检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2013年第8期37卷 587-590页

作者：刘子中张义全周冬生杨瑞馥韩延平军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究温度和酸度对田鼠型鼠疫耶尔森菌psa位点的转录调控作用。方法首先设计相关跨基因引物,用RT-PCR方法验证psa位点的相关操纵子结构。扩增操纵子首基因上游启动子区500 nt序列,并克隆入pRW50质粒β-半乳糖苷酶基因的上游,将重组... 详细信息

目的研究温度和酸度对田鼠型鼠疫耶尔森菌psa位点的转录调控作用。方法首先设计相关跨基因引物,用RT-PCR方法验证psa位点的相关操纵子结构。扩增操纵子首基因上游启动子区500 nt序列,并克隆入pRW50质粒β-半乳糖苷酶基因的上游,将重组质粒转入鼠疫菌中,通过测定β-半乳糖苷酶活性差异来判断不同温度(26和37℃)和酸度(pH 6.0和pH 8.0)对psaE和psaA的调控关系。最后提取鼠疫菌在上述不同温度和酸度条件下的总RNA,采用引物延伸实验进一步明确温度和酸度对psaA的调控关系。结果与结论 RT-PCR结果证实了田鼠型鼠疫菌的psa位点由操纵子psaEF和psaABC构成;半乳糖苷酶和引物延伸实验结果显示在37℃、pH 6.0培养条件下psaABC的转录水平最高,而psaEF的转录水平无明显变化,提示psaA的表达水平在37℃酸性条件下表达量最高,psaE则不受温度和酸度的调控。

关键词：田鼠型鼠疫耶尔森菌转录调控温度酸度 psa位点

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流感病毒热稳定性的研究进展

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军事医学 2013年第3期37卷 231-233页

作者：年庆功姜涛秦鄂德秦成峰军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京10007

热稳定性是流感病毒的固有生物学特性,主要由病毒的血凝素蛋白决定,并且与环境温度、pH、盐度、空气湿度和界面性质等理化因素密切相关,在病毒进化与传播过程中发挥重要作用。热稳定性的具体机制目前尚不确定。流感病毒热稳定性的研究... 详细信息

热稳定性是流感病毒的固有生物学特性,主要由病毒的血凝素蛋白决定,并且与环境温度、pH、盐度、空气湿度和界面性质等理化因素密切相关,在病毒进化与传播过程中发挥重要作用。热稳定性的具体机制目前尚不确定。流感病毒热稳定性的研究将有助于加深对流感病毒结构与功能关系的认识。本文综述了流感病毒热稳定性的研究进展。

关键词：流感病毒热稳定性传播

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鼠疫菌OxyR调控子蛋白对dps的转录调控机制

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微生物学报 2013年第7期53卷 685-690页

作者：倪斌张义全黄新祥杨瑞馥周冬生江苏大学基础医学与医学技术学院镇江212013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】利用分子生物学实验研究鼠疫菌调控子OxyR对dps的转录调控机制。【方法】提取鼠疫菌野生株(WT)和oxyR突变株(ΔoxyR)的总RNA,采用引物延伸实验研究dps的转录起始位点,并根据产物的丰度判断OxyR对dps的调控关系。进一步采用实时... 详细信息

【目的】利用分子生物学实验研究鼠疫菌调控子OxyR对dps的转录调控机制。【方法】提取鼠疫菌野生株(WT)和oxyR突变株(ΔoxyR)的总RNA,采用引物延伸实验研究dps的转录起始位点,并根据产物的丰度判断OxyR对dps的调控关系。进一步采用实时定量RT-PCR的方法验证OxyR对dps的调控关系。PCR扩增dps的整个启动子区DNA序列,并纯化His-OxyR蛋白,通过凝胶阻滞实验(EMSA)验证OxyR对dps启动子区是否具有直接的相互作用。利用大肠杆菌OxyR识别基序,预测鼠疫菌OxyR对dps启动子区的结合位点,从而得出鼠疫菌OxyR对dps的转录调控机制。【结果】鼠疫菌dps有一个转录起始位点G(-40)(翻译起始位点为+1),其转录表达受OxyR的激活;体外实验及生物信息学预测结果表明OxyR能结合到dps启动子区-111到-78之间的碱基上。【结论】OxyR能直接结合到dps启动子区而激活其转录表达。

关键词：鼠疫菌 OxyR dps 转录调控

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Bacteriophage genome analysis based on dig data of deep sequencing

Bacteriophage genome analysis based on dig data of deep sequ...

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第六届全国生物信息学与系统生物学学术大会暨国际生物信息学前沿研讨会

作者： Yigang Tong 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

Background: With the increasing prevalence of bacteria antibiotic resistance, phage therapy has become a hotspot in biomedical *** bacterial viruses, bacteriophages widely exist in various natural *** types and quantities of phages are far greater than these of *** acting as alternatives of antibiotics, their rich genetic resources can be widely used in various fields, including molecular biology, drug delivery systems, surface displaying technology, third generation sequencing technology, electrochemistry, material science and so on.

关键词： Bacteriophage genome deep sequencing termini

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11种(株)食源性细菌基因芯片检测方法的建立

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生物技术通报 2013年第12期29卷 123-128页

作者：高兴辛文文高姗康琳王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

建立多重PCR反应结合基因芯片技术的11种(株)食源性致病菌检测方法。以金黄色葡萄球菌、志贺菌、霍乱弧菌、单增李斯特菌等11种(株)食源性细菌的特异性基因为靶基因,利用Premier 5.0和Oligo 6.0软件设计引物和探针,BLAST比对分析特异性... 详细信息

建立多重PCR反应结合基因芯片技术的11种(株)食源性致病菌检测方法。以金黄色葡萄球菌、志贺菌、霍乱弧菌、单增李斯特菌等11种(株)食源性细菌的特异性基因为靶基因,利用Premier 5.0和Oligo 6.0软件设计引物和探针,BLAST比对分析特异性。寡核苷酸探针点制醛基玻片制备基因芯片,13对引物分为3组扩增,PCR产物混合后与基因芯片杂交检测。鼠伤寒沙门菌、产气荚膜梭菌、奇异变形杆菌等11种(株)细菌使用该方法检测均能准确鉴定,基因组DNA灵敏度为10-100 pg,6组模拟DNA混合样本芯片检测结果与预期一致,18株沙门菌临床分离株检测均为阳性。从样本PCR扩增开始至检测完成,整个操作时间不超过3 h。该方法能够对11种(株)食源性致病菌快速准确鉴定,可以满足部分食源性致病菌通量检测的要求,具有较好的临床应用前景。

关键词：食源性细菌基因芯片多重PCR 特异性基因检测

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H7亚型禽流感病毒感染人的组织嗜性分析

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科学通报 2013年第18期58卷 1701-1705页

作者：年庆功孙伟姜涛张雨李靖祝庆余秦成峰军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室病毒学专业实验室北京100071

截至2013年5月1日,我国大陆地区共报告确诊人感染H7N9禽流感病毒病例127例,其中死亡26人,公共卫生安全受到严重威胁.历史上,H7亚型禽流感病毒曾多次感染人类.早期报告的人感染H7亚型禽流感病毒主要表现为结膜炎等温和疾病,而此次H7N9禽... 详细信息

截至2013年5月1日,我国大陆地区共报告确诊人感染H7N9禽流感病毒病例127例,其中死亡26人,公共卫生安全受到严重威胁.历史上,H7亚型禽流感病毒曾多次感染人类.早期报告的人感染H7亚型禽流感病毒主要表现为结膜炎等温和疾病,而此次H7N9禽流感病毒感染却表现为严重的急性呼吸道疾病,呈现出不同寻常的感染特征.本文对H7亚型禽流感病毒感染人组织嗜性特征及其决定因素进行了解析,以期为此次H7N9疫情的科学防控提供依据.

关键词： H7N9 禽流感病毒人类感染组织嗜性

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3种细菌气溶胶特性实验研究

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军事医学 2013年第1期37卷 30-32+42页

作者：李娜温占波杨文慧王洁李劲松胡凌飞刘克洋董晓凯军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术中心

目的了解金黄色葡萄球菌、黏质沙雷菌和枯草芽孢杆菌芽孢的耐冲击能力和耐雾化能力的强弱,观察3种细菌的空气生物学特性。方法使用AGI-30型全玻璃液体冲击采样器(AGI-30)对3种细菌进行耐冲击实验,在12.5 L/min的气流冲击5、10和15 min... 详细信息

目的了解金黄色葡萄球菌、黏质沙雷菌和枯草芽孢杆菌芽孢的耐冲击能力和耐雾化能力的强弱,观察3种细菌的空气生物学特性。方法使用AGI-30型全玻璃液体冲击采样器(AGI-30)对3种细菌进行耐冲击实验,在12.5 L/min的气流冲击5、10和15 min后测定采样液中细菌滴度和终末采样液体积,采用校正存活率评价3种细菌的耐冲击性。用DV40型气溶胶发生器对3种细菌进行耐雾化实验,分别测定不同雾化时间后的菌液浓度,计算雾化后细菌存活率,评价3种细菌的耐雾化性能。结果采样冲击实验表明,金黄色葡萄球菌的存活率最高,但是在冲击过程中其存活率不稳定,枯草菌芽孢经过15 min的冲击后,存活率为60%,黏质沙雷菌的存活率为72%。在耐雾化能力方面,不同时间的雾化过程中,枯草菌芽孢的存活率最高,经过60 min的雾化后,存活率为83.56%;黏质沙雷菌的相对存活率为40%,金黄色葡萄球菌在雾化过程中存活率状态不稳定。结论金黄色葡萄球菌耐冲击能力最强,但存活率低、稳定性较差;枯草菌芽孢耐雾化能力最强,但耐冲击性能最差,且其特性不适宜作为生物气溶胶的模式菌。3种细菌中,黏质沙雷菌最适于作为生物安全装备生物学评价的指示微生物。

关键词：生物气溶胶金黄色葡萄球菌黏质沙雷菌枯草芽孢杆菌耐冲击性耐雾化性

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副溶血弧菌生物膜相关基因突变株的构建

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中华预防医学杂志 2013年第5期47卷 439-443页

作者：李迎丽张义全闫小娟刘梦颖杨瑞馥邱景富周冬生重庆医科大学公共卫生与管理学院 400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的构建副溶血弧菌生物膜相关基因突变株并进行验证。方法采用PCR方法扩增得到靶基因的上下游同源臂片段，然后以上下游同源臂片段为模板，PCR扩增得到同源臂融合片段。将同源臂融合片段经酶切处理后克隆到自杀质粒pDSl32中。通过结合... 详细信息

目的构建副溶血弧菌生物膜相关基因突变株并进行验证。方法采用PCR方法扩增得到靶基因的上下游同源臂片段，然后以上下游同源臂片段为模板，PCR扩增得到同源臂融合片段。将同源臂融合片段经酶切处理后克隆到自杀质粒pDSl32中。通过结合转移的方式将携带有同源臂融合片段的重组质粒转入副溶血弧菌RIMD2210633中，利用同源重组得到突变株。用PCR方法筛选和鉴定突变株，同时对突变株进行表型分析，从而在分子水平和表型试验上验证突变株是否构建成功。结果构建得到了分别携带副溶血弧菌生物膜相关基因vbfa、crp、hns、swrZ、swrT、cpsR融合同源臂片段的重组质粒，通过PCR扩增，分别得到了大小为1190、1128、1136、953、1242、1112bp的片段；用重组质粒构建了相应的突变株（AvbfR、Acrp、Ahns、AswrZ、AswrT和AcpsR），进行PCR鉴定时，突变株得到了大小分别为1190、1128、1136、953、1242、1112bp的扩增产物，比阳性对照分别小610、739、421、542、427、1367bp；用靶基因内部的引物进行扩增时，无扩增产物；选其中一株突变株Ahns进行生物膜形成能力表型分析，结果表明突变株Ahns生物膜形成量与野生株相比明显增加。结论构建得到了6株副溶血弧菌生物膜相关基因突变株，并从分子和表型试验上验证了突变株构建正确。

关键词：弧菌属质粒生物膜基因敲除技术突变

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免疫胶体金试剂检测布鲁菌苗接种牛血清结果分析

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军事医学 2013年第11期37卷 873-874页

作者：李岩伟程君生左庭婷韩雪莲何君朱虹毛开荣端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国兽医药品监察所北京100081

目的评价实验室研制的布鲁菌病抗体快速检测试剂(胶体金法)能否鉴别布鲁菌自然感染和免疫接种所产生的抗体。方法用胶体金试剂对272份接种S2和A19布鲁菌苗的牛血清进行检测,并以虎红平板凝集试验作为对照。结果与结论结果显示,两种方法... 详细信息

目的评价实验室研制的布鲁菌病抗体快速检测试剂(胶体金法)能否鉴别布鲁菌自然感染和免疫接种所产生的抗体。方法用胶体金试剂对272份接种S2和A19布鲁菌苗的牛血清进行检测,并以虎红平板凝集试验作为对照。结果与结论结果显示,两种方法一致率100%。布鲁菌病抗体快速检测试剂(胶体金法)不被疫苗免疫抗体干扰,可用于布鲁菌感染诊断。

关键词：布鲁菌病胶体金快速检测虎红平板凝集试验

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基于NP和M1蛋白的甲型流感通用疫苗的初步研究

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免疫学杂志 2013年第5期29卷 376-381页

作者：王文娟刘坤段跃强高啸邢丽张良艳王希良杨鹏辉安徽医科大学研究生学院合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的克隆、表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性,为候选甲型流感通用疫苗抗原提供新靶标。方法合成NP-M1-HSP60融合基因,构建pET28a-NP-M1-HSP60重组质粒,表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,抗原与S... 详细信息

目的克隆、表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性,为候选甲型流感通用疫苗抗原提供新靶标。方法合成NP-M1-HSP60融合基因,构建pET28a-NP-M1-HSP60重组质粒,表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,抗原与SP01水包油佐剂混匀,制备候选甲型流感通用疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性。结果成功构建pET28a-NP-M1-HSP60表达载体,表达并纯化了NP-M1-HSP60融合蛋白;与SP01水包油乳剂佐剂混合免疫小鼠后,小鼠血清IgG抗体效价较对照组显著提升,鼻、肺灌洗液中sIgA水平显著升高,IgG亚型分析及细胞因子分泌细胞实验表明该候选疫苗可诱导相对均衡的Th1和Th2反应。免疫后小鼠分别对100LD50剂量的A/Beijing/501/2009(H1N1)毒株,100LD50剂量的PR8(H1N1)毒株和50LD50剂量的A/ostrich/Suzhou/097/2003(H5N1)毒株的攻击分别具有100%、100%和67%保护效果。结论 NP-M1-HSP60融合蛋白抗原具有一定的效果,为发展甲型流感通用疫苗提供了实验依据。

关键词： NP M1 HSP60 流感病毒通用疫苗

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