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为建立Cox.A16型手足口病乳鼠动物模型并进行免疫、致病特性研究。将临床分离的Cox.A16病毒株经蚀斑纯化,乳鼠驯化,最终获得1株能致死11日龄乳鼠的Cox.A16毒株,命名为TS10/08(GenBank Accession ***068829,Cox.A16-TS)。Cox.A16-TS感染1... 详细信息

为建立Cox.A16型手足口病乳鼠动物模型并进行免疫、致病特性研究。将临床分离的Cox.A16病毒株经蚀斑纯化,乳鼠驯化,最终获得1株能致死11日龄乳鼠的Cox.A16毒株,命名为TS10/08(GenBank Accession ***068829,Cox.A16-TS)。Cox.A16-TS感染11日龄C57BL/6J乳鼠后,观测临床疾病得分、体质量变化、死亡率并测定病毒载量、免疫分子、组织病理损伤等病毒、免疫、病理指标。结果表明,Cox.A16-TS毒株感染11日龄C57BL/6J乳鼠,其病毒毒力为50LD50/mL,感染后不同时期肌肉病毒载量均高于其他组织中,至4d达到高峰,后不断下降。至感染后6d发病达高峰时做病理检测,相对于脑组织,肌肉中有更严重的淋巴细胞浸润,引起更严重的炎性分子升高。血清中MCP-1,MIP-1alpha,MIP-1beta和CSF3动态变化,并在不同时间形成峰值。本试验初步建立了Cox.A16型手足口病乳鼠动物模型,为药物筛选、疫苗研发和免疫机理研究奠定了基础。

关键词： Cox A16 乳鼠免疫病理

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自然感染的宿主动物和病人体内汉城型汉坦病毒S片段末端序列多样性研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2013年第1期20卷 35-41页

作者：彭毅左曙青江佳富杨红曹务春中南大学湘雅医学院流行病与卫生统计学系长沙410013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071

在汉城型汉坦病毒（Seoulvirus，SEOV）长期感染的Vero—E6细胞过程中发现，病毒在持续感染过程中存在RNA3’末端序列缺失现象，可能对病毒的持续感染有重要作用。而自然感染的宿主动物或病人体内病毒RNA末端序列的变异情况并不清楚。... 详细信息

在汉城型汉坦病毒（Seoulvirus，SEOV）长期感染的Vero—E6细胞过程中发现，病毒在持续感染过程中存在RNA3’末端序列缺失现象，可能对病毒的持续感染有重要作用。而自然感染的宿主动物或病人体内病毒RNA末端序列的变异情况并不清楚。本文从SEOV感染的病例血块以及SEOV检测阳性的褐家鼠肺组织中提取RNA，测定病毒s片段末端序列，并进行RNA二级结构模拟。结果发现，自然感染的宿主动物褐家鼠体内的SEOVS片段5’末端、3’末端及双末端均可出现序列缺失，而感染病例体内的病毒仅在一个克隆检测到3’末端序列缺失。与长期感染的Vero．E6细胞感染模型中仅存在较短的3’末端序列缺失现象不同，宿主动物的克隆既有较短的3’末端序列缺失，也有5’末端和双末端序列缺失，另外还有典型的大片段序列缺失。不同序列缺失类型的RNA序列二级结构模型存在显著差异。自然感染的宿主动物和病人体内的SEOVS片段序列末端存在序列缺失多样性，但前者的多样化程度更高。因此我们认为这些序列缺失可能受宿主因素影响，并与病毒对宿主的持续感染相关。

关键词：汉城型汉坦病毒末端序列变异准种基因缺失

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一株保存的波瓦生病毒全基因组序列测定及分析

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生物技术通讯 2013年第3期24卷 355-357页

作者：张雨司炳银史永力康晓平户义李靖吴晓燕李裕昌祝庆余杨银辉军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 武警吉林省森林总队门诊部长春130021

目的:对保存的WJBC株波瓦生病毒进行全基因组序列测定和分析,阐明其与已报道毒株之间的关系。方法:将波瓦生病毒基因组编码区分11段进行RT-PCR扩增,扩增产物直接进行测序,非编码区采用RACE法进行扩增,扩增产物纯化并连接pGEM-T easy载... 详细信息

目的:对保存的WJBC株波瓦生病毒进行全基因组序列测定和分析,阐明其与已报道毒株之间的关系。方法:将波瓦生病毒基因组编码区分11段进行RT-PCR扩增,扩增产物直接进行测序,非编码区采用RACE法进行扩增,扩增产物纯化并连接pGEM-T easy载体后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑取阳性克隆鉴定后进行测序,用DNAstar软件将测序结果拼接得到全基因组序列。下载波瓦生病毒全基因组核苷酸序列,利用MEGA5.0软件构建系统进化发生树。结果与结论:WJBC株波瓦生病毒全基因组共11 839 nt,编码3415个氨基酸残基,病毒基因组5′端和3′端分别有111、483 nt的非编码区;进化树结果显示,WJBC株波瓦生病毒与LB株波瓦生病毒的亲缘性最高,可能为同一病毒株。

关键词：波瓦生病毒基因组 RT-PCR

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表达miR-192的重组腺病毒的构建及其在肝细胞中的表达分析

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生物技术通讯 2013年第1期24卷 8-12页

作者：代晓朋李军锋张红飞张伟赵光宇于虹郭彦周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 郑州大学公共卫生学院河南郑州450001

目的:构建表达miR-192的重组腺病毒,感染HepG2细胞建立miR-192高表达的细胞模型,以研究miR-192在肝细胞中的功能。方法:将miR-192前体基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack,构建miR-192穿梭载体pAdTrack-miR-192,经线性化和同源重组,构建重... 详细信息

目的:构建表达miR-192的重组腺病毒,感染HepG2细胞建立miR-192高表达的细胞模型,以研究miR-192在肝细胞中的功能。方法:将miR-192前体基因插入腺病毒穿梭载体pAdTrack,构建miR-192穿梭载体pAdTrack-miR-192,经线性化和同源重组,构建重组腺病毒载体pAd-miR-192;线性化后,在QBI-293A细胞中进行病毒包装;用包装成功的重组腺病毒感染HepG2细胞,72 h后收集细胞,提取总RNA,逆转录后进行定量PCR,检测miR-192和潜在靶分子视网膜母细胞瘤基因1(RB1)mRNA的变化。结果:获得670 bp的miR-192前体基因,经过穿梭载体后重组构建表达miR-192的腺病毒载体pAd-miR-192;将pAd-miR-192转染QBI-293A细胞,第8 d细胞病变及荧光的表达结果表明重组腺病毒成功包装;感染HepG2细胞后,定量PCR检测表明miR-192的表达较对照增加了835.87倍,同时检测到细胞中RB1 mRNA的表达显著降低。结论:构建了高效表达miR-192的腺病毒,建立了miR-192高表达的肝细胞模型,证明在肝细胞中抑制的RB1是miR-192靶分子,为后续miR-192在肝细胞中功能的研究奠定了基础。

关键词：腺病毒载体 miR-192基因肝癌细胞

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一种展示SARS冠状病毒受体结合区的重组枯草杆菌芽孢的制备及免疫原性分析

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生物技术通讯 2013年第3期24卷 342-346页

作者：苗雨张珍珍郭彦唐健邱洪杰于虹孙世惠寇志华赵光宇周育森安徽医科大学研究生学院安徽合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:利用枯草杆菌芽孢呈递技术制备表达SARS冠状病毒S蛋白受体结合区(RBD)的重组芽孢。方法:将枯草杆菌CotB基因构建到基因组整合质粒pDG1664中,再将RBD基因连接到CotB基因的下游,构建成重组质粒pDG1664-CotB-RBD,通过同源重组整合到PY... 详细信息

目的:利用枯草杆菌芽孢呈递技术制备表达SARS冠状病毒S蛋白受体结合区(RBD)的重组芽孢。方法:将枯草杆菌CotB基因构建到基因组整合质粒pDG1664中,再将RBD基因连接到CotB基因的下游,构建成重组质粒pDG1664-CotB-RBD,通过同源重组整合到PY-79枯草杆菌基因组中;利用红霉素抗性筛选重组菌并进行PCR和DNA测序鉴定,Western印迹鉴定重组菌芽孢表面RBD蛋白的表达情况;用表达RBD的重组芽孢以口服方式免疫小鼠,通过ELISA和流式细胞术检测重组芽孢的免疫原性。结果:制备出枯草杆菌基因组整合了RBD抗原基因的重组菌株RS1931,形成的重组芽孢表达相对分子质量约62×103的CotB-RBD融合蛋白;重组芽孢免疫的小鼠血清RBD抗原特异性IgG抗体滴度在末次免疫后2周可达1∶10 880,重组芽孢初免后18周的小鼠脾细胞中IFN-γ+CD4+、IL-4+CD4+和IFN-γ+CD8+T细胞比例上调,表明重组芽孢经口服免疫产生良好的体液免疫和细胞免疫应答。结论:针对SARS冠状病毒S蛋白RBD建立了枯草杆菌芽孢呈递技术方法,制备出在枯草杆菌芽孢表面稳定表达外源RBD蛋白的重组株,获得的重组芽孢具有良好的免疫原性,为开发芽孢呈递型SARS疫苗奠定了基础。

关键词：枯草杆菌芽孢 SARS冠状病毒受体结合区

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两株副溶血弧菌标准株的肠毒性及细胞毒性和溶血活性比较

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中华临床医师杂志（电子版） 2013年第6期7卷 154-156页

作者：马立芝郭李平王立祥王凤林刘亚华赵志兵张广州周冬生邱业峰武警总医院急救医学中心北京100039 军事医学科学院实验动物中心微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的评价两株副溶血弧菌标准株在肠毒性、细胞毒性和溶血活性上的毒力差异。方法通过兔回肠袢实验、Raw264细胞毒性实验和兔红细胞溶血实验比较临床分离株RIMD2210633(tdh+、T3SS1+、T3SS2α+、T3SS2β-、trh-)和环境分离株S251(tdh-、T... 详细信息

目的评价两株副溶血弧菌标准株在肠毒性、细胞毒性和溶血活性上的毒力差异。方法通过兔回肠袢实验、Raw264细胞毒性实验和兔红细胞溶血实验比较临床分离株RIMD2210633(tdh+、T3SS1+、T3SS2α+、T3SS2β-、trh-)和环境分离株S251(tdh-、T3SS1+、T3SS2α-、T3SS2β-、trh-)的毒力表型差异。结果 S251株产生的肠积液量、对Raw264细胞的细胞毒性均弱于RIMD2210633株[(12.37±1.07)mlvs.(1.50±1.50)ml;(35.69±3.07)%vs.(14.07±0.91)%],且有统计学差异(P<0.05),另外S251株对兔红细胞的相对溶血活性明显弱于RIMD2210633株,且具有统计学差异(P<0.01),这与基因预测结果相符。结论 S251株的肠毒性、Raw264细胞毒性和溶血活性均弱于RIMD2210633株,该两株菌可作为后续副溶血弧菌致病机制研究的模式菌株。

关键词：弧菌,副溶血性肠毒性细胞毒性溶血活性

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淮南裸蠓属一新种(双翅目:蠓科)

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中国媒介生物学及控制杂志 2013年第5期24卷 444-445页

作者：宋福春王健虞以新安徽理工大学医学院安徽淮南232001 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

报道并描述发现于淮南地区的裸蠓属一新种,毛毛裸蠓(新种,Atrichopogon comaSong,WangetYu,***),新种模式标本保存于军事医学科学院微生物流行病研究所医学昆虫标本馆。

关键词：蠓科裸蠓属新种

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吉林地区山羊中泰勒虫感染检测及其序列分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2013年第1期20卷 12-15页

作者：张圆江佳富詹琳孙毅曹务春中南大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系长沙410078 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

泰勒虫病是由泰勒科（Theileriidae）泰勒属Theileria原虫引起经蜱传播的一种疾病，可以侵袭羊的网状内皮系统细胞和红细胞，本次研究的目的是了解我国吉林地区山羊中泰勒虫的感染情况以及主要的基因型。在吉林珲春地区采集70份山羊血... 详细信息

泰勒虫病是由泰勒科（Theileriidae）泰勒属Theileria原虫引起经蜱传播的一种疾病，可以侵袭羊的网状内皮系统细胞和红细胞，本次研究的目的是了解我国吉林地区山羊中泰勒虫的感染情况以及主要的基因型。在吉林珲春地区采集70份山羊血液标本。基于泰勒虫18SrRNA基因，分两段设计扩增全长的属特异引物，对采集到的血液样本进行PCR检测，将扩增产物进行测序，与GenBank中注册的核苷酸序列进行同源性比较，采用MEGA5．0软件进行遗传发育分析。结果表明在吉林珲春地区采集到的山羊血液标本中有51只（72．9％）山羊感染了泰勒虫，通过测序获得近全长I600bp的泰勒虫基因序列（KC429038）。经过Blast序列比对分析，与吕氏泰勒虫Theilerialuwenshuni最接近，和rluwenshuni（JX469518）相差一个碱基，同源性为99％。从构建的系统发育树可以看出本研究所获得序列与吕氏泰勒虫rluwenshuni最接近位于同一小分支。本研究说明我国吉林地区山羊中泰勒虫感染较为普遍，初步认为吕氏泰勒虫可能为本地区的一个较为流行的基因型。

关键词：泰勒虫山羊 18S rRNA 序列分析

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