检索结果-内蒙古大学图书馆

中华流行病学杂志 2007年第5期28卷 482-486页

作者：张文义江佳富姚昆吴晓明左曙青詹琳褚宸一赵秋敏张泮河杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的确定中国大林姬鼠是否存在Amur类汉坦病毒及其分子生物学特征。方法应用RT-PCR法扩增大林姬鼠肺组织中汉坦病毒M基因片段和S基因全长,目的片段经测定其核苷酸序列后,用DNASTAR软件进行同源性比对和系统发育分析。结果从东北大林... 详细信息

目的确定中国大林姬鼠是否存在Amur类汉坦病毒及其分子生物学特征。方法应用RT-PCR法扩增大林姬鼠肺组织中汉坦病毒M基因片段和S基因全长,目的片段经测定其核苷酸序列后,用DNASTAR软件进行同源性比对和系统发育分析。结果从东北大林姬鼠肺标本JilinAP06中分别扩增出长度383 bp（M基因）和1696 bp（S基因）大小的目的eDNA片段,其S基因全长由1696个核苷酸组成,完整的开放阅读框从37位核苷酸至1323位核苷酸,共1287个核苷酸,编码429个氨基酸的蛋白。JilinAP06 S基因与1378、Liu株同源性最高,与H5株同源性次之,与AP63、AP61和AP1371同源性为91．0%～91．7%,与76．118同源性为81．0%。S全序列基因推导的氨基酸序列与其他汉坦病毒已知序列比较显示：JilinAP06与AP1371同源性最高（98．4%）,与AP61同源性为98．1%,与AP63和Liu、B78和H5株同源性为97．2%～97．9%,与76-118同源性为95．1%。系统发育分析结果显示：JilinAP06与Amur类汉坦病毒构成一个相对独立的分支。M基因片段同源性比较和系统发育分分析结果与基于S基因全长得到的结果一致.结论中国大林姬鼠存在Amur类病毒，大林姬鼠很可能为Amur类病毒的自然宿主和人群Amur类病毒感染的重要来源。

关键词：汉坦病毒 Amur病毒大林姬鼠

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HIV-1B′亚型毒株新型耐药相关突变位点的筛选

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中华流行病学杂志 2011年第5期32卷 499-503页

作者：李韩平郭伟刘永健鲍作义李林庄道民刘思扬王铮王晓林李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的筛选HIV—1 B′亚型病毒株中可能存在的新型耐药相关突变位点。方法收集整理前期研究获得的451条H1V-1B′亚型pol区基因序列，序列含蛋白酶全长（1～99个密码子）和反转录酶全长（1～560个密码子），长度约1977bp。将354条来自接受... 详细信息

目的筛选HIV—1 B′亚型病毒株中可能存在的新型耐药相关突变位点。方法收集整理前期研究获得的451条H1V-1B′亚型pol区基因序列，序列含蛋白酶全长（1～99个密码子）和反转录酶全长（1～560个密码子），长度约1977bp。将354条来自接受抗病毒治疗艾滋病患者的（服药组）序列与97条来自未接受治疗患者的（未服药组）序列，分别与B亚型野生型pol基因共享序列进行逐个密码子比对，筛选在服药组序列中出现的频率显著高于未服药组序列的突变位点，将筛选出来的突变位点在斯坦福大学HIV-1耐药数据库中检索，根据数据库收录的情况及解释，初步分析突变与耐药的关系。结果在服药组序列中反转录酶区有6个位点7个突变的频率显著高于未服药组，分别是D123E、V292I、K366R、T369A、T369V、A371V和1375V，即前2个突变位于反转录酶的聚合酶区、后5个突变位于反转录酶的连接区。检索数据库收录情况，有7个突变均为相应位点的主要变异形式，在服药患者中出现的频率显著高于未服药患者。结论筛选出的HIV-1B′亚型病毒株7个突变可能与耐药有关。

关键词： HIV-1 B′亚型新型耐药突变

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突发疫情中炭疽芽孢杆菌的分离及鉴定

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微生物学报 2006年第3期46卷 460-462页

作者：王争强何君苏裕心朱虹端青宋立华军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

对疑似炭疽感染病牛牛肉标本和牛血污染土壤标本进行了病原菌分离,经菌落形态和菌体形态观察、血清学实验和生化鉴定,证明分离到的细菌为炭疽芽孢杆菌。为进一步了解其特性,分别用保护性抗原、水肿因子和荚膜基因特异性引物对2株菌进行... 详细信息

对疑似炭疽感染病牛牛肉标本和牛血污染土壤标本进行了病原菌分离,经菌落形态和菌体形态观察、血清学实验和生化鉴定,证明分离到的细菌为炭疽芽孢杆菌。为进一步了解其特性,分别用保护性抗原、水肿因子和荚膜基因特异性引物对2株菌进行PCR扩增。结果显示,这两株菌有两个毒力相关质粒pX01和pX02,为有毒株。序列测定表明,这两株菌基因间同源性达99%,这两株菌与GenBank中炭疽芽孢杆菌A2012株、Ames Ancestor株和A16R疫苗株同源性达99%。

关键词：炭疽芽孢杆菌分离生化鉴定基因克隆 PCR扩增

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鼠疫耶尔森氏菌染色体上重要致病相关基因的克隆与表达

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中国地方病学杂志 2004年第1期23卷 32-35页

作者：江凌晓郭兆彪周冬生杨瑞馥俞守义第一军医大学流行病学教研室广州510515 军事医学科学院微生物流行病研究所

目的在大肠杆菌中表达鼠疫耶尔森氏菌染色体编码的重要致病相关基因。方法运用生物信息学技术对鼠疫耶尔森氏菌基因组序列信息进行分析,选定了18个与病原菌粘附、侵袭宿主细胞相关的基因为克隆与表达的目的基因。通过PCR和TA克隆技术从... 详细信息

目的在大肠杆菌中表达鼠疫耶尔森氏菌染色体编码的重要致病相关基因。方法运用生物信息学技术对鼠疫耶尔森氏菌基因组序列信息进行分析,选定了18个与病原菌粘附、侵袭宿主细胞相关的基因为克隆与表达的目的基因。通过PCR和TA克隆技术从鼠疫耶尔森氏菌基因组中克隆了这些目的基因。上述目的基因经双酶切回收后,分别导入原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基鄄β鄄D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS鄄PAGE)分析和Western blot检测蛋白表达。结果共获得14个可经IPTG诱导的高表达的重组转化子菌株。结论上述重组转化子菌株表达的融合蛋白经进一步纯化可进行宿主感染鼠疫耶尔森氏菌后免疫应答的研究及抗体表达谱变化的研究。这些研究不仅对于鼠疫耶尔森氏菌致病机理的研究有意义,而且在鼠疫疫苗的研制上有重要价值。

关键词：鼠疫耶尔森氏菌染色体致病相关基因基因克隆基因表达

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蜱中玫瑰单胞菌菌株的分离与鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第1期29卷 29-32页

作者：邱尔臣张芳刘玮吴晓明杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的确定从蜱中分离的、使用常规方法不能鉴定的3株粉红色细菌的分类学位置。方法使用16SrDNA序列分析和同源性检索方法及细菌的形态学、生化特性及脂肪酸分析等鉴定方法。结果3株细菌为粉红色的革兰阴性需氧小球杆菌，最适生长温度为3... 详细信息

目的确定从蜱中分离的、使用常规方法不能鉴定的3株粉红色细菌的分类学位置。方法使用16SrDNA序列分析和同源性检索方法及细菌的形态学、生化特性及脂肪酸分析等鉴定方法。结果3株细菌为粉红色的革兰阴性需氧小球杆菌，最适生长温度为37℃，在含有5％以上NaCl的培养基中不能生长。该菌能发酵葡萄糖、利用棕檬酸盐，接触酶试验阳性、脲酶试验阳性、紫外（UV）吸收试验阳性。主要脂肪酸成分为C16：0、C17：0、C18：1 ω9c和C19：0cyc。16SrDNA序列分析和同源性检索发现3株细菌与颈玫瑰单胞菌（Roseomonas cervicalis）同源性最高，达99．1％。结论这3株细菌在分类学上属于玫瑰单胞菌（Roseomonas），但是和已经报道的种都不相同，可能是一个变种。蜱可能是其潜在的媒介宿主。

关键词：玫瑰单胞菌草原革蜱分离鉴定

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炭疽毒素保护性抗原和LFn介导的增强型绿色荧光蛋白进入HeLa细胞的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第2期28卷 158-161页

作者：易绍琼于少洋于婷任声权刘树玲杨秀旭董大勇陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究炭疽毒素保护性抗原（protective antigen，PA）和致死因子（lethal factor，LF）N端254个氨基酸（LFn）在辅助增强型绿包荧光蛋白（EGFP）进入细胞中的作用。方法分别扩增炭疽毒素的基因片段和EGFP的基因全长，将两片段先后克... 详细信息

目的研究炭疽毒素保护性抗原（protective antigen，PA）和致死因子（lethal factor，LF）N端254个氨基酸（LFn）在辅助增强型绿包荧光蛋白（EGFP）进入细胞中的作用。方法分别扩增炭疽毒素的基因片段和EGFP的基因全长，将两片段先后克隆至pET-21a（＋），构建成重组表达质粒pET-LFn-EGFP，在大肠杆菌中诱导表达，并对融合蛋白LFn-EGFP进行纯化。利用荧光共聚焦显微镜和流式细胞术研究LFn-EGFP融合蛋白进入细胞的情况。结果获得较高纯度的融合蛋白LFn-EG-FP，纯度可达90％以上，体外实验显示该融合蛋白保留了LFn与PA结合的活性，并且能够进入到HeLa细胞中。结论LFn-EGFP蛋白本身电会以未知的机制进入细胞，在PA辅助时，LFn-EGFP进入细胞的效率会有所增加。

关键词：致死因子炭疽毒素保护性抗原增强型绿色荧光蛋白 HeLa细胞炭疽杆菌

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抗生素可替代品--噬菌体和益生菌会议

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生物工程学报 2013年第2期29卷 247-250页

作者：裴广倩韩传银史套兴童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

1会议简介近年来，随着抗生素的滥用，细菌对抗生素的耐药性不断增强。据报道，目前有些国家肺炎链球菌耐药发生率达到25％；美国75％的细菌感染会对一种或多种抗生素产生耐药性；日本葡萄球菌分离株半数以上都具有多重耐药性。

关键词：抗生素益生菌噬菌体替代品多重耐药性细菌感染肺炎链球菌会议简介

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蛋白质芯片制作条件的优化

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第一军医大学学报 2004年第11期24卷 1230-1232页

作者：江凌晓郭兆彪陈泽良王津王红霞俞守义杨瑞馥南方医科大学流行病教研室广东广州510515 军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

目的探讨以醛基化玻片为固相载体制备蛋白质芯片的条件.方法蛋白质用含40%甘油的PBS稀释后点加在醛基化玻片上,室温干燥1h,4℃冰箱保存,经封闭剂封闭,PBS漂洗后,依次加入抗体,反应结果用扫描仪进行扫读.结果以醛基化玻片为固相载体时预... 详细信息

目的探讨以醛基化玻片为固相载体制备蛋白质芯片的条件.方法蛋白质用含40%甘油的PBS稀释后点加在醛基化玻片上,室温干燥1h,4℃冰箱保存,经封闭剂封闭,PBS漂洗后,依次加入抗体,反应结果用扫描仪进行扫读.结果以醛基化玻片为固相载体时预点10～15个点后点样均一性较好;点样后4℃冰箱保存24～48h再进行漂洗和封闭处理,所得结果的荧光测量值较高;3%BSA为封闭剂时所得图像的荧光背景值最低;点样量影响荧光信号的强度.结论以醛基化玻片为固相载体制备蛋白质芯片时要预点15～20个点后再正式点样,点样后应4℃保存24～48h再进行漂洗和3%BSA封闭处理.

关键词：蛋白质芯片制作条件醛基化玻片固相载体

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采用高通量测序技术分析尾病毒目噬菌体基因组末端序列特点

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病毒学报 2013年第1期29卷 39-43页

作者：李莎莎范航安小平范华昊姜焕焕米志强童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

证明噬菌体高通量测序中高频出现的序列即是噬菌体基因组的末端序列。在T3噬菌体基因组末端连接特异性序列接头,然后进行高通量测序,同时将不加接头的T3基因组也进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学比较分析。采用类似高通量测序... 详细信息

证明噬菌体高通量测序中高频出现的序列即是噬菌体基因组的末端序列。在T3噬菌体基因组末端连接特异性序列接头,然后进行高通量测序,同时将不加接头的T3基因组也进行高通量测序,对测序结果进行生物信息学比较分析。采用类似高通量测序技术分析N4样噬菌体的全基因组序列。加接头的序列与无接头序列中的高频序列完全一致,证明了高通量测序过程中得到的高频序列就是加接头的基因组末端序列,同时证明T4样噬菌体的末端具有序列特异性而非完全随机,此外我们还发现N4样噬菌体基因组左侧末端具有唯一序列,而其基因组右侧末端不均一。高通量测序技术方便快捷,可用于噬菌体基因组末端和全基因组序列的同时测定。

关键词：高通量测序噬菌体基因组末端序列

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两株炭疽芽胞杆菌MLST新序列型(ST)

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微生物学报 2012年第1期52卷 120-123页

作者：左庭婷李岩伟韩雪莲何君端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】2株炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthracis)17003-14和17003-32的多位点序列分型(Multilocussequence typing,MLST)研究。【方法】选取***基因组7个常见管家基因位点glpF、gmk、ilvD、pta、pur、pycA和tpi进行PCR扩增、测序,与MLST数据库中的等位基因序列进行比对,确定菌株的序列型(sequence type,ST)。【结果】*** 17003-14和17003-32的等位基因编号分别为113、31、1、43、1、53、7和113、31、1、43、1、53、37,比对结果显示这2株细菌的等位基因编号组合未见报道。【结论】17003-14和17003-32为新ST菌株,已被MLST数据库确认,注册号(pubMLST id)分别为id-1053和id-1054。

关键词：炭疽芽胞杆菌多位点序列分型序列型基因分型

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