检索结果-内蒙古大学图书馆

生理科学进展 2008年第2期39卷 169-171页

作者：关泽红旭日干内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(Cyclin-dependent kinase,CDK)2是驱动细胞通过G1/S期检验点进入S期完成DNA合成的关键性调控蛋白。过去一度认为CDK2在减数分裂中的作用不像在有丝分裂中那么重要。直至2003年在敲除小鼠CDK2基因后出乎意料... 详细信息

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(Cyclin-dependent kinase,CDK)2是驱动细胞通过G1/S期检验点进入S期完成DNA合成的关键性调控蛋白。过去一度认为CDK2在减数分裂中的作用不像在有丝分裂中那么重要。直至2003年在敲除小鼠CDK2基因后出乎意料地发现小鼠生长发育正常,只是不育:生殖细胞减数分裂受到影响。这一发现引起人们重新审视CDK2在细胞增殖中的作用,对CDK2在减数分裂中的作用研究受到关注,本文就此作一综述。

关键词： CDK2 减数分裂配子发生

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细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶2在单纯疱疹病毒复制中的作用

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病毒学报 2008年第2期24卷 96-100页

作者：关泽红旭日干内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)与单纯疱疹病毒(HSV)等多种重要人类疾病病毒的复制密切相关。但具体哪种CDK是病毒复制所必需的还不清楚。本文用不同剂量的HSV-1-KOS株(以下简称HSV)感染CDK2功能缺陷型宿主细胞,结果发现HSV在CDK2功... 详细信息

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)与单纯疱疹病毒(HSV)等多种重要人类疾病病毒的复制密切相关。但具体哪种CDK是病毒复制所必需的还不清楚。本文用不同剂量的HSV-1-KOS株(以下简称HSV)感染CDK2功能缺陷型宿主细胞,结果发现HSV在CDK2功能缺陷型宿主细胞中的复制具有感染剂量依赖性;一步生长曲线分析结果表明其在CDK2功能缺陷型宿主细胞中的复制较在正常细胞延迟3h;感染6h时CDK2活性被诱导,9h时活性最大;CDK2活性增加后HSV-1即进入快速的裂解性复制。提示CDK2可能在HSV复制的启动中起着某种重要作用。

关键词： HSV CDK2 病毒-宿主细胞相互作用

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藏羚与几种牛科动物成纤维细胞的特性比较

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兽类学报 2014年第1期34卷 71-79页

作者：刘坤吴侠魏英白春玲苏广华李光鹏内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室农业部草食家畜繁殖生物技术与育种重点实验室

为研究高原低氧环境对哺乳动物细胞生长特性的影响,本文以高原低氧动物藏羚和同科的阿尔巴斯白绒山羊、蒙古绵羊及鲁西黄牛的耳源组织细胞为材料,利用DMEM/F12培养液进行培养,建立了4种动物的体外培养成纤维细胞系,并对其进行形态学观... 详细信息

为研究高原低氧环境对哺乳动物细胞生长特性的影响,本文以高原低氧动物藏羚和同科的阿尔巴斯白绒山羊、蒙古绵羊及鲁西黄牛的耳源组织细胞为材料,利用DMEM/F12培养液进行培养,建立了4种动物的体外培养成纤维细胞系,并对其进行形态学观察、生长曲线绘制、凋亡检测、核型分析等生物学特性检测。结果表明:4种动物的细胞经差异贴壁法联合消化排除法,可获得纯化的成纤维细胞,细胞形态一致且活力稳定,4种动物细胞的形态与生长曲线无明显差异;藏羚、绒山羊、绵羊、牛同代次细胞生长倍增时间分别为26 h、22 h、23 h和22 h;经流式细胞仪检测,细胞凋亡率分别为5.5%、2.7%、8.6%和1.5%;藏羚、绒山羊、绵羊与牛的染色体数目分别为60、60、54和60。藏羚与绒山羊、牛染色体数目相同,且除性染色体外,其余均为端部着丝粒类型,而绵羊存在6条中着丝粒类型染色体。该结果表明,在体外培养条件下,藏羚的体细胞生长特性与同科的其他物种的细胞生长特性存在明显差异。这为从细胞水平上研究藏羚对环境低氧适应的分子机理提供了基础。

关键词：生长曲线绘制凋亡检测核型分析流式细胞检测

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牛脂肪间充质干细胞的分离、培养与鉴定

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生物工程学报 2010年第12期26卷 1645-1651页

作者：任宇吴海青马玉珍仓明王瑞刘东军内蒙古大学哺乳动物繁殖生物学与生物技术重点实验室呼和浩特010021 内蒙古自治区医院呼和浩特010017

为了给组织工程提供种子细胞,对牛间充质干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)进行体外分离培养。首先应用胶原酶消化法分离牛ADSCs,进行体外培养、连续传代,并观察细胞的形态变化,通过细胞计数绘制生长曲线,细胞压片进行染色体分... 详细信息

为了给组织工程提供种子细胞,对牛间充质干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)进行体外分离培养。首先应用胶原酶消化法分离牛ADSCs,进行体外培养、连续传代,并观察细胞的形态变化,通过细胞计数绘制生长曲线,细胞压片进行染色体分析,采用细胞免疫荧光化学方法检测细胞表面标记,利用成骨分化和成脂分化检测其分化能力。结果显示牛ADSCs体外培养时细胞形态呈成纤维细胞样,增殖稳定;Vimentin、CD49d、CD13表达呈阳性,CD34表达呈阴性;成骨诱导条件下的细胞碱性磷酸酶活性高,茜素红染色呈阳性;成脂诱导条件下细胞周围脂滴明显,油红-O染色呈阳性。结果证明牛ADSCs体外生长稳定、增殖速度快、定向分化能力强,简易的体外分离培养及诱导方法为其在组织工程中的应用奠定了基础。

关键词：脂肪间充质干细胞体外分离培养细胞鉴定细胞分化

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原核注射制备转基因小鼠的技术优化

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农业生物技术学报 2016年第8期24卷 1278-1284页

作者：杨磊宋丽爽刘雪霏白力格李光鹏内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

原核注射技术已经是目前制备转基因小鼠（Mus musculus）最有效的手段,但不同实验室所报道的转基因效率差异较大,效率不高仍是该技术的主要缺点。为提高转基因小鼠的制备效率,本研究对转基因小鼠制备过程中的原核注射的多个方面都进行... 详细信息

原核注射技术已经是目前制备转基因小鼠（Mus musculus）最有效的手段,但不同实验室所报道的转基因效率差异较大,效率不高仍是该技术的主要缺点。为提高转基因小鼠的制备效率,本研究对转基因小鼠制备过程中的原核注射的多个方面都进行了改进,尤其是在注射针直径、外源基因浓度、单/双原核注射以及胚胎移植等主要步骤上的进行了优化。实验结果表明,不同浓度的外源基因对转基因小鼠的阳性率有很大影响。外源基因为1.00、2.50、3.00和4.00μg/m L浓度时,转基因小鼠阳性率分别0.67%、14.9%、30.6%和21.4%。其中,外源基因浓度在3.00μg/m L极显著高于其他各组（P<0.01）。采用阳性率最高的3.00μg/m L浓度又进行了单双/原核注射比较,发现转基因阳性率在进行双原核注射组显著高于单原核注射组（24.3%vs.18.3%,P<0.01）。将显微注射后的2细胞时期胚胎经输卵管移植到0.5、1.5和2.5 d假孕母鼠体内,产仔率分别为68.6%、67.6%和40.1%,转基因阳性率为17.4%、22.5%和10.1%。比较发现,0.5 d与1.5 d代孕母鼠产仔率没有差异,但1.5 d代孕组转基因阳性率（22.5%）显著高于其他组。结果表明,采用尽可能细的注射针、2;μg/m L的DNA载体浓度、双原核注射、1.5 d的假孕母鼠和正确的胚胎移植操作,是获得高效率转基因小鼠的关键。本研究对从事动物转基因技术研究的实验室提供一些有益的借鉴。

关键词：显微操作显微注射受精卵原核转基因

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牛肌肉生长抑制素基因敲除打靶载体的构建

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中国农业科学 2012年第2期45卷 359-368页

作者：赵丽华梁浩云亭李荣凤内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

【目的】构建两套用于牛肌肉生长抑制素(myostation,MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。【方法】设计并合成含有限制性内切酶酶切位点的引物,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)以牛耳皮肤组织基因组DNA为模板分别扩增出... 详细信息

【目的】构建两套用于牛肌肉生长抑制素(myostation,MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。【方法】设计并合成含有限制性内切酶酶切位点的引物,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)以牛耳皮肤组织基因组DNA为模板分别扩增出两套打靶载体的同源短臂和长臂,再分别插入到两套打靶专用基础载体pMCS-PLP和PⅢ中,构建两套用于牛MSTN基因敲除的置换型打靶载体pPLP-MSTN和PⅢ-MSTN。【结果】经过PCR、T载体连接和DNA测序,证实载体pPLP-MSTN包含2.8 kb同源短臂和4.0 kb同源长臂,载体PⅢ-MSTN包含1.3 kb同源短臂和6.8 kb同源长臂;经过限制性内切酶酶切鉴定,证实两套载体的同源臂分别正确插入到基础载体内。【结论】两套牛MSTN基因敲除打靶载体pPLP-MSTN和PⅢ-MSTN构建成功,载体pPLP-MSTN为不含负筛选标记的传统基因敲除打靶载体,载体PⅢ-MSTN为不含负筛选标记的荧光蛋白启动子捕获打靶载体。

关键词：牛生长抑制素基因基因敲除打靶载体胎儿成纤维细胞

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牛胎儿成纤维细胞(bEFs)中过表达SET和MYND结构域蛋白3基因(SMYD3)对细胞增殖和诱导性多能干细胞(iPSCs)诱导效率的影响

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农业生物技术学报 2015年第10期23卷 1282-1292页

作者：白海栋董艳华岳永莉李燕于海泉内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

SET和MYND结构域蛋白3(SET and MYND domain-containing protein 3,SMYD3)是一种组蛋白H3赖氨酸残基4(Lysine 4,K4)三甲基化转移酶(H3K4 trimethyltransferase),其在多种癌细胞中高表达,能够促进癌细胞增殖、迁移和侵袭。为研究SMYD3在牛胎儿成纤维细胞(bovine embryonic fibroblast cells,b EFs)中的作用,以牛(Bos taurus)c DNA为模板,PCR扩增牛SMYD3基因CDS,并将其连接到巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)启动子表达载体p IRES2-Zsgreen1上,构建高表达SMYD3基因载体p SMYD3-IRES2-Zsgreen1。表达载体转染b EFs后,q RT-PCR和Western blot检测其表达,噻唑蓝(3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT)比色法监测其对细胞生长的影响。用鼠(Mus musculus)源POU5f1转录因子(octamer-binding transcription factor 4,Oct4)、性别决定基因相关转录因子2(SRY(sex determining region Y)-box 2,Sox2)、鸟类骨髓细胞瘤元癌基因同源基因(avian myelocytomatosis viral oncogene homolog,c-Myc)和Kruppel样因子4(Kruppel-like factor 4,Klf4)诱导高表达SMYD3基因的b EFs,研究SMYD3对b EFs诱导效率的影响。酶切鉴定结果表明,表达载体p SMYD3-IRES2-Zsgreen1构建成功;q RT-PCR和Western blot结果显示,SMYD3能够在b EFs正常表达,通过荧光筛选得到了稳定表达SMYD3基因的b EFs p SMYD3。MTT结果显示,SMYD3能够促进b EFs的生长;转录因子诱导p SMYD3细胞后,与对照组相比,细胞克隆形成率明显提高,且克隆均为OCT4、NANOG同源框(nanong homeobox,NANOG)和SOX2染色阳性,说明SMYD3能够促进诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)诱导效率。本研究表明SMYD3对b EFs的生长有促进作用,并且能够提高b EFs向i PSCs的诱导效率,为牛诱导干细胞制备及机理研究提供新的思路。

关键词： SET和MYND结构域蛋白3基因(SMYD3) 牛胎儿成纤维细胞(bEFs) 诱导性多能干细胞(iPSCs) 诱导效率

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UTX与JMJD3体外转录载体构建及其在小鼠卵母细胞上的验证

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农业生物技术学报 2016年第8期24卷 1267-1277页

作者：杨磊宋丽爽刘雪霏白力格李光鹏内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

UTX(ubiquitously transcribed tetratricopeptide repeat X chromosome)和JMJD3(jumonji domain containing 3)是组蛋白H3赖氨酸27位三甲基化(histone H3 lysine 27 trimethylation,H3K27me3)去甲基化酶,可以调控动物机体生长、肌肉发育、调节代谢等重要生理功能。本研究根据小鼠(Mus musculus)UTX和JMJD3 m RNA序列设计3对引物,分别构建了体外转录载体p MD19T-T7UTX和p MD19T-T7JMJD3。分别将体外转录m RNA注射进小鼠卵母细胞,并利用免疫荧光方法对H3K27me3进行检测。转录产物经电泳检测,结果显示,UTX与JMJD3条带清晰与预期大小相符;通过显微注射m RNA的卵母细胞,其H3K27三甲基化修饰明显减少。本研究成功构建了UTX与JMJD3体外转录载体,并在细胞水平证明转录产物能够翻译出具有活性的酶,为利用此载体研究UTX与JMJD3在生长发育及相关疾病发生中的机制提供基础资料。

关键词： UTX JMJD3 组蛋白H3赖氨酸27位三甲基化(H3K27me3) 体外转录显微注射卵母细胞

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精原干细胞来源的多能干细胞的形成及其应用

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生物医学工程学杂志 2011年第1期28卷 208-212页

作者：张岩吴应积内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

报道证实成体细胞可被重编程去分化为多能干细胞,即诱导多能干细胞(iPS细胞),然而这些去分化过程大多伴随着反转录病毒携带外源基因进入细胞内,而且有的外源基因是致癌基因。因此,目前来看,这些由成体细胞衍生的iPS细胞还不能在临床上... 详细信息

报道证实成体细胞可被重编程去分化为多能干细胞,即诱导多能干细胞(iPS细胞),然而这些去分化过程大多伴随着反转录病毒携带外源基因进入细胞内,而且有的外源基因是致癌基因。因此,目前来看,这些由成体细胞衍生的iPS细胞还不能在临床上用来治疗人类的疾病。另一些最近发表在权威期刊的文章再次受到人们的关注,这些文章显示,小鼠和人睾丸中的精原干细胞(SSCs)可被诱导为多能干细胞。这个转变过程不需要外源基因的介入,也不需要反转录病毒的介导,用于自体器官移植也没有伦理学上的问题。这个发现可能会催生从细胞水平上诱导自体或同源的器官再生来治疗人来各种疾病的方法。本文从SSCs出发,论述了SSCs的各种分离、纯化和培养方法,以及体外培养的SSCs向多能干细胞转变的方法,并介绍了该多能干细胞在再生医学和遗传医学中的应用潜能。

关键词：精原干细胞多能干细胞分离及纯化

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L-Wnt3a细胞用于制备胚胎干细胞饲养层的研究

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农业生物技术学报 2014年第10期22卷 1195-1203页

作者：焦翠华魏英汪金泽武丽琼吴晨辰吴侠内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)作为胚胎干细胞培养的饲养层细胞,受到细胞代次等因素限制,需要长期反复制备,消耗大量的实验动物。寻找可替代小鼠胚胎成纤维细胞支持干细胞生长增殖的稳定细胞系,对于降低干细胞... 详细信息

小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)作为胚胎干细胞培养的饲养层细胞,受到细胞代次等因素限制,需要长期反复制备,消耗大量的实验动物。寻找可替代小鼠胚胎成纤维细胞支持干细胞生长增殖的稳定细胞系,对于降低干细胞的培养成本和减少工作量具有重要意义。L-Wnt3a细胞是一个能够稳定向细胞外分泌Wnt3A蛋白的永生细胞系,目前尚不清楚其是否支持小鼠胚胎干细胞的培养。本研究探讨L-Wnt3a作为饲养层细胞对于小鼠(Mus musculus)胚胎干细胞系的建立以及该细胞条件培养液对无饲养层培养小鼠胚胎干细胞的影响。实验结果表明,丝裂霉素C浓度为10μg/mL,作用4 h时,可显著抑制L-Wnt3a细胞的体外生长而不影响细胞的活力。用该细胞制备饲养层,原代分离、培养小鼠胚胎干细胞,成功建立小鼠胚胎干细胞系。利用L-Wnt3a细胞制备条件培养液进行胚胎干细胞的培养,结果显示,L-Wnt3a条件培养液可支持小鼠胚胎干细胞在无饲养层条件下自我增殖,该条件下培养的胚胎干细胞表达碱性磷酸酶、Oct4、Sox2、Nanog、E-cadherin(E-CAD)和SSEA-1多能性因子,并能够在体内、外分化为3个胚层,形成嵌合体后代。L-Wnt3a细胞作为饲养层细胞,能够成功分离获得小鼠胚胎干细胞,可以避免小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层细胞存在的代数限制、制备繁琐等问题;并且LWnt3a条件培养液可以在无饲养层条件下维持小鼠胚胎干细胞的自我更新,能够在一定程度上有效避免饲养层细胞对胚胎干细胞造成的不利影响。

关键词： L-Wnt3a细胞小鼠胚胎干细胞条件培养液

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