检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2016年第6期24卷 871-880页

作者：诺明途梁浩聂永伟邰大鹏乃门塔娜李硕仓明刘东军内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室

转基因动物的外源基因通过使用体细胞克隆与胚胎移植的方法将表达载体转入细胞后获得,大多以随机整合的形式存在于受体动物的基因组中,而转基因动物中外源基因的整合拷贝数是影响外源基因表达水平及遗传稳定性的重要因素之一,作为转基... 详细信息

转基因动物的外源基因通过使用体细胞克隆与胚胎移植的方法将表达载体转入细胞后获得,大多以随机整合的形式存在于受体动物的基因组中,而转基因动物中外源基因的整合拷贝数是影响外源基因表达水平及遗传稳定性的重要因素之一,作为转基因动物遗传稳定性的鉴定指标,获得存活的转基因动物后便有必要对其外源基因拷贝数进行检测。为了研究转基因阿尔巴斯白绒山羊（Capra hircus）基因组内外源海葵红色荧光蛋白（red fluorescence protein from Discosoma sp.,Ds Red）基因的拷贝数与其表达量之间是否存在一定的联系,本研究采用较鉴定外源基因拷贝数的传统方法DNA印迹杂交（Southern blot）更为高效率、高灵敏度、高准确性的绝对定量q RT-PCR法检测了6只转基因白绒山羊外源Ds Red基因表达框中3个不同片段的拷贝数。结果表明,外源基因3个片段的拷贝数分别为巨细胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）启动子:2.80±0.38;3.68±0.16;Ds Red基因:1.34±0.04;1.84±0.02;CMV启动子与Ds Red连接处:1.58±0.04;9.22±0.38。通过q RT-PCR中相对定量的方法检测了6只转基因白绒山羊外源Ds Red基因m RNA表达量,将其与外源基因中3个不同片段的拷贝数数据分别使用SPSS软件进行相关性分析后,相关性系数P值的结果为:CMV启动子为P=0.763;Ds Red基因为P=0.665;CMV启动子与Ds Red连接处为P=0.803,3组P值均大于0.05,无显著性相关。上述结果表明,在所检测的6只转基因阿尔巴斯白绒山羊中外源CMV启动子启动的Ds Red基因的表达量与其在转基因白绒山羊基因组内的拷贝数在0.05的水平没有显著相关性。另外验证了绝对定量q RT-PCR法在大型转基因家畜的外源基因拷贝数的研究中的可靠性:其重复性良好,误差可控,可以成为检测转基因动物外源基因拷贝数的首选方法。

关键词：转基因白绒山羊外源基因拷贝数基因表达量 qRT-PCR

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5-氮杂胞苷和曲古抑菌素A对转基因绒山羊外源DsRed基因表达效率的影响

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农业生物技术学报 2015年第10期23卷 1334-1342页

作者：诺明途袁建龙高笑宇杨文亮刘东军梁浩仓明内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室

基因沉默现象普遍存在于转基因动植物上,为转基因生物的培育和应用带来了新的难题。本实验对2只健康转基因克隆绒山羊（Capra hircus）上分离的耳尖成纤维细胞、表皮细胞和转基因核供体细胞进行分析,观察外源基因海葵红色荧光蛋白（red ... 详细信息

基因沉默现象普遍存在于转基因动植物上,为转基因生物的培育和应用带来了新的难题。本实验对2只健康转基因克隆绒山羊（Capra hircus）上分离的耳尖成纤维细胞、表皮细胞和转基因核供体细胞进行分析,观察外源基因海葵红色荧光蛋白（red fluorescence protein from Discosoma sp.,Ds Red）表达情况。发现在转基因绒山羊上耳尖成纤维细胞的外源基因的表达量显著高于表皮来源细胞的外源基因表达量（P<0.05）。对2只成体转基因绒山羊（耳号为ZK0311-1和ZK110324-1）耳尖成纤维细胞的CMV启动子进行重亚硫酸盐测序后发现其处于很高的甲基化状态ZK0310-1:89.09%,ZK110324-1:86.36%。经过5氮杂胞苷（5-Azacytidine,5-Az）处理的转基因白绒山羊细胞的Ds Red m RNA表达量均有明显的升高（P<0.05）,在0;μmol/L曲古抑菌素A（trichostatin,TSA）浓度的范围内各种细胞的Ds Red m RNA表达量与TSA浓度呈剂量依赖关系（R2=0.985,P<0.01）,针对来源于两只转基因绒山羊的两种细胞的最适药物处理浓度分别为:ZK0311-1成纤维细胞,5-Az:5μmol/L、TSA:1.0μmol/L;ZK0311-1表皮细胞,5-Az:20μmol/L、TSA:1.0μmol/L;ZK110324-1成纤维细胞,5-Az:10μmol/L、TSA:1.0μmol/L;ZK110324-1表皮细胞5-Az:5μmol/L、TSA:0.75μmol/L,5-Az的处理时间为7 d,TSA的处理时间为24 h。经5-Az和TSA处理细胞系的红色荧光蛋白表达量与其m RNA的表达量发生同步的提高（P<0.05）。另外经5-Az最适浓度处理后,2只转基因绒山羊耳尖成纤维细胞的CMV启动子的甲基化水平也有显著下降ZK0310-1:78.48%,ZK110324-1:49.7%（P<0.05）,证明了5-Az具有明显抑制外源基因启动子甲基化水平的作用。研究结果表明,在成体来源的转基因细胞上,TSA和5-Az处理是提高外源基因表达效率的有效措施。本研究对如何改善转基因动物生产中发生的外源基因沉默的问题具有重要的参考价值。

关键词：转基因绒山羊基因沉默 5氮杂胞苷(5-Az) 曲古抑菌素A(TSA) 表达效率

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利用转基因植物生产口蹄疫可饲疫苗的研究进展与前景

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中国兽医科学 2006年第9期36卷 767-772页

作者：呼格吉乐图吴应积旭日干内蒙古大学生命科学学院哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室内蒙古呼和浩特010023

从口蹄疫可饲疫苗的研究概况、生产技术要点、优缺点及需要改进的问题几方面阐述了利用植物反应器生产口蹄疫可饲疫苗的研究前景。综述了口蹄疫可饲疫苗的研究进展,介绍了利用植物反应器生产口蹄疫可饲疫苗的技术要点,包括在口蹄疫病毒... 详细信息

从口蹄疫可饲疫苗的研究概况、生产技术要点、优缺点及需要改进的问题几方面阐述了利用植物反应器生产口蹄疫可饲疫苗的研究前景。综述了口蹄疫可饲疫苗的研究进展,介绍了利用植物反应器生产口蹄疫可饲疫苗的技术要点,包括在口蹄疫病毒遗传转化质粒载体系统中最常用的农杆菌介导法,提出了生产口蹄疫可饲疫苗需要改进的技术问题。

关键词：口蹄疫病毒 VPI基因可饲疫苗转基因植物

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内蒙古绒山羊CRABPI基因的克隆及表达

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中国农业科学 2012年第13期45卷 2743-2750页

作者：李华苏立宁刘东军李雪峰旭日干内蒙古大学生命科学院/哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室佛山科学技术学院华南师范大学生命科学学院河北北方学院

【目的】克隆内蒙古绒山羊视黄酸结合蛋白Ⅰ(cellular retinoic acid binding proteinⅠ,CRABPⅠ)基因的cDNA,进行蛋白结构的预测和表达分析,为绒山羊毛和绒形成的分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法克隆内蒙古绒山羊CRABPⅠ基... 详细信息

【目的】克隆内蒙古绒山羊视黄酸结合蛋白Ⅰ(cellular retinoic acid binding proteinⅠ,CRABPⅠ)基因的cDNA,进行蛋白结构的预测和表达分析,为绒山羊毛和绒形成的分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR方法克隆内蒙古绒山羊CRABPⅠ基因序列,利用生物信息学方法预测其蛋白结构,采用实时荧光定量PCR探讨该基因在绒山羊4个胎儿日龄皮肤中的表达。【结果】内蒙古绒山羊CRABP I基因cDNA长679 bp(JN936490),其开放阅读框为414 bp,氨基酸序列与其它物种相比具有较高的序列相似性。CRABPⅠ蛋白无明显的信号肽和跨膜区域,不存在N糖基化位点和O糖基化位点;蛋白二级结构主要由α螺旋、β折叠和少量的转角及无规则卷曲构成。胎儿皮肤中CRABPⅠ基因在90 d的表达量明显高于100、120和130 d(P<0.05)。【结论】绒山羊的CRABPⅠ基因cDNA中的开放阅读框(open reading frame,ORF)在不同物种间较为保守,但种属特异性集中表现在第33和123氨基酸残基处,该基因在胎儿期的90 d表达量最大。

关键词：绒山羊 CRABPⅠ基因克隆基因表达生物信息学

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卵丘细胞凋亡与增殖对牛卵母细胞体外发育的影响

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中国农业科学 2011年第8期44卷 1702-1709页

作者：李海军靳木子张睿彪杜晨光刘东军仓明内蒙古农业大学兽医学院内蒙古大学生命科学学院/哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室包头稀土高新区滨河新区管委会

【目的】探讨卵丘-卵母细胞复合体(COCs)形态、卵丘细胞凋亡与增殖状态和卵母细胞发育能力之间的相关性。【方法】根据卵胞质均匀程度和卵丘细胞层数等形态指标,对所挑选的未成熟COCs进行分组,随后利用体外受精技术和TUNEL技术,并结合... 详细信息

【目的】探讨卵丘-卵母细胞复合体(COCs)形态、卵丘细胞凋亡与增殖状态和卵母细胞发育能力之间的相关性。【方法】根据卵胞质均匀程度和卵丘细胞层数等形态指标,对所挑选的未成熟COCs进行分组,随后利用体外受精技术和TUNEL技术,并结合流式细胞仪,评价各组COCs的体外发育能力及其卵丘细胞凋亡和细胞周期差异。【结果】与包被5层以上致密卵丘且卵胞质均质的COCs相比,具有2—5层轻度扩散卵丘与颗粒化卵质特征的COCs显示较好的后续胚胎发育潜力、较高的卵丘细胞凋亡程度和较低的G2-M期细胞比率。【结论】卵丘细胞凋亡程度与未成熟卵母细胞发育潜能呈正相关;COCs形态、卵丘细胞凋亡或者G2-M期细胞比率指标可以用来指示未成熟卵母细胞的发育潜力。

关键词：牛胚胎发育卵丘细胞凋亡增殖

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细胞核移植技术的发展及其应用

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中国生物制品学杂志 2007年第6期20卷 467-470页

作者：韩堃刘东军内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021 内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

自“克隆”一词被提出到克隆羊“多莉”的降生,克隆已经发展了近一个世纪,其中细胞核移植技术始终是克隆技术的核心。本文综述了细胞核移植技术的克隆背景、分类、发展历程、影响因素及应用的研究进展。

关键词：克隆细胞核移植技术

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温度对海南家燕(Hirundo rustica)巢利用率和窝卵数的影响

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生态学杂志 2016年第8期35卷 2159-2163页

作者：罗荣松粟通萍牛楠梁伟哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021 热带动植物生态学省部共建教育部重点实验室海南师范大学生命科学学院海口571158 北京林业大学自然保护区学院北京100083

温度对鸟类的繁殖具有重要影响,气候变化可导致鸟类生活史特征的改变。为了解气候变化对家燕(Hirundo rustica)巢利用率和窝卵数的影响,于2014—2015年4月,对海南临高4个村庄的家燕繁殖情况进行了调查。结果表明,2015年家燕种群开始繁... 详细信息

温度对鸟类的繁殖具有重要影响,气候变化可导致鸟类生活史特征的改变。为了解气候变化对家燕(Hirundo rustica)巢利用率和窝卵数的影响,于2014—2015年4月,对海南临高4个村庄的家燕繁殖情况进行了调查。结果表明,2015年家燕种群开始繁殖的日期较2014年显著推迟,同时巢的利用率也低于2014年(!2=70.37,P<0.001)。通过对两年繁殖季的气候状况进行分析,发现4月份的气温变化对家燕开始繁殖的时间具有重要影响。2015年4月份的平均最低气温比2014年低约2℃(t=3.155,df=58,P=0.003),且平均温差较大,表明2015年4月份偏低的春季温度及其较大的温度波动推迟了当地家燕种群的开始繁殖时间;但温度对家燕的窝卵数(t=0.670,df=87,P=0.505)和孵化成功率(t=0.794,df=71,P=0.442)没有显著影响。研究表明,即便在热带地区,春季低温对海南家燕种群开始繁殖的时间和巢利用率仍具有重要影响。

关键词：温度气候变化繁殖时间家燕

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牛精原干细胞体外分化潜能的分析

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中国细胞生物学学报 2014年第11期36卷 1526-1531页

作者：罗奋华萨初拉黄军就吴应积内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010070 中山大学生命科学学院有害生物控制与资源利用国家重点实验室中山大学附属第一医院广东省生殖医学重点实验室广州510275

家畜精原干细胞操作的核心技术是精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的长期培养。至今家畜精原干细胞的长期培养方法还没有完善。其中的一个原因是缺乏简便有效的家畜精原干细胞生物活性鉴定手段。该研究的目的是建立一种牛精... 详细信息

家畜精原干细胞操作的核心技术是精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)的长期培养。至今家畜精原干细胞的长期培养方法还没有完善。其中的一个原因是缺乏简便有效的家畜精原干细胞生物活性鉴定手段。该研究的目的是建立一种牛精原干细胞生理潜能的体外分析方法,用于体外培养的牛精原干细胞的生物活性鉴定。首先培养牛精原干细胞,进而用干细胞因子(stem cell factor,SCF)对体外长期培养的牛精原干细胞进行诱导分化。在诱导分化过程中对细胞进行显微观察,并且用免疫荧光染色法鉴定分化的细胞。观察结果显示,经过诱导培养8 d后,牛精原干细胞形态发生了明显改变;细胞的运动行为显示出精母细胞特有的特征。免疫荧光染色结果显示,分化的细胞表达精母细胞的标记基因Scp3。上述结果例证了体外培养的牛精原干细胞具有分化为精母细胞的潜能。该研究建立了牛SSCs体外诱导分化的分析方法,用于鉴定体外培养的牛SSCs的生理潜能。但是体外诱导培养条件不能满足牛SSCs减数分裂的全部要求,导致出现一些不完全符合精母细胞特征的现象。诱导分化培养液尚需改进。

关键词：牛精原干细胞体外分化干细胞因子

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毛囊分子调控机制

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生命的化学 2011年第3期31卷 455-460页

作者：苏立宁李华旭日干刘东军李雪峰佛山科学技术学院佛山528231 华南师范大学生命科学学院广州510000 内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

毛囊是产生毛被的组织,具有周期性,经历生长期、衰退期和休止期三个时期,毛囊与皮脂腺组成毛囊皮脂腺单位。本文从分子层面分别对调控毛囊周期性变化、毛囊皮脂腺发育以及毛囊中影响毛被光泽度及毡结度的因子等给予了详细阐述,这些均为... 详细信息

毛囊是产生毛被的组织,具有周期性,经历生长期、衰退期和休止期三个时期,毛囊与皮脂腺组成毛囊皮脂腺单位。本文从分子层面分别对调控毛囊周期性变化、毛囊皮脂腺发育以及毛囊中影响毛被光泽度及毡结度的因子等给予了详细阐述,这些均为提高山羊绒产量和质量提供了重要思路。

关键词：毛囊周期性皮脂腺山羊绒

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人脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的克隆及在HeLa细胞中表达的研究

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现代生物医学进展 2009年第15期9卷 2808-2813,2860页

作者：刘慧梁浩刘明秋扈廷茂内蒙古大学生命科学学院内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室内蒙呼和浩特010021

目的:构建人脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad gene,fhit)基因与报告基因egfp的双顺反子表达载体及融合表达载体,研究fhit基因过表达对HeLa细胞生长及凋亡的影响。方法:根据已知fhit基因的mRNA序列,RT-PCR得到493bp的cDNA序列... 详细信息

目的:构建人脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad gene,fhit)基因与报告基因egfp的双顺反子表达载体及融合表达载体,研究fhit基因过表达对HeLa细胞生长及凋亡的影响。方法:根据已知fhit基因的mRNA序列,RT-PCR得到493bp的cDNA序列,将其构建到pMD18-T中,筛选目的片段插入正确的重组质粒,经限制性内切酶切割,回收目的片段分别插入双顺反子表达载体pIRES2-EGFP和融合表达载体pEGFP-C1的多克隆位点中。再以脂质体介导转染HeLa细胞,G418筛选稳定转染的克隆,分别通过基因组PCR、RT-PCR、免疫细胞化学及TUNEL法在DNA、RNA和蛋白质水平检测其表达情况。结果:转基因细胞基因组PCR获得493bp片段,证明目的基因已整合到细胞基因组中;RT-PCR检测其在RNA水平得到表达;免疫细胞化学及TUNEL法分析表明fhit基因在HeLa细胞内实现了稳定遗传与表达。结论:实验证明fhit基因过表达可有效促进HeLa细胞的凋亡。

关键词： FHIT 过表达 HeLa细胞凋亡

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