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饮食保健 2018年第37期5卷 296-297页

作者：李晓旭吴纯启王全军郭尚敬聊城大学药学院山东聊城 252000 军事医学研究院毒物药物研究所抗毒物药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京 100850 聊城大学药学院山东聊城 252000 聊城大学农学院山东聊城 252000

3D培养是近年来新兴的用于体外药物及毒物测试的细胞培养技术,该培养体系可高度模拟生理培养条件,从而提高细胞体外活率并延长其生存期.而作为细胞外基质成分的水凝胶材料由于以水为分散介质,能够给细胞提供完全自由的生长环境,且可人... 详细信息

3D培养是近年来新兴的用于体外药物及毒物测试的细胞培养技术,该培养体系可高度模拟生理培养条件,从而提高细胞体外活率并延长其生存期.而作为细胞外基质成分的水凝胶材料由于以水为分散介质,能够给细胞提供完全自由的生长环境,且可人为的对其机械性能进行修饰等优势,近年来广泛应用于3D培养系统的研究.考虑到不同的凝胶材料会直接影响培养细胞的功能和活性状态,因此本综述中,我们首先介绍了用于细胞培养的常用的凝胶材料.其次,针对水凝胶构建体在肝细胞3D培养系统中的常用的体外建模方式及存在的问题做一简要介绍.

关键词： 3D培养水凝胶细胞模型毒性

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何首乌肝损伤模型大鼠胆汁淤积现象及相关蛋白表达研究

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药物评价研究 2017年第5期40卷 612-619页

作者：井潇吴纯启韩刚谢丽华王茜莎杨威王全军广东药科大学中药学院广东广州510006 军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京100850 广东莱恩医药研究院有限公司广东广州510006

目的观察经脂多糖(LPS)诱导后连续给予何首乌醇提液(AEP)7 d大鼠的肝损伤程度及胆汁淤积相关指标的变化。方法将雄性SD大鼠随机分为5组:对照组、LPS组、LPS+对乙酰氨基酚(APAP)组、AEP组、LPS+AEP组,LPS、LPS+APAP、LPS+AEP组按大鼠体... 详细信息

目的观察经脂多糖(LPS)诱导后连续给予何首乌醇提液(AEP)7 d大鼠的肝损伤程度及胆汁淤积相关指标的变化。方法将雄性SD大鼠随机分为5组:对照组、LPS组、LPS+对乙酰氨基酚(APAP)组、AEP组、LPS+AEP组,LPS、LPS+APAP、LPS+AEP组按大鼠体质量分别尾iv给予4 mg/kg LPS,对照组与AEP组给予等体积生理盐水;2 h后LPS+APAP组ig给予625 mg/kg APAP,AEP组与LPS+AEP组ig给予12 g/kg,每天1次,连续给药7 d,建立特异质肝损伤炎症模型。观察体质量变化,并分别于造模后2 h、14 h、5 d、8 d检测血清生化中肝功能相关指标的变化,同时收集胆汁,计算胆汁流速与密度,并检测胆汁中主要成分变化。进行肝脏系数及组织病理学检查,并对胆汁淤积相关蛋白胆盐输出泵转运蛋白(BSEP)、多药耐药蛋白2(MRP2)及多药耐药蛋白3(MRP3)进行Real-Time PCR检测。结果经过LPS诱导2 d后,LPS+AEP组与对照组、AEP组比较体质量明显下降,5、8 d肝脏系数显著增加(P<0.05);血清生化指标分析结果显示,与对照组比较,LPS+AEP组丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平无明显变化;造模后8 d的总胆红素(TBIL)明显降低(P<0.05),ALP明显升高(P<0.05);可观察到胆汁密度和胆汁流速明显降低(P<0.05),对胆汁成分分析显示,与对照组比较,LPS+AEP组总胆固醇(TCHO)显著升高、TBIL显著降低(P<0.05);病理结果显示,AEP组出现轻微肝细胞变性,而LPS+AEP组可见严重局灶坏死;转录水平结果发现,LPS诱导后可使得BSEP、MRP2在14 h时出现短期抑制(P<0.05),单独给予AEP可使BSEP、MRP2和MRP3的表达水平短时显著升高(P<0.05、0.01),而LPS+AEP给药第8 d对大鼠肝脏BSEP、MRP2无显著性影响,可使MRP3转录水平升高(P<0.05)。结论经LPS诱导的AEP可明显损伤大鼠肝细胞并干扰胆汁分泌功能,引起胆汁成分相关生化指标的改变,对BSEP与MRP2水平无显著影响,MRP3出现代偿性升高,提示确实存在胆汁淤积症状,但可能是存在其他机制。

关键词：何首乌醇提液胆汁淤积肝毒性实时荧光定量PCR 胆盐输出泵转运蛋白多药耐药蛋白2 多药耐药蛋白3

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何首乌肝损伤差异表达蛋白的筛选与生物信息学分析

何首乌肝损伤差异表达蛋白的筛选与生物信息学分析

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2017年中国毒理学会药物毒理与安全性评价学术大会

作者：井潇吴纯启谢丽华王茜莎杨威王全军军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京 100850 广东莱恩医药研究院有限公司广州 510006 军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京 100850 广东药科大学中药学院广州 510006 军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京 100850 广东药科大学中药学院广州 510006 广东莱恩医药研究院有限公司广州 510006

目的利用生物信息学技术，使用数据库结合软件快速对本课题组前期经过ITRAQ筛选出的何首乌相关差异蛋白进行给予本体论注释的聚类分析，蛋白质相互作用分析，并进一步检测胆汁淤积相关指标，从而为阐明何首乌肝毒性机制提供线索，为后... 详细信息

目的利用生物信息学技术，使用数据库结合软件快速对本课题组前期经过ITRAQ筛选出的何首乌相关差异蛋白进行给予本体论注释的聚类分析，蛋白质相互作用分析，并进一步检测胆汁淤积相关指标，从而为阐明何首乌肝毒性机制提供线索，为后续实验奠定理论基础。

关键词：何首乌肝损伤生物信息学差异蛋白

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何首乌肝损伤模型大鼠胆汁淤积现象及相关蛋白表达研究

何首乌肝损伤模型大鼠胆汁淤积现象及相关蛋白表达研究

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2017年中国毒理学会药物毒理与安全性评价学术大会

作者：井潇吴纯启韩刚谢丽华王茜莎杨威王全军广东药科大学中药学院广州510006 军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京100850 军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京100850 广东药科大学中药学院广州510006 广东莱恩医药研究院有限公司广州 510006

目的观察大鼠经LPS诱导后连续给予何首乌醇提液(AEP)7 d后的肝损伤程度及其对胆汁淤积相关指标的影响.方法将雄性SD大鼠随机分为4组：空白对照组(Ctrl组),LPS组(LPS组),何首乌组(AEP组),LPS+何首乌组(LPS+AEP组).LPS组、LPS+AEP组按... 详细信息

目的观察大鼠经LPS诱导后连续给予何首乌醇提液(AEP)7 d后的肝损伤程度及其对胆汁淤积相关指标的影响.方法将雄性SD大鼠随机分为4组：空白对照组(Ctrl组),LPS组(LPS组),何首乌组(AEP组),LPS+何首乌组(LPS+AEP组).LPS组、LPS+AEP组按动物体重尾静脉注射给予4mg·kg-1 ***组和LPS+AEP组2 h后灌胃给予12 g·kg-1(相当于临床给药剂量22倍)何首乌,每日1次,连续给药7 d建立特异质肝损伤炎症模型.观察体重变化,并分别取第2 h、14 h、5 d、8 d4个时间点检测血生化肝功能相关指标同时收集胆汁,计算胆汁流速与密度并检测胆汁中主要成分变化.进行肝脏系数及组织病理学检查,并对胆汁淤积相关蛋白胆盐输出泵转运蛋白(BSEP)、多药耐药蛋白2(MRP2)及多药耐药蛋白3(MRP3)进行Real-Time PCR检测.

关键词：何首乌醇提液胆汁淤积肝毒性实时荧光定量PCR

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正丁基硫代磷酰三胺对体细胞和生殖细胞的致突变性研究

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癌变．畸变．突变 2016年第6期28卷 432-437页

作者：原野陈丹丹荆淑芳于永生陈健恒吴纯启施畅军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心北京100850 军事医学科学院抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850 中国食品药品检定研究院北京100050 YMS Agriculture International Corp. Toronto M5X 1C7OntarioCanada

目的:采用小鼠骨髓细胞染色体畸变试验和小鼠显性致死突变试验评价正丁基硫代磷酰三胺(NBPT)对体细胞和生殖细胞的致突变性。方法:小鼠骨髓细胞染色体畸变试验中雄性小鼠分别单次灌胃给予NBPT 250、500、1 000 mg/kg,1 000 mg/kg组动物... 详细信息

目的:采用小鼠骨髓细胞染色体畸变试验和小鼠显性致死突变试验评价正丁基硫代磷酰三胺(NBPT)对体细胞和生殖细胞的致突变性。方法:小鼠骨髓细胞染色体畸变试验中雄性小鼠分别单次灌胃给予NBPT 250、500、1 000 mg/kg,1 000 mg/kg组动物于给药后24、48及72 h取骨髓细胞制备骨髓片,其他组动物于给药后24 h取骨髓细胞制备骨髓片。每只动物在油镜下分析100个中期相骨髓细胞,记录染色体结构畸变、数目畸变和发生裂隙的细胞数。小鼠显性致死试验中雄鼠分别连续灌胃给予NBPT 250、500、1 000 mg/kg 5 d后,雌鼠与雄鼠同笼交配5 d,雄鼠再于2 d后与下一轮的雌鼠交配,共进行7个轮次的交配,每轮次1周,覆盖雄性小鼠整个生精周期。每轮次雌鼠于同笼结束后第14天处死,计数总着床数、黄体数、死胎、活胎和吸收胎数。结果:小鼠单次灌胃NBPT 24 h后,250、500、1 000 mg/kg剂量组骨髓细胞染色体结构畸变率分别为2.4%、3.0%和2.0%,1 000 mg/kg组24、48和72 h的骨髓细胞染色体结构畸变率均未超过4%,与溶媒对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。各NBPT处理组染色体四倍体与裂隙的发生率也未出现与NBPT相关性的变化。小鼠显性致死试验的7个交配轮次中,NBPT 3个处理组受孕率为100%,母鼠平均着床数、黄体数、活胎数与溶媒对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。仅在NBPT 250 mg/kg组发现第4交配轮次母鼠着床前丢失率增高,第6轮次母鼠窝均非活胎数降低,与溶媒对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。NBPT 3个处理组各交配轮次母鼠的致死突变率大多为负值,偶见较低的正值。结论:在本试验条件下,NBPT无致小鼠骨髓细胞染色体畸变效应,对雄性ICR小鼠无显性致死突变作用。

关键词：正丁基硫代磷酰三胺致突变性骨髓细胞染色体畸变试验显性致死试验

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纳米银对中国仓鼠肺成纤维细胞的细胞毒性和遗传毒性

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癌变．畸变．突变 2014年第6期26卷 428-433页

作者：于永生施畅徐丽明韩刚尹纪业马华智丁日高烟台大学药学院山东烟台264005 军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心北京100850 军事医学科学院抗毒药物与毒理学国家重点实验室北京100850 中国食品药品检定研究院医疗器械检定所北京100050

目的:研究纳米银对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)的细胞毒性和遗传毒性并探讨其作用机制。方法:以梯度浓度(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0μg/m L)纳米银染毒CHL细胞,MTT比色法计算IC5 0以评估纳米银的细胞毒性水平。利用PI染色分析细... 详细信息

目的:研究纳米银对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)的细胞毒性和遗传毒性并探讨其作用机制。方法:以梯度浓度(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0μg/m L)纳米银染毒CHL细胞,MTT比色法计算IC5 0以评估纳米银的细胞毒性水平。利用PI染色分析细胞周期变化并计算细胞增殖指数;Annexin V-FITC和PI双染检测细胞凋亡和坏死发生率,同时观察细胞染毒后的形态变化,记录前向角散射(FSC)和侧向角散射(SSC)信号;Giemsa染色中期分裂相涂片分析染色体畸变发生率。结果:纳米银毒性水平与纳米银浓度呈正相关(r=0.804,P<0.05),IC 50为21.68μg/m L。22.0μg/m L纳米银与CHL细胞接触24 h后,细胞形态发生明显改变;细胞群SSC信号显著增强,为细胞摄入纳米银提供间接证据;细胞周期在G2/M期被捕获,对G0/G1期、S期以及细胞增殖指数变化情况影响显著(P<0.01);22.0μg/m L纳米银染毒CHL 24 h后凋亡发生率与对照组差异明显(P<0.01);各浓度纳米银诱导染色体结构畸变率均大于5%(P<0.01),中高浓度四倍体发生率达到溶剂对照组的10倍以上(P<0.01)。结论:纳米银对CHL细胞有显著的细胞毒性和遗传毒性,线粒体功能受损、细胞凋亡在纳米银的细胞毒性和遗传毒性中起到重要作用。

关键词：纳米银中国仓鼠肺成纤维细胞细胞毒性遗传毒性细胞周期凋亡

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纳米银对中国仓鼠肺细胞的细胞毒性和遗传毒性

纳米银对中国仓鼠肺细胞的细胞毒性和遗传毒性

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中国环境诱变剂学会致突变、致畸学术讨论会

作者：于永生施畅徐丽明韩刚尹纪业马华智丁日高军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心北京 100850 抗毒药物与毒理学国家重点实验室(军事医学科学院) 北京 100850 烟台大学药学院山东烟台 264005 军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心北京 100850 抗毒药物与毒理学国家重点实验室(军事医学科学院) 北京 100850 中国食品药品检定研究院医疗器械检定所北京 100050

背景与目的研究纳米银对中国仓鼠肺细胞(CHL)的细胞毒性和遗传毒性并探求机制.材料与方法 1.以梯度浓度纳米银(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0 μ g/ml)染毒CHL细胞24h,观察细胞形态变化,MTT比色法计算IC50以评估纳米银细胞毒性水平... 详细信息

背景与目的研究纳米银对中国仓鼠肺细胞(CHL)的细胞毒性和遗传毒性并探求机制.材料与方法 1.以梯度浓度纳米银(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0 μ g/ml)染毒CHL细胞24h,观察细胞形态变化,MTT比色法计算IC50以评估纳米银细胞毒性水平.2.选取近IC50值(22.0 μ g/ml)作为受试浓度,利用PI染色法分析染毒3h、6h、12h、24h和48h后CHL细胞周期变化并计算细胞增殖指数(PI=(S+G2/M)/(G0/G1 +S+G2/M));采用Annexin V-FITC和PI双染检测前述时间点下的细胞凋亡和坏死发生率,同时记录FSC和SSC信号值的变化情况.3.以梯度浓度(11.0、22.0和44.0 μ g/ml)纳米银染毒CHL细胞24h,收获中期分裂相并用Giemsa染色进行镜检,统计染色体结构和数目畸变发生率.结果 1.纳米银与CHL细胞接触后,光镜下(400×)可见细胞出现空泡化,毒性水平与纳米银浓度呈现正相关,根据改良的Kaber公式计算IC50值为21.68 μ g/ml.2.在测试的各时间点纳米银处理组的G2/M期细胞比例均显著高于对照组(P＜0.01),对G0/G1期、S期的变化情况也有显著影响;对照组细胞增殖指数在24h和48h均明显下降,此时纳米银处理组细胞增殖指数也略有下降但幅度远低于对照组;24h以内纳米银处理组凋亡和坏死细胞比例未明显区别于对照组,染毒24h凋亡细胞急剧增加——早、晚期凋亡细胞均增加3倍左右,坏死细胞比例也明显上升,与对照组比较均有显著差异(P＜0.01),染毒至48h早、晚期凋亡发生率较24h略有下降,但与对照组比较仍有显著差异(P＜0.01),坏死细胞比例则持续上升(约为24h时的5.7倍),与对照组比较有显著差异(P＜0.01);纳米银处理组的CHL细胞群SSC信号较对照组显著增强,间接反映染毒过程中细胞可将纳米银的摄入胞浆内.3.各测试浓度纳米银诱导染色体结构畸变均大于5％,中高浓度四倍体发生率达到溶剂对照组的10倍以上;阳性对照品丝裂霉素C (0.25μg/ml)在相同实验条件下诱发CHL细胞染色体结构、数目畸变率明显增加.结论纳米银对CHL细胞有显著的细胞毒性和遗传毒性,线粒体功能受损、细胞凋亡在纳米银的细胞毒性和遗传毒性中起到不可或缺的作用.

关键词：纳米银中国仓鼠肺细胞细胞毒性遗传毒性细胞周期凋亡

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纳米银对中国仓鼠肺细胞的细胞毒性和遗传毒性

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第四届药物毒理学年会

作者：施畅于永生徐丽明丁日高军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心北京100850 抗毒药物与毒理学国家重点实验室(军事医学科学院) 北京100850 中国食品药品检定研究院医疗器械检定所北京100050

目的研究纳米银对中国仓鼠肺细胞(CHL)的细胞毒性和遗传毒性并探求机制.方法 1.以梯度浓度纳米银(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0μg/ml)染毒CHL细胞24h,观察细胞形态变化,MTT比色法计算IC50以评估纳米银细胞毒性水平.2.选取近IC5.... 详细信息

目的研究纳米银对中国仓鼠肺细胞(CHL)的细胞毒性和遗传毒性并探求机制.方法 1.以梯度浓度纳米银(2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0μg/ml)染毒CHL细胞24h,观察细胞形态变化,MTT比色法计算IC50以评估纳米银细胞毒性水平.2.选取近IC5.值(22.0μg/ml)作为受试浓度,利用PI染色法分析染毒3h、6h、12h、24h和48h后CHL细胞周期变化并计算细胞增殖指数;采用Annexin V-EITC和PI双染检测前述时间点下的细胞凋亡和坏死发生率,同时记录FSC和SSC信号值的变化情况.

关键词：纳米银中国仓鼠肺细胞细胞毒性遗传毒性

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