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兔子宫内膜上皮细胞α7-nAChR介导MAPK信号通路抑制炎性反应的机制

中国兽医学报 2022年第3期42卷 582-586页

作者：鲍朝霞魏泓毓陈灰曹金山贺鹏飞内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

子宫内膜上皮细胞可通过自我调控降低过度炎症反应以避免细胞损伤,但调控机制尚不清楚。本研究旨在探讨α7烟碱乙酰胆碱受体(α7-nAChR)是否介导调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路参与细胞避免炎症过度反应。通过体外培养兔子宫内... 详细信息

子宫内膜上皮细胞可通过自我调控降低过度炎症反应以避免细胞损伤,但调控机制尚不清楚。本研究旨在探讨α7烟碱乙酰胆碱受体(α7-nAChR)是否介导调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路参与细胞避免炎症过度反应。通过体外培养兔子宫内膜上皮细胞,脂多糖(LPS)刺激细胞炎症反应、α7-nAChR抑制剂和激动剂处理细胞,比较α7-nAChR表达与MAPK信号通路的相关性,探讨α7-nAChR介导细胞炎症自我调控可能的机制。Western blot检测结果表明,兔子宫内膜上皮细胞在100μg/L LPS刺激12 h后,JNK1/2和P38MAPK磷酸化水平明显低于细胞空白对照组,α7-nAChR抑制剂MLA(5μmol/L)与α7-nAChR激动剂共同处理后ERK1/2、JNK1/2及P38MAPK磷酸化水平上升,而α7-nAChR激动剂PNU282987(5μmol/L)和尼古丁(10 mg/L)可明显逆转MLA效应,且MAPK信号通路关键因子磷酸化与α7-nAChR表达呈部分负相关。结果表明,α7-nAChR介导调控MAPK信号通路是细胞避免炎症过度反应自我调控的潜在机制。

关键词：兔子宫内膜上皮细胞 α7-nAChR MAPK LPS 抗炎机制

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BHV-1感染牛巨噬细胞对CD300a转录的影响

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中国兽医学报 2023年第2期43卷 253-259页

作者：王旭芬安冬侯琳赵润涛张贺赵洋张志丹周伟光内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018 呼伦贝尔市海拉尔区疫病预防控制中心内蒙古呼伦贝尔021000

为探究抑制性受体CD300a在牛Ⅰ型疱疹病毒(bovine herpesvirus 1,BHV-1)免疫调控机制中的作用,分离鉴定了1株BHV-1内蒙古株,并建立CD300a基因的荧光定量PCR方法,检测BHV-1感染牛单核巨噬细胞后0,6,12,24,48,72 h 6个时间点以及空白对照... 详细信息

为探究抑制性受体CD300a在牛Ⅰ型疱疹病毒(bovine herpesvirus 1,BHV-1)免疫调控机制中的作用,分离鉴定了1株BHV-1内蒙古株,并建立CD300a基因的荧光定量PCR方法,检测BHV-1感染牛单核巨噬细胞后0,6,12,24,48,72 h 6个时间点以及空白对照组CD300a基因的转录变化。将β-actin基因作为内参,使用双标准曲线法计算攻毒组与对照组CD300a基因各时间段的相对表达量,分析CD300a在攻毒前、后的表达差异。结果显示,BHV-1分离株在MDBK细胞上出现典型细胞病变效应,测得其病毒滴度为107.23TCID50/mL。本研究建立的CD300a基因荧光定量PCR检测方法,CD300a基因和β-actin基因标准品的Ct值与模板浓度之间均具有良好的线性关系,溶解曲线均为特异单峰,最低检测限均为10拷贝/μL,具有良好的灵敏性,可以准确检测出BHV-1攻毒后巨噬细胞内的CD300a基因表达量。经计算,攻毒组CD300a表达量均高于对照组,其中,6,12,24 h的表达差异倍数显著高于0,72 h(P<0.05),表达差异倍数在12 h时达到最高,且显著高于其他各组(P<0.05),表达差异倍数从6 h时开始巨幅增长,12 h达到最大,48 h开始趋于稳定。结果表明CD300a基因作为巨噬细胞表面的抑制性受体,表达量在BHV-1入侵时会显著变化,推测CD300a基因为协助病毒进入宿主细胞或免疫逃逸也相应增多,在抗病毒免疫机制中起到一定作用。

关键词：传染性鼻气管炎牛Ⅰ型疱疹病毒 CD300a 荧光定量PCR 单核巨噬细胞

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羊副结核病临床案例在家畜病理解剖学教学中的应用

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兽医导刊 2024年第1期 18-20页

作者：王金玲丁玉林内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

家畜病理解剖学是一门实践性很强的临床性质课程,临床案例教学对提高课程的教学质量至关重要。笔者在兽医临床实践中积累了1例羊副结核病临床案例并以该案例进行教学,取得了良好的效果。通过对案例病理学诊断和发病机制分析,使学生掌握... 详细信息

家畜病理解剖学是一门实践性很强的临床性质课程,临床案例教学对提高课程的教学质量至关重要。笔者在兽医临床实践中积累了1例羊副结核病临床案例并以该案例进行教学,取得了良好的效果。通过对案例病理学诊断和发病机制分析,使学生掌握羊副结核病典型临床症状、病理变化和诊断要点以及疾病的诊断思路和方法,并运用萎缩、心功能不全、心力衰竭、水肿、坏死、增生性肠炎、增生性淋巴结、副结核杆菌、抗酸染色等病理学知识和事物运动发展的观点来分析疾病的病理变化和发病机理。通过本案例教学培养了学生认识病变、分析病变和诊断疾病的能力,同时也培养学生把病理学理论知识与实践相结合来分析病变、病理过程和发病机制的思路和方法。

关键词：羊副结核病家畜病理解剖学教学应用

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羊肝静脉血栓形成案例在家畜病理学教学中的应用

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兽医导刊 2024年第2期 54-57页

作者：王金玲丁玉林内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

家畜病理学是一门具有临床性质的课程,课程的理论知识均来自大量实践病例的积累、分析、归纳和总结。因此,理论教学与临床案例教学结合是高质量的家畜病理学教与学的最有效方法。基础病理学是家畜病理学课程的重点,但知识偏于基础,教学... 详细信息

家畜病理学是一门具有临床性质的课程,课程的理论知识均来自大量实践病例的积累、分析、归纳和总结。因此,理论教学与临床案例教学结合是高质量的家畜病理学教与学的最有效方法。基础病理学是家畜病理学课程的重点,但知识偏于基础,教学时若能结合典型临床案例把各章节知识联系起来,可提高学生学习兴趣,明显提高教学效果。作者在实践中系统性诊断了1例羊肝静脉血栓形成导致羊只死亡的案例,案例疾病的发生、发展和转归过程中机体表现出局部血液循环障碍(充血、淤血、出血、血栓形成和栓塞)、水和电解质代谢障碍、酸碱平衡紊乱、缺氧、组织细胞的损伤、修复、炎症和休克等基础病理学知识。通过9年的教学实践表明,使用该病例教学促进了学生对基础病理学知识的理解和掌握,提高了学生的兴趣和积极性,也培养了学生认识病变、分析病变和诊断疾病的理论联系实践的能力。

关键词：羊肝静脉血栓形成案例教学家畜病理学应用

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塞内卡病毒CH/ZZ/2016株cDNA感染性克隆的构建

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中国动物传染病学报 2023年第2期31卷 67-72页

作者：韩宇王秀明刘建奇刘亭岐乌吉斯古楞张斌宋庆庆关平原内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 金宇保灵生物药品有限公司兽医疫苗国家工程实验室呼和浩特010020

为构建塞内卡病毒(Senecavirus A)CH/ZZ/2016株的感染性克隆,采用RT-PCR技术分3个cDNA片段对SVA/CH/ZZ/2016株全基因组进行扩增,并克隆至pcDNA3.1(+)真核表达质粒中。获得重组质粒pSVA-CH/ZZ经NheⅠ、KpnⅠ酶切及测序鉴定后,转染BHK-21细胞并转至PK-15细胞上进行盲传,直至出现细胞病变(CPE)。对出现CPE的细胞上清液进行RT-PCR扩增、酶切、测序、间接免疫荧光试验鉴定。结果显示,成功构建了含SVA全长cDNA克隆的重组质粒,转染BHK-21细胞经PK-15细胞盲传至F5代出现SVA的典型CPE。细胞上清液经RT-PCR扩增、酶切、测序结果表明拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记。间接免疫荧光试验进一步表明拯救了SVA病毒。病毒蚀斑形成和生长曲线表明,拯救毒株和亲本毒株的复制能力及增殖特性相似。本研究构建的CH/ZZ/2016株感染性克隆为进一步研究SVA的致病机理、基因功能及疫苗的研发奠定基础。

关键词：塞内卡病毒全长cDNA 转染病毒拯救

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内蒙古牛呼吸道合胞体病毒的分离鉴定及其全基因组分析

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中国预防兽医学报 2024年第5期46卷 476-483页

作者：黄金田李静丁玉林王文龙高娃王金玲内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010010 内蒙古自治区科学技术厅内蒙古呼和浩特010000 河套学院医学系/内蒙古自治区蜱媒人畜共患传染病重点实验室内蒙古巴彦淖尔015000

为确定引起内蒙古地区3月龄~6月龄荷斯坦犊牛暴发呼吸系统疾病的病原,并分析其基因组序列,本研究对病死犊牛剖检并观察其各脏器的剖检病变,制备各组织病理切片,观察其组织病变。结果可见犊牛肺脏呈深红色有光泽的肌肉样实变,心脏肥大,... 详细信息

为确定引起内蒙古地区3月龄~6月龄荷斯坦犊牛暴发呼吸系统疾病的病原,并分析其基因组序列,本研究对病死犊牛剖检并观察其各脏器的剖检病变,制备各组织病理切片,观察其组织病变。结果可见犊牛肺脏呈深红色有光泽的肌肉样实变,心脏肥大,肝脏表面散在细小的结节状灰白色病灶,肾脏表面散在细小深红色出血点;组织病理学观察可见典型间质性肺炎,多数各级细支气管腔和肺泡腔内巨噬细胞和淋巴细胞大量增生和浸润,偶见合胞体细胞,在各级细支气管部分黏膜上皮细胞浆内有大小不等的圆形红染的病毒包涵体;轻度纤维化和小坏死灶的变质性肝炎,急性炎性脾肿,多发性小出血灶的慢性硬化性肾小球肾炎。进一步进行RT-PCR检测,结果显示,扩增获得约600 bp的目的条带,测序后与GenBank中相关基因序列比对,结果显示目的基因与牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)美国分离株USII/S1(KU159366)的同源性最高(98.42%),表明该地区某牧场犊牛感染了BRSV。将该病例肺组织研磨上清液接种牛肾细胞(MDBK)盲传3代出现典型的细胞病变,经RT-PCR检测确认为BRSV,进一步表明分离到1株BRSV,命名为IM BRSV-39。分段扩增IM BRSV-39株的全基因组序列,经测序后拼接获得长度为15130 bp的BRSV全基因组序列。采用MegAlign软件分析IM BRSV-39株的全基因组序列、G基因序列和F基因序列的同源性及突变位点;采用MEGA 11软件构建分离株全基因组进化树分析其遗传进化关系。结果显示,IM BRSV-39株的全基因组序列、G基因和F基因序列均与BRSVⅢ亚型分离株相应基因序列的同源性最高、且位于同一进化分支,证实IM BRSV-39株属于BRSVⅢ亚型;突变位点分析结果显示:与BRSVⅢ亚型参考株相比,IM BRSV-39株G基因序列存在7个突变位点,F基因序列存在12个突变位点;G蛋白氨基酸序列存在4个突变位点,其中L13H处在G蛋白的胞质结构域(aa1~aa37);Y^(127)H、I^(139)T、P^(177)L、A^(186)T处在G蛋白的胞外结构域(aa66~aa257);F蛋白氨基酸序列存在5个氨基酸突变位点,其中M^(4)T、M^(7)T、S^(14)C处在F蛋白氨基末端信号肽区(aa1~aa26)。本研究检测并分离到1株BSRV,揭示了该病毒基因组的遗传进化特征,为国内BRSV的深入研究奠定了基础。

关键词：病毒包涵体牛呼吸道合胞体病毒全基因组遗传进化

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胆酸对代谢性炎症模型大鼠炎性因子及PPARα和LXRα表达与分布的影响

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中国兽医学报 2022年第6期42卷 1241-1248页

作者：何秀玲孙苗石琳琳李培锋关红郭凤英内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010011 内蒙古农业大学职业技术学院内蒙古包头014109

为了探讨胆酸对代谢性炎症模型大鼠炎症的影响,揭示其调控机理,从而为宠物新型抗代谢性炎症药物的研究提供试验基础,试验用饲喂高脂饲料60 d的SD大鼠建立代谢性炎症模型。将大鼠随机分为5组,即模型组,胆酸高、中、低剂量组,阴性对照组,... 详细信息

为了探讨胆酸对代谢性炎症模型大鼠炎症的影响,揭示其调控机理,从而为宠物新型抗代谢性炎症药物的研究提供试验基础,试验用饲喂高脂饲料60 d的SD大鼠建立代谢性炎症模型。将大鼠随机分为5组,即模型组,胆酸高、中、低剂量组,阴性对照组,连续灌胃给药30 d后处死大鼠,采用HE染色法,观察肝脏组织病理学变化;采用ELISA试剂盒检测单核细胞趋化因子1(MCP-1)、白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)的含量;采用实时荧光定量PCR法检测巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、白介素10(IL-10)、白介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)表达量;采用免疫组化法检测过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)及肝X受体α(LXRα)的分布及表达。结果显示,与阴性对照组相比,模型组大鼠的肝脏组织中出现脂肪空泡以及以巨噬细胞为主的炎性细胞聚集;而给予胆酸治疗的高、中、低剂量组大鼠的肝脏细胞中细胞形态和大小均正常,且炎性细胞减少以及脂肪蓄积得到改善。与阴性对照组相比,模型组的MIP-1α及IL-8的表达量极显著升高(P<0.01),MCP-1的含量、TNF-α的表达量显著升高(P<0.05);与模型组相比,胆酸高剂量组MIP-1α、IL-10及IL-8表达量极显著降低(P<0.01),胆酸中、低剂量组的IL-10表达量显著降低(P<0.05),MIP-1α及IL-8表达量极显著降低(P<0.01),胆酸中剂量组的TNF-α的表达量显著降低(P<0.05)。PPARα及LXRα受体均分布在肝脏细胞核,模型组PPARα表达量较阴性对照组极显著下降(P<0.01),胆酸高、中剂量组PPARα表达量较模型组极显著上调(P<0.01)、低剂量组显著上调(P<0.05),胆酸高、中、低剂量组较模型组LXRα表达量极显著下调(P<0.01)。结果表明,胆酸能够通过上调PPARα、下调LXRα的表达,抑制脂肪生成,从而降低代谢性炎症模型大鼠的炎症反应。

关键词：大鼠胆酸代谢性炎症 PPARα LXRα

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梅花鹿结核病间接ELISA方法的建立

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黑龙江畜牧兽医 2022年第21期 69-74,79页

作者：包福祥张磊徐文博敖可心蒋强吴玘瑶张慧敏程艺白文成杜雅楠内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

为了建立鹿结核病的快速检测方法,试验采用亲和层析方法纯化梅花鹿血清IgG,并免疫兔,制备兔抗梅花鹿IgG抗体,辣根过氧化物酶(HRP)进行标记,通过ELISA和Western-blot对HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体进行鉴定。同时合成结核分枝杆菌38 ku基... 详细信息

为了建立鹿结核病的快速检测方法,试验采用亲和层析方法纯化梅花鹿血清IgG,并免疫兔,制备兔抗梅花鹿IgG抗体,辣根过氧化物酶(HRP)进行标记,通过ELISA和Western-blot对HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体进行鉴定。同时合成结核分枝杆菌38 ku基因,并与pET-22b(+)质粒连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,诱导表达和纯化38 ku蛋白,以38 ku蛋白作为包被抗原,以HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体作为二抗,建立间接ELISA方法。利用建立的间接ELISA方法对结核菌素皮肤试验检出的20份阴性血清和10份阳性血清进行验证。结果表明:对梅花鹿血清IgG进行纯化,得到大小分别约为50 ku和25 ku的蛋白质;制备的HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体可特异性识别梅花鹿血清IgG,在抗体浓度稀释比例为1∶20000时仍有很好的结合效果;38 ku蛋白作为抗原的最佳包被浓度为1μg/mL,被检梅花鹿血清的最佳稀释比例为1∶100,HRP标记的兔抗梅花鹿IgG抗体的最佳稀释比例为1∶10000;间接ELISA方法能够准确区分结核菌素皮肤试验确定的阳性和阴性梅花鹿血清。说明试验建立的间接ELISA方法能够作为鹿结核病血清学快速检测的有效方法,弥补了传统方法的不足。

关键词：牛结核分枝杆菌梅花鹿 38 ku蛋白兔抗梅花鹿IgG抗体间接ELISA

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AA-CYP表氧化酶代谢产物对胰岛β细胞增殖和细胞周期的影响

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中国兽医杂志 2022年第11期58卷 59-64页

作者：玉斯日古楞白兆星吴贞思陈彦汝么宏强内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010011 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010011

花生四烯酸(AA)经过细胞色素P450(CYP)表氧化酶途径生成环氧二十碳三烯酸(EETs)和20-羟基二十碳四烯酸(20-HETE)。为探讨EETs和20-HETE对胰岛β细胞增殖和细胞周期的影响及其机制,本试验将培养的MIN6小鼠胰岛β细胞分为空白对照组和不... 详细信息

花生四烯酸(AA)经过细胞色素P450(CYP)表氧化酶途径生成环氧二十碳三烯酸(EETs)和20-羟基二十碳四烯酸(20-HETE)。为探讨EETs和20-HETE对胰岛β细胞增殖和细胞周期的影响及其机制,本试验将培养的MIN6小鼠胰岛β细胞分为空白对照组和不同浓度EETs和20-HETE处理组,分别采用CCK-8法、流式细胞术和Western blot法检测EETs和20-HETE对胰岛β细胞增殖和细胞周期的影响。CCK-8法结果显示,14,15-EET促进胰岛β细胞增殖,且在一定范围内呈时间和浓度依赖性;流式细胞术结果显示,EETs作用后G1期细胞减少,S期和G2/M期细胞增多,从而促进胰岛β细胞的增殖;Western blot试验结果显示,11,12-EET和14,15-EET能够激活AKT磷酸化水平及PI3K活化状况。本试验结果表明,EETs和20-HETE联合使用时,对胰岛β细胞的增殖没有促进作用,但EETs能够促进小鼠胰岛β细胞增殖,其分子机制可能是EETs激活了PI3K/AKT信号转导通路。

关键词： EETs 20-HETE 胰岛β细胞细胞增殖细胞周期

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捻转血矛线虫虫卵孵化及幼虫L3培养条件的优化

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动物医学进展 2024年第9期45卷 73-76页

作者：马梅清贾晓晴马园郝陆瑶张艳妮李倩楠李炎夫邵瑾杜山丁玉林张磊王瑞内蒙古农业大学兽医学院/农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室/国家级动物医学实验教学中心内蒙古呼和浩特010000 内蒙古乌兰察布市四子王旗农牧科技局内蒙古乌兰察布011800

捻转血矛线虫病是由捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生于牛、羊等反刍动物的皱胃所引起的一类消化道线虫病。为了优化捻转血矛线虫的体外培养技术,得到纯化的虫株以及稳定的样品,为捻转血矛线虫抗原和基因的分离鉴定、病原检测、... 详细信息

捻转血矛线虫病是由捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生于牛、羊等反刍动物的皱胃所引起的一类消化道线虫病。为了优化捻转血矛线虫的体外培养技术,得到纯化的虫株以及稳定的样品,为捻转血矛线虫抗原和基因的分离鉴定、病原检测、疫苗研制及虫体耐药性试验奠定基础。论文对培养基类型、培养液体积、抗生素及二甲基亚砜(DMSO)对捻转血矛线虫卵孵化和虫体生长发育的影响。结果表明,NCTC-109培养基可作为捻转血矛线虫体外培养的首选培养基,200μL培养液体积为最佳培养体积,青-链霉素及两性霉素B的终浓度分别不得超过20%及6.25%,DMSO终浓度要控制在0.625%以下。不同培养基及浓度,常用的抗菌药物和DMSO对捻转血矛线虫的发育均有不同程度的毒性。

关键词：捻转血矛线虫体外培养二甲基亚砜 NCTC-109

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