检索结果-内蒙古大学图书馆

中国媒介生物学及控制杂志 2018年第1期29卷 76-77页

作者：马合木提张建郜振国张晓兵张松虞以新新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心传染病防制科乌鲁木齐830002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

该文报道在新疆维吾尔自治区达坂城采获的新种双钩毛蠓(Dasyhelea biungula Ma et Yu,***.)和我国毛蠓新纪录种奥尔毛蠓(Dasyhelea auli Remm,1962),对其形态特征进行了描述。标本均保存于军事医学科学院微生物流行病研究所医学昆虫标... 详细信息

该文报道在新疆维吾尔自治区达坂城采获的新种双钩毛蠓(Dasyhelea biungula Ma et Yu,***.)和我国毛蠓新纪录种奥尔毛蠓(Dasyhelea auli Remm,1962),对其形态特征进行了描述。标本均保存于军事医学科学院微生物流行病研究所医学昆虫标本馆。

关键词：蠓科毛蠓属新种新纪录

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粪肠球菌噬菌体vB_EfaP_IME195的生物学特性及其全基因组分析

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微生物学通报 2017年第2期44卷 305-313页

作者：邢少贞张湘莉兰裴广倩方云程实米志强安小平童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 河北师范大学生命科学院河北石家庄050024

【目的】以粪肠球菌为宿主菌,从医院的污水中筛选出相应的粪肠球菌噬菌体v B_Efa P_IME195,简称IME195,研究其生物学特性;并通过高通量测序得到其全基因组,深入研究其基因组学特征。【方法】以临床的耐药粪肠球菌为宿主菌,利用医院污水... 详细信息

【目的】以粪肠球菌为宿主菌,从医院的污水中筛选出相应的粪肠球菌噬菌体v B_Efa P_IME195,简称IME195,研究其生物学特性;并通过高通量测序得到其全基因组,深入研究其基因组学特征。【方法】以临床的耐药粪肠球菌为宿主菌,利用医院污水筛选噬菌体并纯化;对噬菌体IME195生物学特性进行了深入研究,包括电镜观察噬菌体形态、最佳感染复数、一步生长曲线、噬菌体IME195对紫外线的敏感度、对温度的耐受程度、对p H的耐受程度、对氯仿是否敏感;通过蛋白酶K/SDS法提取噬菌体IME195全基因组;Ion Torrent高通量测序;测序后进行噬菌体全基因组序列组装、注释、进化分析和比较分析。【结果】通过噬菌体梯度稀释,双层培养基平板法得到噬菌斑边缘分明、斑体透明的裂解性噬菌体IME195,最佳感染复数为0.01,一步生长曲线显示IME195的潜伏期为30 min,暴发量为11。该噬菌体对紫外线比较敏感,对5%浓度的氯仿不敏感,噬菌体对高温比较敏感,该噬菌体在p H 6.0-8.0范围内具有良好的裂解活性;电镜观察结果显示该噬菌体属于尾病毒目短尾噬菌体科;全基因组分析表明:噬菌体IME195基因组大小只有18 607 bp(Gen Bank登录号为KT932700),G+C含量仅为33%。BLASTn比对结果表明,该噬菌体和Gen Bank中的噬菌体v B_Efae230P-4只有82%的相似性。对噬菌体IME195进行了全基因组功能注释和进化分析。【结论】分离鉴定了一株粪肠球菌噬菌体,进行了生物学特性、全基因组测序和生物信息学深入分析,为噬菌体治疗多重耐药细菌奠定了基础。

关键词：粪肠球菌噬菌体生物学特性全基因组测序基因组分析

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不同培养条件下鼠疫菌PhoP/PhoQ的自调控模式研究

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军事医学 2017年第5期41卷 373-376页

作者：张义全方海红刘磊黄新祥杨瑞馥周冬生杨慧盈军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 江苏大学医学院江苏镇江212013

目的研究鼠疫耶尔森菌PhoP/PhoQ在不同培养条件下的自调控关系。方法 PCR扩增YPO1635启动子区DNA序列,并克隆入pRW50质粒β-半乳糖苷酶基因的上游,构建LacZ重组质粒,进而将该重组质粒转入鼠疫菌野生株(WT)和phoP突变株(ΔphoP)中,通过... 详细信息

目的研究鼠疫耶尔森菌PhoP/PhoQ在不同培养条件下的自调控关系。方法 PCR扩增YPO1635启动子区DNA序列,并克隆入pRW50质粒β-半乳糖苷酶基因的上游,构建LacZ重组质粒,进而将该重组质粒转入鼠疫菌野生株(WT)和phoP突变株(ΔphoP)中,通过测定二者中β-半乳糖苷酶活性差异来判定PhoP对YPO1635的调控关系。提取WT和ΔphoP的总RNA,采用引物延伸实验研究phoP的转录起始位点,并根据产物的丰度判断PhoP对phoP的调控关系。结果 LacZ结果表明,在低Mg^(2+)TMH和BHI培养基中,PhoP能激活YPO1635的转录,而在高Mg^(2+)TMH中,PhoP对YPO1635的转录无调控作用。引物延伸结果显示,phoP有两个转录起始位点G(-90)和A(-118)(分别记为P1和P2,翻译起始位点为+1),在低Mg^(2+)TMH中,PhoP能激活P1的转录,而对P2无调控作用;在高Mg^(2+)TMH中,PhoP对二者均无调控作用;在BHI中,PhoP对二者的转录均具抑制作用。结论PhoP/PhoQ的自调控关系随周围环境的变化而表现出不同的模式,这有利于鼠疫菌快速适应外界生存环境的改变。

关键词：鼠疫耶尔森菌 YPO1635 phoP 调控

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基于rDNA靶向测序和鸟枪法测序相结合的致病菌筛查

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中国病原生物学杂志 2017年第12期12卷 1169-1174页

作者：何鮦鮦孙强范航裴广倩王媛媛安小平米志强张湘莉兰黄勇童贻刚广西医科大学广西南宁530021 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的基于高通量测序技术,建立靶向测序和鸟枪法测序相结合的致病菌筛查方法,以期用于临床感染标本中可疑致病菌的快速检测。为临床治疗提供参考。方法通过计算机模拟建立分析策略并研究其可行性,然后通过已知细菌进行验证;应用该方法对... 详细信息

目的基于高通量测序技术,建立靶向测序和鸟枪法测序相结合的致病菌筛查方法,以期用于临床感染标本中可疑致病菌的快速检测。为临床治疗提供参考。方法通过计算机模拟建立分析策略并研究其可行性,然后通过已知细菌进行验证;应用该方法对临床样品进行检测,分析样品中可疑的致病菌。结果在计算机模拟分析的四组标本中,相对应的细菌种属的reads检出比例在总细菌reads数中均为最高。在用已知细菌进行验证的结果中,四种细菌相对应的属reads比例均达到标本总reads数的88%以上,种reads比例均达到标本总reads数的51%以上;三个真菌标本中相对应的真菌属reads比例均达到标本总reads数的91%以上,种reads比例均达到标本总reads数的40%以上。四个细菌样本和三个真菌样本相对应的细菌和真菌属reads和种reads检出比例分别是对应样本中含量最高的属和种,与实际操作的细菌投入量基本相符。计算机模拟分析和用已知细菌测试结果表明,利用16S/ITS全长序列扩增产物进行打断建库可用于细菌和真菌的检测。将rDNA靶向测序和鸟枪法测序相结合,在临床脑脊液中检出红球菌和假单胞菌,在血液和唾液中检出金黄色葡萄球菌。结论靶向测序提高了检测的灵敏性,rDNA靶向测序和鸟枪法测序结果相互印证,提高了病原体检测的准确性。两种测序方法相结合用于病原体检测更加合理有效。

关键词： rDNA靶向测序鸟枪法测序组合策略病原体检测

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丝状真菌质谱鉴定前处理方法及应用

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中华医学杂志 2017年第30期97卷 2379-2383页

作者：黄艳飞常峥白婕朱敏张明新王玫张桂李修远童贻刚王景林鲁辛辛首都医科大学附属北京同仁医院检验科 100730 北京市海淀医院检验科解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的建立并评价实验室自行研发的丝状真菌质谱鉴定前处理方法的可行性.方法复苏2014年1月至2016年12月北京同仁医院菌库中380株丝状真菌菌株,沙保弱葡萄糖琼脂平板（SDA）28 ℃培养至成熟状态,同时使用Bruker仪器推荐的垂直旋转法培养... 详细信息

目的建立并评价实验室自行研发的丝状真菌质谱鉴定前处理方法的可行性.方法复苏2014年1月至2016年12月北京同仁医院菌库中380株丝状真菌菌株,沙保弱葡萄糖琼脂平板（SDA）28 ℃培养至成熟状态,同时使用Bruker仪器推荐的垂直旋转法培养和本实验室研发的＂水平震荡法＂培养至足量菌落.3种方法培养菌株均采用＂改良磁珠提取法＂提取蛋白行质谱鉴定.结果380株真菌菌株,使用SDA培养时间需要3~10 d,鉴定到种和属的比率分别是47%和81%;使用Bruker仪器推荐方法培养时间需要5~7 d,鉴定到种和属的比率分别是76%和94%;＂水平震荡法＂培养时间只需1~2 d,鉴定到种和属的比率分别是96%和99%.＂水平震荡法＂和SDA培养法比较,差异有统计学意义（χ2=39.026,P〈0.01）,和仪器推荐的方法比较,差异有统计学意义（χ2=11.310,P〈0.01）.结论本实验室研发的＂水平震荡法＂和＂改良磁珠提取法＂优于仪器推荐的方法和SDA培养鉴定方法,可以应用到临床.

关键词：真菌水平震荡法改良磁珠提取法

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携带圣路易斯脑炎病毒特异基因片段的重组假病毒颗粒的构建与鉴定

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军事医学 2017年第3期41卷 194-198页

作者：张娜娜邓永强年庆功康晓平杨银辉秦成峰广西医科大学南宁530000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的制备含有圣路易斯脑炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒颗粒,旨在提供安全、可靠、稳定的核酸阳性质控品。方法根据armored RNA技术原理,构建携带含有SLEV prM基因片段的重组质粒pSE380-MS2-SLEV,转化大肠杆菌后利用IPTG进行诱导表达... 详细信息

目的制备含有圣路易斯脑炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒颗粒,旨在提供安全、可靠、稳定的核酸阳性质控品。方法根据armored RNA技术原理,构建携带含有SLEV prM基因片段的重组质粒pSE380-MS2-SLEV,转化大肠杆菌后利用IPTG进行诱导表达,三氯甲烷法纯化后利用透射电镜观察重组假病毒颗粒形态。通过DNaseⅠ和RNase A双酶消化实验评价重组假病毒颗粒的核酸酶耐受性,并结合温度敏感性实验分析假病毒颗粒中核酸片段的稳定性。利用荧光定量RT-PCR法对该假病毒颗粒进行验证。结果 PCR扩增和测序分析显示,pr M基因片段正确克隆至载体p SE380-MS2。经大肠杆菌表达可形成直径约为25 nm的均一、球形重组假病毒颗粒。核酸酶消化和温度敏感性实验表明假病毒样颗粒包装的病毒核酸能耐受核酶的降解,37℃条件下存放20 d仍保持稳定。荧光定量RT-PCR检测该假病毒颗粒检测限可达1.8×103拷贝/ml,且与同属的其他病毒无交叉反应。结论成功构建了含有SLEV prM基因片段的假病毒颗粒,具有良好的核酸酶耐受性和稳定性,可作为核酸阳性质控品对核酸提取与检测过程进行全程监控。

关键词：圣路易斯脑炎病毒假病毒阳性质控品

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鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的构建

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军事医学 2017年第10期41卷 800-804页

作者：高肖芳刘子中李文亮王红朵杨瑞馥韩延平安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的方法。方法在高拷贝质粒pBAD/HisA的基础上利用定点突变试剂盒制备一个可诱导的转录融合载体作为小RNA的过表达质粒。通过转录组测序、引物延伸并参考已有文献,预测... 详细信息

目的构建鼠疫耶尔森菌中长度在100 nt以内的小RNA缺失株及过表达菌株的方法。方法在高拷贝质粒pBAD/HisA的基础上利用定点突变试剂盒制备一个可诱导的转录融合载体作为小RNA的过表达质粒。通过转录组测序、引物延伸并参考已有文献,预测了目的小RNA的存在、大小以及转录起始位点等,将目的小RNA的全长导入到改造后的质粒中并构建小RNA的过表达菌株。结果与结论成功构建了小RNA sR01、sR02、sR03、HmsA 4株缺失株以及小RNA MicF、HmsA、CpxQ 3株过表达菌株。建立了基于λ-Red同源重组、100 nt以内短片段小RNA敲除方法和基于定点突变试剂盒改造质粒的小RNA过表达菌株构建方法。

关键词：鼠疫菌小RNA λ-Red同源重组过表达

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基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法

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军事医学 2017年第8期41卷 689-693页

作者：吴灿军律清宇郝淮杰赵成娜郑玉玲姜永强安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原。方法以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素... 详细信息

目的建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原。方法以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素的磁珠分离铕离子荧光微球-检测抗体-降钙素原-固相抗体-生物素复合物的均相免疫分析方法。用该法检测PCT重组抗原,通过Sigma Plot分析该法的最低检测限。结果 PCT重组抗原的标准曲线匹配二次函数,函数方程为Y=19170.12+75493.74X-26.00X2(r=0.9986),PCT重组抗原检测灵敏度为0.04 ng/ml。结论铕离子荧光微球可作为标记物应用于磁分离均相免疫分析方法,并在PCT重组抗原检测中获得较高的检测灵敏度。

关键词：降钙素原时间分辨荧光法铕离子荧光微球磁珠均相检测

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小RNA对细菌生物膜形成的调控研究进展

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军事医学 2017年第6期41卷 530-533,542页

作者：高肖芳刘子中李文亮杨瑞馥韩延平安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

小RNA在细菌的生长过程中发挥重要调控作用,在感受到外界信号,如营养物浓度、温度、pH值和渗透压的改变时,小RNA可通过影响靶标基因的表达以适应环境的变化。细菌由浮游状态向固体附着生长状态的转变过程中自身会产生一种细胞外基质,即... 详细信息

小RNA在细菌的生长过程中发挥重要调控作用,在感受到外界信号,如营养物浓度、温度、pH值和渗透压的改变时,小RNA可通过影响靶标基因的表达以适应环境的变化。细菌由浮游状态向固体附着生长状态的转变过程中自身会产生一种细胞外基质,即生物膜,其主要由蛋白质、多糖和DNA组成。最新研究表明,小RNA在调控细菌生物膜形成的系统中发挥着重要的作用。小RNA通过与靶标mRNA碱基配对或与调节蛋白相互作用,在细菌生物膜形成中发挥调控作用。该文综述了小RNA对细菌生物膜形成的调控机制和途径,阐述了3种经典的小RNA调控细菌生物膜形成的模型,以及小RNA调控对细菌生物膜形成的研究现状和发展方向。

关键词：小RNA 生物膜 c-di-GMP

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全沟硬蜱、森林革蜱及嗜群血蜱经卵传播新塔拉塞维奇立克次体的检测研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2017年第1期24卷 19-24页

作者：魏然江佳富蒋宝贵常巧呈刘洪波付雪曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 黑龙江八一农垦大学黑龙江大庆163319

本研究旨在明确新塔拉塞维奇立克次体是否可以在全沟硬蜱、森林革蜱及嗜群血蜱3种媒介蜱中经卵传播。以在东北林区采集的牛寄生饱血雌蜱为样本，在实验室条件下人工培育，以获得3种蜱的不同时期的形态，并使用PCR方法检测各虫态中新塔... 详细信息

本研究旨在明确新塔拉塞维奇立克次体是否可以在全沟硬蜱、森林革蜱及嗜群血蜱3种媒介蜱中经卵传播。以在东北林区采集的牛寄生饱血雌蜱为样本，在实验室条件下人工培育，以获得3种蜱的不同时期的形态，并使用PCR方法检测各虫态中新塔拉塞维奇立克次体的感染情况，从而研究新塔拉塞维奇立克次体在蜱生活周期中的传递规律。共采集牛寄生饱血雌蜱91只，其中全沟硬蜱14只，森林革蜱55只，嗜群血蜱24只。新塔拉塞维奇立克次体感染率为85．71％，5．45％，12．50％。卵的最低感染率分别为全沟硬蜱（2％）、森林革蜱（1．3％）、嗜群血蜱（1．1％），幼蜱的最低感染率分别为全沟硬蜱（5％）、森林革蜱（1．7％）、嗜群血蜱（2．2％）。且3种蜱雌蜱、卵、幼虫均检测到的新塔拉塞维奇立克次体，序列比对一致。感染的幼蜱均可通过叮咬使小鼠感染，三种蜱都能经卵传播新塔拉塞维奇立克次体。全沟硬蜱感染率高可能是东北林区新塔拉塞维奇立克次体的主要媒介蜱。

关键词：新塔拉塞维奇立克次体实验经卵传播全沟硬蜱森林革蜱嗜群血蜱

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