检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2023年第4期39卷 1374-1389页

作者：隋馨莹徐平段昌柱李衍常重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所国家蛋白质科学中心(北京)北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206 安徽医科大学基础医学院安徽合肥230032 中国医学科学院蛋白组学与新药研发创新单元北京102206

螯合体1(SQSTM1/p62)是一种选择性自噬接头蛋白,在清除待降解蛋白、维持细胞内蛋白质稳态中发挥重要的调控作用。p62蛋白具有多个功能结构域,介导与多种蛋白质发生相互作用进而精确调节特定的信号通路,从而将p62蛋白与氧化防御系统、炎... 详细信息

螯合体1(SQSTM1/p62)是一种选择性自噬接头蛋白,在清除待降解蛋白、维持细胞内蛋白质稳态中发挥重要的调控作用。p62蛋白具有多个功能结构域,介导与多种蛋白质发生相互作用进而精确调节特定的信号通路,从而将p62蛋白与氧化防御系统、炎症反应和营养感知等重要生命过程联系起来。研究表明p62的突变或者表达异常与多种疾病的发生发展过程密切相关,包括神经退行性疾病、肿瘤、感染性疾病、遗传性疾病以及慢性疾病等。本文综述了p62蛋白的结构特征、分子功能,并系统介绍其在蛋白质稳态和信号通路调控中的多种功能,总结了p62在疾病发生发展中的复杂性与多面性,以期为p62蛋白的功能与相关疾病研究提供参考。

关键词： SQSTM1/p62 蛋白酶体自噬疾病肿瘤

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定量蛋白质组学揭示酵母去泛素化酶Ubp14生物学功能

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生物工程学报 2022年第10期38卷 3901-3913页

作者：李招娣兰秋艳李衍常徐聪常蕾徐平段昌柱重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所中国医学科学院蛋白质组学与药物研发新技术创新单元国家蛋白质科学中心(北京)北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室北京102206

泛素化是一种动态可逆的蛋白质翻译后修饰,泛素分子在泛素激活酶、泛素结合酶和泛素连接酶的级联酶促反应催化下共价连接到底物蛋白上。去泛素化酶将泛素分子从底物上移除,动态可逆地调控泛素化修饰,在成熟泛素的生成、泛素链的移除与... 详细信息

泛素化是一种动态可逆的蛋白质翻译后修饰,泛素分子在泛素激活酶、泛素结合酶和泛素连接酶的级联酶促反应催化下共价连接到底物蛋白上。去泛素化酶将泛素分子从底物上移除,动态可逆地调控泛素化修饰,在成熟泛素的生成、泛素链的移除与修剪、游离泛素链的回收等过程中发挥着关键的调控作用。本文的研究对象是酵母中泛素特异性蛋白酶(ubiquitin specific protease,USP)家族成员Ubp14,负责回收细胞内游离的泛素链。本研究定量比较了酵母细胞中Ubp14缺失对全蛋白质组的影响,进而找出其潜在的调控通路和分子功能。首先,通过同源重组技术构建了ubp14△菌株,发现其生长速度低于野生型酵母。利用稳定同位素氨基酸代谢标记技术结合深度覆盖的蛋白质组学分析技术,系统比较了ubp14△菌株相对于野生型菌株的差异蛋白,共计鉴定3685个蛋白,通过统计学分析筛选得到109个差异蛋白。基因本体论分析发现,Ubp14缺失引起的差异蛋白主要参与了包括氨基酸代谢、氧化还原和热应激等生物学过程。本研究为深入探究去泛素化酶Ubp14的生物学功能,进而深刻理解游离泛素的稳态平衡与生物学过程调控提供了高可信的蛋白质组学数据信息。

关键词：去泛素化酶 Ubp14 稳定同位素氨基酸代谢标记技术泛素

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细菌外膜蛋白BamA突变体构建及位点运动性分析

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军事医学 2022年第9期46卷 677-681页

作者：王媛李志慧魏倩董国福储引娣王长振军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京100850 中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的构建细菌外膜β桶状蛋白组装机器(BAM)核心组分BamA点突变原核表达载体,获得特定位点突变BamA蛋白,并分析该蛋白多肽易位相关(POTRA)结构域上G313位点运动特性。方法利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将BamA蛋白第690和700位天然半胱氨酸(C... 详细信息

目的构建细菌外膜β桶状蛋白组装机器(BAM)核心组分BamA点突变原核表达载体,获得特定位点突变BamA蛋白,并分析该蛋白多肽易位相关(POTRA)结构域上G313位点运动特性。方法利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将BamA蛋白第690和700位天然半胱氨酸(C)突变为丝氨酸(S),将POTRA结构域上第313位氨基酸由甘氨酸(G)突为C,构建含BamA-C690S-C700S-G313C突变的原核表达载体pET22b-Strep-BamA。异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导突变蛋白表达后,利用Strep-Tactin Sepharose柱亲和层析方法对突变体蛋白进行纯化。甲烷硫代磺酸(MTSL)标记所得纯化蛋白的半胱氨酸后,进行电子顺磁共振(EPR)波谱检测,通过EPR波谱拟合获得旋转相关时间τ_(c),分析G313C氨基酸位点的运动特性。结果构建了BamA-C690S-C700S-G313C突变体原核表达载体,实现了突变体蛋白有效表达和纯化。G313C位点EPR波谱为单成分运动状态波谱,其τc值为(2.30±0.03)ns。结论该研究建立了BamA点突变原核表达和蛋白纯化方法,并获得BamA蛋白G313C运动性特征参数,为进一步研究BamA蛋白在外膜蛋白整合过程中的结构机制提供了数据。

关键词：细菌外膜蛋白质类 BamA 突变定点自旋标记-电子顺磁共振运动性

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遗传性耳聋基因治疗临床指南

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实用医院临床杂志 2024年第2期21卷 39-44页

作者：齐洁玉谈方志张李燕陆玲王洪阳李文妍刘闻闻付小龙贺祖宏丁小琼孙珊方巧军董耀东朱学伟童步升曹现宝郭敏范欣淼汪芹马璐张天虹于亚峰李永新樊建刚崔勇吴佩娜张宏征唐杰郭维维查定军叶放蕾何双八曹卫杨见明钱晓云赵宇孙敬武陈晓巍孙宇夏明王秋菊袁慧军冯永孔维佳杨仕明王海波高下李华伟徐磊柴人杰东南大学数字医学工程全国重点实验室附属中大医院耳鼻咽喉头颈外科生命科学与技术学院生命与健康高等研究院江苏省生物医学高新技术研究重点实验室江苏南京210096 南通大学神经再生联合创新中心江苏南通226001 北京理工大学航天中心医院神经内科生命学院北京10081 南京大学医学院附属鼓楼医院耳鼻喉头颈外科江苏省医学重点学科(实验室)江苏南京210008 中国人民解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科医学部北京100853 听觉与平衡觉全国重点实验室北京100853 国家耳鼻咽喉疾病临床医学研究中心北京100853 聋病教育部重点实验室北京100853 聋病防治北京市重点实验室北京100853 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院医学神经生物学国家重点实验室教育部脑科学前沿研究中心上海200031 复旦大学生物医学研究所上海200032 国家卫健委听觉医学重点实验室上海200031 复旦大学脑科学研究院和脑科学协同创新中心上海200032 山东大学山东省耳鼻喉医院耳鼻咽喉头颈外科山东济南250022 山东省耳鼻喉研究所山东济南250022 山东第一医科大学/山东省医学科学院医学科技创新中心山东济南250000 武汉大学中南医院耳鼻咽喉头颈外科湖北武汉430071 东南大学附属中大医院耳鼻咽喉头颈外科江苏南京210009 复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉科上海200032 安徽医科大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科安徽合肥230601 中国医科大学附属盛京医院耳鼻咽喉头颈外科辽宁沈阳110004 吉林大学中日联谊医院耳鼻咽喉头颈外科吉林长春130033 安徽医科大学第一附属医院耳鼻咽喉头颈外科安徽合肥230022 云南省第一人民医院耳鼻喉科云南昆明650032 昆明医科大学第一附属医院耳鼻喉科云南昆明650032 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院耳鼻咽喉科北京100730 中南大学湘雅二医院耳鼻咽喉头颈外科湖南长沙410008 南华大学衡阳医学院基础医学院细胞生物学与遗传学教研室细胞应激生物学衡阳市重点实验室湖南衡阳421001 哈尔滨医科大学附属第一医院黑龙江哈尔滨150001 苏州大学附属第一医院耳鼻咽喉科江苏苏州215006 首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科北京100730 四川省医学科学院·四川省人民医院/电子科技大学附属医院耳鼻咽喉头颈外科四川成都610072 广东省人民医院耳鼻咽喉头颈外科/广东省医学科学院/南方医科大学广东广州510080 南方医科大学珠江医院耳鼻咽喉头颈外科广东广州510282 空军军医大学西京医院耳鼻咽喉-头颈外科陕西西安710032 郑州大学第一附属医院耳科河南郑州450000 东南大学医学院附属南京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科江苏南京211102 四川大学华西医院耳鼻咽喉头颈外科四川成都610041 中国科学技术大学附属第一医院耳鼻咽喉头颈外科安徽合肥230001 华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉头颈外科湖北武汉430022 山东第一医科大学附属山东省立医院耳鼻咽喉科山东济南250021 山东省医学科学院医学科技创新中心山东济南250021 山东大学附属山东省立医院耳鼻咽喉科山东济南250021 国家卫生健康委耳鼻咽喉重点实验室山东济南250021 四川大学华西医院罕见病研究院四川成都6010041 南华大学衡阳医学院南华大学附属妇幼保健院湖南长沙410008 中南大学湘雅医院耳鼻咽喉头颈外科湖南长沙410008 上海人工耳蜗工程技术研究中心上海200031 东南大学深圳研究院广东深圳518063

遗传性耳聋是一种常见的遗传性疾病,新生儿的发病率为1‰~3‰。患者终身携带致病突变,导致不可逆性耳聋,至今尚无临床可用的治疗药物。在部分遗传性耳聋动物模型中,基因治疗已被证实为潜在有效的治疗方法。国内外已开展了多项遗传性耳... 详细信息

遗传性耳聋是一种常见的遗传性疾病,新生儿的发病率为1‰~3‰。患者终身携带致病突变,导致不可逆性耳聋,至今尚无临床可用的治疗药物。在部分遗传性耳聋动物模型中,基因治疗已被证实为潜在有效的治疗方法。国内外已开展了多项遗传性耳聋基因治疗的临床试验。其中,由东南大学附属中大医院牵头,联合国内多家医院成功开展的遗传性耳聋基因治疗临床试验,取得了显著的疗效,并积累了丰富的经验。为规范遗传性耳聋基因治疗并提供临床研究指导,全国多家医院的耳科专家讨论制定了遗传性耳聋基因治疗临床指南,内容涵盖了伦理审查、遗传性耳聋的诊断和入组标准、临床前准备、药物、疗效与安全性评估标准、术后言语康复等。本指南将为耳聋基因治疗的临床诊疗提供规范的理论和技术指导。

关键词：遗传性耳聋基因治疗临床指南

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HCN2在大鼠外周神经病理性疼痛发生中的作用

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中国应用生理学杂志 2017年第4期33卷 294-298,303页

作者：黄涛付波王静王滨刘少君翁谢川军事医学科学院基础医学研究所神经生物学研究室军事医学科学院国家蛋白质组学重点实验室北京100850 军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津300050

目的:初步探讨超极化激活的环核苷酸门控通道2型(HCN2)在外周神经病理性疼痛发生中的作用。方法:将24只健康成年大鼠进行随机分组(n=12):假手术组(Sham)大鼠仅分离左侧L4、L5脊神经,模型组(SNL)分离脊神经后进行相应的结扎处理,手术7 d... 详细信息

目的:初步探讨超极化激活的环核苷酸门控通道2型(HCN2)在外周神经病理性疼痛发生中的作用。方法:将24只健康成年大鼠进行随机分组(n=12):假手术组(Sham)大鼠仅分离左侧L4、L5脊神经,模型组(SNL)分离脊神经后进行相应的结扎处理,手术7 d后用行为学方法进行模型评价;将造模成功的大鼠进行随机分组(n=6):(1)阴性对照组(Saline),左侧足底注射生理盐水;(2)阳性对照组(GBPT),腹腔注射加巴喷丁;(3)实验组(ZD7288),左侧足底注射HCN非特异性阻断剂ZD7288。在给药前以及给药后1 h、4 h、24 h、48 h用疼痛行为学实验检测其对神经病理性疼痛的作用;分别取手术前对照组(Control)、假手术组(Sham)和模型组(SNL)大鼠的背根神经节(DRG)(n=6),利用q PCR和Western blot的方法研究造模前后大鼠DRG内HCN2的表达的变化情况。结果:(1)成功建立大鼠神经痛模型;(2)与Saline组比较,GBPT组和ZD7288组在注射1 h后,均能明显的减轻大鼠神经病理性疼痛的症状(P<0.01),而GBPT组和ZD7288组之间比较则无差异;(3)与Control组和Sham组相比较,SNL组大鼠DRG内的HCN2 mRNA表达量明显增加(P<0.01);与Control组和Sham组相比较,SNL组大鼠DRG内的HCN2通道蛋白表达量显著增加(P<0.05)。结论:HCN2参与外周神经病理性疼痛的发生,并有可能成为治疗神经病理性疼痛一个潜在的新靶点。

关键词：外周神经病理性疼痛 HCN2 背根神经节大鼠

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类泛素蛋白及其中文命名

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科学通报 2018年第25期63卷 2564-2569页

作者：魏文毅孙毅曹诚常智杰陈策实陈佺程金科冯仁田高大明胡荣贵贾立军姜天霞金建平李汇华李卫刘翠华刘萱马蕾娜缪时英饶枫商瑜宋质银万勇王恒彬王平王占新吴缅吴乔谢旗谢松波谢志平徐平许执恒杨波阳成伟应美丹张宏冰张令强赵永超周军朱军王琳芳张宏王琛邱小波 Department of Pathology Beth Israel Deaconess Medical Center Harvard Medical School Boston MA 02115 USA 浙江大学医学院转化医学研究院杭州310058 军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100071 清华大学膜生物学国家重点实验室北京100084 中国科学院昆明动物研究所昆明650223 中国科学院动物研究所膜生物学国家重点实验室北京100101 上海交通大学医学院生物化学与分子细胞生物学系上海200025 浙江海正药业有限公司台州318099 中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所上海200031 上海中医药大学中医肿瘤研究所和附属龙华医院上海200032 北京师范大学生命科学学院细胞增殖与调控生物学教育部重点实验室北京100875 Department of Biochemistry and Molecular Biology Medical School The University of Texas Health Science Center at Houston Houston TX 77030USA 大连医科大学附属第一医院心血管病研究所大连116011 中国科学院动物研究所干细胞与生殖生物学国家重点实验室北京100101 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 南方科技大学生物系深圳518055 武汉大学生命科学学院武汉430072 Robert H.Lurie Comprehensive Cancer Center of Northwestern University Feinberg School of Medicine Northwestern University Chicago IL 60611 USA Department of Biochemistry and Molecular Genetics University of Alabama at Birmingham Birmingham AL 352942 USA 同济大学生命科学与技术学院上海第十人民医院上海200092 中国科学技术大学生命科学学院中国科学院天然免疫与慢性疾病重点实验室中国科学院分子细胞科学卓越创新中心细胞信号网络创新中心合肥230026 厦门大学生命科学学院细胞应激生物学国家重点实验室厦门361000 中国科学院遗传与发育生物学研究所植物基因组学国家重点实验室国家植物基因研究中心北京100101 山东师范大学生命科学学院生物医学科学研究所山东省动物抗性生物学重点实验室济南250014 上海交通大学生命科学技术学院上海200240 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所国家蛋白质科学中心北京蛋白质组学研究中心北京102206 中国科学院遗传与发育生物学研究所分子发育生物学国家重点实验室北京100101 浙江大学药学院杭州310058 华南师范大学生命科学学院广东省植物发育生物工程重点实验室广州510631 浙江大学医学院附属第一医院杭州310003 南开大学生命科学学院药物化学生物学国家重点实验室天津300071 上海交通大学医学院附属瑞金医院中法生命科学和基因组研究中心上海200025 中国科学院生物物理研究所生物膜国家重点实验室生物大分子卓越创新中心北京100101 中国药科大学生命科学学院南京211198

泛素(ubiquitin,Ub)家族包括泛素及类泛素蛋白(ubiquitin-like protein,UBL),约20种成员蛋白,通过共价修饰其底物从而调节着几乎所有动植物的细胞活动[1].泛素及类泛素修饰的异常将导致癌症或神经退行性疾病等多种人类重大疾病.因此,对... 详细信息

泛素(ubiquitin,Ub)家族包括泛素及类泛素蛋白(ubiquitin-like protein,UBL),约20种成员蛋白,通过共价修饰其底物从而调节着几乎所有动植物的细胞活动[1].泛素及类泛素修饰的异常将导致癌症或神经退行性疾病等多种人类重大疾病.因此,对该通路的干预已成为治疗人类疾病中的一种创新性途径[2].随着泛素及类泛素修饰领域的迅速发展,越来越多的中国科研工作者开始使用该领域的专用词汇.但是困扰这一领域持续发展的一个问题是类泛素蛋白并没有统一规范的中文译名,如Nedd8,SUMO和Atg8/LC3等.在我们撰写《泛素家族介导的蛋白质降解和细胞自噬》专著时,这个问题显得尤为突出.因此,我们在2018年4月9日于苏州召开的该专著的编委会时讨论了类泛素蛋白的中文命名问题,并取得初步共识.

关键词： ubiquitin ubiquitin-like proteins ubiquitination Chinese nomenclature

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猕猴急性脊髓全横断损伤血清的代谢组学分析

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中国组织工程研究 2017年第36期21卷 5818-5823页

作者：唐涛程建华杨树广高健黄涛王滨董芳霆刘少君军事医学科学院基础医学研究所神经生物学教研室北京市100850 国家生物医学分析中心北京市100850

背景:脊髓损伤通过非靶标代谢组学分析可用于发现和识别代谢物变化,分析其与脊髓损伤的关系,有助于理解并进一步探讨继发脊髓损伤的病理生理过程和机制。目的:检测分析猕猴脊髓全横断损伤后血清代谢物变化,探讨其与脊髓损伤病理生理过... 详细信息

背景:脊髓损伤通过非靶标代谢组学分析可用于发现和识别代谢物变化,分析其与脊髓损伤的关系,有助于理解并进一步探讨继发脊髓损伤的病理生理过程和机制。目的:检测分析猕猴脊髓全横断损伤后血清代谢物变化,探讨其与脊髓损伤病理生理过程的关系,筛选潜在生物标志物。方法:对5只成年猕猴脊髓全横断损伤前1 d(正常对照),损伤后3 h(超急性期)及3 d(急性期)血清进行气相飞行时间质谱(GC/TOF-MS)非靶标检测,通过与质谱图库比对,指认代谢产物,查找差异代谢物,并映射至相关代谢通路,分析病理生理过程和作用机制。结果与结论:质谱分析共识别出358个谱峰,14个代谢物被认定为差异代谢物,包括小分子有机酸,氨基酸,脂肪酸和糖。结果显示,全横断脊髓损伤急性期与氨基酸代谢、三羧酸循环和丙酮酸代谢密切相关。

关键词：组织构建组织工程猕猴,脊髓损伤,代谢组学,气相飞行时间质谱,三羧酸循环,氨基酸代谢,丙酮酸代谢,主成分分析国家自然科学基金

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深度测序筛选调控小鼠骨骼肌细胞乙酰胆碱受体聚集簇形成的差异基因

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生物技术通讯 2017年第6期28卷 715-724页

作者：刘凤姣杨海红吴燕吴海涛吕英涛青岛科技大学海洋科学与生物工程学院山东青岛266042 军事医学科学院基础医学研究所神经生物学研究室北京100850

目的:运动神经源性聚集蛋白诱导骨骼肌表面乙酰胆碱受体(AChR)聚集簇的形成是神经肌肉接头(NMJ)的关键步骤。本研究旨在利用高通量深度测序技术,筛选调控成肌分化和AChR聚集簇形成相关的关键信号通路和潜在的重要靶基因。方法:建立小鼠... 详细信息

目的:运动神经源性聚集蛋白诱导骨骼肌表面乙酰胆碱受体(AChR)聚集簇的形成是神经肌肉接头(NMJ)的关键步骤。本研究旨在利用高通量深度测序技术,筛选调控成肌分化和AChR聚集簇形成相关的关键信号通路和潜在的重要靶基因。方法:建立小鼠成肌细胞系C2C12成肌分化和聚集蛋白诱导肌细胞表面AChR聚集簇形成的细胞模型,通过高通量深度测序技术检测C2C12成肌分化前后,以及聚集蛋白刺激分化肌管形成AChR聚集簇前后转录水平差异表达基因,并对测序结果进行Gene Ontology(GO)和KEGG pathway分析。结果:GO分析发现,成肌分化前后与聚集蛋白刺激肌管形成AChR聚集簇前后差异基因表达分子的分布、参与的生物学过程及其发挥的分子作用较为相似,均主要存在于细胞器和细胞膜,参与细胞基础代谢过程,主要发挥蛋白结合和催化反应功能。KEGG pathway分析发现,C2C12细胞成肌分化前后差异基因主要富集于聚集蛋白骨架蛋白调控信号和细胞黏附作用等,而聚集蛋白诱导肌管表面AChR聚集簇形成前后差异表达基因则主要集中于轴突导向信号、Wnt信号和肿瘤相关信号等。结论:挖掘出一批可能参与成肌分化和聚集蛋白依赖的AChR聚集簇调控的候选基因,相关分子在成肌分化和AChR聚集簇形成过程中的功能及其调控机制有待进一步深入验证。

关键词：神经肌肉接头 C2C12 聚集蛋白乙酰胆碱受体深度测序

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慢性神经痛对抑郁状态以及中枢多巴胺神经元电生理的影响

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中国应用生理学杂志 2016年第5期32卷 403-407页

作者：付波翁谢川王静黄涛王滨林世德刘少君军事医学科学院基础医学研究所神经生物学研究室军事医学科学院国家蛋白质组学重点实验室北京100850 军事医学科学院卫生环境学研究所天津300050

目的:探讨大鼠慢性神经痛导致抑郁症状发生后,中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元自发放电活动的改变情况。方法:24只健康成年大鼠进行随机分组(n=12):假手术组(Sham)大鼠仅进行坐骨神经分支暴露,坐骨神经损伤组(SNI)进行坐骨神经分支选择性... 详细信息

目的:探讨大鼠慢性神经痛导致抑郁症状发生后,中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元自发放电活动的改变情况。方法:24只健康成年大鼠进行随机分组(n=12):假手术组(Sham)大鼠仅进行坐骨神经分支暴露,坐骨神经损伤组(SNI)进行坐骨神经分支选择性损伤。在神经损伤后的第3、7、14、28、42、56天进行机械刺激计算缩足反射阈值,并进行糖水偏好、强迫游泳、旷场实验等行为学实验来评价大鼠是否发生抑郁症状;利用在体多通道电生理技术,对SNI组大鼠和假手术组大鼠中脑腹侧被盖区神经元分别进行记录分析。结果:与假手术组比较,SNI组大鼠的机械痛阈值明显降低(P<0.01);在旷场实验、糖水偏好、强迫游泳较对照组出现显著性差异(P<0.01);大鼠中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元自发放电频率、簇状放电活动中动作电位的数量明显增加(P<0.01)。结论:慢性疼痛可以导致大鼠抑郁相关症状的发生,中脑腹侧被盖区多巴胺能神经元自发放电频率增加与疼痛后抑郁发生相关。

关键词：抑郁多巴胺能神经元慢性神经痛自发放电大鼠

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单染色体靶向富集方法的建立

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第9期32卷 1060-1066页

作者：谢德健张田甜师明磊张彦沈文龙叶丙雨李平何超张香媛赵志虎军事医学科学院生物工程研究所北京100071 中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005 聊城大学生命科学学院聊城25200

靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析。该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究。为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍... 详细信息

靶向富集技术具有良好的均一性、特异性和灵敏性,只需较低的测序覆盖度即可满足后续的分析。该技术被广泛应用于特定位点重测序和染色体构象等研究。为了靶向富集测序文库中特定的染色体DNA片段,本研究以21号染色体为例,采用人胚肝二倍体细胞CCC-HEL-1建立了一种单染色体靶向富集方法。具体步骤如下:(1)首先将人正常核型二倍体细胞同步化到G2/M期,制备染色体悬液;然后流式分选出21号单染色体。(2)采用多重退火环形扩增技术(MALBAC)对21号染色体DNA进行扩增;用扩增的DNA产物构建文库。(3)利用体外转录合成、生物素标记的RNA探针与文库进行液相杂交,捕获并验证捕获效率。荧光定量PCR检测结果证明,特定的21号染色体呈上百倍的富集,而靶标文库则富集了近60倍。结果提示,特异单染色体靶向富集方法成功建立。该法不仅可实现任一单染色体的靶向富集,用于单条染色体功能组学研究,而且还可能用于查找特定疾病相关的染色体异常(如DNA突变、异位、重复及倒置等),具有一定的实用意义。

关键词：多重退火环形扩增高通量测序靶向富集单染色体流式分选

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