检索结果-内蒙古大学图书馆

食品科学 2019年第8期40卷 79-86页

作者：李萍林洪童贻刚王静雪中国海洋大学食品科学与工程学院山东青岛266003 军事科学院军事医学研究所微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071

以大肠杆菌BL21为指示菌分离得到1株噬菌体vB_EcoS_IME18(IME18),通过电镜观察噬菌体形态,并测定其最佳感染复数、一步生长曲线、裂解谱和体外杀菌效果;使用Illumina MiSeq测序仪完成噬菌体全基因组测序,利用比较基因组学分析噬菌体基... 详细信息

以大肠杆菌BL21为指示菌分离得到1株噬菌体vB_EcoS_IME18(IME18),通过电镜观察噬菌体形态,并测定其最佳感染复数、一步生长曲线、裂解谱和体外杀菌效果;使用Illumina MiSeq测序仪完成噬菌体全基因组测序,利用比较基因组学分析噬菌体基因组特征;通过筛选噬菌体抗性株分析其耐受原因,利用受体基因沉默突变实验、噬菌体斑点实验和噬菌体吸附实验验证噬菌体受体。结果表明,噬菌体IME18具有二十面体头部和非收缩性尾部,属于长尾噬菌体科,Tunavirinae亚科,T1类噬菌体;噬菌体IME18的最佳感染复数为0.01,潜伏期为5 min,裂解期50 min,爆发量高达223 PFU/cell;在体外,噬菌体IME18能在90 min内有效杀死处于对数期的BL21;噬菌体IME18基因组全长50 354 bp,G+C含量为45.6%;蛋白Fhu A、Ton B在噬菌体IME18的吸附和侵染过程中发挥重要作用。

关键词：大肠杆菌噬菌体鉴定噬菌体受体

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副溶血弧菌耐热直接溶血素DAS-ELISA检测方法的建立

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中国人兽共患病学报 2022年第8期38卷 666-672页

作者：白雪欣胡宸艺金志颖万伟李月王菁李岩伟高姗王景林安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立副溶血弧菌耐热直接溶血素的双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法。方法本研究通过PCR技术扩增副溶血弧菌耐热直接溶血素基因序列,并将其克隆至pET-28a载体后进行原核表达,对表达蛋白进行纯化... 详细信息

目的建立副溶血弧菌耐热直接溶血素的双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法。方法本研究通过PCR技术扩增副溶血弧菌耐热直接溶血素基因序列,并将其克隆至pET-28a载体后进行原核表达,对表达蛋白进行纯化和鉴定,随后用高纯度的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,得到抗体后利用分子互作测定抗体的亲和力,并利用该抗体建立检测副溶血弧菌耐热直接溶血素的DAS-ELISA方法。通过棋盘法对该方法的反应条件进行优化,建立标准曲线,并对建立的DAS-ELISA方法进行性能评价及初步应用。结果本实验制备的多克隆抗体亲和力可达1×10^(-8),使用该高亲和力抗体建立的DAS-ELISA方法灵敏度为78 ng/mL,定量范围为78~312 ng/mL;与创伤弧菌溶细胞毒素(Vibrio vulnificus hemolysin,VVH)、产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perfringensαtoxin,CPA)以及产气荚膜梭菌ε毒素(epsilon toxin,ETX)均无交叉反应;利用扇贝、花蛤和魁蚶制备海鲜模拟样本,在上述3种模拟样本内添加重组蛋白构建标准曲线,评价本方法复杂基质中检出能力时发现灵敏度均并未发生改变;同时在上述3种模拟样本中添加菌液上清评价本方法检测天然毒素能力,检出率为100%。结论成功构建了一种用于副溶血弧菌耐热直接溶血素检测的DAS-ELISA方法,该方法特异性强、灵敏度高,适用于复杂基质检测,有望开发成副溶血弧菌耐热直接溶血素快速诊断试剂盒,具有良好的应用前景。

关键词：耐热直接溶血素多克隆抗体 DAS-ELISA

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寨卡病毒EDⅢmRNA疫苗的设计与免疫保护效果评价

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科学通报 2024年第33期69卷 4917-4927页

作者：田颖武媚李凯周超张蓉蓉周航宇叶青秦成峰黄升海李晓峰安徽医科大学基础医学院合肥230000 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国医学科学院北京协和医学院系统医学研究所北京100005

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是虫媒黄病毒属的重要成员,因其在2015年的南美寨卡疫情中导致大量新生儿小头症而备受关注,目前尚无获批上市的寨卡病毒疫苗.与传统疫苗相比,mRNA疫苗在安全性、有效性和产能方面优势明显,代表未来全新的疫苗... 详细信息

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是虫媒黄病毒属的重要成员,因其在2015年的南美寨卡疫情中导致大量新生儿小头症而备受关注,目前尚无获批上市的寨卡病毒疫苗.与传统疫苗相比,mRNA疫苗在安全性、有效性和产能方面优势明显,代表未来全新的疫苗形式.本研究选取寨卡病毒FSS13025株包膜蛋白E的Ⅲ区(EDⅢ)作为免疫原,设计构建包含EDⅢ编码序列、非编码区和poly(A)尾的重组质粒,通过体外转录和加帽反应获得EDⅢ-mRNA转录体,其转染至HEK293TN细胞后能表达特异的目的抗原并能分泌至胞外.进一步利用微流控技术将EDⅢ-mRNA转录体制备成脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle,LNP),以间隔3周加强一次的免疫方案分别将5和20μg的EDⅢ-mRNA经肌肉注射至BALB/c小鼠.酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和空斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)的结果显示,该分子可刺激小鼠产生剂量依赖性的高水平的E蛋白特异IgG抗体与寨卡病毒中和抗体,并产生Th1细胞偏向的分泌型IFN-γ、TNF-α和IL-2细胞因子.攻毒保护试验结果显示,免疫组小鼠的病毒血症和主要脏器中的病毒RNA载量相较于磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline,PBS)对照组小鼠均明显降低,其中孕鼠大脑及胎鼠大脑未检测到病毒核酸,体现出良好的免疫保护和垂直传播阻断效果.本研究设计的编码寨卡病毒E蛋白Ⅲ区的mRNA-LNP疫苗可为寨卡病毒疫苗提供新的候选.

关键词：寨卡病毒 mRNA疫苗 E蛋白Ⅲ区免疫原性免疫保护

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加巴喷丁体内外抗RSV感染的作用

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免疫学杂志 2018年第5期34卷 378-384页

作者：时艳婷谷宏婧杨晓岚段跃强赵忠鹏周娅杨鹏辉王希良宁夏医科大学基础医学院银川750004 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所/病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的探讨加巴喷丁对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的抗病毒作用。方法体外实验通过MTS、TCID50、q RT-PCR方法检测不同浓度加巴喷丁对RSV感染的抑制作用,包括细胞活力、病毒复制及细胞因子的变化。体内实验选取4~6周... 详细信息

目的探讨加巴喷丁对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的抗病毒作用。方法体外实验通过MTS、TCID50、q RT-PCR方法检测不同浓度加巴喷丁对RSV感染的抑制作用,包括细胞活力、病毒复制及细胞因子的变化。体内实验选取4~6周龄C57BL/6小鼠,随机分为空白对照组、RSV感染组、低剂量及高剂量加巴喷丁处理组,连续腹腔注射给药,每日观察体质量变化,HE染色观察小鼠肺部的病理变化,q RT-PCR方法检测肺部病毒载量。结果 1、2、5、10 mmol/L不同浓度加巴喷丁显著增加RSV感染A549细胞的活力;5、10 mmol/L浓度的加巴喷丁可显著降低RSV感染A549细胞的病毒载量,10 mmol/L的加巴喷丁可显著抑制病毒的复制,减少CCL3、CCL5、CXCL2及TNF-α、IL-6、IL-8等趋化因子和炎性因子表达,促进干扰素IFN-α、IFN-β表达;动物实验表明90μg、180μg的加巴喷丁处理组可减轻RSV感染小鼠的体质量变化、改善肺部病理损伤和降低病毒载量。结论加巴喷丁可通过抑制病毒复制,调节趋化因子及炎性因子释放,促进干扰素分泌的方式发挥体内抗病毒作用,对RSV感染的C57BL/6小鼠有一定的治疗作用,可改善肺部病理,为进一步临床应用提供实验依据。

关键词：加巴喷丁呼吸道合胞病毒抗病毒细胞因子

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TFPR1通过激活树突状细胞并促进其成熟发挥佐剂功能

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军事医学 2018年第2期42卷 101-104页

作者：李悄王月鹏朱青宁秀哲孙维来周育森寇志华安徽医科大学北京微生物流行病研究所合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究树突状细胞(DC)在重组蛋白TFPR1发挥佐剂功能中的作用。方法在无菌条件下取4~5周龄雄性BALB/c小鼠的骨髓细胞,小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)与重组白介素4(rm IL-4)诱导分化6 d后,加入TFPR1共孵育24 h,并以LP... 详细信息

目的研究树突状细胞(DC)在重组蛋白TFPR1发挥佐剂功能中的作用。方法在无菌条件下取4~5周龄雄性BALB/c小鼠的骨髓细胞,小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)与重组白介素4(rm IL-4)诱导分化6 d后,加入TFPR1共孵育24 h,并以LPS处理为阳性对照、PBS为阴性对照,普通光学显微镜观察DC形态变化,罗丹明标记鬼笔环肽(TRITC Phalloidin)和DAPI共染色后,激光共聚焦显微镜观察细胞肌动蛋白和细胞核的分布情况,流式细胞术检测细胞表面CD40、CD80、CD86、MHCⅡ的表达水平,ELISA检测细胞培养上清中的细胞因子。结果在普通光镜和共聚焦显微镜下,加入TFPR1的DC与加入PBS的阴性对照DC相比具有显著的不同,而和加入LPS的阳性对照相似:光镜下发现大多数TFPR1处理的DC伪足变短直至消失,并变成圆形、悬浮于培养基中;激光共聚焦显微镜观察发现TFPR1处理的DC肌动蛋白由分布于细胞两极转至均匀分布于细胞膜上,从形态学上表明TFPR1可促进DC成熟;流式细胞术检测到TFPR1处理的DC表面CD40、CD80、CD86、MHCⅡ的表达量上调,进一步证明TFPR1具有促进DC成熟的作用。ELISA检测发现TFPR1处理的DC可产生高水平的IL-6、IL-8、TNF-α等细胞因子。结论 TFPR1不但能促进DC成熟,且能激活DC产生细胞因子,说明DC在TFPR1的佐剂功能中发挥重要作用。

关键词： TFPR1 树突状细胞佐剂作用机制

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发热伴血小板减少综合征病毒微基因组模型的构建与应用

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病毒学报 2023年第4期39卷 1017-1025页

作者：李庆云王红宋亚彬徐力昆张东娜王保刚于欢欢贝祝春王慧军事科学院军、事医学研究院、微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 联勤保障部队第九八五医院太原030001

发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)是一种新发蜱传布尼亚病毒,人群普遍易感,病死率高,目前没有针对SFTSV感染的特异性疫苗和治疗药物。为开发针对它的研究方法和工具,本研究... 详细信息

发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)是一种新发蜱传布尼亚病毒,人群普遍易感,病死率高,目前没有针对SFTSV感染的特异性疫苗和治疗药物。为开发针对它的研究方法和工具,本研究用反向遗传学方法构建了基于SFTSV S片段非编码区的微基因组模型,并利用该模型验证了广谱RNA病毒RdRp抑制剂,法匹拉韦(Favipiravir,T⁃705)的活性。在表达报告基因Gluc的微基因组模型中,T⁃705表现出显著的抑制活性(IC_(50)=3.17μmol/L),且具有良好的剂量相关性(r^(2)=0.95),证明了该微基因组模型用于SFTSV RdRp抑制剂筛选的可行性。

关键词：发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV) 微基因组模型反向遗传学 RdRp抑制剂

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弗氏枸橼酸杆菌中发现介导bla_(KPC-2)传播的新型质粒及比较基因组学分析

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中华预防医学杂志 2023年第12期57卷 2122-2128页

作者：郭会钱李昕悦陈素明张旺鲍春梅殷喆李伯安潍坊医学院医学检验学院潍坊261053 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军总医院第五医学中心检验科北京100039

目的探讨来自弗氏枸橼酸杆菌的产碳青霉烯酶的新型不相容群组质粒pNY2385-KPC的耐药机制及基因结构特征。方法从宁波市医疗中心李惠利医院急诊病房的发热患者尿液样本中获得1株多药耐药菌。采用16S rRNA基因扩增和平均核苷酸一致性(ANI... 详细信息

目的探讨来自弗氏枸橼酸杆菌的产碳青霉烯酶的新型不相容群组质粒pNY2385-KPC的耐药机制及基因结构特征。方法从宁波市医疗中心李惠利医院急诊病房的发热患者尿液样本中获得1株多药耐药菌。采用16S rRNA基因扩增和平均核苷酸一致性(ANI)进行菌种鉴定;采用全自动细菌鉴定及药敏分析系统检测细菌MIC值;通过“三代”测序方法获得基因组序列,然后通过BLASTP/BLASTN、RefSeq、ConservedDomains、ResFinder、Isfinder等对基因功能进行详细注释及比较基因组学分析。结果弗氏枸橼酸杆菌NY2385携带的质粒pNY2385-KPC为一种新型不相容群组质粒,包含bla_(KPC-2),具有接合转移(Ⅳ型分泌系统)基因,可发生接合转移。NCBI中共检索到同型质粒15个,来源于弗氏枸橼酸杆菌、黏质沙雷菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌和植生拉乌尔菌等细菌,为泛宿主质粒。通过对来自弗氏枸橼酸杆菌中6个该新型质粒进行序列比较分析,发现该新型质粒结构具有一定的保守性,具有携带bla_(KPC-2)的Tn6296变体结构,而且质粒pCF1807-3同时具有repApNY2385-KPC和repAIncX8。结论弗氏枸橼酸杆菌中的pNY2385-KPC型质粒均携带bla_(KPC-2)耐药基因,分为repApNY2385-KPC单复制子和repApNY2385-KPC/repAIncX8双复制子两种亚型,属于泛宿主质粒,作为可移动遗传元件促进了bla_(KPC-2)的传播。

关键词：弗氏枸橼酸杆菌多药耐药新型质粒肠杆菌科

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鼠疫历史疫情的考古微生物学研究进展

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中国人兽共患病学报 2018年第12期34卷 1142-1146页

作者：宋凯祁芝珍杨瑞馥宋亚军病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071 青海省地方病预防控制所西宁811062 青海省鼠疫防控及研究重点实验室西宁811062

鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌(简称鼠疫菌)引发的烈性传染病,人类历史上曾发生3次大规模的鼠疫大流行。近年来,考古微生物学得到长足发展,使得研究人员可以对历史上的鼠疫疫情进行探索,为鼠疫的起源、传播以及鼠疫菌的进化等关键问题提供更... 详细信息

鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌(简称鼠疫菌)引发的烈性传染病,人类历史上曾发生3次大规模的鼠疫大流行。近年来,考古微生物学得到长足发展,使得研究人员可以对历史上的鼠疫疫情进行探索,为鼠疫的起源、传播以及鼠疫菌的进化等关键问题提供更为深刻的理解。本文就关于考古微生物学方法在古代鼠疫疫情研究领域取得的进展进行简单综述:包括基于PCR、蛋白质分析以及基因组序列测定在内的考古微生物学研究技术方法;基于以上技术确认查士丁尼瘟疫和黑死病的病原体为鼠疫菌;新石器时代晚期至青铜时代就已经存在人类感染鼠疫菌的病例;通过分子钟分析将鼠疫菌的物种形成时间确定为5000-7500年前。考古微生物学方法不仅可以继续推进鼠疫和鼠疫菌的相关研究,也将为其他历史传染病的研究提供有益借鉴。

关键词：鼠疫鼠疫菌考古微生物学传播毒力因子

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AlphaLISA检测金黄色葡萄球菌肠毒素A方法的建立

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军事医学 2020年第11期44卷 815-820页

作者：张力文陈萱郑玉玲江华刘鹏孔德聪律清宇姜永强安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立一种快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的均相光激化学发光免疫分析法(AlphaLISA)。方法待测样本中的SEA与偶联有羊抗SEA多克隆抗体的受体微球、生物素化的小鼠抗SEA单克隆抗体发生反应,形成双抗体夹心结构,再与包被链霉亲和... 详细信息

目的建立一种快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的均相光激化学发光免疫分析法(AlphaLISA)。方法待测样本中的SEA与偶联有羊抗SEA多克隆抗体的受体微球、生物素化的小鼠抗SEA单克隆抗体发生反应,形成双抗体夹心结构,再与包被链霉亲和素的供体微球形成复合体。680 nm波长荧光激发供体微球上的光敏剂产生单线态氧,触发受体微球发出615 nm波长荧光,多功能酶标仪检测信号值,信号值高低与待测样本中SEA的浓度呈正比。结果缓冲液中SEA的最低检出限(LOD)为0.1 ng/ml,线性范围0.2~50 ng/ml,相关系数R2为0.9941。检测体系不易受高糖、高盐和高蛋白等样本基质的影响,牛乳等液态模拟样本和10%(w/v)稀释的奶粉、豆干、火腿肠等固态食品模拟样本的LOD均为0.1 ng/ml。检测体系与其他4种肠毒素(SEB、SEC、SED、SEE)、A型肉毒毒素、蓖麻毒素、相思子毒素均无交叉反应,特异性较好。无论是缓冲液还是模拟样本检测,变异系数均小于10%,具有较好的重复性。结论该法操作流程简便,检测灵敏度高、特异性强,检测时间为25 min,在金黄色葡萄球菌性食物中毒的鉴别诊断中具有较好的应用前景。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素A AlphaLISA 金黄色葡萄球菌性食物中毒

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大肠杆菌htrA突变株构建及其在鼠疫拟菌颗粒疫苗制备中的应用

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军事医学 2018年第7期42卷 539-544页

作者：李璐刘万兵周亚洲纪宇欣周冬生杨瑞馥王效义安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的基于乳酸乳球菌和鼠疫耶尔森菌F1抗原,制备鼠疫拟菌颗粒疫苗。方法基于λ-Red一步重组技术,构建BL-21大肠杆菌htr A基因缺失突变株;将鼠疫菌F1抗原基因和PA基因克隆至p ET-28a(+)质粒中构建F1-PA融合蛋白表达载体,将此载体分别导入... 详细信息

目的基于乳酸乳球菌和鼠疫耶尔森菌F1抗原,制备鼠疫拟菌颗粒疫苗。方法基于λ-Red一步重组技术,构建BL-21大肠杆菌htr A基因缺失突变株;将鼠疫菌F1抗原基因和PA基因克隆至p ET-28a(+)质粒中构建F1-PA融合蛋白表达载体,将此载体分别导入到BL-21大肠杆菌野生株和其htr A基因缺失突变株中构建F1-PA融合蛋白表达菌株; SDS-PAGE电泳分析F1-PA融合蛋白表达;镍柱亲和层析纯化包涵体蛋白,梯度稀释透析法复性F1-PA融合蛋白;乳酸乳球菌经热酸处理制备拟菌颗粒;革兰染色和透射电镜分析拟菌颗粒的形态;拟菌颗粒分别与F1-PA融合蛋白或F1蛋白共孵育制备拟菌颗粒疫苗。结果 F1-PA融合蛋白在大肠杆菌野生株和htr A缺失突变株中均以包涵体形式表达。拟菌颗粒对F1-Pa融合蛋白的吸附能力明显高于对F1蛋白的吸附能力。F1-PA融合蛋白在大肠杆菌htr A突变株中的表达量明显高于在野生株中的表达量。结论大肠杆菌htr A突变株用于表达F1-PA融合蛋白优于野生株。借助于肽聚糖锚钩蛋白,可将鼠疫菌F1抗原结合到乳酸乳球菌拟菌颗粒上制备鼠疫拟菌颗粒疫苗。

关键词：乳酸乳球菌拟菌颗粒疫苗鼠疫耶尔森菌 F1抗原大肠杆菌htrA突变株

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