检索结果-内蒙古大学图书馆

动物医学进展 2020年第5期41卷 100-104页

作者：耿志军辛文文黄静康琳袁媛王景林安徽医科大学安徽合肥230032 解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

产气荚膜梭菌是产生多种毒素的厌氧菌,在人类和动物中引起多种疾病。其中一种毒素ε毒素(ETX)能诱导山羊、绵羊和牛的致命肠道疾病。ETX属于成孔毒素,含有3个不同的结构域,通过蛋白水解活化及脂筏相关蛋白在细胞表面形成寡聚孔。ETX被... 详细信息

产气荚膜梭菌是产生多种毒素的厌氧菌,在人类和动物中引起多种疾病。其中一种毒素ε毒素(ETX)能诱导山羊、绵羊和牛的致命肠道疾病。ETX属于成孔毒素,含有3个不同的结构域,通过蛋白水解活化及脂筏相关蛋白在细胞表面形成寡聚孔。ETX被美国疾病控制和预防中心(CDC)列为B类生物恐怖战剂,其毒力仅次于肉毒毒素和破伤风神经毒素。ETX能与其靶细胞膜受体特异性结合,但是其受体尚未确定,故论文就其受体研究的相关进展进行综述,为研究产气荚膜梭菌ε毒素诱导疾病的防治提供重要靶标。

关键词：产气荚膜梭菌ε毒素去污剂抗性膜甲型肝炎病毒细胞受体1 小窝蛋白髓鞘和淋巴细胞蛋白

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基于镧系高敏荧光的生物毒素现场快速检测方法的研究

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军事医学 2021年第7期45卷 537-542,547页

作者：刘军波金志颖白雪欣万伟杨浩李岩伟吴俊清章健高姗王景林军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071 河北师范大学生命科学学院河北省动物生理生化与分子生物学重点实验室石家庄050024 成都微瑞生物科技有限公司成都611730

目的利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法。方法首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效... 详细信息

目的利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法。方法首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效价最高的捕获抗体,分别与相应检测抗体平行组合,确定最优的配伍组合条件建立检测方法。其次,对该法的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价。结果所建立的时间分辨荧光免疫层析法(TRFIC)可在20 min内完成对3种生物毒素的定性/定量检测。3种毒素的最低检出限均可达0.5 ng/ml,定量范围为0.5~50 ng/ml,3种毒素间及与黄曲霉毒素B_(1)、T-2毒素均无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15%。结论该研究建立了一种基于可见光激发的TRFIC,在生物毒素的检测中获得了较高的最低检测限,与配套的小型便携式检测仪器一起使用,具有检测快速、可远程传输结果的优势,未来在生物反恐、生物武器核查等领域具有较高的应用价值和应用前景。

关键词：蓖麻毒素 A型肉毒毒素产气荚膜梭菌ε毒素镧系荧光免疫层析生物安全

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一株新型裂解K63荚膜型肺炎克雷伯菌的噬菌体分离鉴定和生物学特性研究及全基因组分析

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微生物学通报 2020年第1期47卷 210-221页

作者：高明明王灿李璞媛刘慧莹裴广倩范航张湘莉兰米志强童贻刚柏长青河北北方学院研究生部河北张家口075000 解放军总医院第五医学中心呼吸与危重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071 北京化工大学生命科学与技术学院北京100029

[背景]噬菌体具有特定的杀菌能力,对生态和细菌的进化具有重要影响。近年来由于多重耐药细菌的全球出现,噬菌体疗法逐渐引起了人们的关注。[目的]对一株新型裂解K63荚膜型肺炎克雷伯菌的噬菌体vB_KpnP_IME308进行生物学特性研究、测序... 详细信息

[背景]噬菌体具有特定的杀菌能力,对生态和细菌的进化具有重要影响。近年来由于多重耐药细菌的全球出现,噬菌体疗法逐渐引起了人们的关注。[目的]对一株新型裂解K63荚膜型肺炎克雷伯菌的噬菌体vB_KpnP_IME308进行生物学特性研究、测序和比较基因组学的分析。[方法]以一株从临床分离到的肺炎克雷伯菌为宿主菌分离噬菌体,应用双层平板法进行噬菌体最佳感染复数(optimal multiplicity of infection)、一步生长曲线(one-step growth curve)、温度以及pH敏感性实验测定,纯化噬菌体并通过透射电镜观察噬菌体形态;应用标准的苯酚-氯仿提取方案提取噬菌体全基因组,使用Illumina MiSeq测序平台进行噬菌体全基因组测序,测序后对噬菌体全基因组序列进行组装、注释、进化和比较基因组学分析。[结果]分离到一株新型的肺炎克雷伯菌噬菌体,命名为vB_KpnP_IME308;其最佳感染复数为0.001,一步生长曲线结果显示,其感染宿主菌的潜伏期约为20 min,裂解期约为80 min,平均裂解量330PFU/cell;噬菌体vB_KpnP_IME308在4-50℃和pH 5.0-10.0范围内稳定;电镜观察该噬菌体属于短尾噬菌体科(Podoviridae)。基因组测序结果表明,噬菌体基因组全长为43 091bp,(G+C)mol%含量为53.9%,(A+T)mol%含量为46.1%。BLASTn比对结果表明,该噬菌体与目前已知噬菌体基因组仅84%区域有相似性。噬菌体进化树结果表明该噬菌体属于Autographivirinae亚科的Drulisvirus属的成员。[结论]从医院污水中分离鉴定了一株新型的肺炎克雷伯菌噬菌体,表征并分析了噬菌体全基因组序列,这些结果均表明该噬菌体具有开发为抗肺炎克雷伯菌制剂的潜力,为噬菌体治疗多重耐药细菌感染奠定了基础。

关键词：肺炎克雷伯菌噬菌体生物学特性全基因组分析

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金黄色葡萄球菌噬菌体vB_SauH_IME522的分离鉴定及全基因组分析

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第三军医大学学报 2020年第3期42卷 229-240页

作者：高明明刘慧莹李璞媛张志华秦艳红黄勇崔玉军裴广倩童贻刚柏长青河北北方学院研究生部张家口075000 解放军总医院第五医学中心呼吸与危重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071 北京化工大学生命科学与技术学院北京100029

目的从医院污水中分离到一株金黄色葡萄球菌噬菌体vB_SauH_IME522,对其进行分离鉴定、测序及进化和基因组学的分析。方法以一株从临床分离到的多重耐药的金黄色葡萄球菌为宿主菌分离噬菌体,应用双层琼脂平板法进行噬菌体最佳感染复数(op... 详细信息

目的从医院污水中分离到一株金黄色葡萄球菌噬菌体vB_SauH_IME522,对其进行分离鉴定、测序及进化和基因组学的分析。方法以一株从临床分离到的多重耐药的金黄色葡萄球菌为宿主菌分离噬菌体,应用双层琼脂平板法进行噬菌体最佳感染复数(optimal MOI)、一步生长曲线(one-step growth curve)实验,使用蔗糖密度梯度离心纯化病毒,并通过透射电镜观察噬菌体形态;应用SDS/蛋白酶裂解方案提取噬菌体全基因组,使用Illumina Miseq测序平台进行噬菌体全基因组测序,测序后对噬菌体全基因组序列进行组装、注释、进化和比较基因组学分析。结果分离到一株金黄色葡萄球菌噬菌体,命名为vB_SauH_IME522;其最佳感染复数为0.01,一步生长曲线结果显示,其感染宿主菌的潜伏期约为20 min,裂解期约为200 min,平均裂解量89 PFU/cell;电镜观察该噬菌体,噬菌体vB_SauH_IME522具有典型的二十面体结构和收缩的尾部,其头部直径为(70±1)nm,尾部长度为(135±2)nm。基因组测序结果表明,噬菌体基因组全长为140 246 bp,G+C含量为30.2%。基因组注释显示噬菌体vB_SauH_IME522含有223个蛋白编码基因、164个启动子、66个终止子、4个tRNAs及7个耐药相关位点。其中52个基因的编码产物有预测的功能,其余基因的编码产物均为功能未知的推定蛋白。系统发生分析表明,该噬菌体属于Twortvirinae亚科的Kayvirus属。结论烈性噬菌体vB_SauH_IME522为Twortvirinae亚科的新成员,具有较强的裂解能力和短的潜伏期。

关键词：金黄色葡萄球菌噬菌体生物学特性基因组分析

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细菌全基因组关联研究的方法与应用

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遗传 2018年第1期40卷 57-65页

作者：杨超杨瑞馥崔玉军包其郁军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 不详

随着测序技术的发展和全基因组序列的不断积累,全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)在人类复杂疾病研究中取得了丰硕成果,10余年间发现了数以万计的疾病风险因子。同样,GWAS也为探索细菌表型的遗传机制提供了新的工... 详细信息

随着测序技术的发展和全基因组序列的不断积累,全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)在人类复杂疾病研究中取得了丰硕成果,10余年间发现了数以万计的疾病风险因子。同样,GWAS也为探索细菌表型的遗传机制提供了新的工具。自2013年第一项细菌GWAS(bacterial GWAS,BGWAS)工作发表以来,目前已有10多项相关研究报道,分别揭示了细菌宿主适应性、耐药性及毒力等表型的遗传机制,极大加深了人们对细菌遗传、进化及传播等方面的认识。本文对目前BGWAS的研究方法、应用成果及存在的问题进行了总结,并对BGWAS的研究前景进行了展望,旨在为微生物学领域开展BGWAS研究提供参考。

关键词：全基因组关联研究细菌全基因组测序表型遗传机制

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1株高毒力型肺炎克雷伯菌临床分离株毒力及耐药性分析

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传染病信息 2020年第3期33卷 220-224页

作者：王灿高明明李璞媛苑鑫牛文凯刘慧莹方云米志强柏长青安徽医科大学附属阜阳医院呼吸内科 236000 中国人民解放军总医院第五医学中心呼吸与危重症医学科北京100071 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对1株临床分离的高毒力型肺炎克雷伯菌菌株进行毒力基因及耐药基因分析,为临床复杂肺炎克雷伯菌感染的诊断及抗生素使用提供参考。方法首先使用PCR方法对该菌株进行血清学分型、毒力基因和耐药基因检测,然后利用二代和三代高通量测... 详细信息

目的对1株临床分离的高毒力型肺炎克雷伯菌菌株进行毒力基因及耐药基因分析,为临床复杂肺炎克雷伯菌感染的诊断及抗生素使用提供参考。方法首先使用PCR方法对该菌株进行血清学分型、毒力基因和耐药基因检测,然后利用二代和三代高通量测序平台对该菌株进行全基因组测序和序列拼接,应用生物信息学方法全面分析该菌株毒力基因及耐药基因。结果该菌株血清型为K1型,采用PCR方法发现该菌株携带wabG、uge、kfuBC、aerobactin、rmpA、magA和fimH 7个毒力基因及超广谱β-内酰胺酶耐药基因(基因型为SHV型)。高通量测序进一步发现该菌株的基因组还携带clbB、iroC和rffG 3个毒力基因。结论该肺炎克雷伯菌临床分离株血清型为K1,除了携带喹诺酮类和β-内酰胺类耐药基因外,还含有多种毒力基因,增加了治疗难度。全面分析感染菌株携带的毒力基因和耐药基因,有针对性地选择抗生素,可提高抗感染治疗的效率,减少并发症的发生。

关键词：肺炎克雷伯菌全基因组测序毒力基因耐药基因血清型

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大肠杆菌hfq和rne-710基因的双质粒无痕敲除技术

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生物工程学报 2018年第4期34卷 602-612页

作者：王净吕瑞辰韩延平杨瑞馥河北北方学院动物科技学院河北张家口075131 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

基因敲除技术是了解基因功能的重要技术手段。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)基因为模型,首先构建Δhfq∷Spe和Δrne-710∷Spe菌株,通过融合PCR方法分别构建缺失hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)的融合片段并... 详细信息

基因敲除技术是了解基因功能的重要技术手段。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)基因为模型,首先构建Δhfq∷Spe和Δrne-710∷Spe菌株,通过融合PCR方法分别构建缺失hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)的融合片段并连接至辅助质粒,缺失hfq和rne-710的片段经重组分别替换壮观霉素抗性盒,得到无痕敲除株Δhfq和Δrne-710。双质粒无痕敲除和融合PCR方法相结合为大片段基因缺失开辟了新的途径。

关键词：大肠杆菌 hfq rne-710 双质粒无痕敲除融合PCR Ⅰ-Sce Ⅰ内切酶

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Q热疫苗研究

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中国人兽共患病学报 2018年第2期34卷 171-174,181页

作者：熊小路焦俊温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原生物生物安全国家重点实验室北京100071

Q热(Q fever)为一种世界性分布的重要人兽共患病,疫苗接种是预防Q热的最有效手段。专性细胞内寄生的贝氏柯克斯体是Q热的病原体,灭活I相贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)免疫保护效能几乎为100%,但是其免疫副反应强。氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体... 详细信息

Q热(Q fever)为一种世界性分布的重要人兽共患病,疫苗接种是预防Q热的最有效手段。专性细胞内寄生的贝氏柯克斯体是Q热的病原体,灭活I相贝氏柯克斯体Q热疫苗(WCV)免疫保护效能几乎为100%,但是其免疫副反应强。氯仿-甲醇提取贝氏柯克斯体(CMR)和三氯醋酸提取贝氏柯克斯体可溶性抗原(TCA)Q热疫苗保留灭活Q热疫苗的免疫保护效能,且免疫副反应显著减轻。但CMR和TCA Q热疫苗均需要用鸡胚大量培养贝氏柯克斯体,需要在高等级生物防护实验室采用复杂步骤提取、纯化贝氏柯克斯体,这些使Q热疫苗的生产成本高、批量生产难。近十年来,国内外Q热疫苗研究着力于分子疫苗,并已经由研究贝氏柯克斯体保护性抗原转移到筛选能诱导特异性细胞免疫应答的CD4+和CD8+T细胞表位上,以期望T细胞表位在机体内高效表达,诱导机体产生良好的抗Q热保护性免疫应答。

关键词： Q热疫苗贝氏柯克斯体保护性抗原 T细胞表位

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医院感染细菌性肺炎患者多重耐药菌感染及30 d内死亡危险因素分析

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检验医学 2019年第4期34卷 300-304页

作者：李静刘雪超孙惠敏崔冰漪刘秀玮唐山市中医医院免疫发光科河北唐山063000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 唐山市中医医院肺系病科河北唐山063000

目的探讨医院感染细菌性肺炎的病原谱和耐药情况,分析患者感染30 d内死亡的危险因素。方法回顾性分析2017年1—12月唐山市中医医院医院感染细菌性肺炎患者的临床资料,分析病原菌分布及耐药情况。采用Logistic回归分析和Cox回归分析评估... 详细信息

目的探讨医院感染细菌性肺炎的病原谱和耐药情况,分析患者感染30 d内死亡的危险因素。方法回顾性分析2017年1—12月唐山市中医医院医院感染细菌性肺炎患者的临床资料,分析病原菌分布及耐药情况。采用Logistic回归分析和Cox回归分析评估相关危险因素。结果患者年龄、重症监护病房(ICU)入住>7 d、接受有创机械性通气>7 d是患者发生多重耐药(MDR)菌感染的独立危险因素;患者年龄、肺部肿瘤及合并机体其他部位感染是细菌性肺炎患者30 d内死亡的独立危险因素。结论明确了医院感染细菌性肺炎患者发生MDR及30 d内死亡的危险因素,为临床制定相应预防、治疗措施提供了理论依据。

关键词：医院感染细菌性肺炎危险因素多重耐药菌死亡

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两质粒系统重配甲型H1N1流感病毒株的研究

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免疫学杂志 2018年第4期34卷 353-358页

作者：周珊珊杨晓岚孙芳程晋霞谷宏婧段跃强杨鹏辉王希良安徽医科大学研究生院合肥230601 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfast... 详细信息

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plh HTBP6。同时将流感病毒A/California/7/2009(H1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入p ENTR-1A质粒,获得p ENTR-1AP2。将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定。结果本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1)Vca,重配病毒株传代后HA效价为2~8,形态符合流感病毒典型特征,大小80~120 nm,具有冷适应、温度敏感表型。结论两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略。

关键词：反向遗传学两质粒系统流感病毒

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