检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物制品学杂志 2006年第4期19卷 333-335页

作者：贾雷立金宁一金扩世郑敏金洪涛连海王瑞琳李昌鲁会军马鸣潇金明兰吉林大学畜牧兽医学院预防兽医学系长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所病毒室长春130062

目的构建猪流感病毒复合多表位核酸疫苗,并研究其表达产物的抗原性。方法以H3、H9亚型流感的HA抗原表位及流感病毒的其它主要抗原(NP、NA、M)表位基因为基础,再附以Kozak序列和适当的酶切位点,设计并合成一段长765bp的复合多表位基因(Ep... 详细信息

目的构建猪流感病毒复合多表位核酸疫苗,并研究其表达产物的抗原性。方法以H3、H9亚型流感的HA抗原表位及流感病毒的其它主要抗原(NP、NA、M)表位基因为基础,再附以Kozak序列和适当的酶切位点,设计并合成一段长765bp的复合多表位基因(Epi),其中各表位基本独立,将其克隆入真核表达载体pIRES1neo,构建重组质粒pIRE-Epi。将多表位抗原基因Epi插入到融合表达基因H57中,构建重组质粒pIRE-H57-Epi。将构建的重组质粒在Hela细胞中表达,并用免疫荧光方法初步检测所表达蛋白的抗原性。结果所构建的融合表达载体pIRE-Epi和pIRE-H57-Epi,在Hela细胞中表达出流感病毒多表位抗原蛋白,并具有抗原性。结论已成功构建猪流感病毒多表位基因,有可能成为较理想的猪流感候选疫苗。

关键词：流感表位核酸疫苗

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ErbB4基因miRNA慢病毒载体的构建及其在小鼠海马齿状回的表达

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中国药理学与毒理学杂志 2013年第1期27卷 29-33页

作者：李树玲颜慧宫泽辉军事医学科学院毒物药物研究所新药评价研究室北京100850 北京军区总医院中心实验科北京100700

目的构建靶向ErbB4的miRNA慢病毒载体,包装产生高滴度慢病毒并观察其感染小鼠海马齿状回基因的表达。方法将靶向ErbB4基因的miRNA干扰质粒利用Gateway重组技术构建慢病毒表达质粒,并与慢病毒包装系统共转染HEK293T包装细胞,收获上清并... 详细信息

目的构建靶向ErbB4的miRNA慢病毒载体,包装产生高滴度慢病毒并观察其感染小鼠海马齿状回基因的表达。方法将靶向ErbB4基因的miRNA干扰质粒利用Gateway重组技术构建慢病毒表达质粒,并与慢病毒包装系统共转染HEK293T包装细胞,收获上清并浓缩得到慢病毒浓缩液,通过测定绿色荧光蛋白(GFP)表达水平测定其滴度。所得慢病毒浓缩液经立体定位微量注射感染小鼠海马齿状回。观察鼠脑冰冻切片基因表达情况,并用神经元标志物神经元核抗原(NeuN)和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)特异性抗体行免疫染色分析转导的细胞类型。结果阳性克隆测序结果与设计序列一致,说明靶向ErbB4基因的miRNA慢病毒干扰载体构建成功。包装收获慢病毒。浓缩的慢病毒包装上清感染HEK293T细胞后,流式细胞术检测GFP阳性率,计算得慢病毒活性滴度为1.0×1012转导单位(TU).L-1。小鼠海马齿状回立体定位微量注射1.0×1012TU.L-1慢病毒6个月后,观察到注射部位外源基因的显著表达。免疫荧光染色显示,慢病毒转导的细胞多呈NeuN标记阳性,并与GFAP的表达不重叠。结论靶向ErbB4的miRNA慢病毒载体构建成功,获得了靶向ErbB4基因的高滴度miRNA慢病毒颗粒,并实现了脑实质的局部长期稳定转导,慢病毒转导的主要细胞类型为神经元。

关键词：慢病毒 ErbB4 海马齿状回

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溶瘤腺病毒Ad-VT对荧光素标记人卵巢癌细胞的抑制作用的研究

溶瘤腺病毒Ad-VT对荧光素标记人卵巢癌细胞的抑制作用的研究

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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第九次全国会员代表大会暨第十七次全国学术研讨会

作者：崔英丽李霄岳瑛金宁一军事医学科学院军事兽医研究所病毒研究室

引言卵巢恶性肿瘤是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一,由于卵巢位于盆腔深部,早起病变不易发现,一旦出现症状多属晚期,因此卵巢恶性肿瘤致死率居妇科恶性肿瘤首位。传统的疗法如手术切除,化学治疗等,虽有一定的治疗效果,但副作用大。... 详细信息

引言卵巢恶性肿瘤是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一,由于卵巢位于盆腔深部,早起病变不易发现,一旦出现症状多属晚期,因此卵巢恶性肿瘤致死率居妇科恶性肿瘤首位。传统的疗法如手术切除,化学治疗等,虽有一定的治疗效果,但副作用大。随着基因工程发展及应用,基因疗法表现出越来越突出的优势,尤以腺病毒为载体的靶向癌细胞的疗法受到广泛的关注。传统的动物模型无法连续地、动态地研究肿瘤的生长和转移。荧光素基因(luciferase gene)作

关键词：人卵巢癌细胞溶瘤腺病毒 Ad-VT 抑制作用重组腺病毒卵巢恶性肿瘤

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150例慢性丙型肝炎患者HCV基因型和NS3蛋白酶编码区序列的分析

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解放军医学杂志 2010年第10期35卷 1201-1204页

作者：李筱涵王琳叶海燕李晓东刘妍李乐毛远丽徐东平军事医学科学院基础医学研究所北京100850 解放军302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039

目的对来源于我国不同地区的150例慢性丙型肝炎患者进行HCV基因分型和NS3蛋白激酶编码区序列分析。方法基因分型采用基因芯片法;NS3区序列扩增采用自行设计的型特异性引物介导巢式RT-PCR,序列分析采用PCR产物直接测序。结果 150例患者HC... 详细信息

目的对来源于我国不同地区的150例慢性丙型肝炎患者进行HCV基因分型和NS3蛋白激酶编码区序列分析。方法基因分型采用基因芯片法;NS3区序列扩增采用自行设计的型特异性引物介导巢式RT-PCR,序列分析采用PCR产物直接测序。结果 150例患者HCV基因分型结果为1b占66.7%(100/150),2a占22.7%(34/150),3a占4%(6/150),3b占4%(6/150),6型占2%(3/150),1a占0.7%(1/150)。对NS3区序列采用进化树分析进行分型,其结果与基因芯片法分型结果高度一致,主要基因型(1a、2b)的NS3区序列无明显地区性聚集倾向。未检出与新型HCV蛋白酶抑制剂telaprevir耐药相关的V36M/A、T54A、R155K/T和A/156V/T变异。结论我国慢性丙型肝炎患者仍以1b型感染为主,采用NS3蛋白酶编码区序列分析可同时进行基因分型和针对蛋白酶抑制剂的耐药变异检测,我国天然存在的相对优势变异株发生telaprevir原发耐药的可能性很小。

关键词：肝炎病毒 DNA指纹法寡核苷酸序列分析

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埃博拉病毒生物学特性研究进展

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军事医学 2015年第5期39卷 386-389页

作者：张毅曲英龙郭振东赵思言付莹莹赵红艳王中一赵宗正刘林娜钱军军事医学科学院军事兽医研究所长春130122 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130122

埃博拉病毒病是一种能够引发埃博拉出血热的人畜共患烈性传染病。2014年蔓延西非三国的埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)已经成为全球性公共卫生新的重大威胁。该文综述了EBOV的结构特征、传播特点、作用方式、动物模型等方面的研究进展,... 详细信息

埃博拉病毒病是一种能够引发埃博拉出血热的人畜共患烈性传染病。2014年蔓延西非三国的埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)已经成为全球性公共卫生新的重大威胁。该文综述了EBOV的结构特征、传播特点、作用方式、动物模型等方面的研究进展,旨在对EBOV生物学特性的全面了解及针对该病新型疫苗和抗病毒药物的研制奠定基础。

关键词：埃博拉病毒病埃博拉病毒生物学特性

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B型流感病毒NS1蛋白羧基端缺失对病毒致病性的影响分析

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病毒学报 2015年第4期31卷 404-409页

作者：李雪于志君孙伟洋陈强王铁成杨松涛黄耕高玉伟夏咸柱张雪梅长春生物制品研究所有限责任公司长春130012 军事医学科学院军事兽医研究所长春130122 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130122 北京协和医学院和中国医学科学院医学实验动物研究所北京100021

本研究利用基因工程技术探索B型流感病毒NS1蛋白羧基端缺失对病毒致病性的影响,并利用反向遗传学技术从体外拯救NS1蛋白羧基端缺失的B型流感病毒,评估去除NS1蛋白羧基端对B型流感病毒致病性的影响,探究B型流感病毒致病性变异的分子基础... 详细信息

本研究利用基因工程技术探索B型流感病毒NS1蛋白羧基端缺失对病毒致病性的影响,并利用反向遗传学技术从体外拯救NS1蛋白羧基端缺失的B型流感病毒,评估去除NS1蛋白羧基端对B型流感病毒致病性的影响,探究B型流感病毒致病性变异的分子基础。通过全基因合成和反向遗传学技术从体外拯救NS1蛋白羧基端发生171个氨基酸缺失的B型流感病毒B/Yamagata/16/88株,命名为B-L5。将实验室之前拯救的母本株B/Yamagata/16/88(以下简称B-S9)和B-L5以3×105 EID5 0的攻毒剂量分别人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒滴度等方面进行致病性分析。成功构建了B型流感病毒B/Yamagata/16/88NS1蛋白羧基端缺失株反向遗传平台。母本株B-S9和NS1蛋白羧基端缺失株B-L5均能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠均呈现低致病性;B-S9感染小鼠后,从攻毒后第3d至第7d,体重持续下降,相反,B-L5感染小鼠后,只在攻毒后第2d出现体重下降,攻毒后第3d体重开始回升;B-S9和B-L5感染小鼠后均能在小鼠肺部进行复制,但攻毒后第3d,B-L5感染小鼠肺脏滴度要比B-S9低7 900倍,攻毒后第6d,B-L5感染小鼠肺脏已检测不到病毒复制。实验结果表明,NS1蛋白羧基端缺失可以明显降低B型流感病毒对小鼠的致病性。B型流感病毒致病性变异的分子基础还有待继续研究,该反向遗传操作系统的建立为B型流感病毒分子机制的研究奠定了基础,同时也为B型流感减毒活疫苗的研究开辟了新途径。

关键词： B型流感病毒反向遗传操作致病性 NS1蛋白

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M2e通用流感疫苗的研究进展

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国际免疫学杂志 2009年第4期32卷 282-285页

作者：花艳红王希良军事医学科学院微生物流行病研究所免疫研究室北京100071

M2基质蛋白是A型流感病毒膜蛋白，在A型流感病毒的生命周期中，M2具有重要的生物学功能，已成为抗病毒药物研究的靶蛋白。其胞外区M2e（M2 ectodomain，M2e）为24个氨基酸残基，该片段在多病毒株中具有极高的保守性。针对M2e产生IgG型... 详细信息

M2基质蛋白是A型流感病毒膜蛋白，在A型流感病毒的生命周期中，M2具有重要的生物学功能，已成为抗病毒药物研究的靶蛋白。其胞外区M2e（M2 ectodomain，M2e）为24个氨基酸残基，该片段在多病毒株中具有极高的保守性。针对M2e产生IgG型抗体能够防止流感病毒引发的死亡，减少动物模型中流感的发病率。了解有关M2e疫苗的研究进展，以及关于M2e作为A型流感疫苗靶抗原的关键问题很重要。

关键词：流感病毒 M2e 通用疫苗

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布鲁氏菌S2株菌壳的制备研究

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中国人兽共患病学报 2012年第7期28卷 679-682页

作者：刘爽刘军何永聚祝令伟孙洋周博纪雪冯书章军事医学科学院军事兽医研究所长春130122 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130062

目的利用温控表达调节系统在布鲁氏菌中诱导表达裂解基因E,制备布鲁氏菌S2株菌壳,监测其裂解效率,并观察菌壳形态。方法从pBV220∶∶E中PCR扩增温控裂解盒和裂解基因E融合片段,克隆至pBBR1MCS-2载体上,构建重组裂解质粒pBBR1MCS-E,并将... 详细信息

目的利用温控表达调节系统在布鲁氏菌中诱导表达裂解基因E,制备布鲁氏菌S2株菌壳,监测其裂解效率,并观察菌壳形态。方法从pBV220∶∶E中PCR扩增温控裂解盒和裂解基因E融合片段,克隆至pBBR1MCS-2载体上,构建重组裂解质粒pBBR1MCS-E,并将其电转化至布鲁氏菌S2株,构建重组菌S2(pBBR1MCS-E)。通过28℃至42℃升温诱导培养制备布鲁氏菌菌壳,绘制生长曲线和裂解曲线,计算裂解率,并电镜观察菌壳形态。结果成功构建了重组裂解质粒pB-BR1MCS-E并制备了布鲁氏菌菌壳。绘制出了布鲁氏菌裂解曲线,布鲁氏菌菌壳的裂解率达99.99%,经高渗溶液冻融后可完全消除其中残存的活菌。电镜观察表明布鲁氏菌菌壳保持有细胞的基本形态,但由于细胞内容物外流而使细胞发生变形和皱缩。结论本研究成功制备出了布鲁氏菌菌壳,为进一步研究布鲁氏菌菌壳的特性奠定了基础。

关键词：布鲁氏菌菌壳裂解质粒

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9株猪瘟分离毒株的致病特性

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中国兽医学报 2007年第2期27卷 145-149页

作者：王琴宁宜宝赵耘王在时张广川范学政宋立秦玉明沈青春丘惠深余兴龙吕宗吉徐兴然涂长春中国兽医药品监察所国家猪瘟参考实验室北京100081 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

采用9株临床表现强、中、低致病特点的猪瘟野毒分离株第3代细胞毒作为种毒,按3mL/头剂量分别注射猪瘟抗原及抗体阴性猪,再用上一代传代猪发病后的血毒作为下一代接毒用种毒接种试验猪1头或2头,或上一代传代猪发病后,同圈放入1头或2头试... 详细信息

采用9株临床表现强、中、低致病特点的猪瘟野毒分离株第3代细胞毒作为种毒,按3mL/头剂量分别注射猪瘟抗原及抗体阴性猪,再用上一代传代猪发病后的血毒作为下一代接毒用种毒接种试验猪1头或2头,或上一代传代猪发病后,同圈放入1头或2头试验猪进行同居感染.如此进行,GDGZ1/95、BJCY1/96和JL1/94传至8代;FJFQ1/99传至7代;HeBHH1/95、HeNBY1/96、BJTX3/96、GXBH1/98和HeNXH2/98传至3代.结果显示:上述分离株传至3～5代过程中均表现出毒力增强的趋势,从3～5代传代到8(7)代的过程中毒力进一步增强并保持稳定,且均超过了标准石门强毒株的发病特点.所有试验猪均出现较典型的猪瘟临床症状,解剖后均表现出不同程度的病理变化,死后或解剖后的各种脏器经HCFA检查均为强阳性,这种现象进一步证实了猪是猪瘟病毒的敏感动物,各毒株之间毒力没有明显差异.对其中7株分离株传代血毒部分代次E2基因主要区域进行序列分析,结果仅GDGZ1/95株从F1～F8代中的F6代有2个核苷酸的差异,引起1个相应氨基酸的变异,其余毒株的不同代次没有碱基发生变异,初步说明猪瘟病毒基因型表现相对的稳定性.

关键词：猪瘟病毒毒力致病特性

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超级细菌NDM-1质粒的水平转移研究

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中国兽药杂志 2015年第10期49卷 15-21页

作者：刘果孙洋纪雪佟盼盼祝令伟刘军周伟郭学军冯书章军事医学科学院军事兽医研究所/吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130122

为探究超级细菌NDM-1质粒水平传播的特性,以携带NDM-1质粒的猫源洛菲不动杆菌和人源醋酸钙不动杆菌为供体菌,以工程菌株大肠杆菌DH5α和大肠杆菌、沙门氏菌弱毒菌株为受体菌,通过接合试验验证了NDM-1基因通过质粒跨种传播的可能性。结... 详细信息

为探究超级细菌NDM-1质粒水平传播的特性,以携带NDM-1质粒的猫源洛菲不动杆菌和人源醋酸钙不动杆菌为供体菌,以工程菌株大肠杆菌DH5α和大肠杆菌、沙门氏菌弱毒菌株为受体菌,通过接合试验验证了NDM-1基因通过质粒跨种传播的可能性。结果显示,猫源NDM-1质粒可以转入*** DH5α中,并可以DH5α为中介,转入猪霍乱沙门氏菌C500中;而人源NDM-1质粒仅转入*** DH5α中,未能转入其他菌株。NDM-1质粒在沙门氏菌C500中比在*** DH5α中较为稳定遗传。质粒的导入并不影响宿主菌的生长特性。本研究初步揭示了NDM-1的传播方式,表明NDM-1质粒能够跨越菌种界限,并可以大肠杆菌为中介,转移至其它菌株中。

关键词：新德里β内酰胺酶-1 接合转移水平传播

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