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2016年第六届全国药物毒理学年会

作者：张瑞安王晓菲关勇彪王全军军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心

非临床安全性评价作为中药研究开发中的重要步骤,是保障药物临床研究和上市的必不可少的措施,了解中药在非临床安全性评价中的难点,为中药的开发和临床前安全性评价设计提供思路和线索。中药一般来源于自然界的植物、动物或矿物质,其成... 详细信息

非临床安全性评价作为中药研究开发中的重要步骤,是保障药物临床研究和上市的必不可少的措施,了解中药在非临床安全性评价中的难点,为中药的开发和临床前安全性评价设计提供思路和线索。中药一般来源于自然界的植物、动物或矿物质,其成分复杂、纯度低,多作为复合整体进行非临床安全性评价,在非临床安全性评价研究中具有以下难点:一、在药学方面,中药具有成分复杂,溶解度较差,味道特殊,在中药重复毒性动物试验中,给药量和给药体积较大,使得给药操作有一定的难度。二、在药效方面,中药药理作用具有多途径、多靶点和多效应的特点,其作用机制一般不十分明确,毒副作用的产生具有多样性和复杂性。三、在药代方面,生物样品分离检测难度大,很难获得明确和完整的药代动力曲线和参数,开展伴随毒代动力学也有较大难度。针对以上情况,在中药重复毒性动物试验中,通过一天内多次给药,以增加动物给药剂量,减少灌胃体积,缓解对动物的伤害,提高给药的可操作性。在药效试验中,明确中药的主要活性成分,研究此活性成分的药效-剂量-时间关系,以探索中药的作用机制。在药代研究中,确证中药中可以稳定存在的质控物或者主要活性成分,研究质控物或者主要活性成分毒代/药代动力学参数,不失为解决中药的毒代/药代动力学研究一种方法。

关键词：中药非临床安全性评价难点

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微生物组学在中药药理毒理研究中的应用

微生物组学在中药药理毒理研究中的应用

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2016年第六届全国药物毒理学年会

作者：邓红吴纯启王全军军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心

微生物组学(Microbiome)是指研究特定微生态环境样本中细菌、病毒和真菌的总和的学科,其研究涉及人类健康、农业、生物能源和环境等领域。其中,与人类健康密切相关的是于2001年提出的人体微生物组。人体微生物组是指寄居在人体的全部微... 详细信息

微生物组学(Microbiome)是指研究特定微生态环境样本中细菌、病毒和真菌的总和的学科,其研究涉及人类健康、农业、生物能源和环境等领域。其中,与人类健康密切相关的是于2001年提出的人体微生物组。人体微生物组是指寄居在人体的全部微生物的总和,可分布于人体皮肤、胃肠道、口腔等部位,不同微生物栖息于不同部位。肠道菌群作为其中研究较多的菌落,已有研究表明其与消化道疾病(炎症性肠病)、代谢性疾病(2型糖尿病)、心脑血管疾病(帕金森综合症)等疾病有关。中药,常作为补益药而长期大量服用,其口服进入胃肠道后,其药理毒理作用受肠道菌群的影响。药理作用方面:肠道菌群被看作人体的"代谢器官",它可产生药物代谢酶参与药物代谢过程,如黄芩苷被菌群转化为黄芩素而发挥作用。毒理作用方面:以何首乌为例,近年研究报道何首乌可导致肝损伤,且伴有恶心、腹泻等症状。大量长时服用何首乌致肝损伤时,使得联系肠肝轴、进入肝门静脉的肠道微生物、环境毒素等增加,这些失调微生物和内毒素进入门静脉后,可激发、释放各种细胞因子和炎症介质,从而加重肝损伤,也加剧了肠道疾病。且有研究采用RT PCR定量分析和体外培养两种方法对实验性急、慢性肝损伤的肠道菌群研究发现,与空白组相比,模型组双歧杆菌数明显减少,肠杆菌、肠球菌和类杆菌数显著增加,且两种方法结果具有一致性。因此,何首乌导致动物肝损伤可能是通过"肠肝轴"作用于肠道菌群,菌群失调和肠功能异常又会加重肝损害,这使得肝功能障碍与肠道菌群之间相互影响、互为因果关系。二、三代测序技术以及宏基因组测序等是目前研究菌群常用的方法 ,将这些生物技术应用于中药学研究,将为中药学科研工作者提供全新的方式。目前,肠道菌群在中药药理毒理研究中的应用存在的主要问题为:1、寻找合适的培养基;由于绝大多数肠道微生物不能进行实验室培养,未来的研究对于寻找一种模拟肠道环境、满足其营养需求的培养基具有重要意义;2、因果关系不明确;中药毒理作用的发生是中药进入体内引发毒性反应导致菌群紊乱还是中药进入体内与菌群发生相互作用而引发毒性反应,尚无定论。这些问题的解决,有助于更加全面、科学地了解中药,加快中药现代化、国际化进程,为中药的临床应用提供更加合理、科学的依据。

关键词：微生物组学毒理研究

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药物/化学品转基因动物致癌性研究

药物/化学品转基因动物致癌性研究

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2016年第六届全国药物毒理学年会

作者：梁宗星刘悦王和枚韩刚吴纯启董延生王全军军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心

致癌性试验研究是药物非临床安全性评价和化学品安全性风险评估的重要研究内容之一。随着我国致癌性实验指导原则的颁布,使创新药物研发与评价和化学品安全风险评估体系得到进一步完善,全面进行科学、规范和可靠的致癌性试验研究已提到... 详细信息

致癌性试验研究是药物非临床安全性评价和化学品安全性风险评估的重要研究内容之一。随着我国致癌性实验指导原则的颁布,使创新药物研发与评价和化学品安全风险评估体系得到进一步完善,全面进行科学、规范和可靠的致癌性试验研究已提到议事日程。而2年致癌性试验因为周期长、费用高而使寻找短期替代的致癌性研究成为药物研发和毒理研究者的科研目标之一。rasH2转基因小鼠6个月的短期致癌性试验可以成为长期致癌性研究的有力补充和提供科学数据参考。目的:建立rasH2转基因小鼠6个月的短期致癌性试验体系,探索AS01连续灌胃rasH2转基因小鼠6个月观察受试物AS01的潜在致癌性研究。方法:AS01是一种新型PPARβ/δ激动剂,本试验设30、60、120、240 mg/kg四个剂量组及溶剂对照、空白对照两个阴性对照组,另设乌拉坦阳性对照组考察转基因小鼠模型的建立,受试物组伴随毒代动力学研究。结果:无论是在空白对照组动物死亡率、阳性对照组动物死亡率还是阳性对照组动物肿瘤发生率、发生谱都与众文献报道一致,转基因动物模型建立成功;试验期间溶剂对照组及AS01给药组共死亡动物2 1只,通过存活函数Logrank分析程序比较4个给药组与溶剂对照组雌雄动物存活率均无显著性差异,给药期间受试物组个别动物在尾部、胸部、背部、前肢及外耳缘等多处出现粉色疣状物,生殖器、尾端及后肢等多处出现球形或扁平的瘤状物,但出现例数均较少,且仅部分经病理检查结果为瘤或癌,属于偶发现在;高剂量组动物体重出现了下降趋势,但总体降低幅度在10%之内;各组动物摄食量未见明显异常,血液学及血液生化也均未见与供试品相关的改变;大体剖检发现雄性中、高与最高剂量组部分动物肝脏局部包块多发,发生率显著高于溶剂对照组,组织病理学检查溶剂对照组、AS0 1低、中、高及最高剂量组雄性动物肝腺瘤发生率分别为2/25、6/25、1 1/25、7/25和11/25,中、最高剂量组肿瘤发生率与溶剂对照组相比差异具有统计学意义(p<0.01),且肝腺瘤发生率呈现一定的剂量相关性(p<0.05),除肝脏外,脾脏、肺脏、胸腺、心脏、肾脏、膀胱、胃、胸髓、前列腺、子宫、乳腺、皮肤和甲状腺等脏器零星发生原发性肿瘤或转移瘤,但肿瘤发生率均无剂量-反应关系,与溶剂对照组比较差异无统计学意义;另外,在30-240 mg/kg剂量范围内,rasH2转基因小鼠体内的药物暴露量随剂量成比例增加,基本呈线性动力学趋势,连续给药6个月无蓄积。结论:rasH2转基因小鼠模型建立符合试验要求;在本研究中所确定的试验条件下,一定剂量下,AS01可使雄性转基因小鼠肝腺瘤发生率明显上升,除此之外无明显的致瘤作用。

关键词：转基因小鼠短期致癌研究

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药物致癌性评价研究

药物致癌性评价研究

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2016年第六届全国药物毒理学年会

作者：王全军军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心

癌症是导致死亡的重要或首要原因。目前我国癌症发病率为285.91/10万,估计每年新发癌症病例312万,平均每分钟有6人被诊断为恶性肿瘤。癌症严重威胁着人类健康和生命,80%以上癌症与环境因素有关,而主要因素(90%以上)是化学因素(化学致癌)... 详细信息

癌症是导致死亡的重要或首要原因。目前我国癌症发病率为285.91/10万,估计每年新发癌症病例312万,平均每分钟有6人被诊断为恶性肿瘤。癌症严重威胁着人类健康和生命,80%以上癌症与环境因素有关,而主要因素(90%以上)是化学因素(化学致癌),具有致癌作用的化学药物也大于460种。药物的致癌作用主要是非基因型致癌机制和基因致癌作用。为了保证人用药安全,新药上市之前都需要进行安全性评价。为降低人用致癌风险,1CH和CFDA等都制定了药物致癌性评价必要性指导原则,通过评价药物在动物身上的致癌性预测人使用的安全性。对致癌试验提出了明确要求,预期临床用药至少为6个月的药物都应进行致癌试验;可能不会连续用药达6个月,但可能以间歇的方式重复使用需进行致癌试验;如果有致癌倾向,一些短期使用的药物也要做致癌试验,比如同类药发现有致癌作用。以及开展致癌性试验的时间窗要求,通常应在申请上市前完成;若对患者人群存在特殊担忧,在进行大样本临床试验之前需完成啮齿类动物的致癌试验;对于开发用于治疗某些严重疾病(如艾滋病)的药物,申请上市前可不必进行动物致癌试验。因为致癌性试验的特殊性,做好致癌性试验也的确存在很大的难度。比如剂量设计的把握,动物数量多、给药技术要求高,临床观察难度大:观察细致仔细,尽量减少对动物的应激,定期开展触诊;饲养环境要求苛刻,饲料,垫料,饮水,换气次数,笼具,笼具位置,哨兵鼠等。2年致癌性试验因为周期长、费用高而使寻找短期替代的致癌性研究成为药物研发和毒理研究者的科研目标之一。rasH2转基因小鼠6个月的短期致癌性试验可以成为长期致癌性研究的有力补充和提供科学数据参考。目前所开展的常规动物致癌性试验在评估人使用药物的致癌性风险方面也有一些问题,存在预测性不高,种属差异明显,啮齿类动物致癌性试验中发现的大部分肿瘤被认为与人类无关。基于此,开展基于机制研究的致癌性评价成为评估药物在人上能否出现致癌性的重要手段之一。深入理解标靶生物学功能和毒性通路分析,开展基于毒理机制的长期毒性研究能更好地了解药物的潜在癌症风险;开展人类疾病和人体风险因素与人体组织病理学和毒性通路之间的相关性分析,也是降低人类癌症风险的重要措施之一。

关键词：药物致癌性评价

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何首乌致特异质肝损伤炎症动物模型的建立及肝脏毒性研究探讨

何首乌致特异质肝损伤炎症动物模型的建立及肝脏毒性研究探讨

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中国毒理学会中药与天然药物毒理专业委员会第一次（2016年）学术交流大会

作者：王全军樊星王伽伯丁日高肖小河军事医学科医学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心解放军302医院

药物性肝损伤已成为药品因安全性问题撤市的最常见原因之一。在我国,中草药所致的肝损伤已经超过抗结核药,成为药物性肝损伤最主要诱因。其特征表现为病死率高、危害大,难以早期发现。近年来国内外关于何首乌引起肝损伤的临床报道屡见不... 详细信息

药物性肝损伤已成为药品因安全性问题撤市的最常见原因之一。在我国,中草药所致的肝损伤已经超过抗结核药,成为药物性肝损伤最主要诱因。其特征表现为病死率高、危害大,难以早期发现。近年来国内外关于何首乌引起肝损伤的临床报道屡见不鲜,即便从保护传统医学的角度,CFDA也已从2013年10月首次发布关于修订含何首乌口服制剂的说明书的通知,发展至2014年7月明确的提示关注口服何首乌药肝风险。何首乌致药物性肝损伤机制并未明确,且化学成分复杂,无疑加大了研究难度。在我国与临床何首乌致人肝损伤相比,传统何首乌致动物肝损伤模型造模给药剂量为临床拟用剂量200倍且时间长,多为1-3个月,并不能真实模拟临床情况,因此,本研究旨在建立与临床特征更为接近的何首乌致大鼠肝损伤动物模型,研究何首乌醇提液对大鼠的急性毒性,以期为临床合理用药及监测提供试验依据,探讨TLR4与何首乌致肝损伤相关性并应用iTRAQ技术进行模型动物肝脏差异表达蛋白筛选,探究何首乌致肝损伤可能机制。观察潜在药物性肝损伤血清生物标志物microRNA-122在该模型中表达变化,为筛选潜在诊断生物标志物提供可能。材料与方法:1)预筛选何首乌致特异质肝损伤炎症动物模型激活剂。分别连续4天3.5%DSS动物自由饮用及单次给予脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）以期激活SD大鼠枯否细胞,然后给予大鼠何首乌醇提液连续7天,麻醉后采血并活检,用以筛选更有效模型激活剂。2)LPS激活后给予动物何首乌醇提液进行急性毒性实验,按照改良寇氏法测定何首乌醇提液对SD大鼠口服半数致死量（LD50）、最大耐受量（MTD）和最大给药量（MLD）。正式试验设计5个剂量组,分别为30g/kg、39g/kg、51 g/kg、69g/kg、90g/kg（r=1.32）及空白对照组,60只大鼠随机分6组,每组10只,雌雄各半。尾静脉注射给予各组大鼠4mg/kg LPS 2小时后,单次灌胃给予何首乌体积剂量依次分别为10ml/kg、13ml/kg、17ml/kg、23ml/kg、30ml/kg,连续观察14天,观察其急性毒性症状谱,记录累积死亡数及大鼠体重变化。3)经LPS激活后建立何首乌致肝损伤动物模型。将雄性SD大鼠按如下分为8组:空白对照组（Ctrl）,LPS组（DSS）,对乙酰氨基酚组（APAP）,LPS+对乙酰氨基酚组（LPS+APAP）,何首乌低剂量组（PMT-L）,何首乌高剂量组（PMT-H）,LPS+何首乌低剂量组（LPS+PMT-L）,LPS+何首乌高剂量组（LPS+PMT-H）。按动物体重,尾静脉注射给予LPS组、LPS+APAP组、LPS+PMT-L组和LPS+PMT-H组4mg/kg LPS。2小时后,按组别分别灌胃给予对APAP组、LPS+APAP组大鼠312mg/kg对乙酰氨基酚,PMT-L组及LPS+PMT-L组3g/kg（相当于临床给药剂量的15倍）何首乌,PMT-H组、及LPS+PMT-H大鼠6g/kg（相当于临床给药剂量的30倍）何首乌,每日一次,连续给药7天建立特异质肝损伤炎症模型。在建模过程中,取第2小时、14小时、5天、8天四个不同时间点,分别对各组别动物麻醉后采血及取肝脏待测。以组织病理学检查和血液生化检查等指标判定模型是否建立成功。4)对模型动物肝脏组织中mTLR4表达水平进行测定,判定模型建立成功可能机制与TLR4相关性。5)同时,检测血清microRNA-122表达水平,按组别计算出各组各时间点相对值。并与四个时间点,各组血清ALT、ALP变化相对值及肝脏mTLR4表达相对值进行比较。判定其作为潜在何首乌致肝损伤的可能性,对其稳定性及灵敏性进行比较。6)应用iTRAQ技术对肝脏样本中高丰度差异表达蛋白进行筛选,以期探究该模型相关机制及通路。结果:何首乌致肝损伤炎症动物模型的建立,其可能机制探究及潜在生物标志物microRNA-122的验证。1)前期模型筛选,我们分别用3.5%DSS与4mg/kg LPS作为激活剂,与DSS组相比,给予SD大鼠20倍临床剂量何首乌后7天,可见LPS组动物全部出现溏便,眼睑分泌异常,脏器系数增加显著,ALT显著升高,组织病理学观察可见枯否细胞激活,伴有少量肝细胞变性,且肝损伤率高于DSS组。此外雄性较雌性对何首乌诱导大鼠肝损伤敏感。2)因此以LPS为激活剂,给予何首乌可见大鼠出现主要毒性症状为腹泻、眼渍,怠动,毛色不滑,随着药物剂量的增大,症状有所加重。依次根据给药剂量大鼠死亡情况为雄性1,0,2,3,5只,雌性1,0,4,4,5只,在给药后2-3天大鼠较空白对照组体重有所下降,14天后给药组大鼠肝脏系数没有明显变化,血液生化检测发现,给药组相对空白对照组转氨酶（ALT、ALP）没有显著性增加。其MTD为30g/kg、MLD为90

关键词：何首乌肝毒性模型机制

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硬脑膜防渗医用涂敷系统对大鼠乳鼠星形胶质细胞的细胞毒性

硬脑膜防渗医用涂敷系统对大鼠乳鼠星形胶质细胞的细胞毒性

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2016年第六届全国药物毒理学年会

作者：石富江高岭原野吴纯启施畅军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心抗毒药物与毒理学国家重点实验室(军事医学科学院)

目的:用原代分离培养的大鼠乳鼠星形胶质细胞检测硬脑膜防渗医用涂敷系统的神经毒性。方法:取2日龄新生大鼠乳鼠的大脑皮层,胰酶和DNA酶消化分离细胞,按6×105个/ml的密度接种至10%多聚赖氨酸(PDL)包被过的12孔板,所用培养基为含10%... 详细信息

目的:用原代分离培养的大鼠乳鼠星形胶质细胞检测硬脑膜防渗医用涂敷系统的神经毒性。方法:取2日龄新生大鼠乳鼠的大脑皮层,胰酶和DNA酶消化分离细胞,按6×105个/ml的密度接种至10%多聚赖氨酸(PDL)包被过的12孔板,所用培养基为含10%FBS、1%谷氨酰胺及1%双抗的DMEM培养基。原代培养的星形胶质细胞融合度达到80～90%时,采用GFAP-DAPI双染法对星形胶质细胞进行细胞纯度鉴定,并进行细胞毒性试验。根据硬脑膜防渗医用涂敷系统使用说明制备凝胶,以大鼠乳鼠星形胶质细胞的维持培养基为浸提介质,按照GB/T 16886.12-2005要求,制备0.100g/ml、0.075 g/ml、0.050 g/ml和0.025 g/ml浸提液。同时设高密度聚乙烯阴性对照组、空白对照组和5%DMSO阳性对照组,每组5孔。染毒24 h后弃掉受试溶液,每孔加入新鲜的维持培养基500μl和50μl的CCK-8溶液,孵育1～4h。用酶标仪检测450nm处OD值,计算细胞相对增殖率(RGR),根据细胞毒性反应分级判断细胞毒性。结果:神星形胶质细胞纯度为97.96%,纯度较高,可用于实验。星形胶质细胞染毒24h后,0.100g/ml、0.075g/ml、0.050g/ml和0.025g/ml浸提液组的细胞形态与空白对照组无明显差异,呈多边形贴壁生长,细胞排列致密均匀,突起相互连接,各浓度组RGR分别为99.49%、98.43%、100.08%和100.59%,细胞毒性反应均不大于1级。5%DMSO阳性对照导致细胞皱缩呈球形,培养液中有大量细胞碎片和死亡细胞,细胞相对增殖率为45.73%,毒性反应属于3级。结论:硬脑膜防渗医用涂敷系统0.100g/ml、0.075g/ml、0.050g/ml和0.025g/ml浸提液对大鼠乳鼠星形胶质细胞无明显毒性。

关键词：大鼠乳鼠星形胶质细胞硬脑膜防渗医用涂敷系统细胞毒性

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对乙酰氨基酚对大鼠原代肝细胞及BRL-3A细胞的毒性作用比较

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药物评价研究 2016年第3期39卷 349-356页

作者：李曼吴纯启许赫雷谢丽华韩刚王全军王茜莎广东药科大学药科学院广东广州510006 军事医学科学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京100850

目的建立大鼠原代肝细胞提取鉴定体系,比较对乙酰氨基酚（APAP）对大鼠原代肝细胞和永生化细胞BRL-3A的毒性作用。方法采用胶原酶原位两步灌流法提取大鼠原代肝细胞,通过过碘酸雪夫染色（PAS）和肝细胞双核结构进行鉴定;CCK 8法测定APA... 详细信息

目的建立大鼠原代肝细胞提取鉴定体系,比较对乙酰氨基酚（APAP）对大鼠原代肝细胞和永生化细胞BRL-3A的毒性作用。方法采用胶原酶原位两步灌流法提取大鼠原代肝细胞,通过过碘酸雪夫染色（PAS）和肝细胞双核结构进行鉴定;CCK 8法测定APAP对大鼠原代肝细胞及BRL-3A细胞毒性作用的IC50;光学显微镜透射电镜观察APAP对2种细胞的损伤情况;全自动生化分析仪测定细胞上清AST、ALT、LDH、ALP、ALB、BUN、TP、GLU 8项生化指标的变化。结果PAS糖原染色鉴定获取的大鼠原代肝细胞,双核结构,细胞存活率浮动在80%~95%;最佳接种密度为60 000/cm^2,在第3~5天为对数生长期;APAP作用于大鼠原代肝细胞24 h的IC50为18.03 mmol/L,95%置信区间为（17.28~18.81）mmol/L,作用于BRL-3A的IC_（50）为20.05 mmol/L,95%置信区间为（18.99~21.17）mmol/L;透射电镜结果显示,在30 mmol/L APAP作用下,2种细胞细胞器肿胀,核膜破裂,细胞膜边界模糊不清;与对照组比较,大鼠原代肝细胞分泌的天冬氨酸氨基转移酶（AST）、尿素氮（BUN）、葡萄糖（GLU）、碱性磷酸酶（ALP）、乳酸脱氢酶（LDH）随着APAP浓度增加产生显著变化,而BRL-3A细胞几乎所有的酶学指标变化均差异不显著。结论与永生化细胞BRL-3A比较,大鼠原代肝细胞更能体现药物的肝脏毒性作用,但其体外培养存活时间较短;BRL-3A细胞缺少肝脏重要酶类,增加细胞内肝脏酶类是提升其作为肝脏毒性筛选模型的更好手段之一。

关键词：大鼠原代肝细胞原代培养 BRL-3A细胞对乙酰氨基酚肝毒性

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正丁基硫代磷酰三胺对体细胞和生殖细胞的致突变性研究

正丁基硫代磷酰三胺对体细胞和生殖细胞的致突变性研究

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2016年第六届全国药物毒理学年会

作者：原野荆淑芳于永生陈健恒吴纯启施畅军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心抗毒药物与毒理学国家重点实验室(军事医学科学院)

目的:采用小鼠骨髓细胞染色体畸变试验和小鼠显性致死突变试验评价正丁基硫代磷酰三胺(NBTP)对体细胞和生殖细胞的致突变性。方法:NBTP用玉米油溶解,小鼠骨髓细胞染色体畸变试验中雄性小鼠单次灌胃给予NBPT1000、500、250mg/kg,高剂量... 详细信息

目的:采用小鼠骨髓细胞染色体畸变试验和小鼠显性致死突变试验评价正丁基硫代磷酰三胺(NBTP)对体细胞和生殖细胞的致突变性。方法:NBTP用玉米油溶解,小鼠骨髓细胞染色体畸变试验中雄性小鼠单次灌胃给予NBPT1000、500、250mg/kg,高剂量组动物于给药后24、48及72h取材制片,其它组动物于给药后24h取材制片。每只动物在油镜下分析100个中期相细胞,记录染色体畸变率。小鼠显性致死突变试验中雄鼠每天1次灌胃给予NBPT1000、500、250mg/kg连续5天后,与处女雌鼠共进行7个周次的交配。每批雌鼠于同笼结束后第14天处死,计数总着床数、黄体数、死胎、活胎和吸收胎数,计算受孕率、窝均着床数、窝均黄体数、着床前丢失率、着床后丢失率、窝均活胎数、窝均非活胎数、显性致死突变率。两个试验均设环磷酰胺单次腹腔注射阳性对照组。结果:小鼠单次灌胃NBTP 24h后,低、中、高剂量组骨髓细胞染色体畸变率分别为2.4%、3.0%和2.0%,高剂量组24、48和72h的骨髓细胞染色体畸变率均未超过4%。经CochranArmi rage检验未显示明显的剂量反应关系(z=-0.3406,p>0.05),卡方检验表明各剂量组以及高剂量组各时间点染色体畸变率与溶媒对照组相比无显著性升高,说明NBTP无致小鼠骨髓细胞染色体畸变效应。小鼠显性致死突变试验的七个交配周次中,NBTP各剂量组和阳性对照组雌鼠的受孕率均为100%,对照组第1周次交配的受孕率为97.5%。NBTP各剂量组和阳性对照组母鼠的着床前丢失率、母鼠的平均着床数、黄体数、活胎数均与对照组无明显差异。NBTP各剂量组母鼠的平均非存活着床数与对照组相比未见明显的差异(低剂量NBTP给药组第6周次的平均非存活着床数明显低于对照组)。阳性对照组母鼠在第一和第二交配轮次的平均非存活着床数明显高于对照组,相应的着床后丢失率也明显高于对照组。与对照组相比较,NBTP各剂量组母鼠的致死突变率大多为负值,偶见较低的正值,表明NBTP无显性致死作用。结论:本试验条件下NBTP无致小鼠骨髓细胞染色体畸变效应,也无显性致死作用。

关键词：正丁基硫代磷酰三胺骨髓细胞染色体畸变试验显性致死试验

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何首乌乙醇提取液对LPS诱导大鼠肝脏CYP450酶的影响

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药物评价研究 2016年第2期39卷 175-182页

作者：谢丽华樊星吴纯启井潇李曼董延生韩刚王全军王茜莎广东药学院广东广州510006 总后卫生部药品仪器检验所北京100071 军事医学科医学院毒物药物研究所抗毒药物与毒理学国家重点实验室国家北京药物安全评价研究中心北京100850

目的基于脂多糖(LPS)诱导大鼠肝脏损伤建立何首乌肝毒性模型,探究何首乌乙醇提取液(AEP)对大鼠细胞色素P450(CYP450)酶主要亚型活性及蛋白表达的影响。方法雄性SD大鼠100只,随机分为6组:对照组、LPS组、对乙酰氨基酚(APAP)组、(LPS+APAP... 详细信息

目的基于脂多糖(LPS)诱导大鼠肝脏损伤建立何首乌肝毒性模型,探究何首乌乙醇提取液(AEP)对大鼠细胞色素P450(CYP450)酶主要亚型活性及蛋白表达的影响。方法雄性SD大鼠100只,随机分为6组:对照组、LPS组、对乙酰氨基酚(APAP)组、(LPS+APAP)组、AEP组和(LPS+AEP)组。尾iv 4 mg/kg LPS,2 h后,按组别分别ig 625 mg/kg APAP和6 g/kg AEP,每天1次,连续给药7 d,每天观察大鼠体质量变化。在建模过程中,取第2、14小时和5、8天4个不同时间点,分别对各组别动物麻醉后取血,检测肝功能生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)活性;解剖,记录肝脏质量;苏木精-伊红(HE)染色进行组织病理学检查;试剂盒法测定肝细胞中细胞色素CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1活性的变化;提取肝脏蛋白,应用Western blotting法检测CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1蛋白表达情况。结果与对照组比较,第2和14小时,LPS组、(LPS+APAP)组和(LPS+AEP)组ALT、AST和ALP活性显著升高;组织病理学检查发现,肝细胞灶状坏死,伴炎细胞浸润;给药后第8天,LPS组组织病理学检查正常,但(LPS+AEP)组可见显著肝细胞变性,局部慢性炎性灶。第8天,AEP组大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1的活性明显降低;Western blotting法检测发现,AEP能显著降低大鼠肝脏CYP1A2蛋白的表达,而对CYP2E1和CYP3A1蛋白表达没有显著影响。结论经LPS诱导,AEP对SD大鼠产生明显的肝脏毒性,毒性的发生及LPS诱发的免疫作用与抑制CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1的活性和抑制CYP1A2蛋白表达有关。

关键词：何首乌乙醇提取液肝损伤药肝LPS 脂多糖细胞色素P450

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Micro SPECT检查法评价乙二醇诱发大鼠骨骼发育异常及其持续性

Micro SPECT检查法评价乙二醇诱发大鼠骨骼发育异常及其持续性

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2016年第六届全国药物毒理学年会

作者：施畅原野闫小娇任荣娟吴纯启军事医学科学院毒物药物研究所国家北京药物安全评价研究中心抗毒药物与毒理学国家重点实验室(军事医学科学院)

目的:建立Micro SPECT成像法检查胎鼠、仔鼠骨骼的程序和方法 ,并对乙二醇(EG)诱导的仔鼠骨骼畸形进行动态、无创性观察和分析,显示骨骼发育异常的发生、发展和转归的动态变化时程。方法:60只雌性SD大鼠,分别于交配后的妊娠第6天至第15... 详细信息

目的:建立Micro SPECT成像法检查胎鼠、仔鼠骨骼的程序和方法 ,并对乙二醇(EG)诱导的仔鼠骨骼畸形进行动态、无创性观察和分析,显示骨骼发育异常的发生、发展和转归的动态变化时程。方法:60只雌性SD大鼠,分别于交配后的妊娠第6天至第15天经口灌胃给予2500mg/kg的EG或溶媒双蒸水。开展受精鼠的体重、摄食量和临床观察评估。半数受精雌鼠于GD20剖宫产,进行胎鼠的外观检查和骨骼检查(包括Micro SPECT成像法和单染法)。其余的受精雌鼠正常分娩,开展母鼠分娩检查和仔鼠的出生后生长发育检查,并于出生日(PND0)、断乳日(PND21)、PND63(成年)三个发育阶段进行仔鼠的骨骼Micro SPECT成像检查(Mediso nanoScan Spect CT仪)。结果:妊娠期给予EG导致母鼠妊娠期体重明显下降,摄食量明显减少,并出现脱毛、流涎等临床体征;并可诱发胎鼠的畸形和体重下降(相对于对照组下降20%)。EG可诱发腹裂、露脑、露脐、脑膨出、无尾、局部淤血等外观畸形和波状肋、分叉肋、单侧或双侧椎骨体未骨化、椎骨体融合、肋骨缺失、肋骨融合等骨骼畸形,其致畸率达82.5%。妊娠期EG处理对母鼠哺乳期体重、摄食量以及仔鼠的哺乳期体重无影响,但可延缓下门齿萌出、负趋地性、平面翻正反射等发育指标的发生。出生、断乳和成年期的连续性骨骼检查发现,分叉肋、椎骨体融合、肋骨缺失、肋骨融合等骨骼畸形可仍然至成年期;而波状肋、单侧或双侧椎骨体未骨化等骨骼畸形则于断乳时部分恢复,成年期则完全恢复。Micro SPECT成像法和单染法的比较研究显示,两种检查模式的结果大体相当,但在肋骨变短、胸骨节骨化等较小的改变方面则稍有差异。结论:Micro SPECT CT法可适用于大鼠胎仔和仔鼠的骨骼检查,本具有成像通量高,实时、无创、连续检测的特点;乙二醇的骨骼发育延长效应可持续至断乳期,在成年后可完全恢复。

关键词： Micro SPECT 乙二醇骨骼发育持续性

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