检索结果-内蒙古大学图书馆

科学通报 2024年第33期69卷 4917-4927页

作者：田颖武媚李凯周超张蓉蓉周航宇叶青秦成峰黄升海李晓峰安徽医科大学基础医学院合肥230000 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国医学科学院北京协和医学院系统医学研究所北京100005

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是虫媒黄病毒属的重要成员,因其在2015年的南美寨卡疫情中导致大量新生儿小头症而备受关注,目前尚无获批上市的寨卡病毒疫苗.与传统疫苗相比,mRNA疫苗在安全性、有效性和产能方面优势明显,代表未来全新的疫苗... 详细信息

寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是虫媒黄病毒属的重要成员,因其在2015年的南美寨卡疫情中导致大量新生儿小头症而备受关注,目前尚无获批上市的寨卡病毒疫苗.与传统疫苗相比,mRNA疫苗在安全性、有效性和产能方面优势明显,代表未来全新的疫苗形式.本研究选取寨卡病毒FSS13025株包膜蛋白E的Ⅲ区(EDⅢ)作为免疫原,设计构建包含EDⅢ编码序列、非编码区和poly(A)尾的重组质粒,通过体外转录和加帽反应获得EDⅢ-mRNA转录体,其转染至HEK293TN细胞后能表达特异的目的抗原并能分泌至胞外.进一步利用微流控技术将EDⅢ-mRNA转录体制备成脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle,LNP),以间隔3周加强一次的免疫方案分别将5和20μg的EDⅢ-mRNA经肌肉注射至BALB/c小鼠.酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和空斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)的结果显示,该分子可刺激小鼠产生剂量依赖性的高水平的E蛋白特异IgG抗体与寨卡病毒中和抗体,并产生Th1细胞偏向的分泌型IFN-γ、TNF-α和IL-2细胞因子.攻毒保护试验结果显示,免疫组小鼠的病毒血症和主要脏器中的病毒RNA载量相较于磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline,PBS)对照组小鼠均明显降低,其中孕鼠大脑及胎鼠大脑未检测到病毒核酸,体现出良好的免疫保护和垂直传播阻断效果.本研究设计的编码寨卡病毒E蛋白Ⅲ区的mRNA-LNP疫苗可为寨卡病毒疫苗提供新的候选.

关键词：寨卡病毒 mRNA疫苗 E蛋白Ⅲ区免疫原性免疫保护

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基于FRET构建A型肉毒毒素活性检测的高通量方法

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安徽医科大学学报 2023年第1期58卷 15-21页

作者：罗森郭丽娜李涛王琴王慧遵义医药高等专科学校细胞生物学与免疫学教研室遵义563006 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用荧光共振能量转移(FRET)构建针对A型肉毒毒素酶活性检测的高通量体外方法。方法构建只识别A型肉毒毒素的基于双荧光标记底物的重组表达质粒,将其构建的质粒转入大肠杆菌表达系统进行表达,对表达后的荧光标记底物重组蛋白进行纯... 详细信息

目的利用荧光共振能量转移(FRET)构建针对A型肉毒毒素酶活性检测的高通量体外方法。方法构建只识别A型肉毒毒素的基于双荧光标记底物的重组表达质粒,将其构建的质粒转入大肠杆菌表达系统进行表达,对表达后的荧光标记底物重组蛋白进行纯化和透析并保存备用;利用A型肉毒毒素轻链(ALc)对重组蛋白进行酶切检测活性;对本检测方法的条件进行优化;ALc切割荧光标记底物测定其酶动力学参数K_(m)与K_(cat)值。结果重组表达质粒构建成功,通过大肠杆菌表达系统表达后检测明显出现目的条带,对其纯化后获得的重组蛋白纯度在90%左右,命名重组蛋白为CYA。对CYA通过酶ALc、B型肉毒毒素轻链(BLc)进行酶切鉴定,结果显示CYA只能被ALc酶切产生与预期相符的两个蛋白片段,不能被BLc酶切。对基于FRET底物的条件优化得到:设定滤光片灵敏度在65~110之间;实时动态检测间隔为2 min/次,动态检测时间为30~120 min,底物CYA合适的浓度范围0.5~32μmol/L。CYA在ALc酶作用下随时时间的变化与荧光值528与485的比值作图最小在0.5左右,最大时约为0.9。酶动力学参数测定ALc切割CYA的值K_(cat)值为(5±0.4)s^(-1)和K_(m)为(2.33±0.21)μmol/L。结论成功构建了基于FRET技术的A型肉毒毒素活性检测的高通量体外分析方法。

关键词： FRET 肉毒毒素高通量检测

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河南省1272例新型冠状病毒肺炎疾病负担分析

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河南预防医学杂志 2021年第5期32卷 321-324,330页

作者：尹超男王海涛魏佳特赵琳曹务春山东大学齐鲁医学院公共卫生学院流行病学系山东济南250000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100000

目的应用伤残调整寿命年(DALY)指标分析河南省新型冠状病毒肺炎(新冠肺炎)疾病负担,同时应用DALY结合人力资本法分析河南省新冠肺炎造成的间接经济负担,为卫生部门制定防治措施及公共卫生规划提供参考依据。方法将河南省新冠肺炎确诊病... 详细信息

目的应用伤残调整寿命年(DALY)指标分析河南省新型冠状病毒肺炎(新冠肺炎)疾病负担,同时应用DALY结合人力资本法分析河南省新冠肺炎造成的间接经济负担,为卫生部门制定防治措施及公共卫生规划提供参考依据。方法将河南省新冠肺炎确诊病例的发病、死亡数据根据性别、年龄进行整理,使用WHO疾病负担Excel计算模板和DisMod II计算程序进行DALY的计算,并进行不同年龄段、性别、病例临床分型等DALY的比较,再利用DALY与人力资本法结合估计河南省新冠肺炎的间接经济负担。结果截止到2020年2月27日,河南省共确诊1272例新冠肺炎病例,死亡20例,累计发病率为1.334/10万,死亡率为0.023/10万。河南省新冠肺炎疾病负担DALY总值为230.931人年,DALY强度为0.242人年/10万人,由死亡造成的疾病负担高达225.737人年,占总的DALY比例为97.75%;疾病负担随临床分型加重而不断增加,临床分型为危重型的患者疾病负担占比最高;30岁以上年龄段疾病负担占比最高,高达99.67%,其中60~69岁是DALY总值最高的年龄段,80岁以上年龄段DALY强度最高;男性新冠肺炎疾病负担高于女性;河南省1272例新冠肺炎患者总体间接经济负担为2802476.21元,人均2203.20元。结论河南省新冠肺炎疾病负担主要是由死亡造成的疾病负担,提示我们除加强预防措施外,在疾病早期应保证患者及时就医,控制病情发展。河南省人群中的60~69岁、80岁以上年龄段群体和男性是新冠肺炎防治工作的重中之重。

关键词：新型冠状病毒疾病负担 DALY 间接经济负担

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产气荚膜梭菌ε毒素受体研究进展

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动物医学进展 2020年第5期41卷 100-104页

作者：耿志军辛文文黄静康琳袁媛王景林安徽医科大学安徽合肥230032 解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

产气荚膜梭菌是产生多种毒素的厌氧菌,在人类和动物中引起多种疾病。其中一种毒素ε毒素(ETX)能诱导山羊、绵羊和牛的致命肠道疾病。ETX属于成孔毒素,含有3个不同的结构域,通过蛋白水解活化及脂筏相关蛋白在细胞表面形成寡聚孔。ETX被... 详细信息

产气荚膜梭菌是产生多种毒素的厌氧菌,在人类和动物中引起多种疾病。其中一种毒素ε毒素(ETX)能诱导山羊、绵羊和牛的致命肠道疾病。ETX属于成孔毒素,含有3个不同的结构域,通过蛋白水解活化及脂筏相关蛋白在细胞表面形成寡聚孔。ETX被美国疾病控制和预防中心(CDC)列为B类生物恐怖战剂,其毒力仅次于肉毒毒素和破伤风神经毒素。ETX能与其靶细胞膜受体特异性结合,但是其受体尚未确定,故论文就其受体研究的相关进展进行综述,为研究产气荚膜梭菌ε毒素诱导疾病的防治提供重要靶标。

关键词：产气荚膜梭菌ε毒素去污剂抗性膜甲型肝炎病毒细胞受体1 小窝蛋白髓鞘和淋巴细胞蛋白

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细菌全基因组关联研究的方法与应用

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遗传 2018年第1期40卷 57-65页

作者：杨超杨瑞馥崔玉军包其郁军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 不详

随着测序技术的发展和全基因组序列的不断积累,全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)在人类复杂疾病研究中取得了丰硕成果,10余年间发现了数以万计的疾病风险因子。同样,GWAS也为探索细菌表型的遗传机制提供了新的工... 详细信息

随着测序技术的发展和全基因组序列的不断积累,全基因组关联研究(genome-wide association study,GWAS)在人类复杂疾病研究中取得了丰硕成果,10余年间发现了数以万计的疾病风险因子。同样,GWAS也为探索细菌表型的遗传机制提供了新的工具。自2013年第一项细菌GWAS(bacterial GWAS,BGWAS)工作发表以来,目前已有10多项相关研究报道,分别揭示了细菌宿主适应性、耐药性及毒力等表型的遗传机制,极大加深了人们对细菌遗传、进化及传播等方面的认识。本文对目前BGWAS的研究方法、应用成果及存在的问题进行了总结,并对BGWAS的研究前景进行了展望,旨在为微生物学领域开展BGWAS研究提供参考。

关键词：全基因组关联研究细菌全基因组测序表型遗传机制

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大肠杆菌hfq和rne-710基因的双质粒无痕敲除技术

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生物工程学报 2018年第4期34卷 602-612页

作者：王净吕瑞辰韩延平杨瑞馥河北北方学院动物科技学院河北张家口075131 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

基因敲除技术是了解基因功能的重要技术手段。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)基因为模型,首先构建Δhfq∷Spe和Δrne-710∷Spe菌株,通过融合PCR方法分别构建缺失hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)的融合片段并... 详细信息

基因敲除技术是了解基因功能的重要技术手段。以大肠杆菌K-12 MG1655基因组hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)基因为模型,首先构建Δhfq∷Spe和Δrne-710∷Spe菌株,通过融合PCR方法分别构建缺失hfq(309 bp)和rne-710(1056 bp)的融合片段并连接至辅助质粒,缺失hfq和rne-710的片段经重组分别替换壮观霉素抗性盒,得到无痕敲除株Δhfq和Δrne-710。双质粒无痕敲除和融合PCR方法相结合为大片段基因缺失开辟了新的途径。

关键词：大肠杆菌 hfq rne-710 双质粒无痕敲除融合PCR Ⅰ-Sce Ⅰ内切酶

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两质粒系统重配甲型H1N1流感病毒株的研究

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免疫学杂志 2018年第4期34卷 353-358页

作者：周珊珊杨晓岚孙芳程晋霞谷宏婧段跃强杨鹏辉王希良安徽医科大学研究生院合肥230601 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfast... 详细信息

目的构建两质粒冷适应流感病毒拯救系统,提高流感病毒的重配效率。方法本研究通过构建克隆载体pfastbac△plh HTB,将流感病毒A/Ann Arbor/6/60(H2N2)6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS)的双向转录表达元件定向克隆入此载体,获得pfastbac△plh HTBP6。同时将流感病毒A/California/7/2009(H1N1)表面基因(HA、NA)双向转录表达元件定向克隆入p ENTR-1A质粒,获得p ENTR-1AP2。将2个重组质粒共转染MDCK/COSI细胞,细胞上清接种10日龄SPF鸡胚,收取尿囊液,血凝实验筛选阳性株,并进行全面鉴定。结果本研究利用两质粒系统成功重配甲型H1N1流感病毒株,命名为TRG A/California/07/2009(H1N1)Vca,重配病毒株传代后HA效价为2~8,形态符合流感病毒典型特征,大小80~120 nm,具有冷适应、温度敏感表型。结论两质粒流感病毒拯救系统为高效重配流感疫苗株提供了新策略。

关键词：反向遗传学两质粒系统流感病毒

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医院感染细菌性肺炎患者多重耐药菌感染及30 d内死亡危险因素分析

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检验医学 2019年第4期34卷 300-304页

作者：李静刘雪超孙惠敏崔冰漪刘秀玮唐山市中医医院免疫发光科河北唐山063000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 唐山市中医医院肺系病科河北唐山063000

目的探讨医院感染细菌性肺炎的病原谱和耐药情况,分析患者感染30 d内死亡的危险因素。方法回顾性分析2017年1—12月唐山市中医医院医院感染细菌性肺炎患者的临床资料,分析病原菌分布及耐药情况。采用Logistic回归分析和Cox回归分析评估... 详细信息

目的探讨医院感染细菌性肺炎的病原谱和耐药情况,分析患者感染30 d内死亡的危险因素。方法回顾性分析2017年1—12月唐山市中医医院医院感染细菌性肺炎患者的临床资料,分析病原菌分布及耐药情况。采用Logistic回归分析和Cox回归分析评估相关危险因素。结果患者年龄、重症监护病房(ICU)入住>7 d、接受有创机械性通气>7 d是患者发生多重耐药(MDR)菌感染的独立危险因素;患者年龄、肺部肿瘤及合并机体其他部位感染是细菌性肺炎患者30 d内死亡的独立危险因素。结论明确了医院感染细菌性肺炎患者发生MDR及30 d内死亡的危险因素,为临床制定相应预防、治疗措施提供了理论依据。

关键词：医院感染细菌性肺炎危险因素多重耐药菌死亡

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基于FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法

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安徽医科大学学报 2018年第5期53卷 739-745页

作者：罗森丁朋晓李涛王琴王慧遵义医药高等专科学校病原生物与免疫教研室遵义563006 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法。方法构建针对破伤风毒素和B型肉毒毒素的双荧光标记底物的重组表达质粒,表达并纯化荧光标记底物重组蛋白;利用A型肉毒毒素轻链(ALc),B型肉毒毒素轻链(BLc)... 详细信息

目的利用FRET技术构建破伤风毒素和B型肉毒毒素酶类抑制剂高通量体外筛选方法。方法构建针对破伤风毒素和B型肉毒毒素的双荧光标记底物的重组表达质粒,表达并纯化荧光标记底物重组蛋白;利用A型肉毒毒素轻链(ALc),B型肉毒毒素轻链(BLc)和破伤风毒素轻链(TLc)分别对目的蛋白进行酶切反应。对基于双荧光标记底物高通量体外筛选方法的条件进行优化。酶动力学参数分别测定TLc和BLc切割底物荧光标记底物的Km和Kcat值。结果设计并成功构建荧光标记底物的重组表达质粒。表达并纯化后获得纯度为90%左右的重组蛋白,命名为CYVAMP。利用ALc、BLc和TLc分别对CYVAMP进行酶切,CYVAMP能被BLc和TLc识别切割而不能被ALc切割。对基于双荧光标记底物高通量体外筛选方法的条件优化得到:CYVAMP较适宜的范围为0.2~32μmol/L,酶标仪滤光片灵敏度设定的较合适的设置范围在65~110;(对于96孔板)动态实时检测间隔时间2 min较为合适,检测持续时间从30 min到120 min较合适。CYVAMP在内肽酶BLc作用下随反应时间变化与荧光值528与485比值作图最大时在1.5左右,最小在0.5左右。酶动力学参数测定得到BLc酶切CYVAMP的Km和Kcat值分别为(17.6±2.6)μmol/L和(4.16±0.28)s-1。TLc酶切CYVAMP的Km和Kcat值分别为(40.8±3.5)μmol/L和(2.65±0.32)s-1。结论成功构建基于FRET技术的分析法能满足对破伤风毒素和B型肉毒毒素的检测及抑制剂的高通量体外筛选所需。

关键词： FRET 肉毒毒素破伤风毒素高通量筛选

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大肠杆菌小RNASgrS单分子原位成像方法的建立

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科学通报 2017年第24期62卷 2804-2813页

作者：王净韩延平杨瑞馥河北北方学院动物科技学院张家口075131 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌... 详细信息

为了确定单分子Sgr S的空间定位,在野生株Escherichia coli MG1655基础上,构建敲除株(35)sgr S和过表达株(35)sgr S-p BAD-Sgr S,并以3株菌为供试菌株建立了定位大肠杆菌Sgr S的单分子荧光原位杂交(sm FISH)方法.优化条件为:杂交后细菌洗涤次数为5次,涂片时加入Slow Fade Diamond Antifade Mountant防淬灭,细菌在杂交液和探针的混合液中经40℃杂交3 h,杂交前探针置98℃变性10 min,Alexa-555 WGA染料用来标记细胞壁.sm FISH操作步骤确定为:固定-洗涤-透化-预杂交-杂交-洗涤-染细胞壁-洗涤-涂片,最后使用N-SIM超分辨率显微镜观察成像.定位结果显示,Sgr S呈绿色点状荧光弥散分布于细菌胞浆中,Alexa-555 WGA染料标记细胞壁呈红色,从而完整地定位了大肠杆菌的形态.sm FISH方法和超分辨显微技术的结合可为深入研究细菌模式基因s RNA的定位以及s RNA介导的调控机制提供线索和技术支持.

关键词：大肠杆菌 sRNA SgrS 单分子荧光原位杂交超分辨率显微镜 Alexa-555 WGA

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