处可以捕捉到二期、三期幼虫,采用扫描电子显微镜、一体式解剖显微镜、超景深成像仪等进行观察并描述。在解剖镜下看到蝇蛆具有12段体节,分别为1段双叶伪头、3段胸节、7段腹节和肛部。扫描电子显微镜下观察到一期幼虫双叶伪头上具有很多感受器和一对口钩,口钩附在头骨架上,蝇蛆体表有很多硬刺,每一体节上刺的数量与排列方式不同。黑须污蝇二期、三期幼虫前呼吸孔呈扇形,由5个分支组成。肛部为最后一体节,呈半球型,后呼吸孔隐藏在气门腔内。

关键词：阿拉善双峰驼阴道蝇蛆病黑须污蝇幼虫形态学扫描电子显微镜

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乌审旗地区绵羊消化道线虫感染情况及耐药性的调查

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中国兽医科学 2018年第6期48卷 735-742页

作者：额叶勒德格曹增富海鹰米其德玛丽雅其其格哈斯苏荣内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 鄂尔多斯市乌审旗动物疫病控制中心内蒙古鄂尔多斯017300

为调查乌审旗地区绵羊消化道线虫感染情况及跟踪研究常用抗线虫药物的驱虫效果,通过粪便虫卵定性和定量检查法及剖检法对乌审旗不同地区自然放牧绵羊群进行了蠕虫病流行情况调查,并开展了驱虫效果比较试验。结果表明,乌审旗地区绵羊蠕... 详细信息

为调查乌审旗地区绵羊消化道线虫感染情况及跟踪研究常用抗线虫药物的驱虫效果,通过粪便虫卵定性和定量检查法及剖检法对乌审旗不同地区自然放牧绵羊群进行了蠕虫病流行情况调查,并开展了驱虫效果比较试验。结果表明,乌审旗地区绵羊蠕虫病流行比较严重,绵羊蠕虫总感染率达84.4%,其中线虫、绦虫和吸虫感染率分别为84.3%、23.8%和7.9%。感染优势虫种为捻转血矛线虫和细颈线虫,其感染率分别为84.3%和65.6%。而且,这些优势虫种已对目前广泛应用的伊维菌素和阿苯达唑产生了高度耐药性,其给药后第7天的虫卵减少率分别为6.9%和1.7%,虫卵转阴率均为0。对左旋咪唑亦产生较强的耐药性,其给药后第7天的虫卵减少率为51.2%,虫卵转阴率约为30%。然而,不常用的碘硝酚注射液对捻转血矛线虫显示出强大的驱虫效果。因此,通过本实验掌握了乌审旗地区绵羊群中流行的主要线虫及其耐药情况,并筛选出对目前流行的优势虫种具有强大驱杀作用的药物,为后续制定合理的驱虫方案奠定了扎实的试验基础。

关键词：乌审旗绵羊蠕虫病流行病学调查消化道线虫耐药性

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温肾益精散对肾阳虚模型大鼠生长性能的影响

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中国兽医科学 2018年第9期48卷 1187-1195页

作者：马晓宇姜梦如穆祥杨英内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 北京农学院动物科学技术学院北京102206

为评价温肾益精散在动物生长性能方面的作用，以氢化可的松注射液25mg／（kg·d）双侧后肢股四头肌交替注射15d建立肾阳虚大鼠模型。将大鼠随机分为空白对照组，模型组，金匮肾气丸组和温肾益精散高、中、低剂量组。空白对照组和模... 详细信息

为评价温肾益精散在动物生长性能方面的作用，以氢化可的松注射液25mg／（kg·d）双侧后肢股四头肌交替注射15d建立肾阳虚大鼠模型。将大鼠随机分为空白对照组，模型组，金匮肾气丸组和温肾益精散高、中、低剂量组。空白对照组和模型组大鼠连续30d灌服0．9％氯化钠溶液，其余各组大鼠连续30d灌服相应质量浓度的金匮肾气丸和温肾益精散。检测大鼠30d平均日增重、平均日采食量，计算其饲料转化率；记录大鼠体质量的变化；用ELISA方法检测血清中生长激素（GH）、生长抑素（SST）和胰岛素样生长因子1（IGF—1）含量，RT—PCR方法检测肝中GHR、JAK2、STAT5b和IGF—1mRNA表达量。结果显示，与模型组相比，温肾益精散高剂量组大鼠平均日采食量显著降低（P〈0．05），饲料转化率提高，体质量升高；温肾益精散中剂量组大鼠平均日增重显著升高（P〈0．05），饲料转化率提高，体质量显著升高（P〈0．05），血清中GH和IGF-1质量浓度显著升高（P〈0．05），SST质量浓度显著降低（P〈0．05），肝中JAK2和IGF-1mRNA表达量显著升高（P〈0．05）；温肾益精散低剂量组大鼠平均日增重和体质量均显著升高（P〈0．05），饲料转化率提高。结果表明．适宜质量浓度的温肾益精散可以改善肾阳虚模型大鼠的生长性能，且这种功能的发挥可能是通过JAK—STAT信号通路完成的。

关键词：温肾益精散肾阳虚生长性能

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