检索结果-内蒙古大学图书馆

中国输血杂志 2004年第4期17卷 227-231页

作者：郭斯启奚永志崔建武习彩霞刘楠梁飞孔繁华军事医学科学院附属医院免疫学研究室国家生物医学分析中心免疫分析实验室北京100039

目的　探索并建立人干细胞因子 (SCF)的原核高效表达系统。方法　设计特异性引物 ,以RT PCR从人胎肝组织中扩增出干细胞因子的膜外区活性片段 ,克隆进入pGEM T载体。以Goldkey软件进行翻译起始序列RNA结构和自由能优化 ;通过合成寡核苷... 详细信息

目的　探索并建立人干细胞因子 (SCF)的原核高效表达系统。方法　设计特异性引物 ,以RT PCR从人胎肝组织中扩增出干细胞因子的膜外区活性片段 ,克隆进入pGEM T载体。以Goldkey软件进行翻译起始序列RNA结构和自由能优化 ;通过合成寡核苷酸和PCR技术将SCFcDNA中的原核稀有密码子定点突变为同义的高频密码子 ;酶切连接构建多种原核表达载体并比较它们在宿主菌中诱导表达结果。表达产物经SDS PAGE、WesternBlot和MTT活性鉴定。结果　扩增SCF膜外区序列测定正确。构建的原核表达载体 pET32a(+) SCF在大肠杆菌中获得高效融合表达 ,表达产量达 30 %以上 ,WesternBlot鉴定正确 ,初步纯化产物的活性与标准品相似。结论　根据使用的载体 /宿主系统 ,翻译起始序列 (TIS)的RNA结构和自由能优化、稀有密码子突变对表达无影响 ;SCF基因在 5′端融合要比

关键词：干细胞因子重组大肠杆菌高效表达

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基因治疗类风湿关节炎策略的研究进展

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中华风湿病学杂志 2004年第11期8卷 685-688页

作者：宋新强奚永志军事医学科学院附属医院免疫学研究室国家生物医学分析中心免疫分析实验室北京100039

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)迄今病因未明,尽管抗风湿药物繁多,但疗效皆不佳.基因治疗的研究在RA治疗方面虽只有8年的历史,但治疗效果已初露端倪.研究者对RA基因治疗的探索异常活跃.纵观其基因治疗的策略,主要体现在以下几... 详细信息

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)迄今病因未明,尽管抗风湿药物繁多,但疗效皆不佳.基因治疗的研究在RA治疗方面虽只有8年的历史,但治疗效果已初露端倪.研究者对RA基因治疗的探索异常活跃.纵观其基因治疗的策略,主要体现在以下几个方面:①阻断或抑制细胞因子;②阻断信号传递;③抑制或杀伤滑膜细胞/T淋巴细胞。

关键词：基因治疗类风湿关节炎 RA 阻断抗风湿药物滑膜细胞治疗方研究者策略历史

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重组人干细胞因子双体分子融合蛋白的构建、原核表达及其分子结构特性预测

中华实用医学

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中华实用医学 2003年第16期5卷 1-4页

作者：郭斯启奚永志孙玉英崔建武刘楠梁飞杨丽芳孔繁华军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫分析实验室 100039

目的:设计并构建重组人干细胞因子的双体分子(BiSCF)融合蛋白并在原核中表达,预测该新型BiSCF融合蛋白的分子结构特性.方法:采用分子克隆方法分别构建SCF单体分子与BiSCF的原核表达载体pET32/SCF和pET32/BiSCF,并在大肠杆菌中进行表达,... 详细信息

目的:设计并构建重组人干细胞因子的双体分子(BiSCF)融合蛋白并在原核中表达,预测该新型BiSCF融合蛋白的分子结构特性.方法:采用分子克隆方法分别构建SCF单体分子与BiSCF的原核表达载体pET32/SCF和pET32/BiSCF,并在大肠杆菌中进行表达,表达产物以Western Blot加以鉴定;采用生物信息学方法,以DS Genel. 1和ProtScale软件对该融合蛋白的结构特征诸如二级结构、等电点、柔性、抗原性及亲水性进行模拟分析.结果:首次成功构建BiSCF双体分子pET32/BiSCF的原核表达载体,并经Nco Ⅰ和Not Ⅰ双酶切电泳及测序证实.通过转化origamiTM(DE3)感受态菌及IPTG诱导获得了高效表达,表达产量在40%以上;Western Blot显示表达产物能与抗SCF多克隆抗体特异性结合.对BiSCF双体分子融合蛋白的结构特性预测表明,BiSCF双体分子融合蛋白中的两个SCF单体分子其等电点、抗原性及亲水性均无显著改变,接头处具有高柔性.与SCF的原始序列相比,BiSCF的一级结构中有2个氨基酸发生了改变;二级结构中除插入的接头为无规卷曲外,原来的α螺旋和β片层均无改变.结论:本研究所构建表达的SCF单体和BiSCF双体分子均可在大肠杆菌中获得高效表达,BiSCF双体分子的结构预测符合我们的设计要求.为进一步深入研究新型BiSCF双体分子融合蛋白的生物学特性奠定了基础.

关键词：干细胞因子双体分子融合构建大肠杆菌表达蛋白特性预测

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HLA-B27转基因动物研究进展

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中华风湿病学杂志 2003年第4期7卷 234-236页

作者：郭斯启奚永志孔繁华军事医学科学院附属医院免疫学研究室国家生物医学分析中心免疫分析实验室北京100039

HLA-B27是第一个发现与疾病相关的HLA等位基因，也是到目前为止相关性最高的一个。自1973年Brewerton等和Schlosstein等提出强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）与HLA-B27抗原有非常强的关联以来，人们发现HLA-B27还与反应性关... 详细信息

HLA-B27是第一个发现与疾病相关的HLA等位基因，也是到目前为止相关性最高的一个。自1973年Brewerton等和Schlosstein等提出强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis,AS）与HLA-B27抗原有非常强的关联以来，人们发现HLA-B27还与反应性关节炎、银屑病性关节炎、炎症性肠病性关节炎、青海年脊柱关节病、急性前葡萄膜炎等明显相关。随着研究的深入，虽然人们提出了许多HLA-B27与AS相关的假说，如分子模拟假说、关节源性肽假说、B27自身的变异等，但在B27DAS中的作用及其发病机制目前仍不清楚。HLA-B27转基因动物疾病模型的建立及相关研究为AS的发病机制提供了很好的研究手段。应指出的是，HLA-B27也是第一个被用于转基因的HLA分子。

关键词： HLA-B27 转基因动物研究进展发病机制影响因素强直性脊柱炎

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人类白细胞抗原-B27与强直性脊柱炎关联的研究新进展

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中华风湿病学杂志 2005年第5期9卷 306-308页

作者：李彦博郭斯启奚永志军事医学科学院附属医院免疫学研究室国家生物医学分析中心免疫分析实验室北京100039

发现人类白细胞抗原(HLA)-B27与强直性脊柱炎之间的关联已经有30多年的历史[1],这种关联已经拓展到其他类型的脊柱关节炎(SpA),并在世界上的许多人种中得到证实.SpA与主要组织相容性复合体(MHC)之间的遗传学联系已经得到确定,类脊柱关... 详细信息

发现人类白细胞抗原(HLA)-B27与强直性脊柱炎之间的关联已经有30多年的历史[1],这种关联已经拓展到其他类型的脊柱关节炎(SpA),并在世界上的许多人种中得到证实.SpA与主要组织相容性复合体(MHC)之间的遗传学联系已经得到确定,类脊柱关节炎也在HLA-B27转基因动物中发生。

关键词：人类白细胞抗原-B27 强直性脊柱炎研究新进展关联主要组织相容性复合体 HLA-B27 脊柱关节炎转基因动物结构和功能发病机制等位基因致病机制遗传学 SpA 易感性

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造血干细胞移植中供受体配型选择新标准──HLA分子模拟三维结构匹配

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中国实验血液学杂志 2001年第4期9卷 354-355页

作者：韩红星孔繁华奚永志金荔刘楠屠敏郭斯启国家生物医学分析中心免疫分析实验室军事医学科学院附属医院免疫学研究室北京100039

为了确定人类白细胞抗原 (HLA)三维结构配型的标准 ,总结出主要的可允许错配和免疫原性错配等位基因 ,我们采用分子模拟技术模拟了HLA分子的三维结构 ,用计算机软件比较模拟结构间的差异大小。结果表明 ,HLA分子模拟结构间的差异不同 ,... 详细信息

为了确定人类白细胞抗原 (HLA)三维结构配型的标准 ,总结出主要的可允许错配和免疫原性错配等位基因 ,我们采用分子模拟技术模拟了HLA分子的三维结构 ,用计算机软件比较模拟结构间的差异大小。结果表明 ,HLA分子模拟结构间的差异不同 ,在大量统计分析基础上可以认为 ,HLA A和 B分子整体相对均方差 (relativemeansquaredeviation ,RMSD ,单位nm)大于 0 .0 4nm为差异显著 ,小于 0 .0 2nm为差异不显著 ;DRB1位点间RMSD大于 0 .0 2nm为差异显著 ,小于 0 .0 1nm为差异不显著 ,据此进一步总结了主要的可允许错配和免疫原性错配等位基因情况。本研究提示 ,HLA三维结构配型是移植配型领域的新观点 ,值得进一步深入研究。

关键词：造血干细胞移植供-受体选择人类白细胞抗原 HLA分子模拟三维结构

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L-型细菌蛋白表达系统

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生物技术通讯 2003年第1期14卷 54-56页

作者：郭斯启奚永志军事医学科学院附属医院免疫学研究室国家生物医学分析中心免疫分析实验室北京100039

L-型细菌由于缺乏细胞壁以及具有的其它特殊生物学特性,通过连接合适的信号肽,可以用于许多外源蛋白的可溶性、功能活性形式的分泌表达。表达产物在培养基中,表达的产量依赖于不同的基因序列、载体、宿主和诱导表达条件等因素。此外,L-... 详细信息

L-型细菌由于缺乏细胞壁以及具有的其它特殊生物学特性,通过连接合适的信号肽,可以用于许多外源蛋白的可溶性、功能活性形式的分泌表达。表达产物在培养基中,表达的产量依赖于不同的基因序列、载体、宿主和诱导表达条件等因素。此外,L-型细菌还能将具有功能活性的蛋白展示在胞浆膜表面。

关键词： L-型细胞蛋白表达系统外源蛋白分泌活性

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干热法对人凝血因子Ⅷ制品中指示病毒灭活效果验证

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中国输血杂志 2014年第2期27卷 168-171页

作者：邓靖尹惠琼胡吉军肖春桥王蕊袁靖章金刚陈云华贵州泰邦生物制品有限公司贵州贵阳550025 军事医学科学院野战输血研究所国家生物医学分析中心生物活性物质病毒安全检测实验室

目的研究100℃,30 min加热法对人凝血因子Ⅷ制品中指示病毒的灭活效果。方法采用细胞感染法,并以猪细小病毒(PPV)、脑心肌炎病毒(EMCV)作为指示病毒,对3批人凝血因子Ⅷ半成品样品进行病毒灭活效果验证。同时对干热前后样品的活性进行检... 详细信息

目的研究100℃,30 min加热法对人凝血因子Ⅷ制品中指示病毒的灭活效果。方法采用细胞感染法,并以猪细小病毒(PPV)、脑心肌炎病毒(EMCV)作为指示病毒,对3批人凝血因子Ⅷ半成品样品进行病毒灭活效果验证。同时对干热前后样品的活性进行检测,以考察灭活方法对制品活性的影响。结果 3批人凝血因子Ⅷ样品经100℃,加热处理30 min后,均无可以检测到的PPV和EMCV病毒,可使病毒滴度下降4个Log以上。对病毒滴度阴性的样品,取其最低稀释倍数孔上清,接种敏感细胞,盲传3代均无可观察到细胞病变。3批样品干热前活性分别为:30.1 IU/mL、27.6 IU/mL、29.8 IU/mL,干热后效价分别为:22.6 IU/mL、20.0 IU/mL、21.6 IU/mL。结论100℃,30 min加热法对人凝血因子Ⅷ半成品中指示病毒PPV和EMCV具有良好的灭活效果,干热后活性损失分别为25%、28%、28%。

关键词：血液制品人凝血因子Ⅷ 病毒灭活 100℃,30min加热法

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橡树岭军团菌的分离及用16S rDNA测序法的鉴定

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微生物学免疫学进展 1999年第1期27卷 1-5页

作者：杨瑞馥汪晓辉李崇辉郭兆彪张敏丽周方高树德军事医学科学院微生物流行病研究所国家生物医学分析中心分析微生物实验室

军团菌属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌａ）自１９７１年确定以来，现已有３９个成员。军团菌属主要分布于供水系统中，如空调冷却塔水和浴池淋浴水中。我们曾于１９９４年从北京某宾馆冷却塔水中分离出一株可疑军团菌，但因缺乏标准抗血清而未能... 详细信息

军团菌属（Ｌｅｇｉｏｎｅｌａ）自１９７１年确定以来，现已有３９个成员。军团菌属主要分布于供水系统中，如空调冷却塔水和浴池淋浴水中。我们曾于１９９４年从北京某宾馆冷却塔水中分离出一株可疑军团菌，但因缺乏标准抗血清而未能定种。由于核酸分析技术和细菌鉴定观念上进步，使我们能根据１６ＳｒＤＮＡ序列比较推测细菌间进化关系，并进而对未知细菌进行鉴定和检测。我们用以１６ＳｒＤＮＡ为靶序列的ＰＣＲ和测定鉴定，确定了该分离株为橡树岭军团菌（Ｌ．ｏａｋｒｉｄｇｅｎｓｉｓ）。

关键词： 16SrDNA 测序 PCR 橡树岭军团菌

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人重组造血生长因子双体分子的构建表达及结构特性分析

人重组造血生长因子双体分子的构建表达及结构特性分析

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中国生理学会第六届应用生理学委员会全国学术会议

作者：郭斯启奚永志孙玉英崔建武刘楠梁飞孔繁华军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫分析实验室军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫分析实验室军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫分析实验室军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫分析实验室军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫分析实验室军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫分析实验室军事医学科学院附属医院免疫学研究室及国家生物医学分析中心免疫分析实验室

目的:分子设计并构建较单体分子具有半衰期更长、生物活性更高的新型重组人干细胞因子(SCF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和血小板生成素(Tpo)的双体分子(分别简称S-S、G-G、T-T),并在原核系统进行高效表达。方法:分别构建pET32/S-S、G-G... 详细信息

目的:分子设计并构建较单体分子具有半衰期更长、生物活性更高的新型重组人干细胞因子(SCF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和血小板生成素(Tpo)的双体分子(分别简称S-S、G-G、T-T),并在原核系统进行高效表达。方法:分别构建pET32/S-S、G-G、T-T和pET32/S、G、T原核表达载体,实现上述双体融合蛋白和单体蛋白在大肠杆菌中的高效表达,利用亲和层析等方法进行蛋白纯化;对这些融合蛋白的结构特征诸如等电点、柔性、抗原性

关键词：大肠杆菌 CSF 单体分子亲和层析重组人干细胞因子单体蛋白生长因子高效表达载体原核系统特性分析

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