检索结果-内蒙古大学图书馆

生理科学进展 2008年第2期39卷 169-171页

作者：关泽红旭日干内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(Cyclin-dependent kinase,CDK)2是驱动细胞通过G1/S期检验点进入S期完成DNA合成的关键性调控蛋白。过去一度认为CDK2在减数分裂中的作用不像在有丝分裂中那么重要。直至2003年在敲除小鼠CDK2基因后出乎意料... 详细信息

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(Cyclin-dependent kinase,CDK)2是驱动细胞通过G1/S期检验点进入S期完成DNA合成的关键性调控蛋白。过去一度认为CDK2在减数分裂中的作用不像在有丝分裂中那么重要。直至2003年在敲除小鼠CDK2基因后出乎意料地发现小鼠生长发育正常,只是不育:生殖细胞减数分裂受到影响。这一发现引起人们重新审视CDK2在细胞增殖中的作用,对CDK2在减数分裂中的作用研究受到关注,本文就此作一综述。

关键词： CDK2 减数分裂配子发生

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细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶2在单纯疱疹病毒复制中的作用

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病毒学报 2008年第2期24卷 96-100页

作者：关泽红旭日干内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)与单纯疱疹病毒(HSV)等多种重要人类疾病病毒的复制密切相关。但具体哪种CDK是病毒复制所必需的还不清楚。本文用不同剂量的HSV-1-KOS株(以下简称HSV)感染CDK2功能缺陷型宿主细胞,结果发现HSV在CDK2功... 详细信息

细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)与单纯疱疹病毒(HSV)等多种重要人类疾病病毒的复制密切相关。但具体哪种CDK是病毒复制所必需的还不清楚。本文用不同剂量的HSV-1-KOS株(以下简称HSV)感染CDK2功能缺陷型宿主细胞,结果发现HSV在CDK2功能缺陷型宿主细胞中的复制具有感染剂量依赖性;一步生长曲线分析结果表明其在CDK2功能缺陷型宿主细胞中的复制较在正常细胞延迟3h;感染6h时CDK2活性被诱导,9h时活性最大;CDK2活性增加后HSV-1即进入快速的裂解性复制。提示CDK2可能在HSV复制的启动中起着某种重要作用。

关键词： HSV CDK2 病毒-宿主细胞相互作用

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牛体外受精胚胎早期发育差异表达基因的筛选及定量检测

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农业生物技术学报 2012年第1期20卷 54-61页

作者：刘冬沙日娜温建勋王瑞仓明刘东军内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室

卵母细胞成熟和母源型-合子型过渡过程中,存在大量基因的表达差异,使得应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)筛选对胚胎发育起关键作用的基因成为可能。为了解牛卵母细胞成熟过程及体外受精胚胎不同发育阶段相关基因mRNA表达规律,本研究以牛生发... 详细信息

卵母细胞成熟和母源型-合子型过渡过程中,存在大量基因的表达差异,使得应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)筛选对胚胎发育起关键作用的基因成为可能。为了解牛卵母细胞成熟过程及体外受精胚胎不同发育阶段相关基因mRNA表达规律,本研究以牛生发泡(GV)期卵母细胞、体外受精获得的8细胞期胚胎和囊胚期胚胎为检测对象,利用mRNA差异显示技术筛选这三个时期mRNA表达差异基因,并用实时定量PCR分析差异基因在这三个时期以及体外成熟卵母细胞中的mRNA丰度。结果成功筛选得到5个差异片段,经测序和GenBank数据库比对分析,检索到与这5个片段有高同源性的已知基因,分别为无机焦磷酸1基因(PPA1)、ErbB2互作蛋白基因(ERBB2IP)、350kD中心体相互作用蛋白基因(CEP350)、核糖体蛋白L27a基因(RPL27A)和Ⅱ类主要组织相容复合物下调因子基因(IK),实时定量PCR检测和SPSS统计分析结果表明,PPA1、ERBB2IP和CEP350mRNA表达量随胚胎发育进程呈不同程度的降低趋势,RPL27AmRNA表达量在囊胚期由降低转为升高,IK的转录物含量在囊胚期前呈波动变化,到囊胚期显著降低。本研究结果为进一步了解卵母细胞成熟对后续胚胎发育的影响以及合子基因组激活机制提供了实验依据。

关键词：卵母细胞成熟胚胎发育差异基因 mRNA差异显示实时定量PCR

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不同激活方法对猪孤雌胚胎单倍体率的影响

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中国农业科学 2011年第1期44卷 218-224页

作者：张曼玲赵丽华周鑫李荣凤内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室

【目的】采用不同的物理或化学方法激活猪卵母细胞,以期获得一种能有效产生猪单倍体孤雌胚胎的激活方法。【方法】试验一分别采用电激活、电激活结合细胞松弛素B(CB)、不同浓度乙醇以及不同作用时间对成熟卵母细胞进行激活处理,试验二... 详细信息

【目的】采用不同的物理或化学方法激活猪卵母细胞,以期获得一种能有效产生猪单倍体孤雌胚胎的激活方法。【方法】试验一分别采用电激活、电激活结合细胞松弛素B(CB)、不同浓度乙醇以及不同作用时间对成熟卵母细胞进行激活处理,试验二检测电激活结合MG-132或Thimerosal和DTT对成熟卵母细胞的激活效果。【结果】试验一显示电激活结合CB组(27.34%)处理后的囊胚率显著高于电激活处理组(16.92%)(P<0.05),且二者均显著高于所有的乙醇组(P<0.05),乙醇处理组中以9%乙醇作用11 min效果最佳(10.20%)。试验二显示电激活结合MG-132组的囊胚发育率(24.69%)与电激活结合CB组(27.50%)没有显著差异,二者显著高于电激活结合Thimerosal和DTT组(14.10%)及电激活处理组(17.5%)(P<0.05)。对所得囊胚进行染色体倍性分析后得出,电激活处理后的囊胚单倍体率(41.7%)与9%乙醇处理组(40%)和电激活结合Thimerosal和DTT处理组(35.3%)无显著差异,但却显著高于电激活结合CB(0)及电激活结合MG-132(6.7%)处理组(P<0.05)。【结论】综合囊胚发育率和囊胚单倍体比率,电激活、9%乙醇、电激活结合Thimerosal、DTT和电激活结合MG-132处理组获得单倍体囊胚的总效率分别为7.3%(17.5%×41.7%)、4.1%(10.2%×40%)、5.0%(14.1%×35.3%)和1.7%(24.69%×6.7%)。电脉冲处理可能是比较理想的获得猪单倍体孤雌胚胎的激活方法。

关键词：猪卵母细胞体外成熟孤雌激活单倍体率

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毛囊特异表达载体pUHS-FGF18的构建及转基因小鼠的制备

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农业生物技术学报 2016年第8期24卷 1165-1172页

作者：李欣欣奥旭东李东芳魏英银凤霞杨磊李光鹏内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室

成纤维生长因子18（fibroblast growth factor 18,Fgf18）是一种分泌型的信号分子,参与小鼠（Mus musculus）和绒山羊（Capra hircus）毛发生长及毛周期的调控。本研究克隆了小鼠Fgf18基因CDS区的片段,并将其连接于超高硫角蛋白（ultra-... 详细信息

成纤维生长因子18（fibroblast growth factor 18,Fgf18）是一种分泌型的信号分子,参与小鼠（Mus musculus）和绒山羊（Capra hircus）毛发生长及毛周期的调控。本研究克隆了小鼠Fgf18基因CDS区的片段,并将其连接于超高硫角蛋白（ultra-high sulfur keratin,UHS）启动子的下游。SacⅠ、BglⅡ、SphⅠ和Eco T14Ⅰ的酶切鉴定结果表明,成功构建了Fgf18基因毛囊特异表达载体p UHS-Fgf18。原核注射线性化p UHS-FGF18,共获得3只转基因小鼠。RT-PCR检测结果表明,Fgf18基因在转基因小鼠皮肤中的表达明显高于对照小鼠（P<0.05）。转基因小鼠NO.205皮肤中Fgf18的表达量明显高于对照小鼠（P<0.05）,而肝脏、肾脏、心脏、睾丸、骨骼肌、脾、脑、肺、胃和小肠等组织则与对照小鼠无显著性差异（P>0.05）。Western blot的结果表明,转基因小鼠皮肤的Fgf18蛋白水平显著高于对照组（P<0.05）。同时本研究利用RT-PCR的方法检测了转基因小鼠中Fgf18基因的拷贝数,其拷贝数在8;10。本研究成功建立了毛囊特异表达Fgf18基因的转基因小鼠模型,不仅可为进一步研究Fgf18基因在毛周期及毛发生长中的功能及其作用机理提供必要的工具和手段,也可为生产Fgf18基因修饰的转基因绒山羊提供一定的理论基础。

关键词：成纤维生长因子18(Fgf18) 毛囊组织特异性超高硫角蛋白(UHS) 转基因小鼠

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不同激活方法对绒山羊卵母细胞孤雌发育的影响

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农业生物技术学报 2011年第3期19卷 495-500页

作者：金永袁建龙朱兵郭旭东刘东军内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室

为了进一步探索绒山羊卵母细胞孤雌发育的方法,进而为绒山羊的体细胞核移植技术提供高效的体外激活方法,本实验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用切割法收集卵母细胞,并进行体外成熟。将体外成熟的卵母细胞分别经IA23187+6-DMAP、离子霉素(... 详细信息

为了进一步探索绒山羊卵母细胞孤雌发育的方法,进而为绒山羊的体细胞核移植技术提供高效的体外激活方法,本实验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用切割法收集卵母细胞,并进行体外成熟。将体外成熟的卵母细胞分别经IA23187+6-DMAP、离子霉素(Ionomycin)+6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)、7%乙醇+6-DMAP、IA23187+放线菌酮(CHX)、Ionomycin+CHX、7%乙醇+CHX处理,体外发育48h后统计卵裂率、8-cell率,7～9d后统计囊胚率和囊胚细胞数。结果表明,IA23187+6-DMAP处理组的卵裂率(89.6±4.9%)显著低于Ionomycin+6-DMAP(99.1±0.8%)、IA23187+CHX(97.6±1.2%)、Ionomycin+CHX(99.3±0.6%)及7%乙醇+CHX(97.5±1.4%)处理组(P<0.05),而与7%乙醇+6-DMAP(96.3±0.5%)处理组没有显著差异;IA23187+CHX(81.3±5.8%)和Ionomycin+CHX(82.5±6.6%)处理组的8-细胞率显著高于IA23187+6-DMAP(48.4±4.3%)、Ionomycin+6-DMAP(42.5±1.8%)、7%乙醇+6-DMAP(38.2±2.1%)及7%乙醇+CHX(62.5±2.2%)处理组(P<0.05);IA23187+6-DMAP(22.8±2.4%)和Ionomycin+6-DMAP(20.6±4.8%)处理组的囊胚率显著高于7%乙醇+6-DMAP(10.5±1.8%)、IA23187+CHX(8.4±1.2%)、Ionomycin+CHX(11.8±2.0%)及7%乙醇+CHX(8.8±2.5%)处理组(P<0.05);囊胚细胞数(200.0±14.0、169.6±11.4、187.0±8.8、201.3±16.5、179.6±5.2和177.6±20.8个)各组间没有明显差异(P>0.05)。利用IA23187、Ionomycin及乙醇联合6-DMAP和CHX,对山羊卵母细胞进行激活均能获得较高的卵裂率,IA23187、Ionomycin及乙醇与CHX联合激活处理组可获得较高的8-cell率,IA23187+6-DMAP和Ionomycin+6-DMAP处理组获得较高的囊胚率,不同处理组的囊胚均具有较高的细胞数量。IA23187或Ionomycin联合6-DMAP是激活山羊卵母细胞最适方法,是体细胞核移植技术过程中的较为高效的体外激活方法,该研究结果为山羊卵母细胞孤雌发育及体外激活等相关研究提供了借鉴。

关键词：绒山羊卵母细胞孤雌激活胚胎发育

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AAPH引起小鼠早期胚胎发育阻滞中线粒体相关机能研究

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农业生物技术学报 2017年第1期25卷 11-20页

作者：张祥李向南刘瑞花岳永莉于海泉内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室

哺乳动物胚胎体外培养体系影响着早期胚胎的发育潜能,在目前模拟体内输卵管及子宫的低氧环境的培养系统中,活性氧(reactive oxygen species,ROS)被认为是影响胚胎发育的一个重要因素。本实验探究了ROS在小鼠(Mus musculus)体外发育2细... 详细信息

哺乳动物胚胎体外培养体系影响着早期胚胎的发育潜能,在目前模拟体内输卵管及子宫的低氧环境的培养系统中,活性氧(reactive oxygen species,ROS)被认为是影响胚胎发育的一个重要因素。本实验探究了ROS在小鼠(Mus musculus)体外发育2细胞阻滞胚胎中对线粒体相关机能的影响。本研究使用2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(2,2’-Azobis(2-methylpropionamidine)dihydrochloride,AAPH)处理昆明白小鼠体外受精卵,通过荧光探针检测处理前后与线粒体活性相关的线粒体膜电位、线粒体ROS(mt ROS)及线粒体分布状态的变化,并利用q RT-PCR检测ROS相关基因、线粒体转录因子A(mitochondrial transcription factor A,TFAM)m RNA的表达量及mt DNA的拷贝数。研究结果显示,使用1.0 mmol/L浓度的AAPH分别处理的胚胎,具有较高的阻滞率(66.16%)和较低的损伤率(24 h畸形率9.09%,48 h死亡率10.39%),ROS染色实验结果显示,AAPH处理能够使胚胎内胞质ROS水平明显升高,所检测的ROS相关基因m RNA表达量升高。1.0 mmol/L处理后二细胞期胚胎线粒体膜电位及mt ROS水平明显高于对照组,mt DNA的拷贝数增加,q RT-PCR结果显示,处理组TFAM基因的表达量明显高于对照组。以上研究表明,AAPH处理引起的氧化应激反应及发育阻滞的胚胎中,线粒体活性升高,线粒体数目增加,线粒体转录因子A表达增强,表明线粒体参与调节细胞内ROS的动态平衡。本研究初步探究了ROS与线粒体相关功能变化的关系,为揭示卵母细胞成熟机制和优化哺乳动物胚胎体外培养体系提供了参考。

关键词：线粒体膜电位 mtDNA拷贝数小鼠胚胎2细胞阻滞活性氧

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过表达重编程转录因子藏羚羊成纤维细胞异种克隆研究

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农业生物技术学报 2016年第7期24卷 957-967页

作者：苏广华李雪刘雪菲刘坤白春玲魏英李光鹏旭日干内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室

藏羚羊(Pantholops hodgsoni)为濒危珍稀物种。本研究利用小鼠(Mus musculus)来源的POU5f1转录因子(octamer-binding transcription factor 4,OCT-4)、性别决定基因相关转录因子2(sex determining region Y-Box 2,SOX-2)、Kruppel样因子4(Kruppel-like factor 4,KLF-4)和鸟类骨髓细胞瘤元癌基因同源基因(avian myelocytomatosis viral oncogene homolog,C-MYC)等4种重编程因子,对藏羚羊体细胞进行诱导重编程,并将诱导后的细胞移植入牛(Bos taurus)去核的卵母细胞中,进行异种克隆操作,观察异种克隆胚胎(inter-species somatic cell nuclear transfer,i SCNT)的体外发育情况。结果表明,经过4因子诱导之后的藏羚羊细胞(简称i PS-ZLY)并没有形成胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESc)样细胞克隆,细胞增殖能力和形态都发生了改变。细胞周期分析发现,i PS-ZLY进入G2-M期的比率高于藏羚羊成纤维细胞(简称ZLY)(21.5%vs 16.7%)。i PS-ZLY细胞在培养的第4天进入生长的平台期,而ZLY细胞则在第6天进入平台期。核型分析发现,i PS-ZLY的正常2N核型比例与ZLY细胞相似(68.3%vs 69.6%)。i PS-ZLY细胞表达OCT-4基因。当把i PS-ZLY细胞移植入去核的牛卵母细胞后,i PS-ZLY异种克隆桑葚胚和囊胚形成率分别为8.5%和2.4%,而ZLY异种克隆胚胎桑葚胚和囊胚形成率则分别为3.8%和0.95%。以上研究表明,经过4种因子诱导之后藏羚羊体细胞,其增殖能力发生显著改变,细胞生长周期加快,表达多能基因OCT-4;诱导细胞的i SCNT发育率显著高于普通细胞,诱导细胞对于i SCNT发育有促进作用。本研究首次利用重编程因子诱导藏羚羊体细胞,进而对诱导之后的细胞进行了包括细胞周期、染色体核型以及多能性基因的检测,虽然没有形成干细胞样细胞克隆形态,但是多能性基因OCT-4开始表达,是一个处于分化的体细胞和多能性细胞的中间状态,这样的中间状态有助于i SCNT的发育。本研究结果对重编程机理研究以及物种保护具有指导意义。

关键词：诱导多能干细胞异种克隆胚胎(iSCNT) 细胞周期转录因子

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一种快速提取质粒DNA用于鉴别重组克隆的方法

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生物工程学报 2007年第1期23卷 176-178页

作者：郭旭东毛舒燕侯冬霞旭日干内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室呼和浩特010021

介绍了一种利用过夜培养的菌液瞬时提取质粒DNA，并用于电泳鉴别含有插入子克隆的方法。事先无需准备许多繁琐的相关试剂，提取质粒的全过程只需3～5min就可完成，非常适合于做重组克隆的快速鉴别。

关键词：质粒DNA 酚/氯仿/异戊醇重组克隆

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牛肌细胞生成素基因(MyoG)启动子的活性及组织特异性分析

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农业生物技术学报 2014年第1期22卷 87-93页

作者：李硕郝斐梁浩王鹤霏吴海青诺明途刘东军仓明内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室

肌细胞生成素(myogenin,MyoG)在肌肉细胞分化过程中起着中心调控的作用。为了研究牛(Bos)MyoG基因启动子的启动效率和组织特异性。本研究首先克隆了牛MyoG基因启动子区域,以pDsRed2载体为外源载体,红色荧光蛋白为目的基因,构建了pDsRed-... 详细信息

肌细胞生成素(myogenin,MyoG)在肌肉细胞分化过程中起着中心调控的作用。为了研究牛(Bos)MyoG基因启动子的启动效率和组织特异性。本研究首先克隆了牛MyoG基因启动子区域,以pDsRed2载体为外源载体,红色荧光蛋白为目的基因,构建了pDsRed-BosMyoG真核表达载体。利用脂质体介导转染体外培养的绵羊(Ovis aries)骨骼肌卫星细胞和成纤维细胞,最后通过实时定量PCR和Western blot检测红色荧光蛋白的表达,从而确定牛MyoG基因启动子的启动效率及组织特异性。结果显示,pDsRed-BosMyoG转染绵羊骨骼肌卫星细胞后在显微镜下可观察到红色荧光蛋白的表达,但在转染后的成纤维细胞中并没有观察到红色荧光蛋白的表达。在mRNA水平上,转基因骨骼肌卫星细胞中红色荧光蛋白mRNA表达量明显高于转基因成纤维细胞(P<0.01)。Western blot结果显示,转基因骨骼肌卫星中高表达红色荧光蛋白,而在转基因成纤维细胞中并未检测到此蛋白。结果表明,本研究克隆得到的牛MyoG基因启动子可以特异性的在绵羊骨骼肌卫星细胞中驱动外源基因的高表达,是一种有效的肌肉细胞特异性启动子。克隆MyoG基因的启动子,探讨启动子区域的启动活性,有助于从理论上揭示MyoG基因表达的关键调控位点,同时也有利于揭示肌肉发育调控的相关机理,为改良家畜肉质研究提供实验依据。

关键词：肌细胞生成素 MyoG基因启动子肌肉卫星细胞肌管

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