检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2012年第7期36卷 502-507页

作者：朱鹏张青雯祁芝珍崔玉军肖潇杨瑞馥谭周进宋亚军湖南农业大学生物安全科学技术学院长沙410128 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 青海省地方病预防控制所西宁811602 湖南中医药大学微生物学教研室长沙410208

目的利用Luminex悬浮芯片技术,基于单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)建立我国鼠疫耶尔森菌东方型菌株(以下简称东方型鼠疫菌)的基因分型方法,为进一步研究东方型鼠疫菌多态性并分析其系统发育关系奠定基础。方法利... 详细信息

目的利用Luminex悬浮芯片技术,基于单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)建立我国鼠疫耶尔森菌东方型菌株(以下简称东方型鼠疫菌)的基因分型方法,为进一步研究东方型鼠疫菌多态性并分析其系统发育关系奠定基础。方法利用多重PCR,同时扩增东方型鼠疫菌中18个具有分型意义的SNP位点,扩增产物进行多重等位基因特异性引物延伸(allele specific primer extension,ASPE)反应以及Luminex悬浮芯片技术分析,随后利用MasterPlex GT V2.3软件计算平均荧光强度(median fluorescence intensity,MFI)比值,判断各SNP位点的碱基状态;并对SNP分型方法的重现性进行评价。结果 Luminex多重SNP技术能够快速、高通量地检测出各SNP位点的MFI值,从而在8 h内一次性成功确定东方型鼠疫菌中18个SNP的碱基状态;36株东方型鼠疫菌基于18个SNP可以分为7个基因型。结论本文建立的Luminex多重SNP检测方法作为一种高通量检测SNP的技术平台,为后期的东方型鼠疫菌SNP分型及系统发育分析奠定了基础。

关键词： Luminex技术耶尔森菌,鼠疫多态性,单核苷酸基因分型

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副溶血弧菌毒力评价小鼠模型的建立与应用

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中国实验动物学报 2012年第4期20卷 31-34页

作者：郭李平徐镔蕊杜德燕姜汉雯邱业峰周冬生中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人兽共患病重点实验室北京100193 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院实验动物中心北京100071

目的建立用于评价副溶血弧菌毒力的小鼠模型,为研究副溶血弧菌的致病机制奠定基础。方法将适宜浓度的菌液经腹腔感染4～5周龄雌性BALB/c小鼠,观察小鼠的症状及死亡数。结果高盐(2%NaCl)条件下培养的强毒株RIMD2210633,经腹腔感染107CFU... 详细信息

目的建立用于评价副溶血弧菌毒力的小鼠模型,为研究副溶血弧菌的致病机制奠定基础。方法将适宜浓度的菌液经腹腔感染4～5周龄雌性BALB/c小鼠,观察小鼠的症状及死亡数。结果高盐(2%NaCl)条件下培养的强毒株RIMD2210633,经腹腔感染107CFU的菌量,小鼠存活率为20%～30%,而环境无毒株S251的小鼠存活率为100%。结论建立了评价副溶血弧菌毒力的实验小鼠模型,并应用于不同盐分浓度培养的强毒株与环境无毒株的毒力比较实验。

关键词：副溶血弧菌小鼠致死性

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山东临沂市手足口病传播时空特征分析

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中国公共卫生 2012年第1期28卷 121-122页

作者：孙大鹏姜宝法丁淑军王连森方立群曹务春王显军山东大学公共卫生学院卫生统计与流行病学研究所济南250012 山东省疾病预防控制中心山东省传染病预防控制重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

手足口病（hand，foot，andmonthdisease，HFMD）是由多种肠道病毒引起的常见传染病，多发于〈5岁婴幼儿。可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡，个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。2007年山东省临沂地区... 详细信息

手足口病（hand，foot，andmonthdisease，HFMD）是由多种肠道病毒引起的常见传染病，多发于〈5岁婴幼儿。可引起发热和手、足、口腔等部位的皮疹、溃疡，个别患者可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。2007年山东省临沂地区出现手足口病暴发流行，一些患儿出现严重并发症，引起社会广泛关注。为了解临沂市手足口病流行特点，本研究对临沂市2007—2010年的手足口病疫情资料进行了分析。结果报告如下。

关键词：手足口病时空分析趋势面模型

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白纹伊蚊T7噬菌体展示cDNA文库的构建

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寄生虫与医学昆虫学报 2012年第2期19卷 78-83页

作者：冀霞赵瑞君刘美德赵彤言山西医科大学病原生物学教研室太原030001 军事医学科学院微生物流行病研究所/病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为筛选白纹伊蚊与相关蚊媒病毒相互作用的基因,本文构建了白纹伊蚊Aedes albopictusT7噬菌体展示eDNA文库,分离与纯化白纹伊蚊mRNA,所得mRNA经反转录合成双链cDNA后,在双链cDNA末端加上定向EcoRI/HindIn接头使其两端分别带EcoRI和Hind11... 详细信息

为筛选白纹伊蚊与相关蚊媒病毒相互作用的基因,本文构建了白纹伊蚊Aedes albopictusT7噬菌体展示eDNA文库,分离与纯化白纹伊蚊mRNA,所得mRNA经反转录合成双链cDNA后,在双链cDNA末端加上定向EcoRI/HindIn接头使其两端分别带EcoRI和Hind11I黏性末端;接着用MiniColumn纯化收集300bp以上的双链cDNA片段连接于T7 Select 10-3b载体;经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建1v7噬菌体展示cDNA文库。所建文库的库容量经测定为1.7×10'pfu/mL,扩增后文库滴度为2.5×10^(15)pfu/mL。对从原始文库中随机挑取的50个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为95%以上;阳性克隆片段长度分布在200－2000bp,其中有90%的插入片段大于300bp。本文所构建的白纹伊蚊T7噬菌体展示cDNA文库,满足cDNA文库的基本要求,可以用于筛选白纹伊蚊与相关蚊病毒相互作用的基因。

关键词：伊蚊属 DNA 互补细菌噬菌体T7 数据库文献型基因文库蚊科细菌噬菌体基因

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白纹伊蚊T7噬茵体展示cDNA文库的构建

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寄生虫与医学昆虫学报 2012年第2期19卷 78-83页

作者：冀霞赵瑞君刘美德赵彤言山西医科大学病原生物学教研室太原030001 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为筛选白纹伊蚊与相关蚊媒病毒相互作用的基因，本文构建了白纹伊蚊Aedes albopictusT7噬菌体展示eDNA文库，分离与纯化白纹伊蚊mRNA，所得mRNA经反转录合成双链cDNA后，在双链cDNA末端加上定向EcoRI／HindIn接头使其两端分别带EcoRI和H... 详细信息

为筛选白纹伊蚊与相关蚊媒病毒相互作用的基因，本文构建了白纹伊蚊Aedes albopictusT7噬菌体展示eDNA文库，分离与纯化白纹伊蚊mRNA，所得mRNA经反转录合成双链cDNA后，在双链cDNA末端加上定向EcoRI／HindIn接头使其两端分别带EcoRI和Hind11I黏性末端；接着用MiniColumn纯化收集300bp以上的双链cDNA片段连接于T7 Select 10—3b载体；经体外包装后，以BLT5403为受体菌构建1v7噬菌体展示cDNA文库。所建文库的库容量经测定为1．7×10’pfu／mL，扩增后文库滴度为2．5×10^（15）pfu／mL。对从原始文库中随机挑取的50个噬菌斑进行PCR鉴定，重组率为95％以上；阳性克隆片段长度分布在200～2000bp，其中有90％的插入片段大于300bp。本文所构建的白纹伊蚊T7噬菌体展示cDNA文库，满足cDNA文库的基本要求，可以用于筛选白纹伊蚊与相关蚊病毒相互作用的基因。

关键词：白纹伊蚊蚊媒病毒 T7噬菌体 cDNA展示文库

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副溶血弧菌毒力评价小鼠模型的建立与应用

副溶血弧菌毒力评价小鼠模型的建立与应用

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2012年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会学术研讨会

作者：郭李平徐镔蕊杜德燕姜汉雯邱业峰周冬生中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人兽共患病重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院实验动物中心

目的本研究旨在建立评价副溶血性弧菌毒力的小鼠模型,为研究副溶血性弧菌的致病机制奠定基础。材料方法将不同剂量的RIMD210633菌液经腹腔感染4-5周龄雌性Balb/c小鼠,注射剂量分别为10～9、10～8、10～7、10～6CFU/只,观察小鼠的症状及... 详细信息

目的本研究旨在建立评价副溶血性弧菌毒力的小鼠模型,为研究副溶血性弧菌的致病机制奠定基础。材料方法将不同剂量的RIMD210633菌液经腹腔感染4-5周龄雌性Balb/c小鼠,注射剂量分别为10～9、10～8、10～7、10～6CFU/只,观察小鼠的症状及死亡数,以确定最佳感染量;然后将不同盐分浓

关键词：副溶血弧菌小鼠模型建立与应用

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EV71型手足口病乳鼠动物模型的建立及免疫、内分泌及病理特征研究

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免疫学杂志 2012年第10期28卷 867-871页

作者：李仲任庆杰门丽管晨杨巧芝赵忠鹏田庆玲闫芳王希良山西农业大学动物科技学院太原030801 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京中医药大学第一临床学院中医内科 100029 聊城市人民医院儿科 252000 唐山市妇幼保健院感染性疾病科 063000

目的建立EV71型手足口病乳鼠动物模型并进行免疫、致病特性研究。方法将临床分离的EV71病毒株经蚀斑纯化,3T3细胞适应,乳鼠驯化,最终获得1株能致死7日龄乳鼠的EV71毒株,命名为BJ09/07(GenBank Accession ***319054,EV71-BJ)。EV71-BJ感... 详细信息

目的建立EV71型手足口病乳鼠动物模型并进行免疫、致病特性研究。方法将临床分离的EV71病毒株经蚀斑纯化,3T3细胞适应,乳鼠驯化,最终获得1株能致死7日龄乳鼠的EV71毒株,命名为BJ09/07(GenBank Accession ***319054,EV71-BJ)。EV71-BJ感染7日龄ICR乳鼠后,观测临床疾病得分、体质量变化、死亡率并测定病毒载量、免疫分子、内分泌水平、组织病理损伤等病毒、免疫、内分泌、病理指标。结果 EV71-BJ毒株感染7日龄ICR乳鼠,其病毒毒力为150 LD50/ml,感染后不同时期肌肉病毒载量均高于脑中,至第4天达到高峰,后不断下降。至感染后第6天发病达高峰时做病理检测,相对于脑组织,肌肉中有更严重的淋巴细胞浸润,引起更严重的炎性分子升高。肌肉研磨液和血清中MCP-1、IFN-γ、IL-6和TNF-α显著升高,而肾上腺素和皮质醇未见明显变化。结论初步建立了EV71型手足口病乳鼠动物模型,为药物筛选、疫苗研发及免疫机理研究奠定了基础。

关键词： EV71 ICR乳鼠免疫内分泌病理

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甲型H1N1流感病毒疫苗株高适应性MDCK细胞的筛选及鉴定

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免疫学杂志 2011年第3期27卷 189-192页

作者：姚志东张良艳刘坤邢丽王希良中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的筛选甲型H1N1流感病毒疫苗株高适应的MDCK单克隆细胞株,用于培养生产流感病毒疫苗,为细胞代替鸡胚生产制备流感病毒疫苗提供保证。方法通过有限稀释法将MDCK细胞进行单克隆化,扩大培养建立单克隆化细胞库,通过血凝和TCID50筛选甲型H... 详细信息

目的筛选甲型H1N1流感病毒疫苗株高适应的MDCK单克隆细胞株,用于培养生产流感病毒疫苗,为细胞代替鸡胚生产制备流感病毒疫苗提供保证。方法通过有限稀释法将MDCK细胞进行单克隆化,扩大培养建立单克隆化细胞库,通过血凝和TCID50筛选甲型H1N1流感病毒疫苗株的高适应性单克隆化细胞株,并鉴定所获得的细胞株细胞表面NeuAcα2,6 Gal的丰度。结果共制备了97株单克隆化MDCK细胞,经过甲型H1N1流感病毒疫苗株的筛选,共筛选到2株高适应甲型H1N1流感病毒疫苗株的MDCK单克隆化细胞株,其TCID50分别为6.68 log10 TCID50/ml和6.77 log10 TCID50/ml,其表面NeuAcα2,6 Gal的丰度明显提高。结论成功培养了MDCK单克隆细胞株,经筛选获得的单克隆细胞株其血凝滴度,TCID50都比普通MDCK细胞有明显提高,为细胞培养生产流感病毒疫苗奠定了基础。

关键词： MDCK细胞单克隆化甲型H1N1流感病毒

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五株EV71病毒毒力、免疫原性与基因组比较分析

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免疫学杂志 2011年第6期27卷 494-498页

作者：刘鑫段长松李仲王校伟赵忠鹏王希良中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对5株EV71分离株(LCH01、LCH02、BJ01、BJ02、AH01)进行毒力、免疫原性和基因组的比较分析。方法分别用5株EV71分离株攻击Balb/c乳鼠,比较毒力差异;免疫6～8周龄Balb/c小鼠后收集血清,ELISA检测抗体效价,微量中和实验检测中和抗体效... 详细信息

目的对5株EV71分离株(LCH01、LCH02、BJ01、BJ02、AH01)进行毒力、免疫原性和基因组的比较分析。方法分别用5株EV71分离株攻击Balb/c乳鼠,比较毒力差异;免疫6～8周龄Balb/c小鼠后收集血清,ELISA检测抗体效价,微量中和实验检测中和抗体效价;反转录获得5株EV71的全长cDNA进行全基因组测序;最后,用CLC Main Workbench 5.5软件对序列进行比较分析。结果通过对VP1基因的比较分析发现,这5株EV71分离株均为C4a亚型。1周龄Balb/c小鼠经脑部注射LCH01株,表现出后肢瘫痪和后继死亡;而注射其它4株EV71的小鼠在观察了14 d之后仍然存活。5株EV71血清抗体效价为210～211,中和抗体效价为27～28,无显著差异。LCH01毒株与其它几株序列相比,在5′-NTR、3′-NTR、3D等处均有明显差异。结论这5株EV71分离株为近几年流行的C4a亚型,具有较高的免疫原性;LCH01毒株的毒力高于其它几株,从基因组水平上找到了差异序列,这为EV71疫苗评价和致病机制研究提供了实验数据和实验材料。

关键词：手足口病 EV71病毒毒力免疫原性序列分析

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甲型H1N1流感病毒样颗粒疫苗的初步研究

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免疫学杂志 2011年第6期27卷 470-474页

作者：高啸潘玉竹陈中伟邢丽刘坤王文娟杨鹏辉王希良中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 重庆大学A区生物工程学院 400044

目的对甲型H1N1病毒样颗粒的免疫原性和保护效果进行初步研究,为研发不依赖鸡胚生产工艺的流感疫苗提供新的思路。方法使用昆虫-杆状病毒表达系统表达并纯化甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(H1N1)的病毒样颗粒;通过Western blot... 详细信息

目的对甲型H1N1病毒样颗粒的免疫原性和保护效果进行初步研究,为研发不依赖鸡胚生产工艺的流感疫苗提供新的思路。方法使用昆虫-杆状病毒表达系统表达并纯化甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(H1N1)的病毒样颗粒;通过Western blot、血凝、单向免疫扩散,透射电镜等方法鉴定病毒样颗粒;使用A/California/07/2009(H1N1)裂解疫苗作为对照,腹腔注射免疫Balb/c小鼠,并使用A/Beijing/501/2009(H1N1)进行攻毒,评价病毒样颗粒疫苗的免疫原性及保护效果。结果经鉴定,纯化后的病毒样颗粒血凝滴度为1:512,HA含量为92.9μg/ml,颗粒大小在100 nm左右,二免10 d后IgG抗体效价7.9×103,血凝抑制实验测得血抑(Hemagglutination Inhibition,HI)效价384,对50LD50的A/Beijing/501/2009(H1N1)病毒的保护率达到100%。结论甲型H1N1流感病毒样颗粒的免疫原性显著高于裂解疫苗,为发展不依赖鸡胚生产的流感亚单位疫苗提供了技术保证。

关键词：甲型H1N1 病毒样颗粒疫苗

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