检索结果-内蒙古大学图书馆

中华预防医学杂志 2008年第11期42卷 814-817页

作者：王承宇王化磊冯娜杨松涛高玉伟王铁成邹啸环夏咸柱军事医学科学院军事兽医研究所病毒学研究室长春130062

目的评价H5NI亚型禽流感病毒免疫血清对实验感染小鼠的紧急预防保护效果。方法给30只小鼠腹腔注射0．2ml／只禽流感病毒免疫血清，注射后l～19d内每天采3只小鼠血清测定血凝抑制（HI）抗体效价，测定免疫血清在小鼠体内的消长规律；给1... 详细信息

目的评价H5NI亚型禽流感病毒免疫血清对实验感染小鼠的紧急预防保护效果。方法给30只小鼠腹腔注射0．2ml／只禽流感病毒免疫血清，注射后l～19d内每天采3只小鼠血清测定血凝抑制（HI）抗体效价，测定免疫血清在小鼠体内的消长规律；给10只小鼠腹腔注射1．5ml／只禽流感病毒免疫血清，检测免疫血清对小鼠的安全性；将70只小鼠按数字表法随机分为7组，分别为正常对照组、病毒对照组以及免疫血清高剂量早期组、高剂量中期组、高剂量晚期组、中剂量组、低剂量组，每组10只，分别在攻毒前8d、4d和1d时腹腔注射血清0．2ml／只、0．1ml／只、0．05ml／只禽流感病毒免疫血清，然后给小鼠滴鼻感染10个半数致死量（LD，。）病毒，攻毒后连续观察14d，计算小鼠存活率和平均存活天数，比较各实验组小鼠肺指数及肺脏病毒感染滴度。结果注射0．2ml免疫血清小鼠m抗体效价在1—15d时为2°，在17d以后开始下降；1．5ml免疫血清注射小鼠全部存活，没有发病；在攻毒前8d、4d和1d时给小鼠腹腔注射0．2ml免疫血清，小鼠存活率分别为80％、100％和100％，平均存活天数分别为13．1d、14．0d和14．0d，在攻毒前1d给小鼠腹腔注射0．1ml和0．05ml免疫血清，小鼠存活率分别为100％和50％，平均存活天数分别为14．0d和11．7d，各实验组小鼠肺指数（0．0096±0．0033—0．0145±0．0060）均小于病毒对照组（0．0199±0．0025），除低剂量组外，均具有统计学意义（P值0．0022—0．0470，〈0．05），各实验组小鼠肺脏病毒滴度（TCID50）较病毒对照组平均低2个滴度。结论禽流感病毒免疫血清对实验感染小鼠具有较好的紧急预防保护效果，可作为人禽流感紧急预防制剂加以研究开发。

关键词：流感病毒A型鸟免疫血清免疫法被动

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一个用于转染细胞分选的双顺反子载体的构建及其应用

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生物化学与生物物理进展 2005年第9期32卷 889-894页

作者：曲笑霞秦立蓬岳文高艳红李艳华袁红丰王韫芳刘大庆闫舫施双双裴雪涛军事医学科学院输血研究所干细胞研究室北京100850

为简化转染细胞的分选过程,构建了一个含有细胞表面标志CD34基因的双顺反子载体p3.1-IRES-CD34.利用来源于脑心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点(IRES),实现目的基因与CD34基因的共同表达.将绿色荧光蛋白(EGFP)作为目的基因插入载体... 详细信息

为简化转染细胞的分选过程,构建了一个含有细胞表面标志CD34基因的双顺反子载体p3.1-IRES-CD34.利用来源于脑心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点(IRES),实现目的基因与CD34基因的共同表达.将绿色荧光蛋白(EGFP)作为目的基因插入载体的多克隆位点,然后转染NIH-3T3细胞,通过免疫磁珠分选(MACS)方法来分选细胞.结果表明:对于转染细胞,均可实现快速分选(瞬时转染细胞约48h,稳定转染10￣15天),并且获得较高纯度(95%以上)的表达目的基因细胞.

关键词：载体转染细胞分选 CD34

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猪圆环病毒病和繁殖与呼吸综合征二联灭活疫苗的安全性及免疫保护力

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中国生物制品学杂志 2010年第5期23卷 489-492页

作者：金扩世韩松鲁会军李洋杨尧李昌李霄田明尧金宁一军事医学科学院军事兽医研究所病毒学研究室长春130062

目的观察猪圆环病毒病(PCVD)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)二联灭活疫苗的安全性及免疫保护力。方法分别用超剂量疫苗免疫妊娠母猪和3～4周龄断奶仔猪,以观察疫苗的安全性及对妊娠母猪产仔的影响;并用3批疫苗分别免疫3～4周龄断奶仔猪,检... 详细信息

目的观察猪圆环病毒病(PCVD)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)二联灭活疫苗的安全性及免疫保护力。方法分别用超剂量疫苗免疫妊娠母猪和3～4周龄断奶仔猪,以观察疫苗的安全性及对妊娠母猪产仔的影响;并用3批疫苗分别免疫3～4周龄断奶仔猪,检测血清中ELISA和中和抗体效价;免疫后28d,分别用PRRSV CC株和PCV2 NM株攻毒,观察临床反应,并进行病理组织学检查,计算疫苗保护率。结果超剂量疫苗免疫对妊娠母猪和断奶仔猪均安全,无任何不良临床反应。免疫断奶仔猪后7d可检测到血清抗体,PCV2及PRRSV攻毒后的保护率均不低于80%。结论 PCVD和PRRS二联灭活疫苗安全、有效,可用于PCVD和PRRS的预防。

关键词：猪圆环病毒病猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗联合疫苗安全性免疫保护

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狂犬病病毒核蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建研究

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免疫学杂志 2005年第6期21卷 453-456页

作者：李海涛扈荣良张守峰肖跃强袁慧君涂长春军事医学科学院军事兽医研究所病毒学研究室长春130062

目的获得具有感染性的狂犬病病毒核蛋白犬2型腺病毒,并对重组病毒生物学和免疫学特性进行初步探讨。方法对克隆的犬2型腺病毒全基因组E3区进行部分缺失后,插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因和牛生长激素polyA构成的长2392bp... 详细信息

目的获得具有感染性的狂犬病病毒核蛋白犬2型腺病毒,并对重组病毒生物学和免疫学特性进行初步探讨。方法对克隆的犬2型腺病毒全基因组E3区进行部分缺失后,插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9株核蛋白基因和牛生长激素polyA构成的长2392bp的表达盒,然后通过AscⅠ和PvuⅠ双酶切,游离重组全基因组,转染犬肾细胞系。结果盲传5代后,细胞产生典型病变。经鉴定,确定得到了狂犬病病毒核蛋白重组犬2型腺病毒(CAV2RN)。Westernblot检测表明,狂犬病病毒核蛋白在重组犬2型腺病毒中得到了表达。结论重组病毒可以诱导受试犬产生针对犬2型腺病毒和狂犬病病毒核蛋白的特异性抗体。

关键词：狂犬病病毒核蛋白犬2型腺病毒重组病毒

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腺病毒载体介导PDX-1在骨髓间充质干细胞中的表达

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生物化学与生物物理进展 2004年第6期31卷 538-542页

作者：李艳华张锐王韫芳赵连旭陈琳岳文裴雪涛军事医学科学院输血研究所干细胞生物学研究室北京100850

为研究PDX 1基因在骨髓间充质干细胞中的表达情况及生物学功能的发挥 ,构建了含PDX 1基因的重组腺病毒载体 .酶切PDX 1基因并连入穿梭质粒 pAdTrack CMV .用电穿孔法使穿梭质粒pAdTrack CMV PDX 1与病毒骨架质粒 pAdEasy 1在大肠杆菌BJ5... 详细信息

为研究PDX 1基因在骨髓间充质干细胞中的表达情况及生物学功能的发挥 ,构建了含PDX 1基因的重组腺病毒载体 .酶切PDX 1基因并连入穿梭质粒 pAdTrack CMV .用电穿孔法使穿梭质粒pAdTrack CMV PDX 1与病毒骨架质粒 pAdEasy 1在大肠杆菌BJ5 183中同源重组 .利用脂质体介导重组腺病毒载体转染 2 93细胞 ,包装出完整的腺病毒 .分离、培养、扩增骨髓间充质干细胞 .用重组腺病毒感染间充质干细胞 .用荧光显微镜、RT PCR、免疫荧光染色等方法检测PDX 1、胰岛素基因及蛋白质的表达 ,用放射免疫分析法检测转基因细胞分泌胰岛素情况 .结果表明 :通过测序、PCR、酶切等鉴定PDX 1基因已正确插入穿梭质粒中 ,并与病毒骨架质粒重组 .重组腺病毒滴度为 6 3× 10 7PFU/ml.通过荧光显微镜观察证实重组腺病毒可高效感染骨髓间充质干细胞 ,经RT PCR、免疫荧光染色证实转染 pAd PDX 1后培养 7天的细胞中有PDX 1及胰岛素基因的表达 .这些转基因的细胞向胞外分泌的胰岛素量为 (15 2 1± 3 5 0 )mIU/L .

关键词： PDX-1 腺病毒载体间充质干细胞

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抗HIV-1重组导向毒素SL120在毕赤酵母中的表达及其活性检测

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生物工程学报 2005年第3期21卷 473-477页

作者：王宏金宁一尹革芬徐一鸣金洪涛张立树李子建军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程实验室

以pPIC9K为载体,构建抗HIV 1gp12 0单链抗体scFv12 0与葡萄球菌肠毒素A(StaphylococcalenterotoxinA ,SEA)融合基因表达质粒,线性化、电转化法整合入巴斯德毕赤酵母菌,经表型鉴定、PCR分析和G4 18筛选得到Muts型多拷贝整合菌,甲醇诱导... 详细信息

以pPIC9K为载体,构建抗HIV 1gp12 0单链抗体scFv12 0与葡萄球菌肠毒素A(StaphylococcalenterotoxinA ,SEA)融合基因表达质粒,线性化、电转化法整合入巴斯德毕赤酵母菌,经表型鉴定、PCR分析和G4 18筛选得到Muts型多拷贝整合菌,甲醇诱导培养可分泌表达5 7kD的预期大小蛋白—重组导向毒素SL12 0 ,表达量达5 0 1mg L。通过单链抗体亲和力测定,表明蛋白SEA和scFv12 0的构象有微弱的相互影响,但此重组导向毒素仍可高效介导CTLs杀伤HIV 1靶细胞。

关键词： HIV-1,gp120,单链抗体,金黄色葡萄菌外毒素A,分泌表达,毕赤酵母

来源：评论

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非病毒基因递送技术研究进展

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中国新药杂志 2008年第10期17卷 809-814页

作者：李鹏尚明美宋海峰军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理毒理研究室北京100850

基因递送是生物学和医学研究中一项重要且常用的技术,分为病毒感染法和非病毒转染法两大类。病毒载体具有较高转染效率,但产生不良反应等缺陷限制了其应用。非病毒载体具有低细胞毒性、低免疫原性、生物相容性好、可以生物降解等优点,... 详细信息

基因递送是生物学和医学研究中一项重要且常用的技术,分为病毒感染法和非病毒转染法两大类。病毒载体具有较高转染效率,但产生不良反应等缺陷限制了其应用。非病毒载体具有低细胞毒性、低免疫原性、生物相容性好、可以生物降解等优点,而且不受基因大小的限制,具有很好的应用前景,但转染效率不高是其主要的瓶颈,目前研究人员正致力于寻找和开发高效率的非病毒转染方法。文中阐述了几种主要的生化转染法(阳离子多聚物、阳离子脂质体、磷酸钙)及物理转染法(电穿孔、超声/微气泡、显微注射和基因枪)的原理、优缺点以及研究进展。

关键词：基因递送非病毒载体阳离子多聚物阳离子脂质体磷酸钙电穿孔超声显微注射基因枪

来源：评论

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小鼠对HIV-2gp105核酸疫苗免疫应答的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第1期21卷 86-89页

作者：李子健金宁一江文正张立树军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室

　目的: 探讨HIV- 2gp105基因核酸疫苗在小鼠体内的免疫应答, 为开发HIV- 2核酸疫苗提供实验依据。方法:将HIV- 2外膜蛋白 (gp105 )基因插入真核表达质粒载体pVAX1中, 构建pVAX1 gp105重组表达质粒。将其肌注免疫BALB/c小鼠, 用ELISA法... 详细信息

　目的: 探讨HIV- 2gp105基因核酸疫苗在小鼠体内的免疫应答, 为开发HIV- 2核酸疫苗提供实验依据。方法:将HIV- 2外膜蛋白 (gp105 )基因插入真核表达质粒载体pVAX1中, 构建pVAX1 gp105重组表达质粒。将其肌注免疫BALB/c小鼠, 用ELISA法检测小鼠血清抗HIV -2抗体, 用流式细胞仪测定CD4+、CD8+ T细胞亚群数, 以乳酸脱氢霉释放法检测脾特异性CTL的杀伤活性。结果: 重组质粒pVAX1 -gp105免疫组小鼠的血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量及特异性CTL的杀伤活性, 均明显高于对照组, 分别为P<0. 01, P<0. 05和P<0. 01。结论: HIV -2gp105核酸疫苗能诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫。

关键词： HIV-2 gp105 DNA疫苗免疫应答

来源：评论

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人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白的表达及生物活性分析

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第3期30卷 225-228页

作者：杜芝燕王芳朱静潆于继云王宇朱晓明张巍军事医学科学院基础医学研究所转化医学研究室

目的构建携带人肿瘤坏死因子受体(TNFR)胞外区融合人IgG Fc片段的重组腺相关病毒载体(pAAV/hTNFR-Fc),并对融合蛋白hTNFR-Fc的表达和生物学活性进行鉴定。方法构建hTNFR-Fc融合基因重组腺相关病毒(AAV)载体,体外转染人胚肾HEK293T细胞,... 详细信息

目的构建携带人肿瘤坏死因子受体(TNFR)胞外区融合人IgG Fc片段的重组腺相关病毒载体(pAAV/hTNFR-Fc),并对融合蛋白hTNFR-Fc的表达和生物学活性进行鉴定。方法构建hTNFR-Fc融合基因重组腺相关病毒(AAV)载体,体外转染人胚肾HEK293T细胞,收集转染上清,以Western blot法检测目的蛋白的表达,应用L929细胞测定重组表达产物对人和大鼠TNF-α细胞毒中和活性,采用ELISA比较重组表达产物对人和大鼠TNF-α的结合活性。结果成功构建重组表达载体pAAV/hTNFR-Fc,在转染细胞上清中检测到目的蛋白hTNFR-Fc的表达,重组表达产物可有效结合人TNF-α并中和其L929细胞毒活性,并对大鼠TNF-α具有一定程度的结合和中和活性。结论成功构建了hTNFR-Fc融合基因,验证了其在AAV载体上的分泌性表达,并对其生物活性进行了鉴定,为进一步病毒包装和大鼠关节炎动物实验研究奠定了基础。

关键词： hTNFR—Fc 重组腺相关病毒载体表达活性

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用人源肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛构建新型呈现载体(英文)

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Acta Genetica Sinica 2001年第10期28卷 971-979页

作者：高荣凯张兆山李淑琴黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所基因工程研究室

根据对人源大肠杆菌菌毛CS3亚单位亲水性、表位、二级结构和柔韧性计算机预测结果 ,以CS3亚单位第 72位氨基酸残基之后作为外源表位的插入位点 ,构建了一种新的表面呈现载体pCSX72。用该载体分别表达口蹄疫病毒 (FMDV)的VP1表位和C -my... 详细信息

根据对人源大肠杆菌菌毛CS3亚单位亲水性、表位、二级结构和柔韧性计算机预测结果 ,以CS3亚单位第 72位氨基酸残基之后作为外源表位的插入位点 ,构建了一种新的表面呈现载体pCSX72。用该载体分别表达口蹄疫病毒 (FMDV)的VP1表位和C -myc的十肽表位 (4 1 0～ 4 1 9aa)。SDS -PAGE结果以及电镜和免疫电镜观察证明 ,插入的外源表位和CS3亚单位以杂合菌毛的形式呈现在菌体表面。ELISA检测结果表明 ,pCSX72表达的杂合蛋白的抗原性较之其他插入位点的载体要高得多。用重组细菌腹腔免疫小鼠 ,能够诱发机体对杂合蛋白的双重免疫应答。

关键词：表面呈现载体 CS3菌毛人源肠毒素性大肠杆菌

来源：评论

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