检索结果-内蒙古大学图书馆

黑龙江畜牧兽医 2023年第19期 66-71页

作者：毛晓伟孙柯石雅琴穆嘉明王文龙呼和巴特尔内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了区分布鲁氏菌S2疫苗株和布鲁氏菌野毒株,试验通过比对NCBI上公布的布鲁氏菌S2疫苗株和M28野毒株全基因组序列,筛选出S2疫苗株特有基因GL_0002189,对该基因进行克隆、原核表达及蛋白质纯化,以纯化的重组蛋白作为抗原建立间接ELISA检... 详细信息

为了区分布鲁氏菌S2疫苗株和布鲁氏菌野毒株,试验通过比对NCBI上公布的布鲁氏菌S2疫苗株和M28野毒株全基因组序列,筛选出S2疫苗株特有基因GL_0002189,对该基因进行克隆、原核表达及蛋白质纯化,以纯化的重组蛋白作为抗原建立间接ELISA检测方法,对该方法的反应条件进行优化后确定判定点,同时对建立的间接ELISA检测方法进行重复性验证、特异性和敏感性试验,并对部分曾接种过布鲁氏菌S2疫苗的83份牛血清进行检测。结果表明:重组蛋白GL_0002189同时以可溶形式和包涵体形式表达,经纯化得到大小为29.2 ku的重组蛋白;在建立的间接ELISA检测方法中,最适重组蛋白包被浓度为2.5 ng/μL,最适血清稀释度为1∶100,最佳酶标二抗稀释度为1∶5 000,判定点为0.586,该方法的特异性为95.0%,敏感性为93.3%,且具有较好的重复性。利用建立的间接ELISA检测方法对83份牛血清进行检测,检出率为7.2%。说明试验建立的间接ELISA检测方法可区分布鲁氏菌S2疫苗免疫牛血清和布鲁氏菌野毒感染牛血清。

关键词：布鲁氏菌疫苗间接ELISA 鉴别诊断原核表达

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蒙古马胃蝇蛆病的组织损伤研究与虫体鉴定

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中国兽医科学 2024年第9期54卷 1240-1247页

作者：董俊斌王文龙王金玲丁玉林包海泉内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古农业大学食品科学与工程学院内蒙古呼和浩特010018

为了明确蒙古马马胃蝇蛆感染组织的病理变化及感染虫体种类,2021年12月份在内蒙古和林和呼伦贝尔屠宰场各收集到9例感染马胃蝇蛆的蒙古马病料,对感染马的咽部、胃部、十二指肠进行病理学观察,并且利用光学显微镜和扫描电镜对胃蝇第三龄... 详细信息

为了明确蒙古马马胃蝇蛆感染组织的病理变化及感染虫体种类,2021年12月份在内蒙古和林和呼伦贝尔屠宰场各收集到9例感染马胃蝇蛆的蒙古马病料,对感染马的咽部、胃部、十二指肠进行病理学观察,并且利用光学显微镜和扫描电镜对胃蝇第三龄幼虫进行形态学观察,同时选取胃蝇第三龄幼虫,通过PCR方法扩增线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅱ(COXⅡ)基因。利用MEGA6.0软件对胃蝇COXⅡ基因和GenBank数据库中胃蝇科的其他种类同源序列进行Clustal W比较,构建系统发育树。结果表明:感染马的病理变化主要为咽部、胃部、十二指肠黏膜出现不同程度的损伤和增生性炎变化,黏膜层水肿,炎性细胞浸润,上皮细胞空泡化。咽部出现虫体肉芽肿,胃部出现蝇蛆损伤的炎性寄生灶。和林蒙古马马胃蝇的第三龄幼虫口脊骨的页部、伪头小刺特征与黑腹胃蝇幼虫的形态一致。呼伦贝尔蒙古马马胃蝇的第三龄幼虫口脊骨、棘刺特征和肠胃蝇相似。系统发育树表明,和林蒙古马马胃蝇与GenBank数据库中黑腹胃蝇聚在一起,而呼伦贝尔蒙古马马胃蝇单独成为1个分支,与其他胃蝇的遗传距离很大。所以和林蒙古马马胃蝇鉴定为黑腹胃蝇,呼伦贝尔蒙古马马胃蝇是基因变异较大的胃蝇变种。

关键词：蒙古马马胃蝇蛆病理变化病原鉴定

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蒙古马马胃蝇三龄幼虫形态鉴定和种系发育关系分析

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中国兽医杂志 2025年第2期61卷 57-61页

作者：董俊斌包海泉内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010010 内蒙古农业大学食品科学与工程学院内蒙古呼和浩特010018

为了明确内蒙古自治区呼和浩特市和通辽市蒙古马马胃蝇蛆病病原种类和种系发育关系,本试验于2023年3月在呼和浩特市和通辽市屠宰场采集马胃蝇三龄幼虫120只,利用光学显微镜和扫描电子显微镜对其进行形态学鉴定;通过PCR方法扩增其线粒体... 详细信息

为了明确内蒙古自治区呼和浩特市和通辽市蒙古马马胃蝇蛆病病原种类和种系发育关系,本试验于2023年3月在呼和浩特市和通辽市屠宰场采集马胃蝇三龄幼虫120只,利用光学显微镜和扫描电子显微镜对其进行形态学鉴定;通过PCR方法扩增其线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)基因,并利用MEGA 6.0和DnaSP 5.0软件将COXⅠ基因序列与GenBank中胃蝇科、皮蝇科和狂蝇科昆虫COXⅠ基因序列进行比对分析,并构建系统发育树;同时对呼和浩特市和通辽市的马胃蝇三龄幼虫进行线粒体COXⅠ基因单倍型和遗传分化分析。结果显示,本试验采集的马胃蝇三龄幼虫体色呈粉红色、口脊末端平滑,形态特征与黑腹胃蝇三龄幼虫一致。系统发育分析结果显示,通辽市黑腹胃蝇TONGLIAO1、TONGLIAO2、TONGLIAO3和TONGLIAO4与呼和浩特市黑腹胃蝇HUHEHAOTE2处于同一分支,呼和浩特市黑腹胃蝇HUHEHAOTE1与GenBank数据库中胃蝇科黑腹胃蝇处于同一分支,2个地区的黑腹胃蝇均与胃蝇科鼻胃蝇、红尾胃蝇和肠胃蝇处于不同分支,与皮蝇科、狂蝇科和外群双翅目麻蝇科距离较远。马胃蝇三龄幼虫COXⅠ基因相似性比对结果与系统发育分析结果一致。呼和浩特市和通辽市黑腹胃蝇线粒体COXⅠ基因序列共含有5个单倍型,二者没有共享单倍型,遗传分化系数(Fst)值大于0.05,基因流(Nm)为4。结果表明,呼和浩特市和通辽市蒙古马马胃蝇蛆病病原为黑腹胃蝇,且亲缘关系较近,未出现遗传分化。

关键词：蒙古马黑腹胃蝇形态学鉴定发育树分析

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表达牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的嵌合狂犬病病毒生物学特性

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中国兽医学报 2023年第12期43卷 2451-2456页

作者：李欣李伊铭赵洪哲王亚新王凤雪温永俊内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起牛发热、腹泻、黏膜糜烂溃疡等症状,给养牛业带来严重经济损失,新型疫苗的研发意义重大。狂犬病病毒(rabies virus,RV)作为病毒载体可稳定表达外源蛋白,反过来外源蛋白也不会阻... 详细信息

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)引起牛发热、腹泻、黏膜糜烂溃疡等症状,给养牛业带来严重经济损失,新型疫苗的研发意义重大。狂犬病病毒(rabies virus,RV)作为病毒载体可稳定表达外源蛋白,反过来外源蛋白也不会阻碍病毒的复制。本研究目的是利用反向遗传操作技术构建和拯救表达BVDV结构蛋白的重组RV,以期获得一种能表达高水平BVDV E2蛋白的重组病毒。选择Ⅰ型BVDV主要优势抗原E2蛋白基因序列进行优化后合成E2基因片段,利用Overlap PCR的方法将E2基因改造为DE2片段,以RV疫苗毒株LBNSE为病毒载体,利用BsiWⅠ和NheⅠ酶切位点,将DE2基因插入LBNSE基因组中,成功构建pRV-DE2重组质粒。脂质体法将全长重组质粒转染BSR细胞后,拯救重组病毒RV-DE2,并用直接免疫荧光和RT-PCR的方法对其鉴定,对构建成功的病毒进行生长特性、致病性、重组蛋白表达特性等生物学特性和小鼠体内免疫效力的研究。结果表明,RV-DE2病毒滴度在F3代之后趋于稳定,在相同的培养条件下比亲本LBNSE病毒滴度高。重组病毒对小鼠无致死性,E2蛋白表达量高于BVDV。将灭活的重组病毒免疫小鼠后成功产生了抗BVDV的中和抗体。表达BVDV E2的重组RV的成功拯救为BVDV新型疫苗的研发提供候选毒株,对BVD的防控提供了一种新的思路。

关键词： BVDV E2蛋白 RV疫苗毒株 LBNSE 反向遗传操作直接免疫荧光

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棕色绿僵菌与高效氯氰菊酯复配杀蝇蛆的增效作用

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动物医学进展 2024年第6期45卷 78-83页

作者：李倩楠马园郝陆瑶张艳妮郭志凯丁玉林杜山王瑞内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室/国家级动物医学实验教学中心内蒙古呼和浩特010010

为了研究棕色绿僵菌(Metarhizium brunneum)与高效氯氰菊酯(beta-cypermethrin)复配在蝇蛆防控中的应用,试验测定了高效氯氰菊酯和棕色绿僵菌的相容性,以及单一棕色绿僵菌组、棕色绿僵菌与高效氯氰菊酯复配制剂组杀蝇蛆毒性试验。结果表... 详细信息

为了研究棕色绿僵菌(Metarhizium brunneum)与高效氯氰菊酯(beta-cypermethrin)复配在蝇蛆防控中的应用,试验测定了高效氯氰菊酯和棕色绿僵菌的相容性,以及单一棕色绿僵菌组、棕色绿僵菌与高效氯氰菊酯复配制剂组杀蝇蛆毒性试验。结果表明,即使在较高浓度的下,高效氯氰菊酯对棕色绿僵菌的菌丝生长情况、孢子萌发率和孢子产量等无显著影响;高效氯氰菊酯与棕色绿僵菌联合使用确实可以增加棕色绿僵菌对蝇蛆的致死率,其中孢子浓度为1×10^(8)个/mL、1×10^(7)个/mL对蝇蛆的累计死亡率分别从90.0%、86.7%提高到100%;孢子浓度为1×10^(6)个/mL、1×10^(5)个/mL、1×10^(4)个/mL的累计死亡率分别从86.7%、50%和36.7%提高到93.3%、70%和63.3%。说明棕色绿僵菌与高效氯氰菊酯相容性良好,可以一起使用。低剂量的高效氯氰菊酯与棕色绿僵菌联用应用可以降低高效氯氰菊酯的使用量并提高生物防治效果。

关键词：棕色绿僵菌高效氯氰菊酯蝇蛆生物防治增效作用

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磷酸二酯酶在金黄色葡萄球菌性乳腺炎中的表达分析

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黑龙江畜牧兽医 2024年第1期 1-9,16页

作者：张良万凯陈灰李慧萍刘淑英内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 内蒙古自治区基础兽医学重点实验室呼和浩特010018

为了探究磷酸二酯酶(PDEs)家族成员表达与金黄色葡萄球菌性乳腺炎的关系,试验采用PCR技术检测了PDE家族除PDE6、PDE10和PDE11基因外的各亚型在奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)、小鼠乳腺上皮细胞(mMECs)及小鼠乳腺(mMG)中的表达情况,实时荧光定... 详细信息

为了探究磷酸二酯酶(PDEs)家族成员表达与金黄色葡萄球菌性乳腺炎的关系,试验采用PCR技术检测了PDE家族除PDE6、PDE10和PDE11基因外的各亚型在奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)、小鼠乳腺上皮细胞(mMECs)及小鼠乳腺(mMG)中的表达情况,实时荧光定量PCR技术检测了金黄色葡萄球菌刺激下这些PDE家族亚型的表达差异及PDE4抑制剂RO-20-1724对金黄色葡萄球菌诱导的炎症因子表达的影响。结果表明:在bMECs中,PDE3B、PDE5A、PDE8B、PDE9A基因呈高表达;在mMECs中,PDE2A基因呈高表达;而在mMG中,PDE2A、PDE3A基因呈高表达。金黄色葡萄球菌刺激8 h后bMECs中PDE1C、PDE4A、PDE4B、PDE4C、PDE4D、PDE5A、PDE8A基因的相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),而PDE1B、PDE7A、PDE7B基因相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);mMECs中PDE1B、PDE1C、PDE2A、PDE3A、PDE4A、PDE4C、PDE4D、PDE5A基因相对表达量极显著升高(P<0.01),而PDE7A基因相对表达量极显著降低(P<0.01);mMG中PDE1B、PDE3A、PDE4C、PDE4D、PDE5A、PDE8A、PDE8B基因相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),而PDE1C、PDE4B、PDE7B基因相对表达量极显著降低(P<0.01)。加入PDE4抑制剂RO-20-1724孵育8 h后可极显著降低金黄色葡萄球菌诱导的mMECs中IL-1β基因的相对表达量。说明乳腺上皮细胞中PDE家族的一些亚型表达存在种属差异,金黄色葡萄球菌感染后可引起不同PDE亚型表达发生改变。

关键词：乳腺炎磷酸二酯酶金黄色葡萄球菌 mRNA表达上皮细胞

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Nesfatin-1对禁食小鼠多巴胺奖赏系统的影响

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黑龙江畜牧兽医 2023年第19期 8-12页

作者：罗雨晨么宏强谢志凤陈宇飞王铭玉斯日古楞内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了探究Nesfatin-1对禁食小鼠多巴胺奖赏系统的影响,试验将40只C57BL/6小鼠随机分为阴性对照组、禁食24 h组、禁食48 h组、禁食24 h+Nesfatin-1组、禁食48 h+Nesfatin-1组,每组8只。禁食24 h、48 h组小鼠分别禁食24 h及48 h;禁食24 h+N... 详细信息

为了探究Nesfatin-1对禁食小鼠多巴胺奖赏系统的影响,试验将40只C57BL/6小鼠随机分为阴性对照组、禁食24 h组、禁食48 h组、禁食24 h+Nesfatin-1组、禁食48 h+Nesfatin-1组,每组8只。禁食24 h、48 h组小鼠分别禁食24 h及48 h;禁食24 h+Nesfatin-1组及禁食48 h+Nesfatin-1组小鼠分别在禁食24 h及48 h基础上按体重120 mg/kg腹腔注射Nesfatin-1;阴性对照组小鼠腹腔注射等体积的PBS。注射Nesfatin-1后等待观察4 h,各组小鼠眼球采血后断颈处死,解剖取脑组织,采用ELISA方法检测各组小鼠血清Nesfatin-1及多巴胺含量;应用实时荧光定量PCR方法检测各组小鼠脑组织酪氨酸羟化酶(TH)基因和即刻早期基因(cFOS基因)的相对表达量。结果表明:与阴性对照组相比,禁食24 h组及禁食48 h组小鼠血清Nesfatin-1、多巴胺含量显著降低(P<0.05);与禁食24 h组相比,禁食24 h+Nesfatin-1组小鼠血清Nesfatin-1、多巴胺含量极显著升高(P<0.01);与禁食48 h组相比,禁食48 h+Nesfatin-1组小鼠血清Nesfatin-1、多巴胺含量极显著升高(P<0.01)。与阴性对照组相比,禁食24 h组及禁食48 h组小鼠脑组织TH基因的相对表达量极显著下降(P<0.01),cFOS基因的相对表达量极显著升高(P<0.01);与禁食24 h组相比,禁食24 h+Nesfatin-1组小鼠脑组织TH及cFOS基因相对表达量极显著升高(P<0.01);与禁食48 h组相比,禁食48 h+Nesfatin-1组小鼠脑组织TH及cFOS基因相对表达量显著升高(P<0.05)。说明Nesfatin-1对禁食小鼠多巴胺奖赏系统有一定影响。

关键词： Nesfatin-1 禁食多巴胺酪氨酸羟化酶即刻早期基因

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携带eGFP基因的重组牛结节性皮肤病病毒的构建及其生长特性研究

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中国畜牧兽医 2024年第12期51卷 5479-5488页

作者：莘若兰周祉玉张嘉雯杜吉革印春生王凤雪陈小云温永俊朱真内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010000 中国兽医药品监察所北京100081

【目的】筛选可高效率表达重组牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)的不同启动子/细胞组合,据此构建携带增强绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组LSDV,并探究其生长特性,为后续抗病毒药物的开发以及病毒复制和作用机制的研究... 详细信息

【目的】筛选可高效率表达重组牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)的不同启动子/细胞组合,据此构建携带增强绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组LSDV,并探究其生长特性,为后续抗病毒药物的开发以及病毒复制和作用机制的研究奠定基础。【方法】利用融合PCR方法分别将羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)启动子、LSDV启动子与eGFP基因进行连接,用以替换LSDV 005基因,构建同源重组片段,并将其分别转染至感染LSDV的非洲绿猴肾细胞(Vero)、非洲绿猴肾细胞衍生株(Vero-E6)、牛肾细胞(MDBK)、仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)、羊睾丸细胞(LT)和原代羊睾丸细胞(PLT)6种细胞中,通过荧光显微镜观察转染效果,并使用ImageJ软件统计荧光面积百分比,筛选出最优启动子/细胞组合。以筛选出的最优组合进行重组病毒转染,并检测病毒纯化效果,进一步探究重组病毒的生长特性和稳定性。【结果】在6种细胞中LSDV启动子的转染效果均优于ORFV启动子,且在PLT细胞中,LSDV启动子的荧光面积百分比最高(8.38%),与其他组细胞相比差异显著(P<0.05)。使用LSDV启动子/PLT细胞组合构建重组病毒LSDV-Δ005/eGFP,纯化后在倒置荧光显微镜下观察到所有病变部位均带有绿色荧光,荧光面积百分比约为50.8%。病毒的生长特性和稳定性分析结果显示,重组病毒LSDV-Δ005/eGFP在6种细胞中的病变效应以及病毒滴度随时间变化的趋势与野生毒株LSDV/Heilongjiang/2022相似,且在PLT细胞上连续传代10次eGFP基因稳定表达。【结论】利用LSDV启动子/PLT细胞组合构建重组LSDV时效率最佳,据此构建的重组病毒LSDV-Δ005/eGFP生长特性与LSDV野生毒株一致,经10次传代后遗传稳定性良好。

关键词：牛结节性皮肤病病毒细胞转染重组病毒生长特性

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伪狂犬病病毒gE/gI/TK基因缺失对感染PK-15细胞的差异表达蛋白质组分析

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中国兽医学报 2023年第5期43卷 880-886页

作者：张洪亮王凤雪刁志凯李桂梅黄娟温永俊单虎青岛农业大学动物医学院山东省预防兽医学重点实验室山东青岛266109 内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为了研究伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)变异株3个主要毒力基因gE/gI/TK缺失对感染宿主细胞后蛋白表达的影响,探究PRV与宿主细胞相互作用的分子机制,将PRV SD-2017ΔgE/gI/TK株接种PK-15细胞,运用串联质谱标签(tandem mass tags,... 详细信息

为了研究伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)变异株3个主要毒力基因gE/gI/TK缺失对感染宿主细胞后蛋白表达的影响,探究PRV与宿主细胞相互作用的分子机制,将PRV SD-2017ΔgE/gI/TK株接种PK-15细胞,运用串联质谱标签(tandem mass tags,TMT)标记定量蛋白质组学技术,开展PRV感染细胞后差异表达蛋白分析,并通过Western blot进行数据验证。通过生物信息学分析发现,与亲本毒株PRV SD-2017感染组比较,SD-2017ΔgE/gI/TK感染组共鉴定到19个差异表达蛋白,其中7个蛋白上调,12个蛋白下调;与传统疫苗株Bartha-K/61比较,SD-2017ΔgE/gI/TK感染组共鉴定到176个差异表达蛋白,其中157个蛋白上调,19个蛋白下调。这些差异蛋白主要与紧密连接、RNA降解途径、核糖体生物发生、B细胞受体等信号通路有关,其中ATP2A1、KDM8、Eri1、XRCC6、DNM2和PYCR2等差异蛋白参与细胞凋亡、免疫反应和自噬相关功能。通过Western blot验证了MYLPF、ERI1、XRCC6和GAMT的表达情况与TMT比率一致,证明了该数据的可靠性。本研究为进一步探讨PRV变异株的致病和免疫机制奠定了理论基础。

关键词：伪狂犬病病毒变异株毒力基因 TMT 差异表达蛋白

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前列腺素D_(2)-DP_(1)受体途径对细菌性奶牛子宫内膜炎炎症介质表达的影响

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动物医学进展 2023年第2期44卷 51-55页

作者：杨效林包海霞毛伟刘博曹金山内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为了阐明前列腺素D 2(prostaglandin D2,PGD 2)/DP 1受体途径参与大肠埃希氏菌(***)和金黄色葡萄球菌(***)所致奶牛子宫内膜炎炎症反应的作用机制,以体外培养奶牛子宫内膜组织为研究对象,用浓度1×10^(-6) mol/L的DP 1受体激动剂(BW... 详细信息

为了阐明前列腺素D 2(prostaglandin D2,PGD 2)/DP 1受体途径参与大肠埃希氏菌(***)和金黄色葡萄球菌(***)所致奶牛子宫内膜炎炎症反应的作用机制,以体外培养奶牛子宫内膜组织为研究对象,用浓度1×10^(-6) mol/L的DP 1受体激动剂(BW-245C,15d-PGJ2)或DP 1受体抑制剂(S5751,MK-0524)处理***与***感染体外培养的奶牛子宫内膜组织12 h,用RT-qPCR检测IL-6、TNF-α和NOS-2表达变化;ELISA检测培养液上清中IL-6、TNF-α分泌变化;免疫荧光法检测组织中NOS-2蛋白表达情况。结果显示,与空白对照组相比,***和***感染奶牛子宫内膜组织中IL-6、TNF-α和NOS-2的表达显著升高(P<0.05);DP 1受体激动剂与***和***共孵育奶牛子宫内膜组织,显著抑制组织中IL-6、TNF-α和NOS-2的表达(P<0.05);而DP 1受体抑制剂、***和***共同处理体外培养的奶牛子宫内膜组织后,组织中IL-6、TNF-α和NOS-2的表达显著高于细菌感染组(P<0.05)。表明PGD 2/DP 1途径在细菌诱导的奶牛子宫内膜炎症中发挥着重要的调控作用。

关键词：奶牛子宫内膜组织大肠埃希氏菌金黄色葡萄球菌白介素-6 肿瘤坏死因子-α 一氧化氮合酶-2

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