检索结果-内蒙古大学图书馆

1996-2014年中国HIV-1毒株CRF01_AE亚型传播簇和传播网络研究

中华流行病学杂志 2019年第1期40卷 84-88页

作者：王晓林贾磊李韩平刘永健韩婧婉李天一李敬云李林军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的了解我国HIV-1毒株CRF01_AE亚型在省内和省际的传播规律和风险因素,为实施精准干预提供参考依据。方法收集我国19个省份1996-2014年已有的2094条CRF01_AEpol区基因序列,利用PhyML3.0软件构建系统进化树,确定传播簇,利用Cytoscape3.... 详细信息

目的了解我国HIV-1毒株CRF01_AE亚型在省内和省际的传播规律和风险因素,为实施精准干预提供参考依据。方法收集我国19个省份1996-2014年已有的2094条CRF01_AEpol区基因序列,利用PhyML3.0软件构建系统进化树,确定传播簇,利用Cytoscape3.6.0软件构建传播网络,结合背景信息分析传播风险。结果发现82个传播簇,包含255条序列(12.18%,255/2094),省内传播簇数量和包含序列数(61个,173条)明显多于跨省传播簇(21个,82条)。传播簇中男男性传播人群的成簇比例随时间上升趋势明显,由1996-2008年的2.41%(2/83)上升为2013-2014年的23.61%(72/305)(χ^2=27.800,df=1,P=0.000)。跨省传播簇的男男性传播人群比例明显高于省内传播簇,由1996-2008年的0.67%(2/297)上升为2013-2014年的6.36%(30/472),具有随时间的上升趋势(χ^2=20.276,df=1,P=0.000)。跨省传播簇中男男性传播的比例(86.59%,71/82)明显高于省内传播簇(56.65%,98/173),差异有统计学意义(χ^2=22.792,P=0.000)。含2种及以上传播途径的跨省传播簇的比例(33.33%,7/21)明显高于省内传播簇(13.11%,8/61),差异有统计学意义(χ^2=4.273,P=0.039)。传播网络分析发现,跨省传播簇内高传播风险人群比例(51.22%,42/82)明显高于省内传播簇(26.59%,46/173),差异有统计学意义(χ^2=14.932,P=0.000)。跨省传播簇以男男性传播人群为主。结论我国HIV-1毒株CRF01_AE亚型存在复杂的传播网络,跨省传播簇快速增长,其中高风险传播者对HIV-1亚型的大范围传播起到重要作用,应深入进行传播网络研究以指导精准干预。

关键词：艾滋病病毒 CRF01_AE亚型传播簇传播网络

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副溶血弧菌密度感应系统调控exsA和exsD的分子机制

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军事医学 2020年第10期44卷 740-745页

作者：仇越杜天钰王迎王霄杨文慧胡凌飞殷喆周冬生王丽张义全江苏大学医学院江苏镇江212013 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 河南大学第一附属医院河南开封475000

目的研究副溶血弧菌密度感应系统核心调控子AphA和OpaR对exsA和exsD的调控机制。方法提取野生株(WT)和调控子基因突变株(ΔaphA或ΔopaR)总RNA,采用引物延伸实验确定exsA和exsD的转录起始位点,并根据WT和突变株中引物延伸产物的丰度,判... 详细信息

目的研究副溶血弧菌密度感应系统核心调控子AphA和OpaR对exsA和exsD的调控机制。方法提取野生株(WT)和调控子基因突变株(ΔaphA或ΔopaR)总RNA,采用引物延伸实验确定exsA和exsD的转录起始位点,并根据WT和突变株中引物延伸产物的丰度,判定AphA和OpaR对exsA和exsD的调控关系;将exsA和exsD的启动子区DNA序列克隆入pHRP309质粒无启动子区的β-半乳糖苷酶基因的上游,构建重组质粒,并将其分别转入WT、ΔaphA和ΔopaR中得到LacZ菌株,用β-半乳糖苷酶检测试剂盒检测并比较各LacZ菌株中β-半乳糖苷酶活性的差异来判断AphA和OpaR对exsA和exsD的调控关系;PCR扩增exsA和exsD的上游调控序列,并表达纯化His-AphA和His-OpaR重组蛋白,利用凝胶阻滞实验(EMSA)探究重组蛋白是否可结合到exsA和exsD的上游调控序列上,并采用DNase I足迹实验鉴定具体的结合位点。结果引物延伸实验结果显示,exsA和exsD各有一个转录起始位点,分别为C(-440)和C(-105)(翻译起始位点为+1),且在低密度生长条件下,AphA可激活它们的转录活性,而在高密度生长条件下,OpaR抑制它们的转录活性,随后的LacZ报告基因融合实验进一步确证了这种调控关系。体外的EMSA和DNaseⅠ足迹实验结果表明,His-AphA和His-OpaR均不能与exsA和exsD启动子DNA序列结合。结论低密度生长时,AphA间接激活exsA和exsD的转录;高密度生长时,OpaR间接抑制exsA和exsD的转录。

关键词：副溶血弧菌密度感应系统 AphA OpaR exsA exsD

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铝佐剂和MF59对HIV-1多表位蛋白MEP1佐剂活性的比较研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第7期39卷 499-505页

作者：王月鹏李悄朱青杨裔郭彦周育森寇志华安徽医科大学北京微生物流行病研究所合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的比较MF59和铝佐剂在HIV-1多表位蛋白MEP1小鼠体内诱导的免疫应答的异同,确定一种能诱导高水平免疫应答的佐剂配方。方法将MEP1蛋白与MF59或铝佐剂制备成免疫原,肌肉注射BALB/c雌性小鼠,分别在初次免疫和三次免疫后10d分离血清和单... 详细信息

目的比较MF59和铝佐剂在HIV-1多表位蛋白MEP1小鼠体内诱导的免疫应答的异同,确定一种能诱导高水平免疫应答的佐剂配方。方法将MEP1蛋白与MF59或铝佐剂制备成免疫原,肌肉注射BALB/c雌性小鼠,分别在初次免疫和三次免疫后10d分离血清和单个脾细胞,通过间接ELISA检测小鼠血清特异性抗MEP1抗体及亚类,ELISPOT检测脾脏分泌IFN-γ及IL-4淋巴细胞数量,比较两种佐剂诱导的体液和细胞免疫应答的异同。结果单次免疫后,铝佐剂相较MF59能更快促进MEP1诱导早期的体液和细胞免疫应答;三次免疫后,铝佐剂和MF59在促进MEP1诱导Th2偏倚的体液免疫应答的同时,MF59促进MEP1诱导Th1/Th2平衡的细胞免疫应答。结论铝佐剂相较于MF59更适合作为HIV-1多表位蛋白MEP1的佐剂。

关键词： MF59 铝佐剂蛋白疫苗细胞因子抗体

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不同蜱种E3泛素连接酶多态性分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2021年第3期28卷 177-183页

作者：秦通邢丹张美娜施明杰孙毅蒋宝贵军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071 中国人民解放军91638部队卫生所北京102202

E3泛素连接酶通过蛋白修饰等泛素化过程在病原体与媒介、宿主互作中发挥着关键作用,而蜱类体内E3泛素连接酶及其功能还未明确,本研究利用高通量测序手段获得了森林革蜱、嗜群血蜱E3泛素连接酶CDS,并通过基因组生物信息学检索获得了长角... 详细信息

E3泛素连接酶通过蛋白修饰等泛素化过程在病原体与媒介、宿主互作中发挥着关键作用,而蜱类体内E3泛素连接酶及其功能还未明确,本研究利用高通量测序手段获得了森林革蜱、嗜群血蜱E3泛素连接酶CDS,并通过基因组生物信息学检索获得了长角血蜱、全沟硬蜱和亚洲璃眼蜱E3泛素连接酶CDS。结果发现,森林革蜱和全沟硬蜱的E3泛素连接酶同属于SH3RF3型;而长角血蜱、嗜群血蜱E3泛素连接酶属于SH3RF2型,亚洲璃眼蜱的E3泛素连接酶介于两者之间可能为中间类型。结果表明,不同蜱类的E3泛素连接酶随系统发育呈现出一定的演化趋势和多态性特征,E3泛素连接酶的多样性及表达情况可能是影响蜱类媒介效能的关键因素之一。

关键词： E3泛素连接酶蜱多态性高通量测序

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结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6融合基因DNA疫苗株的构建及免疫原性研究

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免疫学杂志 2020年第2期36卷 109-115页

作者：张真赵玲娜申梦王希良杨鹏辉包金风内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010059 中国人民解放军总医院第五医学中心北京100039 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所/病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA候选疫苗株并鉴定,初步评价其免疫原性。方法从GenBank中获取*** H37Rv的Ag85B、ESAT6和Hsp65基因序列优化后合成,经PCR、酶切、连接与真核表达载体PVAX1重组,构建重组质粒PVAX1-Hsp65... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA候选疫苗株并鉴定,初步评价其免疫原性。方法从GenBank中获取*** H37Rv的Ag85B、ESAT6和Hsp65基因序列优化后合成,经PCR、酶切、连接与真核表达载体PVAX1重组,构建重组质粒PVAX1-Hsp65-Ag85B和PVAX1-Hsp65-ESAT6。重组质粒体外转染验证其表达后,免疫C57BL/6小鼠,检测特异性细胞免疫应答反应。结果Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株在体内外均能表达,Western blot结果显示,DNA疫苗株体外转染293T细胞,24 h可检测到特异性蛋白条带,48 h蛋白表达量达最高。小鼠体内实验表明,Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株均可激发较强的免疫反应,可诱导机体产生分泌高水平TNF-α的Th型免疫应答,且Hsp65-Ag85B优于Hsp65-ESAT6。结论Hsp65-Ag85B、Hsp65-ESAT6 DNA疫苗株均具有较强的免疫原性,呈Th型细胞介导的免疫应答,推测Hsp65-Ag85B DNA疫苗的保护效力优于Hsp65-ESAT6,为新型结核DNA疫苗研制提供了实验依据。

关键词： DNA疫苗 Ag85B ESAT6 Hsp65 分枝杆菌

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细菌外膜蛋白A通用抗原表位预测及其抗体磁珠捕获病原菌效果的初步评价

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军事医学 2021年第5期45卷 336-339,353页

作者：王磊柯跃华栗业李怡璇杨瑞馥高波韩延平军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军32277部队新骝哈密839108 解放军疾病预防控制中心北京100071

目的利用革兰阴性细菌外膜蛋白A高度保守的特性,设计和制备可识别多种食源性革兰阴性细菌的免疫磁珠,并对该免疫磁珠的识别和富集效果进行评价。方法利用革兰阴性外膜蛋白A序列高度保守的特性,从国际生物基因数据库(NCBI)提取该蛋白的... 详细信息

目的利用革兰阴性细菌外膜蛋白A高度保守的特性,设计和制备可识别多种食源性革兰阴性细菌的免疫磁珠,并对该免疫磁珠的识别和富集效果进行评价。方法利用革兰阴性外膜蛋白A序列高度保守的特性,从国际生物基因数据库(NCBI)提取该蛋白的氨基酸序列进行同源比对;使用抗原表位预测工具"BepiPred"预测具有免疫原性的抗原表位;将预测的多肽序列分两组混合免疫大耳白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法对抗体进行评价,挑选出优质抗体偶联磁珠捕捉细菌,利用平板培养计数的方法检验抗体的有效性和广谱性。结果经间接ELISA筛选,制备的多抗可识别阪岐克洛诺杆菌、肠出血性大肠埃希菌O157∶H7、弗氏志贺菌、肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、小肠结肠炎耶尔森菌6种常见食源性致病菌,识别灵敏度为25μg/ml;使用该抗体制备的500 nm羧基免疫磁珠对6种细菌的捕捉率为0.47%~2.03%。结论与传统的免疫磁珠相比较,该项目制备的多抗免疫磁珠具有广谱性的特点,可提高检验效率,是一种具有应用前景的检测思路。

关键词：革兰阴性细菌外膜蛋白A 免疫磁珠食源性致病菌快速检测

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ATP生物荧光法检测空气中细菌浓度的研究

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中国消毒学杂志 2020年第7期37卷 491-495页

作者：胡凌飞李娜张柯曹杰靳爱军李劲松军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究ATP生物荧光法检测气溶胶细菌浓度的方法,为其应用提供科学数据。方法采用人工气溶胶方法,对ATP生物荧光法检测不同试验菌人工气溶胶细菌浓度进行观察,同时与活菌计数法作比较。结果建立了粘质沙雷菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃... 详细信息

目的研究ATP生物荧光法检测气溶胶细菌浓度的方法,为其应用提供科学数据。方法采用人工气溶胶方法,对ATP生物荧光法检测不同试验菌人工气溶胶细菌浓度进行观察,同时与活菌计数法作比较。结果建立了粘质沙雷菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及其混合菌液浓度与ATP发光值的关系曲线,线性回归分析得出各曲线的R2值均>0.9,显示在103~109cfu/m L范围内细菌浓度与生物发光强度有明显的正相关性。混合菌液气溶胶的模拟试验检测结果显示,ATP生物荧光法和平板计数法在气溶胶浓度较高时有较好的相关性,R2值为0.8613。ATP生物荧光法检测结果受细菌气溶胶浓度、不同的采样器和采样方式等因素的影响。结论ATP生物荧光法快速检测空气中细菌浓度的方法具有可行性,但结果会受到诸多因素的影响,尚需要进一步研究解决。

关键词： ATP生物荧光法平板计数法细菌气溶胶细菌浓度

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恙虫病实验室诊断研究进展

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传染病信息 2021年第6期34卷 490-493页

作者：牛华熊小路辛德莉苏州大学基础医学与生物科学学院 215123 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 首都医科大学附属北京友谊医院北京热带医学研究所热带病防治研究北京市重点实验室 100050

恙虫病是经恙螨叮咬传播,由恙虫病东方体感染引起的一种致命性自然疫源性疾病,以发热、焦痂或溃疡、淋巴结肿大及皮疹为主要临床特征,主要流行于东亚和东南亚地区。恙虫病的临床症状不典型,极易造成误诊和漏诊。精确和快速的实验室诊断... 详细信息

恙虫病是经恙螨叮咬传播,由恙虫病东方体感染引起的一种致命性自然疫源性疾病,以发热、焦痂或溃疡、淋巴结肿大及皮疹为主要临床特征,主要流行于东亚和东南亚地区。恙虫病的临床症状不典型,极易造成误诊和漏诊。精确和快速的实验室诊断对于恙虫病的确诊和治疗具有非常重要的意义。本文对恙虫病常用实验室诊断方法及近年来的研究进展进行综述。

关键词：恙虫病恙虫病东方体实验室诊断

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基于镧系高敏荧光的生物毒素现场快速检测方法的研究

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军事医学 2021年第7期45卷 537-542,547页

作者：刘军波金志颖白雪欣万伟杨浩李岩伟吴俊清章健高姗王景林军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071 河北师范大学生命科学学院河北省动物生理生化与分子生物学重点实验室石家庄050024 成都微瑞生物科技有限公司成都611730

目的利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法。方法首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效... 详细信息

目的利用时间分辨荧光技术建立一种可快速、准确地对蓖麻毒素、A型肉毒毒素及产气荚膜梭菌ε毒素进行定量检测的方法。方法首先合成了一种可见光激发的镧系荧光微球,通过比较不同粒径的铕离子荧光微球,筛选出最佳粒径的微球偶联标记效价最高的捕获抗体,分别与相应检测抗体平行组合,确定最优的配伍组合条件建立检测方法。其次,对该法的敏感性、精密性、定量能力和特异性进行评价。结果所建立的时间分辨荧光免疫层析法(TRFIC)可在20 min内完成对3种生物毒素的定性/定量检测。3种毒素的最低检出限均可达0.5 ng/ml,定量范围为0.5~50 ng/ml,3种毒素间及与黄曲霉毒素B_(1)、T-2毒素均无交叉反应,批内重复性和批间重复性变异系数均小于15%。结论该研究建立了一种基于可见光激发的TRFIC,在生物毒素的检测中获得了较高的最低检测限,与配套的小型便携式检测仪器一起使用,具有检测快速、可远程传输结果的优势,未来在生物反恐、生物武器核查等领域具有较高的应用价值和应用前景。

关键词：蓖麻毒素 A型肉毒毒素产气荚膜梭菌ε毒素镧系荧光免疫层析生物安全

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肺炎克雷伯菌质粒p1512-KPC的测序及比较基因组学分析

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微生物学报 2019年第2期59卷 349-363页

作者：蒋昭芳赵亚超李曼莉周冬生朱天川谭小艳童贻刚龙军南方医科大学珠江医院广东广州510630 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】对多重耐药的肺炎克雷伯菌1512中的质粒p1512-KPC进行测序及比较基因组学的分析。【方法】利用16S rRNA基因测序进行菌种鉴定,根据7对管家基因(gapA、infB、mdh、pgi、phoE、rpoB和tonB)对菌株进行多位点序列分型(Multilocus se... 详细信息

【目的】对多重耐药的肺炎克雷伯菌1512中的质粒p1512-KPC进行测序及比较基因组学的分析。【方法】利用16S rRNA基因测序进行菌种鉴定,根据7对管家基因(gapA、infB、mdh、pgi、phoE、rpoB和tonB)对菌株进行多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)。利用PCR进行耐药基因的筛查,通过接合转移实验及电转化实验将质粒转入受体菌大肠杆菌EC600。采用改良Carba NP法检测细菌碳青霉烯酶的活性以及类型,使用VITEK2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析仪检测菌株最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)。最后通过高通量测序技术结合生物信息分析手段明确菌株1512及质粒p1512-KPC的耐药基因谱,并通过比较基因组方法对质粒p1512-KPC的基本结构、耐药基因遗传环境及移动元件等结构基因组学特征进行分析。【结果】菌株1512为产A类碳青霉烯酶的多重耐药肺炎克雷伯菌,MLST分型结果显示该菌为ST11型。经PCR筛查,菌株1512包含bla_(KPC-2)、dfrA1和sul1耐药基因,其中bla_(KPC-2)基因位于不可结合转移但电转成功的质粒p1512-KPC上。测序结果显示,质粒p1512-KPC长度为117.69 kb,同时包含IncFII型复制子和属于Rep_3家族但类型未知的复制子repB,并携带耐药基因bla_(KPC-2)、bla_(CTX-M-65)、bla_(TEM-1)及rmtB。其中bla_(KPC-2)、bla_(CTX-M-65)及bla_(TEM-1)分别存在于截短的Tn6296、Tn6367及截短的Tn2的基因环境中。【结论】携带bla_(KPC-2)、bla_(CTX-M-65)、bla_(TEM-1)及rmtB基因的质粒p1512-KPC介导了肺炎克雷伯菌1512对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类、单环β-内酰胺类及氨基糖苷类抗生素耐药,并能引起相应耐药基因的水平传播。此外,本研究还对IncFII型复制子和Rep_3家族复制子repB共存的质粒进行了比较基因组分析,为该类型质粒的多样性和进化提供了更深入的理解。

关键词：肺炎克雷伯菌 p1512-KPC 碳青霉烯酶 blaKPC-2

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