检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2018年第10期45卷 2112-2120页

作者：王言吉容丹王佳平王海立高建义韩延平杨瑞馥李勇枝中国航天员科研训练中心北京100094 军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【背景】我国未来几年深空探索任务将呈"井喷式"发展,微生物对于航天活动的影响越来越引起关注,而国内外少有表型异质性亚群的研究。【目的】从表型异质性的角度探讨低剪切力模拟失重环境(Low-shearmodeledmicrogravity,LSMMG... 详细信息

【背景】我国未来几年深空探索任务将呈"井喷式"发展,微生物对于航天活动的影响越来越引起关注,而国内外少有表型异质性亚群的研究。【目的】从表型异质性的角度探讨低剪切力模拟失重环境(Low-shearmodeledmicrogravity,LSMMG)和低剪切力正常重力环境(Low-shearnormalgravity,LSNG)对大肠杆菌K12造成的影响。【方法】利用旋转细胞培养系统模拟失重环境对大肠杆菌K12进行连续传代培养,从单克隆形态、颜色以及菌体形态等方面挑选出表型异质性的亚群菌株,对不同菌株进行增殖速率、抗生素耐药性、生物被膜形成、环境压力抵抗力以及细胞毒性的测定,以此评估低剪切力和模拟失重环境对大肠杆菌K12的影响。【结果】利用旋转细胞培养系统连续传代培养,总共分离出4株形态不同的表型异质性亚群菌株,其中2株来自模拟失重组(M1,Ma),另外2株来自正常重力对照组(N1,Na);4株亚群与原始菌株(P)相比,在增殖速率、生物被膜形成、环境压力抵抗力和细胞毒性方面均有增强或减弱的明显变化,对于抗生素的耐药性无明显变化。【结论】低剪切力模拟失重环境以及存在低剪切力的正常重力环境均能引起大肠杆菌表型异质性变化,与原始菌株相比,表型异质性亚群菌株在分化上并没有统一的方向,但仍需警惕那些可能对人类造成危害的变化表型。

关键词：大肠杆菌模拟失重低剪切力表型异质性细胞毒性

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细菌最小基因组研究进展

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遗传 2021年第2期43卷 142-159页

作者：李金玉杨姗崔玉军王涛滕越天津大学生命科学学院天津300110 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

具有最小基因组的细菌只包含维持自我生命复制所必需的基因,其作为一种潜在的工业生产平台具有诸多优势。由于高通量DNA测序和合成技术的发展,目前已经构建了多种缩减基因组的菌株。本文首先介绍了最小基因组的概念,其次总结了细菌必需... 详细信息

具有最小基因组的细菌只包含维持自我生命复制所必需的基因,其作为一种潜在的工业生产平台具有诸多优势。由于高通量DNA测序和合成技术的发展,目前已经构建了多种缩减基因组的菌株。本文首先介绍了最小基因组的概念,其次总结了细菌必需基因的相关研究进展,然后梳理了人工缩减与合成微生物基因组的相关工作,最后探讨了在设计和组装基因组的过程中遇到的技术障碍和限制,以期为人工合成基因组的实验与应用提供理论参考。

关键词：细菌最小基因组必需基因合成生物学人工设计

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凝血相关分子在病毒感染方面的研究进展

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病毒学报 2021年第4期37卷 1011-1017页

作者：李佳佳罗德炎王慧安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

从生物进化角度,天然免疫系统、凝血系统、获得性免疫系统依次产生,且三者存在千丝万缕的联系。以病毒为研究对象对凝血系统作为免疫系统的一个独立部分进行研究,分两部分:感染初期,通过对凝血系统的调控来加强天然免疫和获得性免疫的对... 详细信息

从生物进化角度,天然免疫系统、凝血系统、获得性免疫系统依次产生,且三者存在千丝万缕的联系。以病毒为研究对象对凝血系统作为免疫系统的一个独立部分进行研究,分两部分:感染初期,通过对凝血系统的调控来加强天然免疫和获得性免疫的对话,以此"通畅气血""增强免疫力",清除体内病毒;感染末期合并细菌感染,对凝血系统进行快速干预,既调动该系统自身的免疫力,也疏通天然免疫和获得性免疫的交流通道,有效逆转DIC状态挽救生命,为此,首先要了解各凝血相关分子在抗病毒感染中的作用。本综述分别介绍了多种病毒侵入后,所导致机体凝血功能紊乱的特点,以及在感染过程中凝血相关分子与免疫关联性特征,即病毒毒力分子如何通过调节凝血相关分子的表达,来影响免疫细胞的功能。同时,病毒毒力因子导致免疫系统的改变,又是如何间接影响凝血相关反应。将为包括新型冠状病毒在内的所有病毒的防控提供新的思路。

关键词：病毒感染凝血因子炎症免疫

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虫媒正黄病毒mRNA疫苗研究进展

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科学通报 2024年第33期69卷 4845-4857页

作者：王族馨迟航邓永强韩晓东内蒙古农业大学生命科学学院呼和浩特010011 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

虫媒正黄病毒种类多、传播快、致病强,长期严重威胁公共卫生安全,目前仍然缺乏针对正黄病毒的特异性治疗手段.疫苗接种是防控正黄病毒传播和感染的重要手段,多种制备技术生产的传统疫苗在黄热病毒、日本发脑炎病毒、森林脑炎病毒和登革... 详细信息

虫媒正黄病毒种类多、传播快、致病强,长期严重威胁公共卫生安全,目前仍然缺乏针对正黄病毒的特异性治疗手段.疫苗接种是防控正黄病毒传播和感染的重要手段,多种制备技术生产的传统疫苗在黄热病毒、日本发脑炎病毒、森林脑炎病毒和登革病毒的防控中发挥了关键性作用.然而,这些疫苗在安全性和免疫效力上仍有待进一步提高和完善.值得注意的是,在新型冠状病毒大流行的背景下,可快速制备的mRNA疫苗成为了应对新突发传染病的关键疫苗技术,必将极大地助力快速研发安全、高效的正黄病毒疫苗,为未来正黄病毒的科学防控奠定基础.为此,本文首先对mRNA疫苗的分子基础和作用机制进行了总结.然后,着重介绍了几种正黄病毒的生物学特征和流行情况,以及针对这些病毒的mRNA疫苗研究现状.最后,对合成生物学、核苷酸修饰技术和新型递送系统在未来mRNA疫苗研发中的作用进行了归纳,以期为未来快速研发高效、安全的正黄病毒mRNA疫苗提供研究思路和技术指导.

关键词：虫媒正黄病毒 mRNA疫苗体液免疫细胞免疫

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产气荚膜梭菌ε毒素导致多器官组织损伤

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微生物学通报 2020年第6期47卷 1920-1926页

作者：耿志军辛文文黄静康琳袁媛王景林安徽医科大学研究生院安徽合肥230032 军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【背景】产气荚膜梭菌ε毒素(εtoxin,ETX)是由B型和D型产气荚膜梭菌产生的一种肠毒素,具有迅速的致命性和经济上的破坏性。【目的】研究ETX对小鼠多个脏器的损伤情况及其在不同小肠肠段的结合情况。【方法】构建纯化偶联红色荧光蛋白的... 详细信息

【背景】产气荚膜梭菌ε毒素(εtoxin,ETX)是由B型和D型产气荚膜梭菌产生的一种肠毒素,具有迅速的致命性和经济上的破坏性。【目的】研究ETX对小鼠多个脏器的损伤情况及其在不同小肠肠段的结合情况。【方法】构建纯化偶联红色荧光蛋白的mScarlet-ETX,使用小动物活体成像观察其在小鼠体内的累积情况;使用病理学技术观察ε毒素对小鼠各个脏器和不同肠段的结合情况,以及对脏器的损伤情况。【结果】产气荚膜梭菌感染后,产生的ETX能累积于脑、肾、肺、肝、脾和心脏组织中,并能导致这些脏器的损伤。ETX在小鼠的小肠中主要累积于结肠中。【结论】产气荚膜梭菌ε毒素导致多器官组织损伤,并主要在结肠上被吸收,为治疗和预防携带ε毒素的产气荚膜梭菌感染提供了理论依据。

关键词：产气荚膜梭菌 ε毒素器官损伤出血水肿

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AlphaLISA检测金黄色葡萄球菌肠毒素D

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军事医学 2020年第2期44卷 142-146页

作者：曹鹤译郑玉玲刘鹏江华孔德聪姜永强律清宇军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用新型均相化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)检测金黄色葡萄球菌肠毒素D(SED),并与传统酶联免疫吸附测定(ELISA)进行比较。方法采用SED单抗偶联发光微球,生物素标记另一SED单抗,以及链霉亲和素偶联感光微球构建SED AlphaLISA检测... 详细信息

目的利用新型均相化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)检测金黄色葡萄球菌肠毒素D(SED),并与传统酶联免疫吸附测定(ELISA)进行比较。方法采用SED单抗偶联发光微球,生物素标记另一SED单抗,以及链霉亲和素偶联感光微球构建SED AlphaLISA检测体系;SED单抗包被,另一生物素标记SED单抗检测,链霉亲和素偶联辣根过氧化物酶(HRP)放大,构建SED ELISA检测体系。结果与结论确定AlphaLISA发光微球和生物素标记抗体的最适稀释比例为1∶50和1∶1000;确定ELISA包被抗体的最适浓度为3μg/ml,生物素标记抗体和链霉亲和素偶联HRP的最适比例分别为1∶1000和1∶2000;AlphaLISA对缓冲液和牛奶模拟样本SED的检出限为100 pg/ml,变异系数(CV)为0.3%~8.9%;ELISA对缓冲液和牛奶模拟样本SED的检出限为781.29 pg/ml,CV为1.0%~19.8%;两种方法均不与其他型肠毒素抗原产生交叉反应。与ELISA相比,AlphaLISA检测SED灵敏度、精确性更高。

关键词： AlphaLISA 金黄色葡萄球菌肠毒素D ELISA

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鼠疫耶尔森菌caf1基因缺失株体外生物学特性和对小鼠致病性分析

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中国人兽共患病学报 2020年第8期36卷 605-610页

作者：程鹏博陆灏曹超越蒋南张丽丽赵月峨鹿建春周冬生胡凌飞杨文慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 安徽医科大学合肥230032

目的探索caf1基因缺失对鼠疫耶尔森菌体外生物学特性与对小鼠致病性的影响.方法利用CRISPR/Cas12a介导的基因编辑技术构建鼠疫耶尔森菌caf1基因缺失株,并通过PCR技术对caf1基因缺失验证.比较鼠疫耶尔森菌caf1基因缺失株和野生株201在生... 详细信息

目的探索caf1基因缺失对鼠疫耶尔森菌体外生物学特性与对小鼠致病性的影响.方法利用CRISPR/Cas12a介导的基因编辑技术构建鼠疫耶尔森菌caf1基因缺失株,并通过PCR技术对caf1基因缺失验证.比较鼠疫耶尔森菌caf1基因缺失株和野生株201在生长速率、液体培养状态、聚集情况等体外生物学特性和对小鼠致病性等方面的差异.结果PCR扩增结果证实,caf1基因缺失株构建成功.体外生物学特征分析表明,与野生株相比,caf1基因缺失株的形态学和生长速率并未发生明显变化,自凝聚率升高.肺递送途径LD50分析表明,caf1的缺失导致鼠疫耶尔森菌气溶胶感染小鼠半数致死剂量显著降低.结论不同途径感染结果表明,caf1基因缺失株相较于野生株,在肺递送、滴鼻、皮下、尾静脉注射4种途径下对BALB/c小鼠的毒力均降低.caf1基因的缺失导致鼠疫耶尔森菌自凝聚率升高,对BALB/c小鼠致病性下降.

关键词：鼠疫耶尔森菌 caf1基因 CRISPR/Cas12a 毒力自凝聚率

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肠致病性大肠杆菌效应因子E2348C-1040泛素连接酶活性及泛素链连接方式的鉴定

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军事医学 2023年第3期47卷 182-187页

作者：黄炎玉李崭陈芳红李涛王慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的鉴定肠致病性大肠杆菌(EPEC)效应因子E2348C-1040泛素连接酶活性,检测其催化形成的泛素链的连接方式。方法构建原核表达质粒,转化感受态细胞,表达纯化E2348C-1040蛋白质。通过体外泛素化实验鉴定其泛素连接酶活性,利用泛素赖氨酸位... 详细信息

目的鉴定肠致病性大肠杆菌(EPEC)效应因子E2348C-1040泛素连接酶活性,检测其催化形成的泛素链的连接方式。方法构建原核表达质粒,转化感受态细胞,表达纯化E2348C-1040蛋白质。通过体外泛素化实验鉴定其泛素连接酶活性,利用泛素赖氨酸位点突变蛋白结合Western印迹实验检测该分子催化形成的泛素链的连接位点。结果成功构建原核表达质粒,获得纯度大于85%、浓度约为0.5 mg/ml的E2348C-1040蛋白质。分子水平的酶活实验结果表明E2348C-1040分子具有泛素连接酶活性,能催化形成不依赖于赖氨酸的泛素链。通过构建真核表达质粒转染HEK-293T细胞,发现E2348C-1040分子可在宿主细胞中催化形成甲硫氨酸(methionine 1,M1)连接的线性泛素链。结论EPEC效应因子E2348C-1040具有泛素连接酶活性,能催化泛素形成M1连接的线性泛素链。这一发现将为揭示效应因子E2348C-1040在宿主细胞内的作用机制提供研究线索。

关键词：肠致病性大肠杆菌效应因子泛素化泛素连接酶

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基于原代小脑颗粒细胞的A型肉毒毒素活性分析法的建立

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军事医学 2018年第1期42卷 57-59页

作者：王建新李崭何志利黄洁李涛王慧军事科学院军事医学研究微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的分离、培养SD大鼠原代小脑颗粒细胞,用于评价A型肉毒毒素活性。方法将出生后6~8 d的SD大鼠小脑颗粒细胞培养5~7 d后用A型肉毒毒素处理,采用免疫荧光法进行检测并评价毒素的活性,Western印迹法分析毒素活性与剂量关系。结果与结论成... 详细信息

目的分离、培养SD大鼠原代小脑颗粒细胞,用于评价A型肉毒毒素活性。方法将出生后6~8 d的SD大鼠小脑颗粒细胞培养5~7 d后用A型肉毒毒素处理,采用免疫荧光法进行检测并评价毒素的活性,Western印迹法分析毒素活性与剂量关系。结果与结论成功培养了大鼠小脑颗粒细胞,并在原代神经细胞水平建立了A型肉毒毒素活性分析法,测定了毒素活性剂量关系,为进一步解析肉毒毒素作用的生化机制提供了技术手段。

关键词： A型肉毒毒素原代小脑颗粒细胞活性分析

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高毒力肺炎克雷伯菌气溶胶感染小鼠模型的构建与评价

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军事医学 2020年第12期44卷 921-925页

作者：曹超越张丽丽仇洪影蒋南程鹏博吕蒙周冬生赵月峨杨文慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建高毒力肺炎克雷伯菌气溶胶感染小鼠模型并评价该模型构建效果。方法选取6~8周BALB/c雌性小鼠,经液体气溶胶肺递送和腹腔注射两种途径感染肺炎克雷伯菌NTUH-K2044,记录小鼠攻毒后14 d的生存状况,分析感染小鼠肺部病理并检测小鼠... 详细信息

目的构建高毒力肺炎克雷伯菌气溶胶感染小鼠模型并评价该模型构建效果。方法选取6~8周BALB/c雌性小鼠,经液体气溶胶肺递送和腹腔注射两种途径感染肺炎克雷伯菌NTUH-K2044,记录小鼠攻毒后14 d的生存状况,分析感染小鼠肺部病理并检测小鼠血清和肺泡灌洗液多种细胞因子。结果BALB/c小鼠LD50<11CFU。与腹腔攻毒途径比较,肺递送组小鼠死亡率更高,二者间差异有统计学意义(P<0.001)。病理切片发现,感染后12 h小鼠肺组织开始广泛出血,36 h出现脓肿,肉眼可见大量中性粒细胞浸润,至60 h可见肺部结构破坏。细胞因子检测结果显示,小鼠感染60 h内,在血清中检测到11个显著升高的蛋白,包括IL-6、GM-CSF、IL-18、MCP-1、MCP-3、MIP-1β、Eotaxin、G-CSF、MIP-2、MIP-1α和GRO-α。在肺泡灌洗液中检测到24个显著升高的蛋白,其中有10个趋化因子,即ENA-78、Eotaxin、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、MCP-3、IP-10、RANTES、GRO-α和MIP-2;有14个促炎因子,即IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α、IL-12p70、IL-22、IL-23、IL-17a、IL-18、IL-27、G-CSF、LIF、IFN-γ和GM-CSF。结论通过小鼠攻毒途径比较以及组织病理观察证实成功构建了小鼠模型。多种细胞因子检测结果显示,在感染36 h后,机体发生了剧烈的炎症因子风暴。

关键词：高毒力肺炎克雷伯菌气溶胶小鼠模型

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