检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2017年第24期62卷 2804-2813页

作者：王净韩延平杨瑞馥河北北方学院动物科技学院张家口075131 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌... 详细信息

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌洗涤次数为5次,涂片时加入Slow Fade Diamond Antifade Mountant防淬灭,细菌在杂交液和探针的混合液中经40℃杂交3 h,杂交前探针置98℃变性10 min,Alexa-555 WGA染料用来标记细胞壁.sm FISH操作步骤确定为:固定-洗涤-透化-预杂交-杂交-洗涤-染细胞壁-洗涤-涂片,最后使用N-SIM超分辨率显微镜观察成像.定位结果显示,Sgr S呈绿色点状荧光弥散分布于细菌胞浆中,Alexa-555 WGA染料标记细胞壁呈红色,从而完整地定位了大肠杆菌的形态.sm FISH方法和超分辨显微技术的结合可为深入研究细菌模式基因s RNA的定位以及s RNA介导的调控机制提供线索和技术支持.

关键词：大肠杆菌 sRNA SgrS 单分子荧光原位杂交超分辨率显微镜 Alexa-555 WGA

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部队乙型肝炎疫苗预防接种的成本效果分析

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中华流行病学杂志 2001年第2期22卷 142-145页

作者：胡蓉曹务春张习坦第二军医大学卫勤系卫生事业管理教研室上海4200433 军事医学科学院微生物流行病研究所流行病研究室

目的　应用成本效果分析对部队不同乙型肝炎 (乙肝 )疫苗接种方案进行比较 ,为制定经济有效的全军乙肝疫苗预防接种策略提供依据。方法　建立决策树和乙肝转归树 ,采用催化模型推算不同接种方案下易感人群年新感染率 ,用失能调整生命年... 详细信息

目的　应用成本效果分析对部队不同乙型肝炎 (乙肝 )疫苗接种方案进行比较 ,为制定经济有效的全军乙肝疫苗预防接种策略提供依据。方法　建立决策树和乙肝转归树 ,采用催化模型推算不同接种方案下易感人群年新感染率 ,用失能调整生命年 (disability adjustedlifeyear ,DALY)作为衡量效果的指标 ,计算增量成本效果比。结果　与不接种方案相比 ,直接接种方案和筛检再接种方案的DALY分别为 6 1.888和 5 7.175 ,增量成本效果比 (cost effectivenessratio ,CER)分别为 392 .70和2 5 1.90。用部队干部实际年龄构成进行加权 ,得到筛检再接种方案和直接接种方案的CER分别为2 5 1.9和 392 .7,即每获得一个健康生命年所需成本前者少于后者。结论　筛检再接种方案优于直接接种方案 ;

关键词：乙型肝炎疫苗接种成本-效果分析失能调整生命年军队流行病学

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艾滋病病毒长期不进展者、缓慢进展者、高危暴露者以及正常人群APOBEC3G mRNA水平的差异

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中华流行病学杂志 2008年第4期29卷 356-359页

作者：刘永健李林鲍作义刘思扬庄道民李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的检测我国中部地区艾滋病病毒（HIV）流行区4类不同人群APOBEC3G（hA3G）mRNA水平的差异并分析其与疾病进程的关系。方法采集研究人群的静脉全血标本，分离外周血单核细胞（PBMCs），冻存于液氮中；复苏PBMCs，提取总RNA，mRNA体外... 详细信息

目的检测我国中部地区艾滋病病毒（HIV）流行区4类不同人群APOBEC3G（hA3G）mRNA水平的差异并分析其与疾病进程的关系。方法采集研究人群的静脉全血标本，分离外周血单核细胞（PBMCs），冻存于液氮中；复苏PBMCs，提取总RNA，mRNA体外逆转录为eDNA，应用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测不同人群血标本APOBEC3GmRNA的水平。结果HIV长期不进展者标本13份，其CD；T淋巴细胞计数平均为（716±169）个／弘1，平均感染时间为（12．5±2．3）年；HIV缓慢进展者标本48份，其CD；T淋巴细胞计数平均为（233±144）个／μ1，平均感染时间为（10．7±2．2）年。HIV长期不进展者APOBEc3GmRNA水平高于正常人群的水平；HIV缓慢进展者APOBEC3GmRNA水平高于高危人群和正常人群的水平。HIV长期不进展者和缓慢进展者的CD；T淋巴细胞数量与APOBEC3GmRNA水平无相关性。结论我国中部地区HIV流行区4类不同人群APOBEC3GmRNA水平存在差异，并且HIV长期不进展者和缓慢进展者CD；T淋巴细胞数量与APOBEC3GmRNA水平无相关性。

关键词：艾滋病病毒 APOBEC蛋白 mRNA水平

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我国HIV-1 B'亚型流行株vif基因序列特征及变异分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第8期26卷 743-746页

作者：李林刘永健鲍作义李韩平庄道民刘思扬李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)B'亚型vif基因的变异特征,探讨其与HIV传播和致病性之间的关系。方法采集河南省部分HIV感染者的外周血,提取41例HIV感染者外周血淋巴细胞DNA,设计特异性引物扩增其前病毒基因组中的vif基因,对于扩... 详细信息

目的研究人免疫缺陷病毒-1(HIV-1)B'亚型vif基因的变异特征,探讨其与HIV传播和致病性之间的关系。方法采集河南省部分HIV感染者的外周血,提取41例HIV感染者外周血淋巴细胞DNA,设计特异性引物扩增其前病毒基因组中的vif基因,对于扩增阳性的29例PCR产物进行vif区基因的测序及分析。结果29条vif基因的平均离散率是0．0328,突变主要集中于90～120、270 -302、372～405、450～470四个区域。Vif多肽链的90～93位和157～160位存在两个富含R和K带有强烈正电荷的亲水区,带正电荷的R或K交替出现,几乎没有其他的氨基酸残基。29个Vif多肽链有21条在90～93位存在R90 RKR93基序;有26条在157-160位存在K157 RRK160基序,29条序列在114位和133位存在两个在HIV-1和HIV-2以及SIV内保守的半胱氨酸(A)。结论vif在HIV-1基因组内具有相对保守性,其特征性区域和氨基酸基序对于保持Vif蛋白的功能是十分重要的。

关键词：人免疫缺陷病毒 vif基因

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扎伊尔型、苏丹型埃博拉病毒TaqMan探针实时定量PCR核酸检测方法的建立

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国际药学研究杂志 2015年第1期42卷 80-84页

作者：贾佳康晓平李裕昌吴晓燕张雨张雪松霍耐凡冉鑫杨银辉军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立针对扎伊尔型(ZEBOV)及苏丹型埃博拉病毒(SEBOV)特异、灵敏和快速的Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法。方法选用世界卫生组织(WHO)参比实验室所使用的引物和探针序列,建立针对扎伊尔型及苏丹型埃博拉病毒的NP基因序列保守区... 详细信息

目的建立针对扎伊尔型(ZEBOV)及苏丹型埃博拉病毒(SEBOV)特异、灵敏和快速的Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法。方法选用世界卫生组织(WHO)参比实验室所使用的引物和探针序列,建立针对扎伊尔型及苏丹型埃博拉病毒的NP基因序列保守区的Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法,验证检测方法的灵敏性、特异性和稳定性,并与常规PCR检测方法进行比较。结果所建立的实时定量PCR方法可用于ZEBOV及SEBOV的特异性检测,较传统PCR方法反应快捷、灵敏,分别可达:ZEBOV 34拷贝/反应、SEBOV 24拷贝/反应;具有良好的特异性、稳定性和可重复性。结论建立了ZEBOV及SEBOV Taq Man探针实时定量PCR核酸检测方法,该方法可有望用于埃博拉病毒(EBOV)的实验室、临床及现场核酸检测。

关键词：埃博拉病毒,扎伊尔型埃博拉病毒,苏丹型 TaqMan探针实时定量PCR 核酸检测

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利用噬菌体随机肽库筛选可结合志贺毒素B亚单位的短肽序列

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微生物学报 2006年第5期46卷 749-752页

作者：包士中王慧荫俊杨慧盈史晶军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

以制备的重组志贺毒素B亚单位(StxB)为靶标,利用噬菌体展示亲和淘选技术,经4轮筛选,从随机十二肽库中筛选到与StxB结合的一批噬菌体克隆,对特异结合活性较高的27个噬菌体克隆的表面展示肽进行序列测定,其中A6序列出现16次,A9和A3序列分... 详细信息

以制备的重组志贺毒素B亚单位(StxB)为靶标,利用噬菌体展示亲和淘选技术,经4轮筛选,从随机十二肽库中筛选到与StxB结合的一批噬菌体克隆,对特异结合活性较高的27个噬菌体克隆的表面展示肽进行序列测定,其中A6序列出现16次,A9和A3序列分别出现2次和3次。为评价筛选克隆中和毒素毒性的能力,将展示肽出现频率最高的A6噬菌体克隆,体外与志贺毒素孵育进行动物试验,动物存活率达33.3%,表明毒素的毒性得到部分抑制,A6短肽可能发展成为志贺毒素的拮抗剂。

关键词：志贺毒素B亚单位噬菌体展示技术淘选毒性中和试验

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LFn-PSCA融合蛋白的表达和生物活性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第10期26卷 929-932页

作者：于少洋易绍琼徐俊杰葛猛付玲于长明李冠霖陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究大肠杆菌中表达的炭疽毒素致死因子氨基端与前列腺干细胞抗原(PSCA)融合蛋白的生物活性。方法分别扩增炭疽毒素致死因子LF(lethal factor)N端254个氨基酸(LFn)的基因片段和PSCA氨基酸29～100的基因片段,将两片段先后克隆进分泌... 详细信息

目的研究大肠杆菌中表达的炭疽毒素致死因子氨基端与前列腺干细胞抗原(PSCA)融合蛋白的生物活性。方法分别扩增炭疽毒素致死因子LF(lethal factor)N端254个氨基酸(LFn)的基因片段和PSCA氨基酸29～100的基因片段,将两片段先后克隆进分泌型载体pAS22中,构建成表达质粒pAS-LFn-PSCA,在大肠杆菌中表达,并对融合蛋白进行纯化和活性检测。结果实现了融合蛋白LFn-PSCA的分泌型表达。纯化后纯度可达90％以上。体外试验显示LFn-PSCA对小鼠巨噬细胞无毒性,并保留了LFn与保护性抗原结合的活性。结论在大肠杆菌中实现了LFn-PSCA的分泌型表达,为继续进行以炭疽毒素为载体增强机体免疫应答的研究打下基础。

关键词：致死因子前列腺干细胞抗原融合蛋白

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人源化抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原单链抗体的设计和表达

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第2期26卷 145-148页

作者：李冰张军徐俊杰刘树玲付玲李建民陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框... 详细信息

目的:应用抗体"框架区重塑"技术,对鼠单克隆抗体(mAb)框架区进行人源化,制备人源化单链抗体(scFv)并检测其活性。方法:在获得抗炭疽芽胞杆菌保护性抗原鼠mAb(5E1)可变区基因的基础上,保持鼠mAb互补决定区(CDR)不变,选择与框架区同源性最高的人源序列替换鼠mAb的框架区,保留个别关键的鼠源残基。通过融合PCR技术构建人源化的scFv,并在大肠杆菌中进行了表达。表达产物以包涵体形式存在,通过变性、镍柱亲和层析和复性,获得复性后的可溶蛋白。对纯化产物进行了SDS-PAGE、ELISA和抑制炭疽毒素中和活性的检测。结果:人源化后的序列具有与鼠源scFv一致的抗原结合活性和细胞水平的中和炭疽毒素活性。结论:获得了具有功能的人源化的抗体基因序列,为表达具有中和炭疽毒素活性的全分子人源化抗体奠定了基础。

关键词：单链抗体免疫原性人源化炭疽

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人免疫缺陷病毒1型生物学性状变异的体外研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2002年第2期16卷 196-197页

作者：樊卫平李敬云王红霞鲍作义吕富双山西医科大学微生物免疫教研室太原030001 军事医学科学院微生物流行病研究所

高度的变异性是人免疫缺陷病毒1型的（HIV-1）显著特征之一，也是HIV-1逃脱机体免疫监视的主要原因和HIV-1疫苗研制的主要障碍。了解体外传代HIV-1基因型别、感染毒力及冱产量等生物学形状的变异，对评估机体内环境在HIV-1变异中的作用... 详细信息

高度的变异性是人免疫缺陷病毒1型的（HIV-1）显著特征之一，也是HIV-1逃脱机体免疫监视的主要原因和HIV-1疫苗研制的主要障碍。了解体外传代HIV-1基因型别、感染毒力及冱产量等生物学形状的变异，对评估机体内环境在HIV-1变异中的作用及评价体外长期传代HIV-1毒种的实用性具有重要意义。为此，我们对军事科学院P3实验室保存的HIV-1毒种进行长期传代培养，观察CPE，分析病毒的感染毒力和病毒产量的变异，并进行了基因亚型变异鉴定。

关键词：人免疫缺陷病毒1型生物学性状变异体外研究

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实时荧光定量PCR检测汉赛巴通体

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中华流行病学杂志 2007年第3期28卷 277-281页

作者：张晶波温博海陈梅玲李丽莉邱玲牛东升军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测汉赛巴通体的实时荧光定量PCR方法。方法根据汉赛巴通体特异的16S～23SrRNA间隔区序列设计引物和探针，以克隆的16S-23SrRNA间隔区基因片段作DNA模板，在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时... 详细信息

目的采用新型TaqMan-MGB探针建立检测汉赛巴通体的实时荧光定量PCR方法。方法根据汉赛巴通体特异的16S～23SrRNA间隔区序列设计引物和探针，以克隆的16S-23SrRNA间隔区基因片段作DNA模板，在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时荧光定量检测方法，对所建立的方法分别进行敏感性、特异性及重复性分析，并且对模拟标本进行检测。结果建立的定量标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．997）；与普通PCR相比较，荧光定量PCR检测的灵敏度是其1000倍。用荧光定量PCR检测其他相关立克次体和细菌DNA样本，除军团菌检出微弱信号（2个拷贝）外，其余检出结果均为0；对重复性进行了评价，批内和批间的变异系数在0．2％～1．9％之间。用荧光定量PCR检测汉赛巴通体感染的小鼠血标本，在感染后第2天、第3天、第5天，检出少量的汉赛巴通体，在感染后的第1天和第2天从脾脏样本中检出大量的汉赛巴通体。结论检测汉赛巴通体实时荧光定量PCR方法具有高度特异性和高敏感性以及良好的重复性，可用于快速检测各种样本中的微量汉赛巴通体以及作为汉赛巴通体感染的实验室诊断。

关键词：汉赛巴通体巴通体感染实时定量PCR

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