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中华卫生杀虫药械 2015年第6期21卷 616-617页

作者：韩振宇龙驰吕晓鹏曹婷嫣梁馨月王飞鹏虞以新成都军区峨眉疗养院四川峨眉山614200 福建农林大学生物农药与化学农药教育部重点实验室福建福州350002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的了解峨眉山地区是否存在铗蠓属新种。方法灯诱和挥网法采集。结果发现铗蠓属二新种,即叠茎铗蠓和淡色铗蠓。叠茎铗蠓与Forcipomyia albopunctata(Skuse),1889略有近似,但阳茎中叶明显不同。淡色铗蠓阳茎中叶形态特征也有别于现知种... 详细信息

目的了解峨眉山地区是否存在铗蠓属新种。方法灯诱和挥网法采集。结果发现铗蠓属二新种,即叠茎铗蠓和淡色铗蠓。叠茎铗蠓与Forcipomyia albopunctata(Skuse),1889略有近似,但阳茎中叶明显不同。淡色铗蠓阳茎中叶形态特征也有别于现知种。新种模式标本珍藏于军事医学科学院医学昆虫标本馆。结论在峨眉山地区至少存在叠茎铗蠓和淡色铗蠓二新种。

关键词：蠓科铗蠓属新种

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四川地区铗蠓名录及一新种记述

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中华卫生杀虫药械 2015年第5期21卷 509-510,514页

作者：余静石清明陈锚锚梁栋王飞鹏虞以新范泉水成都军区疾病预防控制中心云南昆明650118 福建农林大学生物农药与化学农药教育部重点实验室福建福州350002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的发布四川省和重庆铗蠓属蠓种类调查情况,为今后该地区铗蠓生物学等方面研究提供基础资料。方法根据实地调查和文献查询列出了四川和重庆铗蠓种群组成,并对2014年在成都市府南河捕获的1新种蠓类进行了描述。结果四川省和重庆市迄今... 详细信息

目的发布四川省和重庆铗蠓属蠓种类调查情况,为今后该地区铗蠓生物学等方面研究提供基础资料。方法根据实地调查和文献查询列出了四川和重庆铗蠓种群组成,并对2014年在成都市府南河捕获的1新种蠓类进行了描述。结果四川省和重庆市迄今已记录的铗蠓属有37种,新种为铗蠓属乌黑铗蠓。结论四川省和重庆市铗蠓种类丰富,为研究该类蠓生物学、生态学等提供宝贵资源。

关键词：蠓科铗蠓属新种

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携带脑组织特异性microRNA靶序列的重组日本脑炎病毒的构建与鉴定

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解放军医学杂志 2014年第6期39卷 429-432页

作者：曹文媛叶青李晓峰王洪江朱舜亚秦鄂德江振友秦成峰暨南大学医学院微生物学与免疫学系广州510632 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒株。方法利用反向遗传学技术将脑组织特异性的miR-124和miR-125靶序列引入日本脑炎病毒cDNA全长感染性克隆,将重组质粒用XhoⅠ线性化后采用SP6转录试剂盒进行体外转录,以获得的RN... 详细信息

目的构建携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒株。方法利用反向遗传学技术将脑组织特异性的miR-124和miR-125靶序列引入日本脑炎病毒cDNA全长感染性克隆,将重组质粒用XhoⅠ线性化后采用SP6转录试剂盒进行体外转录,以获得的RNA转染BHK-21细胞,37℃、5%CO2孵箱培养3d后取上清盲传1代观察细胞病变,并通过RT-PCR、细胞蚀斑形成实验和病毒生长曲线等方法对恢复病毒的生物学特性进行鉴定。结果成功在BHK-21细胞中拯救获得了携带miRNA靶序列的重组病毒,与野生型病毒株具有相似的蚀斑形态和生长特性。结论通过反向遗传学技术获得了携带脑组织特异性miRNA靶序列的重组日本脑炎病毒,为miRNA介导的组织特异性减毒机制研究奠定了基础。

关键词：微RNAs 脑炎病毒,日本感染性克隆疫苗

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Gluc-GFP 双标记系统的构建及验证

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第11期34卷 854-858页

作者：张雪松户义康晓平张雨李裕昌吴晓燕杨银辉安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：构建含Gluc-GFP的双标记系统，为研究病毒的体外标记和活体成像提供技术手段。方法根据文献报道合成split-GFP基因，将GFP拆分为G1-10与G11两部分，分别构建含G1-10与G11的pcDNA3．1表达质粒并通过荧光观察验证其相互作用。然后... 详细信息

目的：构建含Gluc-GFP的双标记系统，为研究病毒的体外标记和活体成像提供技术手段。方法根据文献报道合成split-GFP基因，将GFP拆分为G1-10与G11两部分，分别构建含G1-10与G11的pcDNA3．1表达质粒并通过荧光观察验证其相互作用。然后通过融合PCR技术将Gluc基因与G11基因通过Linker连接并插入到pcDNA3．1上，与G1-10表达质粒共转染293T细胞，测定细胞上清中Gluc荧光素酶的活性，并进行GFP荧光观察。为了更方便对病毒进行细胞水平的观测和筛选，利用慢病毒表达系统构建能稳定表达G1-10的MDCK细胞系，再向细胞系中转染G11质粒，通过红色荧光蛋白（ RFP）标记和嘌呤霉素的抗性对细胞系以及GFP活性进行筛选与验证。结果split-GFP基因共转染细胞后的荧光观察结果证实了split-GFP拆分策略的可行性。 Gluc-G11与G1-10质粒共转染后，细胞能够发出明亮的绿色荧光，上清中荧光素的活性也较高。在此基础上，建立的G1-10 MDCK细胞系能够稳定表达出G1-10，用G11质粒转染该细胞系后，可检测到GFP荧光。结论成功构建了含Gluc-GFP的双标记系统，split-GFP拆分策略可行，Gluc-G11不会影响荧光素酶Gluc的生理活性；G1-10细胞系的稳定表达可简化双标记系统的制备，为在细胞和活体水平研究病毒致病机制提供技术手段。

关键词：双标记 Gluc-GFP 分子成像病毒研究

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基于上转换发光技术的尿液中吗啡及甲基苯丙胺快速定量检测方法研究

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刑事技术 2015年第1期40卷 28-34页

作者：刘晓林承喜张平平杨笑熳赵勇李春凤孙崇云邱景富杨瑞馥周蕾重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中海智(北京)科技有限公司北京100027 中国人民解放军总医院北京100853

目的利用上转换发光免疫层析技术（UPT-LF）建立一种尿液中吗啡（MOP）及甲基苯丙胺（MET）快速定量检测方法并对其进行系统评价。方法以上转换发光纳米颗粒（UCP-NPs）作为生物示踪物,竞争模式免疫层析作为检测平台,建立可对尿液中MOP... 详细信息

目的利用上转换发光免疫层析技术（UPT-LF）建立一种尿液中吗啡（MOP）及甲基苯丙胺（MET）快速定量检测方法并对其进行系统评价。方法以上转换发光纳米颗粒（UCP-NPs）作为生物示踪物,竞争模式免疫层析作为检测平台,建立可对尿液中MOP及MET进行定量检测的UPT-LF,即MOP-UPT-LF、MET-UPT-LF。以MOP-UPT-LF为代表,评价UPT-LF对痕量毒品检测极限,通过系列浓度标准品测定,评价定量检测能力。根据常规检测阈值,调整MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF检测敏感性及线性范围,并评价其定量检测能力。以LC-MS、GC-MS分别作为MOP、MET检测的金标准,以胶体金免疫层析作为对照,对执法现场收集尿样进行检测,确定UPT-LF定性检测性能。对系列浓度MOP模拟阳性样本同时进行LC-MS及MOP-UPT-LF定量检测,对系列浓度MET模拟阳性样本同时进行GC-MS及MET-UPT-LF定量检测,评价UPT-LF定量检测性能。结果在痕量检测条件下,MOP-UPT-LF敏感性可达1ng/m L,线性范围为1~5000ng/m L（r=-0.98172,P〈0.0005）。在常规检测条件下,MOP-UPT-LF敏感性为50ng/m L,线性范围调整为50~3000ng/m L（r=-0.98464,P〈0.0005）;MET-UPT-LF敏感性为100ng/m L,线性范围为100~5000ng/m L（r=-0.99964,P〈0.0005）。就定性检测而言,MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF均较优,灵敏度及特异度均为100%,与胶体金结果一致。就定量检测而言MOP-UPT-LF及MET-UPT-LF与定量确证方法LC-MS及GC-MS无显著差异。结论本研究建立MOP-UPT-LF、MET-UPT-LF方法,在满足快筛试剂快速简便的基础上,进一步实现了现场快速定量检测,为尿液中毒品的现场快速定量检测提供了技术保障。

关键词：法医毒物学上转换发光技术免疫层析吗啡甲基苯丙胺快速定量检测尿液

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基于重组溶葡球菌酶和ATP生物发光技术特异定量检测金黄色葡萄球菌

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生物工程学报 2014年第8期30卷 1283-1290页

作者：李玉元米志强安小平周育森童贻刚广西医科大学广西南宁530021 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

基于重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法建立特异定量检测金黄色葡萄球菌的方法。优化设计合成溶葡球菌酶序列,构建重组表达载体pQE30-Lys,转化至大肠杆菌M15并诱导表达,镍柱纯化得到目的蛋白。利用重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法特异定量... 详细信息

基于重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法建立特异定量检测金黄色葡萄球菌的方法。优化设计合成溶葡球菌酶序列,构建重组表达载体pQE30-Lys,转化至大肠杆菌M15并诱导表达,镍柱纯化得到目的蛋白。利用重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法特异定量检测金黄色葡萄球菌并与平板计数对比。成功表达了重组溶葡球菌酶,并建立了特异定量检测金黄色葡萄球菌的方法,与平板计数具有显著线性关系。本研究建立的将重组溶葡球菌酶和ATP生物发光法相结合的检测方法操作快捷简单,具有良好的应用前景。

关键词：金黄色葡萄球菌重组溶葡球菌酶 ATP生物发光特异和定量检测

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用于筛选和评价抑制I型胶原α1链基因表达的抗肝纤维化药物双报告基因系统的构建及其有效性鉴定

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中华肝脏病杂志 2014年第10期22卷 747-751页

作者：张伟代晓朋于虹王鲁燕孙世惠李军锋周育森解放军八八医院肝病中心二区军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建一种双报告基因系统，用于筛选和评价抑制I型胶原α1链基因（COLIAl）表达的抗肝纤维化药物。方法RT-PCR克隆转化生长因子β1（TGFβ1）全长基因，酶切后插入载体pcDNA3．1和pJW4303，构建真核表达载体pcDNA3.1-TGFβ1和pJW4303... 详细信息

目的构建一种双报告基因系统，用于筛选和评价抑制I型胶原α1链基因（COLIAl）表达的抗肝纤维化药物。方法RT-PCR克隆转化生长因子β1（TGFβ1）全长基因，酶切后插入载体pcDNA3．1和pJW4303，构建真核表达载体pcDNA3.1-TGFβ1和pJW4303-TGFβl；以基因组DNA为模板，克隆COLlAl启动子，插入报告基因载体pGL4.29，构建含COLlAl启动子的报告基因载体pGL4.29-COLlAl promoter。上述重组载体鉴定使用酶切和序列测定。将pcDNA3.1-TGFβ1或pJW4303-TGFβ1与pGL4-COLlAl promoter、内参报告基因载体pRL-null共转染入肝星形细胞系LX-2中，构建转录激活的双报告基因系统。使用地塞米松鉴定该双报告基因系统评价抗肝纤维化药物的有效性。组间比较用Studant t检验分析，P〈0.05为差异有统计学意义。结果成功构建TGFβ1的两种真核表达载体和含COLlAl启动子的报告基因载体。通过双报告基因检测两种方式表达TGFβ1对COLlAl启动子活性的影响，结果表明：分泌表达的TGFβ1使cOLlAl启动子活性提高200倍以上（t=21.78，P=0.0001），非分泌表达的TGFβ1仅使cOLlAl启动子活性提高了不到2倍t=3.396，P=0.0274）。成功构建了转录激活的双报告基因系统。用COLlAl表达抑制剂地塞米松作为模式药物来鉴定该系统的有效性，结果显示地塞米松对COLlAl启动子有抑制作用，且呈有剂量依赖性。结论成功构建了用于筛选和评价抑制COLlAl表达的抗肝纤维化药物的双榀告基因系统并答定该系统的有效件．

关键词：肝硬化转化生长因子β1 I型胶原α1链基因

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蜱虫叮咬所致红肉过敏

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中华临床免疫和变态反应杂志 2015年第1期9卷 44-48页

作者：祝戎飞陈浩孙劲旅文利平江佳富华中科技大学同济医学院附属同济医院过敏反应科武汉430030 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院变态反应科北京100730 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

蜱虫叮咬致病报道增多,已引起医务工作者重视。目前,大多数医务工作者关注蜱虫叮咬所引起的感染性疾病,而对蜱虫叮咬所致红肉过敏关注甚少,本文从蜱虫叮咬与红肉过敏的相关性,以及蜱虫叮咬所致红肉过敏的发病机制、诊断与鉴别诊断、治... 详细信息

蜱虫叮咬致病报道增多,已引起医务工作者重视。目前,大多数医务工作者关注蜱虫叮咬所引起的感染性疾病,而对蜱虫叮咬所致红肉过敏关注甚少,本文从蜱虫叮咬与红肉过敏的相关性,以及蜱虫叮咬所致红肉过敏的发病机制、诊断与鉴别诊断、治疗及预后等方面综述蜱虫叮咬所致红肉过敏的研究进展,以期为临床提供参考。

关键词：蜱虫红肉过敏 α-半乳糖

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副溶血弧菌ToxR截短体蛋白的表达纯化及其DNA结合活性

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微生物学报 2014年第8期54卷 956-961页

作者：胡小许张义全黄倩王丽杨瑞馥黎晓敏周冬生钟青萍华南农业大学食品学院广东广州510642 北京军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 西南大学动物科技学院重庆400715

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3表达系统,表达出有活性的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)ToxR截短体蛋白,为进一步研究ToxR的转录调控机制奠定基础。【方法】以VP基因组DNA为模板,PCR扩增ToxR蛋白DNA结合结构域(ToxR-N)的DNA片... 详细信息

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3表达系统,表达出有活性的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)ToxR截短体蛋白,为进一步研究ToxR的转录调控机制奠定基础。【方法】以VP基因组DNA为模板,PCR扩增ToxR蛋白DNA结合结构域(ToxR-N)的DNA片段,并将其直接克隆入pET28a中,获得重组质粒;将重组质粒导入大肠杆菌BL21λDE3中,所得菌株经IPTG诱导后能表达出His-ToxR-N蛋白。利用限制级凝血酶切除His-ToxR-N中的His-标签,进而以VP的calR和VP1687为靶基因,通过体外的凝胶阻滞实验(EMSA)验证ToxR-N蛋白的DNA结合活性。分别构建克隆有calR和VP1687上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入野生株(WT)和toxR突变株(ΔtoxR)中,通过测定β-半乳糖苷酶活性来比较两株重组菌中靶基因启动子活性,以验证ToxR对calR和VP1687的调控关系。【结果】成功表达出有活性的ToxR-N蛋白,该蛋白对calR启动子区具有结合活性。LacZ结果显示ToxR对calR的转录具有激活作用,而对VP1687的转录具有抑制作用。【结论】所表达的ToxR-N可用于后续的转录调控机制研究;ToxR通过直接激活calR的转录表达,而间接抑制T3SS1相关基因的表达。

关键词：副溶血弧菌 ToxR DNA结合活性转录调控

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AphA蛋白促进副溶血弧菌c-di-GMP合成和生物膜形成

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微生物学报 2014年第5期54卷 525-531页

作者：黄倩张义全胡小许王丽杨瑞馥钟青萍周冬生黎晓敏西南大学动物科技学院重庆400715 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 华南农业大学食品学院广东广州510642

【目的】综合运用表型和分子生化实验研究AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜形成的调节机制。【方法】利用菌落褶皱和结晶紫染色实验比较aphA突变株(ΔaphA)和野生株(WT)的表型差异;进而利用色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法分别检测ΔaphA和WT... 详细信息

【目的】综合运用表型和分子生化实验研究AphA蛋白对副溶血弧菌生物膜形成的调节机制。【方法】利用菌落褶皱和结晶紫染色实验比较aphA突变株(ΔaphA)和野生株(WT)的表型差异;进而利用色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)的方法分别检测ΔaphA和WT中c-di-GMP分子含量;提取ΔaphA和WT的总RNA,采用实时定量RT-PCR的方法研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;分别构建克隆有scrABC和scrG上游启动子区的LacZ重组质粒,并将重组质粒转入ΔaphA和WT中,通过测定并比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来进一步研究AphA对scrABC和scrG的调控关系;PCR扩增scrABC和scrG的整个启动子区DNA序列,并纯化His-AphA蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)验证AphA对靶基因启动子区是否具有直接的相互作用。【结果】表型结果显示AphA能促进c-di-GMP的合成和生物膜形成;实时定量RT-PCR和LacZ结果表明AphA能抑制scrABC和scrG的转录表达;EMSA结果证明AphA不能结合到scrABC和scrG的启动子区DNA上。【结论】AphA间接抑制scrABC和scrG的表达是其促进副溶血弧菌c-di-GMP合成及生物膜形成的机制之一。

关键词：副溶血弧菌生物膜形成 c—di—GMP AphA scrABC scrG

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