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第三届中国骆驼大会

作者：伊丽玉斯日古楞吉日木图内蒙古农业大学食品工程学院乳品生物技术与工程教育部重点实验室呼和浩特 010018 内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特 010018 内蒙古骆驼研究院内蒙古阿拉善盟右旗巴丹吉林镇 737300 内蒙古农业大学食品工程学院乳品生物技术与工程教育部重点实验室呼和浩特 010018 内蒙古骆驼研究院内蒙古阿拉善盟右旗巴丹吉林镇 737300

随着生活水平的提高,免疫乳的开发利用逐渐成为当今乳制品市场的主流.本文就免疫乳的概念,免疫乳的功能因子及其研究状况以及免疫驼乳的开发优势进行了简要综述.

关键词：驼乳功能因子营养成分免疫功能

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雌激素对奶牛输卵管上皮细胞前列腺素E_2和F_(2α)合成酶mRNA表达的影响

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中国畜牧兽医 2013年第3期40卷 130-133页

作者：樊凤娇董至恒付改玲黄娜曹金山内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为了揭示雌激素(estrogen,E2)对奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素E2合成酶(PGES)和前列腺素F2α合成酶(PGFS)mRNA表达的影响,探讨E2对奶牛输卵管生殖生理的调节作用,本试验采用了体外培养荷斯坦奶牛输卵管上皮细胞技术,分不同时间(0、2、4... 详细信息

为了揭示雌激素(estrogen,E2)对奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素E2合成酶(PGES)和前列腺素F2α合成酶(PGFS)mRNA表达的影响,探讨E2对奶牛输卵管生殖生理的调节作用,本试验采用了体外培养荷斯坦奶牛输卵管上皮细胞技术,分不同时间(0、2、4、8、16、24和48h)和不同浓度(10-12、10-11、10-10、10-9 mol/L)添加雌激素E2(以不加雌激素作空白对照),采用荧光定量PCR技术检测PGES和PGFS mRNA表达。不同浓度的E2或同一浓度不同刺激时间的E2均能增加PGES的表达,但4h浓度为10-10 mol/L时与空白对照相比差异极显著(P<0.01),而PGFS在24h添加浓度为10-12 mol/L E2时与空白对照相比差异极显著(P<0.01)。试验结果表明,E2对培养的奶牛输卵管上皮细胞PGES和PGFS mRNA的表达有促进作用,说明雌激素E2对前列腺素酶PGES和PGFS mRNA的表达具有调控作用。

关键词：雌激素输卵管上皮细胞 PGES PGFS 荧光定量PCR

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牛磺胆酸对小鼠腹腔巨噬细胞Gsα基因表达的影响

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中国畜牧兽医 2013年第4期40卷 10-13页

作者：郭文瑞毛伟关红李培锋内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

本试验旨在探讨牛磺胆酸(taurocholate acid,TCA)对小鼠腹腔巨噬细胞刺激性G蛋白α(Gsα)基因表达的影响,为阐明TCA对小鼠腹腔巨噬细胞的作用机制提供线索。采用荧光定量PCR技术检测TCA对小鼠腹腔巨噬细胞GsαmRNA表达的影响。试验结果... 详细信息

本试验旨在探讨牛磺胆酸(taurocholate acid,TCA)对小鼠腹腔巨噬细胞刺激性G蛋白α(Gsα)基因表达的影响,为阐明TCA对小鼠腹腔巨噬细胞的作用机制提供线索。采用荧光定量PCR技术检测TCA对小鼠腹腔巨噬细胞GsαmRNA表达的影响。试验结果显示,高(15μg/mL)、中(1.5μg/mL)和低剂量(0.15μg/mL)的TCA作用组小鼠腹腔巨噬细胞GsαmRNA的表达均显著高于对照组和LPS刺激组(P<0.05)。结果表明,TCA能显著促进小鼠腹腔巨噬细胞GsαmRNA的表达。

关键词：牛磺胆酸刺激性G蛋白α 荧光定量PCR 腹腔巨噬细胞

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绵羊肺腺瘤病毒受体透明质酸酶-2的原核表达及纯化

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中国畜牧兽医 2013年第9期40卷 32-36页

作者：朱福余马学恩于立新么宏强内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为建立绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)受体透明质酸酶-2(Hyal-2)的原核高效表达体系,本试验设计了扩增JSRV受体Hyal-2基因的特异性引物,应用PCR技术扩增出Hyal-2全长基因,将该基因定向重组于原核表达载体pGEX-4T-1中... 详细信息

为建立绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)受体透明质酸酶-2(Hyal-2)的原核高效表达体系,本试验设计了扩增JSRV受体Hyal-2基因的特异性引物,应用PCR技术扩增出Hyal-2全长基因,将该基因定向重组于原核表达载体pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1-Hyal-2重组质粒,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,逐步优化条件至稳定表达,经Western blotting检测融合蛋白成功表达后,通过亲和层析法对融合蛋白进行纯化。结果表明,Hyal-2基因正确地插入到原核表达载体pGEX-4T-1中;经诱导含重组质粒pGEX-4T-1-Hyal-2的表达菌高效表达了带GST标签的目的蛋白;SDSPAGE电泳结果显示目的蛋白分子质量为80 ku,与预期大小一致,经Western blotting验证为带GST标签的融合蛋白;通过谷胱甘肽亲和层析法获得纯化的目的蛋白。本试验结果为进一步制备Hyal-2蛋白的多克隆抗体及深入研究其功能奠定基础。

关键词：绵羊肺腺瘤病受体透明质酸酶-2 原核表达蛋白纯化

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HypoderminC基因DNA疫苗的构建及其免疫原性试验

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中国兽医杂志 2013年第1期49卷 13-15页

作者：刘春霞白红岩娜仁高娃呼和巴特尔王文龙内蒙古农业大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

本试验以Hypodermin C(HC)基因原核表达载体pETHC为模板,PCR扩增HC基因,克隆测序后,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建了DNA疫苗pcDNA-HC。pcDNA-HC体外转染小鼠胎儿成纤维细胞后,间接免疫荧光技术检测目的基因在转染细胞中的表... 详细信息

本试验以Hypodermin C(HC)基因原核表达载体pETHC为模板,PCR扩增HC基因,克隆测序后,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建了DNA疫苗pcDNA-HC。pcDNA-HC体外转染小鼠胎儿成纤维细胞后,间接免疫荧光技术检测目的基因在转染细胞中的表达。以DNA疫苗pcDNA-HC免疫小鼠,对小鼠进行体液免疫水平检测。结果表明,所构建的DNA疫苗能转染到小鼠胎儿成纤维细胞中并正确表达,免疫小鼠血清IgG滴度随免疫次数的增加而升高。

关键词：牛皮蝇蛆病 HypoderminC DNA疫苗

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丝状支原体山羊亚种脂蛋白LPPA基因的定点突变及原核表达

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畜牧与兽医 2013年第10期45卷 74-76页

作者：张玲郝永清徐春光黄海碧张爱荣内蒙古农业大学兽医学院微生物学与免疫学实验室内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

采用PCR的方法扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides ***,Mmc)模式株PG3的脂蛋白LPPA基因并对其反应原性进行了研究。该基因中含有1个密码子TGA,在支原体中编码色氨酸,却在原核表达系统中作为终止密码子,因此结合定点突变的方... 详细信息

采用PCR的方法扩增出丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides ***,Mmc)模式株PG3的脂蛋白LPPA基因并对其反应原性进行了研究。该基因中含有1个密码子TGA,在支原体中编码色氨酸,却在原核表达系统中作为终止密码子,因此结合定点突变的方法将LPPA基因序列中TGA同义突变为TGG,并构建重组表达质粒pET-LPPA,然后将其转入宿主菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达产物经SDSPAGE检测,在64 ku处出现目的条带,将重组蛋白纯化后经Western blot分析,重组蛋白能与Mmc模式株PG3兔高免血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。

关键词：丝状支原体山羊亚种 LPPA 定点突变表达

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头孢噻呋酸晶体注射液对乳腺组织的刺激性及代谢规律的研究

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内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2013年第2期34卷 21-25页

作者：关红李成应刘明强毛伟赵俊利内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 齐鲁动物保健品有限公司济南250100

目的:观察头孢噻呋酸晶体注射液对兔子和大鼠乳腺组织的刺激性并研究其在大鼠乳腺组织中的代谢规律。方法:采用临床症状观察与HE染色法观察了头孢噻呋酸晶体注射液对兔子和大鼠乳腺组织的刺激性作用;采用高效液相色谱-质谱法检测了头孢... 详细信息

目的:观察头孢噻呋酸晶体注射液对兔子和大鼠乳腺组织的刺激性并研究其在大鼠乳腺组织中的代谢规律。方法:采用临床症状观察与HE染色法观察了头孢噻呋酸晶体注射液对兔子和大鼠乳腺组织的刺激性作用;采用高效液相色谱-质谱法检测了头孢噻呋酸晶体注射液在大鼠乳腺组织中不同时间点的残留量。结果:头孢噻呋酸晶体注射液灌注兔乳腺组织中10d内对乳腺组织有一定的刺激性,60d乳腺组织切片显示乳导管内有脱落的上皮细胞,淋巴细胞浸润,少量结缔组织增生,腺泡内有少量灰蓝色物质,疑似是未吸收的药物。头孢噻呋酸晶体注射液在大鼠乳腺组织中的含量随时间呈现明显的下降趋势,60d时含量为0.0260ppb。结论:头孢噻呋酸晶体注射液对兔子和大鼠乳腺组织的刺激性小;其在大鼠乳腺组织中代谢较快。

关键词：头孢噻呋酸晶体注射液乳腺组织刺激性代谢规律

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绵羊肺腺瘤病毒内蒙株衣壳蛋白在真核细胞中的表达

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中国兽医杂志 2013年第8期49卷 3-5页

作者：斯日古楞么宏强马学恩周建华内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所黑龙江哈尔滨150030

为构建绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte Sheep Retrovirus,JSRV)内蒙株衣壳蛋白(CA)基因真核表达载体,采用含HA标签的引物,通过PCR方法从重组原核表达质粒上扩增CA-HA融合基因片段,将其克隆至真核表达载体上。构建的真核表达质粒通过脂质体... 详细信息

为构建绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte Sheep Retrovirus,JSRV)内蒙株衣壳蛋白(CA)基因真核表达载体,采用含HA标签的引物,通过PCR方法从重组原核表达质粒上扩增CA-HA融合基因片段,将其克隆至真核表达载体上。构建的真核表达质粒通过脂质体法转染293细胞和Hela细胞,用间接免疫荧光和Westhern blotting法检测目的蛋白的表达。结果表明,成功地构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-CA-HA,并转染的293细胞和Hela细胞内观察到特异性荧光和检测到目的基因的表达产物,说明CA基因在真核细胞内获得表达。本试验为建立特异性的诊断试剂盒奠定了基础。

关键词：绵羊肺腺瘤病病毒 CA基因真核表达间接免疫荧光法 Western blotting法

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牛外周血单核巨噬细胞的分离、培养与鉴定

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畜牧与饲料科学 2013年第5期34卷 21-22,25页

作者：陈玉惠周伟光高晶高龙冀显亮希尼尼根内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

试验旨在为深入研究单核巨噬细胞的生物学特性和免疫学功能提供材料。应用牛淋巴细胞分离液从牛外周血中分离牛外周血单个核细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640营养液培养5d,在倒置显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测单核巨噬细胞表... 详细信息

试验旨在为深入研究单核巨噬细胞的生物学特性和免疫学功能提供材料。应用牛淋巴细胞分离液从牛外周血中分离牛外周血单个核细胞,用含10%胎牛血清的RPMI1640营养液培养5d,在倒置显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测单核巨噬细胞表面特征性标志CD14。结果表明,获得的贴壁细胞具备巨噬细胞的形态学特征及免疫表型。通过形态学观察和流式细胞术鉴定可知,该试验成功获得了牛外周血单核巨噬细胞。

关键词：牛单核巨噬细胞分离鉴定流式细胞术形态学观察

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鉴别牛羊布鲁菌实时荧光定量PCR方法的建立

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畜牧与饲料科学 2013年第5期34卷 7-12页

作者：苏娇王艳杰智达夫关平原内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

[目的]建立准确、快速检测布鲁菌、羊种布鲁菌、牛种布鲁菌的方法。[方法]以BCSP31作为布鲁菌菌属特异性基因,以IS711插入元件作为布鲁菌菌种特异性标志,设计引物和Taqman探针;分别构建标准阳性质粒模板,将其10倍倍比稀释作多重实时荧... 详细信息

[目的]建立准确、快速检测布鲁菌、羊种布鲁菌、牛种布鲁菌的方法。[方法]以BCSP31作为布鲁菌菌属特异性基因,以IS711插入元件作为布鲁菌菌种特异性标志,设计引物和Taqman探针;分别构建标准阳性质粒模板,将其10倍倍比稀释作多重实时荧光定量PCR标准曲线,评价多重实时荧光定量PCR反应体系的敏感性、特异性、重复性。[结果]建立了鉴别牛种、羊种布鲁菌的实时荧光定量PCR方法,并用该方法对临床样品进行检测。[结论]所建立的多重实时荧光定量PCR诊断方法能够快速、准确地鉴别牛种和羊种布鲁菌。

关键词：实时荧光定量PCR 布鲁菌牛种布鲁菌羊种布鲁菌 Taqman探针

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