检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2017年第9期41卷 775-783页

作者：王文秀习佳飞赵月何丽娟周军年范增张彪王海洋曾泉南雪岳文裴雪涛广西医科大学南宁530021 军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室血液安全保障技术研究北京市重点实验室北京100850 华南干细胞与再生医学研究中心广州510005

目的以天然杀伤细胞(NK)-92细胞系为模型,研究NK细胞对肝癌细胞的杀伤作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立NK-92细胞系的体外培养方法,利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和乳酸脱氢酶细胞毒性检测实验(... 详细信息

目的以天然杀伤细胞(NK)-92细胞系为模型,研究NK细胞对肝癌细胞的杀伤作用,并探讨其可能的作用机制。方法建立NK-92细胞系的体外培养方法,利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和乳酸脱氢酶细胞毒性检测实验(lactate dehydrogenase cytotoxicity assay)等体外实验验证NK-92细胞对多种肝癌细胞的体外杀伤作用。同时建立人肝癌细胞株HepG2的裸鼠皮下荷瘤模型,每只裸鼠分别在荷瘤后第2、9、16、23天共4次通过尾静脉注射1×10~7个NK-92细胞,对照组注射等体积PBS,密切观察实验组和对照组裸鼠移植瘤大小、体积、质量以及裸鼠存活状态。荷瘤30 d后活杀裸鼠,取肿瘤组织进行大体观察,并对肿瘤组织切片进行HE染色和免疫荧光检测,明确瘤内磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)蛋白的表达。结果体外长期培养的NK-92细胞能保持典型的NK细胞表型特征,细胞活性好,利用ELISA和LDH实验对NK-92细胞的体外杀瘤能力进行鉴定。结果表明,其对多种肝癌细胞系均具有很好的杀伤作用。裸鼠抑瘤实验结果显示,体内NK-92细胞对肝癌组织有较好的杀伤作用,实验组肝癌组织体积明显小于对照组,且肝癌组织免疫组化和免疫荧光结果均表明GPC3表达明显降低。初步显示,NK细胞可能通过杀伤GPC3阳性肝癌细胞来发挥其治疗作用。结论NK细胞治疗有望作为有效的肝癌治疗手段。该研究利用NK-92细胞系为研究对象,证明其在体外和体内均对肝癌细胞有很好的杀伤作用,同时初步表明其对肝癌的杀伤作用机制可能是通过杀伤肝癌组织内的GPC3阳性细胞;该研究对进一步提高NK细胞对肝癌的治疗作用及明确其作用机制奠定了基础。NK细胞除抗肿瘤作用外对多种细菌和病毒等病原体有很好的杀伤作用,同时对进一步拓展NK细胞的应用范围提供了参考。

关键词：杀伤细胞,天然癌细胞,肝细胞毒作用磷脂酰肌醇蛋白聚糖类

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内皮微环境NOTCH信号通路促进人多能干细胞造血分化

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军事医学 2017年第9期41卷 767-774,785页

作者：赵月王文秀张博文何丽娟曾泉范增岳文裴雪涛习佳飞广西医科大学南宁530000 军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室血液安全保障技术研究北京市重点实验室北京100850 华南干细胞与再生医学研究中心广州510005

目的体外诱导人诱导性多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSC)向造血分化,富集生血内皮细胞,将其与高表达NOTCH信号通路配体DLL4的内皮细胞共培养,体外建立内皮微环境促进多能干细胞造血分化的研究模型,进一步研究明... 详细信息

目的体外诱导人诱导性多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPSC)向造血分化,富集生血内皮细胞,将其与高表达NOTCH信号通路配体DLL4的内皮细胞共培养,体外建立内皮微环境促进多能干细胞造血分化的研究模型,进一步研究明确内皮微环境影响造血干/祖细胞产生的作用及机制。方法将携带runx1c报告基因的hiPSC通过spin EB方法诱导分化形成拟胚体(embryonic body,EB),在诱导分化第10天通过免疫磁珠分选技术(magnetic-activated cell sorting,MACS)分选富集出CD34^+的生血内皮细胞,将生血内皮细胞与高表达DLL4的内皮微环境细胞Vera Vec共培养,进一步诱导其向造血干/祖细胞分化,最终建立体外研究NOTCH信号通路促进多能干细胞向造血干/祖细胞分化的研究模型。结果建立了单细胞培养hiPSC的技术方法,将单细胞培养的携带runx1c报告基因的hiPSC通过spin EB方法诱导其向造血细胞分化,在诱导分化第10天利用MACS技术分离富集了CD34^+的生血内皮细胞。同时获得了转染E4ORF1的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,UVEC)Vera Vec细胞,并对其NOTCH信号通路相关基因的表达进行了鉴定。结果表明,其在m RNA水平和蛋白水平均高表达NOTCH信号通路的配体DLL4。将分离富集的生血内皮细胞与高表达DLL4的内皮细胞共培养。结果显示,其能明显促进携带runx1c报告基因的hiPSC诱导分化时红色荧光td Tomato的表达和造血细胞的形成,以此作为模型可进一步研究内皮微环境促进多能干细胞向造血干/祖细胞分化的模型。结论成功建立了spin EB方法诱导多能干细胞分化的技术方法,能高效在体外富集生血内皮细胞,并将生血内皮细胞与高表达NOTCH信号通路配体DLL4的内皮细胞共培养,在体外构建了内皮微环境促进内皮生血转化的研究模型,供进一步研究内皮微环境促进造血干/祖细胞分化的作用及其机制,为体外利用多能干细胞制备造血干/祖细胞奠定基础,有望最终在体外获得有完整功能的造血干细胞,用于临床造血干细胞移植治疗及战场辐射损伤救治,有一定的社会和军事应用价值。

关键词：人诱导性多能干细胞造血干细胞内皮微环境 NOTCH信号通路

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脐血单个核细胞来源红系祖细胞的诱导扩增及保存的研究

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中华血液学杂志 2016年第1期37卷 45-50页

作者：陈琳谢小燕习佳飞吕洋田宇刘大庆岳文李艳华南雪李思婷范增裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心北京100850

目的探索含多种细胞因子无血清培养基诱导脐血单个核细胞体外分化为红系祖细胞效率及红系祖细胞的保存方法。方法利用羟乙基淀粉沉降脐血中红细胞，人淋巴细胞分离液（Ficoll）分离单个核细胞，采用含FMS样酪氨酸激酶3配体、干细胞生长... 详细信息

目的探索含多种细胞因子无血清培养基诱导脐血单个核细胞体外分化为红系祖细胞效率及红系祖细胞的保存方法。方法利用羟乙基淀粉沉降脐血中红细胞，人淋巴细胞分离液（Ficoll）分离单个核细胞，采用含FMS样酪氨酸激酶3配体、干细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、重组人红细胞生成素的无血清培养基进行体外诱导脐血单个核细胞向红系祖细胞分化，并将诱导的红系祖细胞用不同的冻存液进行冷冻保存，观察红系祖细胞诱导、分化能力和红系祖细胞冷冻保存效果。结果随着诱导时间延长，细胞总数明显增多，培养14d红系祖细胞扩增约110倍，存活率为（88．92±0．95）％，红系祖细胞特异性标志CD71＋细胞占（86．77±9．11）％，CD71／CD235a细胞占（64．47±16．67）％。诱导10d多为中幼红细胞，可见血红蛋白表达的阳性细胞；诱导14d开始出现晚幼红细胞，细胞沉淀呈红色。诱导7d红系集落数为326．00±97．96，高于诱导前（61．60±20．03）。10％二甲基亚砜（DMSO）＋2％人血清白蛋白保存细胞复苏后红系祖细胞存活率、回收率分别为（90．32±1．80）％、（93．66±1．87）％，将50％自体脐血浆与10％DMSO、2％人血清白蛋白联用可获得更好的保护效果。结论该无血清培养基可高效诱导、扩增红系祖细胞，10％DMSO＋2％人血清白蛋白＋50％自体脐血血浆可很好保存红系祖细胞。

关键词：胎血红系祖细胞冷冻保存单个核细胞

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过表达微小RNA miR-125b抑制肝癌细胞上皮-间质转换及促进细胞凋亡

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第6期32卷 656-664页

作者：张彪曾泉王海洋李思霆南雪何丽娟岳文周军年裴雪涛军事医学科学院野战输血研究所全军干细胞与再生医学重点实验室北京100850 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心广州510005

微小RNA 125b(miR-125b)在许多恶性肿瘤的增殖、分化和凋亡等过程中具有很重要的作用,但miR-125b是否涉及肝癌的上皮-间质转换过程(EMT)还有待进一步研究。本研究通过构建过表达miR-125b的肝癌稳转细胞株,初步检测miR-125b对于肝癌的EM... 详细信息

微小RNA 125b(miR-125b)在许多恶性肿瘤的增殖、分化和凋亡等过程中具有很重要的作用,但miR-125b是否涉及肝癌的上皮-间质转换过程(EMT)还有待进一步研究。本研究通过构建过表达miR-125b的肝癌稳转细胞株,初步检测miR-125b对于肝癌的EMT过程和相关的TGF-β信号通路的影响,以及对于肝癌细胞凋亡的影响。以慢病毒载体p HRS-1cla-EGFP构建过表达miR-125b的载体质粒(p HRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP),并对上述载体进行NheⅠ、XbaⅠ双酶切和测序鉴定,鉴定正确后,在293T细胞中进行慢病毒包装,浓缩病毒后,对MHCC97-H进行慢病毒感染并采用流式分选GFP阳性的细胞。实时定量PCR检测表明肝癌细胞稳转株MHCC97-H-PHRSmiR-125b-EGFP的miR-125b表达量是空载体转染组的6倍。Western印迹检测发现,与空载体对照组相比,MHCC97-H-PHRS-miR-125b-EGFP细胞中间质细胞标志α-SMA表达显著下调,上皮细胞标志E-cadherin表达显著上调,同样的,用Western印迹检测也发现MHCC97-H-PHRS-miR-125b-EGFP细胞中TGF-β信号通路关键下游分子Smad2和Smad4的表达显著下调,细胞凋亡检测结果表明,与对照组相比,过表达miR-125b的稳转株凋亡率增加到19.66%,加入TGF-β1后,过表达miR-125b的稳转株凋亡率进一步增加到74.7%。同样的,在体内治疗实验中,我们采用商品化的体内核酸转染试剂,在皮下肿瘤组织中过表达miR-125b mimics,结果表明miR-125b的过表达与肿瘤组织的凋亡成正相关性(r=0.83463,P<0.01),且免疫组化结果也表明,miR-125b过表达后,E-cadherin表达显著上调,α-SMA及Smad2和Smad4的表达显著下调。上述结果表明,我们成功构建了过表达miR-125b的肝癌细胞稳转株,并成功建立了肿瘤组织中过表达miR-125b mimics的动物模型,在体内外均观察到过表达miR-125b后对肝癌细胞EMT过程的抑制作用和对细胞凋亡的促进作用。相关研究结果加深了我们对miR-125b在肝癌中抑制肝癌发展作用机制的理解,及其作为潜在的治疗肝癌的新靶点的重要性。

关键词：肝细胞癌 miR-125b 过表达细胞凋亡

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利用骨髓间充质干细胞膜片原位构建“三明治”样组织工程牙周膜的实验研究

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军事医学 2016年第4期40卷 294-298页

作者：刘翠朱彪张欣然刘东华赵刚郭希民郭红延辽宁医学院武警总医院研究生培养基地北京100039 武警总医院口腔医学中心北京100039 军事医学科学院基础医学研究所全军干细胞与再生医学重点实验室北京100850

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)膜片与胶原膜构建的"三明治"样结构植入体内后牙周膜的再生情况。方法制备BMSC细胞膜片,与胶原膜构建夹层结构复合于牙根表面,植入原位生长,分别于4和12周取材,利用X片、HE和天狼星红染色观察... 详细信息

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)膜片与胶原膜构建的"三明治"样结构植入体内后牙周膜的再生情况。方法制备BMSC细胞膜片,与胶原膜构建夹层结构复合于牙根表面,植入原位生长,分别于4和12周取材,利用X片、HE和天狼星红染色观察牙周膜的再生情况。结果相比单纯胶原膜组和空白对照组,实验组在牙根与牙槽骨间形成了清晰的软组织间隙,且有类Sharpey纤维存在,即形成了功能性牙周膜。结论细胞膜片-胶原膜-细胞膜片的"三明治"样夹层结构可较好地促进牙周膜再生。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞膜片牙周膜再生细胞外基质组织工程

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牙周膜再生方法主要研究进展

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武警医学 2016年第10期27卷 1053-1056页

作者：刘静郭红延郭希民武警总医院口腔医学中心北京100039 军事医学科学院基础医学研究所全军干细胞与再生医学重点实验室北京100850

由于牙周炎患者自身的牙周膜干细胞（periodental ligament stem cells,PDLSCs）再生能力降低[1],进而分化能力下降,因此增加牙周受损区域具有再生能力的细胞数量是解决问题的关键。

关键词：牙周膜再生细胞移植细胞归巢

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维生素C对兔骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

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解放军医学院学报 2016年第3期37卷 246-250,255页

作者：刘翠张欣然刘东华周勇翟羽郭希民郭红延辽宁医学院北京武警总医院研究生培养基地北京100039 北京武警总医院口腔医学中心北京100039 军事医学科学院基础医学研究所(全军干细胞与再生医学重点实验室) 北京100850

目的探讨维生素C（vitamin C,Vc）对兔骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成脂分化能力的影响。方法以兔BMSCs为实验对象,添加0~150μg/ml不同浓度的Vc处理后,进行成脂诱导,镜下观察诱导4 d、7 d、10 d、14 ... 详细信息

目的探讨维生素C（vitamin C,Vc）对兔骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）成脂分化能力的影响。方法以兔BMSCs为实验对象,添加0~150μg/ml不同浓度的Vc处理后,进行成脂诱导,镜下观察诱导4 d、7 d、10 d、14 d、21 d的脂肪形成情况,并利用油红-O染色提取法检测其脂肪含量,实时荧光定量PCR（q PCR）法检测成脂相关转录因子PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA表达的变化。结果相比未添加Vc组,不同浓度的Vc均能增加BMSCs成脂量和成脂分化相关基因PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA的表达。其中50μg/ml Vc处理组OD值高达1.373±0.099,高于其他组（0.720±0.011、0.879±0.023、0.915±0.159、1.088±0.066、0.908±0.162）,差异有统计学意义（P〈0.01）,而该组PPARγ、C/EBPα、C/EBPβm RNA的表达最高水平分别为5.82±0.24、5.41±0.42、5.14±0.54,与其他组差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论 Vc可以促进MSCs的成脂分化且最佳浓度为50μg/ml。

关键词：维生素C 间充质干细胞成脂分化

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BPI-BD3融合抗菌肽修饰C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响

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解放军医学杂志 2015年第9期40卷 722-726页

作者：张欣然刘翠钱智勇徐红梅郭希民郭红延辽宁医学院北京武警总医院研究生培养基地北京100039 军事医学科学院基础医学研究所、全军干细胞与再生医学重点实验室北京100850 武警总医院口腔医学中心北京100039

目的观察p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响。方法使用重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞,并采用RT-PCR及Western blotting进行鉴定。取30只KM小鼠行直径1cm的全层皮肤缺损创面,并接种金黄色葡... 详细信息

目的观察p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响。方法使用重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞,并采用RT-PCR及Western blotting进行鉴定。取30只KM小鼠行直径1cm的全层皮肤缺损创面,并接种金黄色葡萄球菌制造感染创面。造模后,随机均分为3组每组10只,T组尾静脉注射p Adxsi-BPIBD3转染后的C3H10T1/2细胞,C组注射未转染的C3H10T1/2细胞,N组注射等量PBS。通过大体观察、痂下细菌计数、测定创面残留面积、HE染色等来评价BPI-BD3修饰的C3H10T1/2的促愈效果。结果与其余两组相比,T组痂下菌量较少(P<0.05),且T组愈合较快,7、14d时,创面残留面积与其余两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,与其余两组相比,T组炎症较轻、表皮生长较快。结论 BPI-BD3修饰的C3H10T1/2可以促进金黄色葡萄球菌所致的小鼠感染创面的愈合。

关键词： C3H10T1/2细胞 β防御素杀菌/通透性增加蛋白伤口感染

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人β-防御素3与杀菌/通透性增加蛋白重组腺病毒载体及其转染C3H10T1/2细胞的构建

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中国现代医学杂志 2015年第20期25卷 17-22页

作者：张欣然刘翠钱智勇翟羽郭希民郭红延辽宁医学院北京武警总医院研究生培养基地北京100039 北京武警总医院口腔医学中心北京100039 军事医学科学院基础医学研究所(全军干细胞与再生医学重点实验室) 北京100850

目的构建人β-防御素3(h BD3)与杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的重组腺病毒载体p Adxsi-BPIBD3,并转染鼠胚胎间充质干细胞系(C3H10T1/2),观察融合蛋白的表达。方法酶切原始质粒,得到BPI-BD3片段,连接到p Shuttle-CMV得到p Shuttle-BPI-BD3,... 详细信息

目的构建人β-防御素3(h BD3)与杀菌/通透性增加蛋白(BPI)的重组腺病毒载体p Adxsi-BPIBD3,并转染鼠胚胎间充质干细胞系(C3H10T1/2),观察融合蛋白的表达。方法酶切原始质粒,得到BPI-BD3片段,连接到p Shuttle-CMV得到p Shuttle-BPI-BD3,验证后将插入片段转移至p Adxsi载体构建重组腺病毒质粒,线性化后转染HEK293细胞,扩增纯化后,TCID50测定重组腺病毒滴液。p Adxsi-BPI-BD3及空载体p Adxsi(作为对照组)转染C3H10T1/2。RT-PCR、Western blot检测BPI-BD的表达;MTT法检测其对细胞增殖的影响。结果成功构建重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3,纯化后病毒滴度达1.2×1010pfu/ml。p AdxsiBPI-BD3转染C3H10T1/2后,RT-PCR、Western blot结果显示,BPI-BD3融合蛋白表达成功。MTT结果显示,转染的C3H10T1/2生长无明显影响(P>0.05)。结论成功构建重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3,且转染C3H10T1/2后可稳定表达BPI-BD3融合蛋白,为进一步研究应用抗菌肽BPI-BD3奠定基础。

关键词：腺病毒载体人β-防御素3 杀菌/通透性增加蛋白

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诱导多功能干细胞在口腔医学的研究进展

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北京口腔医学 2015年第4期23卷 232-234页

作者：刘翠郭希民赵刚朱彪郭红延北京武警总医院口腔医学中心北京100039 军事医学科学院基础医学研究所全军干细胞与再生医学重点实验室

体细胞在特定因子作用下可重编程为诱导多功能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs),因其不受伦理学等方面的限制,成为干细胞领域的一个研究热点。i PSCs在再生医学领域有着广泛的应用前景,因此学者们展开了其对人体各组织、... 详细信息

体细胞在特定因子作用下可重编程为诱导多功能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs),因其不受伦理学等方面的限制,成为干细胞领域的一个研究热点。i PSCs在再生医学领域有着广泛的应用前景,因此学者们展开了其对人体各组织、器官再造的应用探索。近年来发现i PSCs在口腔再生医学领域具有极大的应用价值,本文对i PSCs在口腔医学中的研究进行综述。

关键词：多功能干细胞口腔医学医学领域 cells 器官再造体细胞伦理学应用

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