检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2011年第11期27卷 140-145页

作者：王玮袁建龙金永朱兵岳群华梁浩郭旭东刘东军仓明内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

旨在构建骨骼肌特异表达人卵泡抑制素(follistatin,FS)基因载体并得到其稳定转染的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。首先通过RT-PCR方法克隆得到人FS基因cDNA序列,然后与猪骨骼肌特... 详细信息

旨在构建骨骼肌特异表达人卵泡抑制素(follistatin,FS)基因载体并得到其稳定转染的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。首先通过RT-PCR方法克隆得到人FS基因cDNA序列,然后与猪骨骼肌特异表达启动子α-actin以及红色荧光蛋白表达元件连接,构建成FS基因骨骼肌特异表达载体pCFCDS。脂质体介导外源表达载体转染绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选后得到稳定转染的绵羊转基因细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,分析转基因细胞系的核型和生长状况。结果显示,成功构建得到绵羊骨骼肌特异表达人FS基因的真核表达载体,并得到其稳定转染的转基因绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。

关键词：绵羊卵泡抑制素骨骼肌特异表达载体转基因细胞系

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检测生精过程中减数分裂完成的质粒载体的构建

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生物技术通报 2012年第9期28卷 202-207页

作者：于泊洋罗奋华张岩吴应积内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

旨在构建在所有转染细胞中表达绿色荧光、在核分裂的次级精母细胞、圆形精子细胞及长形精子细胞中表达红色荧光蛋白的cmv-eGFP-Gsg2-DsRed载体。重组载体是以本实验室保存CMV-EGFP-pDsRed质粒载体为基础载体,在其多克隆位点插入Gsg2启动... 详细信息

旨在构建在所有转染细胞中表达绿色荧光、在核分裂的次级精母细胞、圆形精子细胞及长形精子细胞中表达红色荧光蛋白的cmv-eGFP-Gsg2-DsRed载体。重组载体是以本实验室保存CMV-EGFP-pDsRed质粒载体为基础载体,在其多克隆位点插入Gsg2启动子,期待可以启动红色荧光蛋白基因的表达。经大鼠睾丸共培养细胞转染试验证实,成功构建了含有Gsg2启动子的表达双荧光蛋白质粒载体。

关键词：小鼠 Gsg2启动子 CMV启动子精子发生

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大鼠RVLG选择性剪接变异体的鉴定和分析

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中国农业科学 2011年第7期44卷 1474-1480页

作者：黄文强董珍珍邢万金内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

【目的】确认大鼠RVLG(rat vasa-like gene)的第7、8两个内含子的部分片段在卵巢中可能存在选择性剪接现象,进一步检测大鼠RVLG的第7、8两个内含子在卵巢和睾丸中的选择性剪接形式。【方法】从雌雄各5只Wistar大鼠的卵巢和睾丸组织中提... 详细信息

【目的】确认大鼠RVLG(rat vasa-like gene)的第7、8两个内含子的部分片段在卵巢中可能存在选择性剪接现象,进一步检测大鼠RVLG的第7、8两个内含子在卵巢和睾丸中的选择性剪接形式。【方法】从雌雄各5只Wistar大鼠的卵巢和睾丸组织中提取总RNA,反转录成cDNA后作为模板,用PCR扩增RVLG起始密码后约620—690 bp的编码区cDNA。分别选卵巢和睾丸各7个独立克隆测序,将测序结果与大鼠RVLG基因组DNA比对,分析是否有选择性剪接。【结果】大鼠卵巢和睾丸组织中各7个RVLG cDNA编码区5′端620—690 bp的片段测序结果均存在45 bp和15 bp两处选择性剪接。在7个卵巢RVLG cDNA独立克隆中,有5个仅存45 bp而缺少15 bp,两个仅存15 bp而缺少45 bp;7个睾丸RVLG cDNA独立克隆中,4个仅存在45 bp而缺少15 bp,两个既含有15 bp又含有45 bp,一个既没有45 bp也没有15 bp。经与大鼠RVLG基因组DNA序列比对后确认45 bp位于其第7内含子5′端的两个GT之间,15 bp位于第8内含子3′端的两个AG之间,剪掉或保留这两段均符合典型的GT-AG内含子剪接原则,属选择性剪接。【结论】大鼠RVLG的第7、8两个内含子在卵巢和睾丸中均存在多种选择性剪接形式,体内的标准剪接方式应该是第7外显子3′端保留45 bp,第9外显子不保留来自第8内含子的15 bp。

关键词： RVLG RT-PCR 选择性剪接

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从小蓟对不同癌细胞的抑制效果看中医理论的科学性

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中国中医基础医学杂志 2009年第6期15卷 466-466,472页

作者：王振飞李煜贾瑞贞内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室内蒙古呼和浩特010021

1 材料1.1 药材小蓟生药购于内蒙古中蒙医院药房.取生药适量,六蒸水洗3遍,烘干、称量;用适量无水乙醇浸湿,充分烘干;六蒸水浸泡过夜,武火煮沸,文火煎煮20 min,纱布过滤,滤渣加适量六蒸水置110℃高压蒸汽锅内20min,纱布过滤;合并2次滤液,... 详细信息

1 材料1.1 药材小蓟生药购于内蒙古中蒙医院药房.取生药适量,六蒸水洗3遍,烘干、称量;用适量无水乙醇浸湿,充分烘干;六蒸水浸泡过夜,武火煮沸,文火煎煮20 min,纱布过滤,滤渣加适量六蒸水置110℃高压蒸汽锅内20min,纱布过滤;合并2次滤液,2℃冰箱静置72h,高、中、低速滤纸,0.45μm、0.22μm微孔滤膜逐级过滤;滤液蒸发浓缩、灭菌、4℃保存,使用时以培养液稀释至所需质量分数(以生药计算).

关键词：小蓟不同癌细胞中医理论科学性

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IL-2和EGFP共表达逆转录病毒载体的构建

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内蒙古大学学报（自然科学版） 2005年第6期36卷 665-670页

作者：梁浩石艳春旭日干内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

设计质粒pR evT et-O n和pIRES2-EGFP的接头序列,经一系列酶切连接,重组为含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和多克隆位点(M CS)的逆转录病毒载体pR evIRES2-EGFP;同时将质粒pBV 220-IL-2和pEGFP-C 1重组为含有人白细胞介素-2(h IL-2)... 详细信息

设计质粒pR evT et-O n和pIRES2-EGFP的接头序列,经一系列酶切连接,重组为含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和多克隆位点(M CS)的逆转录病毒载体pR evIRES2-EGFP;同时将质粒pBV 220-IL-2和pEGFP-C 1重组为含有人白细胞介素-2(h IL-2)的过渡质粒pEGFP-C 1-IL-2.再酶切质粒pEGFP-C 1-IL-2,琼脂糖凝胶电泳回收IL-2基因片段,并将其连接到pR evIRES2-EGFP的多克隆位点中,转化*** DH 5α进行扩增,提取质粒DNA获得重组体pR evIRES2-EGFP-IL-2.鉴定结果表明构建的逆转录病毒表达载体pR evIRES2-EGFP-IL-2完全正确.

关键词：逆转录病毒逆转录病毒载体白细胞介素-2 增强型绿色荧光蛋白

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人白介素-3乳腺表达载体的构建

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内蒙古大学学报（自然科学版） 2006年第5期37卷 540-546页

作者：多曙光吴应积罗奋华旭日干内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

人白介素-3是一种造血系统和免疫系统调节剂,在治疗造血系统疾病、肿瘤、先天或获得性免疫功能缺陷等方面发挥着重要作用.应用牛乳腺生物反应器生产人白介素-3的研究具有重要的临床应用和经济价值.研究选用具有红色荧光蛋白报告基因(R e... 详细信息

人白介素-3是一种造血系统和免疫系统调节剂,在治疗造血系统疾病、肿瘤、先天或获得性免疫功能缺陷等方面发挥着重要作用.应用牛乳腺生物反应器生产人白介素-3的研究具有重要的临床应用和经济价值.研究选用具有红色荧光蛋白报告基因(R ed2)和新霉素抗性基因(neor)表达框架的pD sR ed2-1质粒为骨架构建人白介素-3乳腺表达载体.通过PCR方法分别扩增牛β-酪蛋白基因5′端上游调控序列、人IL-3基因以及CM V启动子序列,将它们按先后顺序分别定向克隆于质粒pD sR ed2-1的多克隆位点内,使牛β-酪蛋白基因调控序列位于人IL-3基因的上游,指导人IL-3基因在乳腺组织中特异性表达,而CM V启动子位于红荧光蛋白基因的上游,指导红荧光蛋白基因在所有的组织中非特异性表达.限制性酶切片段分析及部分DNA序列鉴定结果表明,所构建载体结构正确.

关键词：载体构建牛β-酪蛋白基因启动子人白介素-3基因

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小鼠KGF基因毛囊特异性表达载体的构建及mESC脂质体悬浮转染条件的优化

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生物技术通报 2011年第11期27卷 107-117页

作者：梁伟肖红高笑宇杜晓媛汪慧郭旭东刘东军内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

旨在构建小鼠角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体pCDsR-UKA,通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞(mESC),并进一步优化其转染条件,最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的转KGF基因的ES细胞。利用RT-PCR技术扩增小鼠KGF基因cDNA... 详细信息

旨在构建小鼠角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体pCDsR-UKA,通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞(mESC),并进一步优化其转染条件,最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的转KGF基因的ES细胞。利用RT-PCR技术扩增小鼠KGF基因cDNA并构建表达载体pCDsR-UKA(6.6 kb),经鉴定正确的重组质粒DNA用脂质体包裹后转染mESC。从小鼠成纤维细胞cDNA扩增出891 bp的KGF基因片段与UHS启动子和BGH polyA序列成功重组到pCDsRed2载体中。经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为KGF基因且方向正确。采用脂质体法优化转染条件,mESC最高转染效率达到(34.4±4.1)%。经G418筛选的转基因ES细胞通过PCR鉴定证实外源基因已整合在ES细胞基因组中。成功获得了小鼠KGF基因片段,以及真核表达载体pCDsR-UKA,经优化的脂质体悬浮法转染条件,在六孔板中当DNA与脂质体比例为3∶10时,可获得最佳转染效率且不改变ES细胞的生长状态,经筛选获得了转基因ES细胞克隆。为下一步通过四倍体补偿技术获得ES小鼠提供了转基因ES细胞。

关键词： KGF 表达载体胚胎干细胞毛囊 UHS 红色荧光蛋白脂质体转染悬浮法

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内蒙古白绒山羊LDH-A基因cDNA的克隆与特性分析

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中国农业科学 2008年第9期41卷 2813-2819页

作者：王志钢其布日包婵婵旭日干内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

【目的】克隆内蒙古白绒山羊乳酸脱氢酶A(LDH-A)基因并分析其基本表达模式。【方法】采用RT-PCR和3′RACE技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法进行组织表达检测。【结果】获得了... 详细信息

【目的】克隆内蒙古白绒山羊乳酸脱氢酶A(LDH-A)基因并分析其基本表达模式。【方法】采用RT-PCR和3′RACE技术克隆基因,将得到的基因cDNA序列及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析。利用RT-PCR方法进行组织表达检测。【结果】获得了内蒙古白绒山羊LDH-A基因全长cDNA序列。该基因cDNA全长1 649 bp,包含一个996 bp的ORF和642 bp的3′UTR。SMART分析表明ORF编码的蛋白质具有Ldh1Ndomain和Ldh1Cdomain,Psite分析表明有L-乳酸脱氢酶活性位点,PSORT程序分析将其定位于细胞质中。LDH-A基因在脾、肾、睾丸和肌肉组织中均有表达。【结论】内蒙古白绒山羊LDH-A基因编码的蛋白具有典型的乳酸脱氢酶结构,cDNA核苷酸序列与牛的LDH-A基因(NM174099.2)具有较高的同源性。在脾、肾、睾丸和肌肉组织中均有表达。

关键词：内蒙古白绒山羊 LDH-A 基因克隆表达模式分析

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血清及BSA对牛体外受精胚胎发育过程超微结构影响的研究

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细胞生物学杂志 2003年第1期25卷 55-59,F003页

作者：刘东军杨东山其木格旭日干内蒙古大学哺乳动物繁殖生物学与生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021 内蒙古医学院电镜中心呼和浩特010059

本研究将牛IVF胚胎分别在SOF+FCS、SOF+BSA和SOF+PVA三种培养系统内进行培养,然后分别取三个系统中发育到原核期、2细胞、4细胞、8细胞、桑椹胚和囊胚阶段的胚胎进行透射电镜的观察,了解培养系统中血清和BSA的添加与否对胚胎发育过程中... 详细信息

本研究将牛IVF胚胎分别在SOF+FCS、SOF+BSA和SOF+PVA三种培养系统内进行培养,然后分别取三个系统中发育到原核期、2细胞、4细胞、8细胞、桑椹胚和囊胚阶段的胚胎进行透射电镜的观察,了解培养系统中血清和BSA的添加与否对胚胎发育过程中细胞内脂滴、细胞连接、细胞凋亡和微绒毛发育的影响.观察结果表明:各培养系统胚胎的细胞质中均存在大量的脂滴,表明外培养系统是造成脂滴积累的主要原因;血清的添加不会进一步促进脂滴的大量积累,反而可以避免多个脂滴聚合成更大的脂滴.三种培养系统条件下胚胎细胞连接无显著差异.培养系统中添加FCS或BSA时,桑椹胚期以后的胚胎细胞中存在凋亡小体,表明血清成分是引起细胞凋亡的重要原因.培养系统中血清成分的缺乏会影响胚胎表面微绒毛的发育.

关键词：血清 BSA 牛体外受精胚胎发育超微结构早期发育胚胎发育

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抗人胃腺癌细胞株AGS单克隆抗体的制备和初步鉴定

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内蒙古大学学报（自然科学版） 2010年第1期41卷 91-96页

作者：黄翔华李瑶杨利军李云霞赵宇航李煜内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

用人胃癌细胞株AGS作为抗原免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗人胃癌细胞mAb,应用间接ELISA法进行筛选,显微操作法进行亚克隆并用琼脂糖双向免疫扩散法鉴定亚类,免疫化学法检测特异性,获得l株分泌抗AGS细胞株的mAb的杂交瘤(命名为1B... 详细信息

用人胃癌细胞株AGS作为抗原免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗人胃癌细胞mAb,应用间接ELISA法进行筛选,显微操作法进行亚克隆并用琼脂糖双向免疫扩散法鉴定亚类,免疫化学法检测特异性,获得l株分泌抗AGS细胞株的mAb的杂交瘤(命名为1B4).该杂瘤分泌的mAb与人宫颈癌细胞株Hela、肝癌细胞株HepG2和正常胎儿肺细胞均为阴性反应,而与AGS细胞呈阳性反应.结果表明,该mAb对AGS细胞株具有一定的特异性,可为胃癌相关抗原的筛选研究提供一定的帮助.

关键词：胃癌 AGS 单克隆抗体杂交瘤

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