检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2012年第1期36卷 73-76页

作者：宋克玉李晓峰江振友秦成峰暨南大学医学院微生物与免疫学教研室广州510632 病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

抗体依赖性感染增强作用(antibody-dependent enhancement,ADE)在登革病毒的致病机制中发挥重要作用。在存在亚中和浓度抗体的条件下,登革病毒可通过Fc受体或补体受体等途径进入靶细胞,进而导致ADE的发生。ADE的发生受病毒和宿主一系列... 详细信息

抗体依赖性感染增强作用(antibody-dependent enhancement,ADE)在登革病毒的致病机制中发挥重要作用。在存在亚中和浓度抗体的条件下,登革病毒可通过Fc受体或补体受体等途径进入靶细胞,进而导致ADE的发生。ADE的发生受病毒和宿主一系列复杂因素的调节,直接影响患者的临床表现和病情进展,对其作用机制的研究有助于加深对登革出血热发病机制的认识,对登革热疫苗以及治疗性抗体的研发具有重要意义。本文综述了登革病毒ADE的研究进展。

关键词：登革病毒抗体依赖性感染增强疫苗抗体

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shRNA随机文库结合TK自杀基因筛选靶向HIV-1 LTR相关宿主因子

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中国生物工程杂志 2012年第9期32卷 48-54页

作者：李建彬米志强安小平谭莉陈斌王晓娜范华昊张文慧张博方祥童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 华南农业大学食品学院广州510642

构建shRNA随机文库与HIV-1 LTR启动胸苷激酶基因(TK基因)稳定表达的稳定细胞系HEK293/TK,将两者结合起来,筛选靶向HIV-1 LTR相关宿主因子。方法:通过化学合成含有19个随机脱氧核苷酸的发夹结构,将其退火补平后与合成的接头Linker连接进... 详细信息

构建shRNA随机文库与HIV-1 LTR启动胸苷激酶基因(TK基因)稳定表达的稳定细胞系HEK293/TK,将两者结合起来,筛选靶向HIV-1 LTR相关宿主因子。方法:通过化学合成含有19个随机脱氧核苷酸的发夹结构,将其退火补平后与合成的接头Linker连接进行PCR反应,将PCR产物酶切后置于慢病毒载体pLenti-U6启动子下游由此构建shRNA随机文库;利用重叠PCR将HIV-1 LTR片段和TK基因连接起来,连接产物经酶切后与pcDNA3.1载体连接;将连接正确的质粒转染HEK293细胞同时用G418加压筛选获得稳定细胞系HEK293/TK;将所获得的文库质粒包装成慢病毒后侵染所构建的HEK293/TK细胞系,通过加入药物GCV进行加压筛选获得存活细胞。结果:成功筛选到加药后存活下来的细胞,抽提细胞基因组,采用巢式PCR扩增目的干扰序列并用Western blot对干扰序列进行验证,鉴定获得一个克隆所表达的shRNA能对TK基因的表达起到抑制作用,通过测序分析获得其干扰序列,该序列很有可能针对HIV-1 LTR某宿主相关因子。结论:成功构建了一种筛选HIV-1 LTR相关宿主因子的方法,筛选所得序列可以定位到具体相关宿主因子,为靶向筛选抗HIV-1药物提供了重要手段。

关键词：慢病毒载体 shRNA随机文库人类免疫缺陷病毒(HIV-1) 末端重复序列(LTR) TK自杀基因

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妥洛特罗控释透皮贴剂的处方、工艺及其体外透皮吸收研究

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军事医学 2012年第1期36卷 44-48页

作者：李海晶张东娜唐玲杨柳窦媛媛王洪权广西医科大学南宁530021 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对脂溶性妥洛特罗贴剂的处方与制备工艺进行筛选和研究,获得一种有效控制药物透过的工艺方法。方法采用正交设计实验,考察聚异丁烯B50和PB1300与环烷烃油Naphsol 200(N200)等3种因素对妥洛特罗药物透过速率、贴剂持黏力及初黏力的影... 详细信息

目的对脂溶性妥洛特罗贴剂的处方与制备工艺进行筛选和研究,获得一种有效控制药物透过的工艺方法。方法采用正交设计实验,考察聚异丁烯B50和PB1300与环烷烃油Naphsol 200(N200)等3种因素对妥洛特罗药物透过速率、贴剂持黏力及初黏力的影响,确定最优处方;考察不同的涂布方法对妥洛特罗贴剂透皮速率的影响,得到最佳制备工艺。结果与结论以最优处方配比B50∶PB1300∶N200=1.5∶1∶1,确立了药胶用量比为2∶1的两层涂布法为最佳工艺方法。获得的贴剂黏性适宜,达到了匀速、稳态透皮的制剂学要求。

关键词：妥洛特罗透皮贴剂处方工艺研究

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多种食源性致病菌的基因芯片检测技术

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解放军医学杂志 2012年第8期37卷 765-769页

作者：高兴曲险峰孙伟李华宇辛文文高姗康琳王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室解放军63850部队防疫检验及环境监测所

目的探讨随机PCR结合基因芯片技术用于多种食源性致病菌筛查检测的可行性。方法利用Clustal X和Oligo 6.0软件设计探针,进行生物信息学比对验证特异性,探针末端修饰后合成并制备基因芯片。使用锚定随机引物扩增细菌基因组DNA,偶联荧光... 详细信息

目的探讨随机PCR结合基因芯片技术用于多种食源性致病菌筛查检测的可行性。方法利用Clustal X和Oligo 6.0软件设计探针,进行生物信息学比对验证特异性,探针末端修饰后合成并制备基因芯片。使用锚定随机引物扩增细菌基因组DNA,偶联荧光染料的扩增产物与芯片杂交后扫描检测。对随机PCR及杂交反应等一系列检测条件进行优化。选取16种病原细菌进行芯片特异性验证,使用4种食源性致病菌DNA进行芯片灵敏度检测及重复性评价,制备细菌DNA混合样本和痢疾志贺菌模拟水污染样本对芯片检测效能进行初步考核。结果 9种食源性致病菌获得阳性结果,基因组DNA检测灵敏度102～103pg/μl,芯片重复性变异系数(CV)值<15%,混合样本检测与预期结果一致,最低可检测水样本中痢疾志贺菌的最低浓度为3.54×105cfu/ml。结论初步建立的基于随机引物PCR的基因芯片技术进行多种食源性致病菌检测的方法,为病原细菌高通量筛查检测提供了一种新的思路。

关键词：食源性致病菌寡核苷酸序列分析随机扩增多态DNA技术

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Luminex液相芯片技术检测6种虫媒病毒方法的建立

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解放军医学杂志 2012年第5期37卷 459-463页

作者：范丽李裕昌康晓平林方魏婧靖杨银辉熊正英陕西师范大学体育学院西安710062 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立森林脑炎病毒(TBEV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、辛得比斯病毒(SINV)、西尼罗病毒(WNV)、东部马脑炎病毒(EEEV)、登革热病毒(DENV) 6种虫媒病毒的液相芯片检测技术,并对该方法进行评价。方法制备6种虫媒病毒的特异性单克隆抗体,... 详细信息

目的建立森林脑炎病毒(TBEV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、辛得比斯病毒(SINV)、西尼罗病毒(WNV)、东部马脑炎病毒(EEEV)、登革热病毒(DENV) 6种虫媒病毒的液相芯片检测技术,并对该方法进行评价。方法制备6种虫媒病毒的特异性单克隆抗体,检测抗体标记生物素,捕获抗体偶联荧光聚苯乙烯微球,建立双抗体夹心的液相芯片检测技术,利用Luminex 200分析系统对6种虫媒病毒分别进行单一、多重液相芯片检测。结果将平均荧光强度的判定阈值定为背景对照的2倍可对上述6种虫媒病毒进行有效鉴定。多批次实验均能对6种单一病毒样本和混合病毒样本进行准确鉴定,未出现交叉反应,批次间变异系数(CV)均小于7%,表明该方法的稳定性和特异性均较好。同时对该方法的敏感性进行鉴定,结果表明检测TBEV、WNV、JEV、SINV、EEEV、DENV的敏感性分别达到25.00、781.25、781.25、390.63、781.25、1562.5pfu/ml。该方法与ELISA相比具有灵敏性高、重复性好、节省样本和时间等优点,特异性相当。结论通过制备特异性单克隆抗体,成功建立了可同时检测6种虫媒病毒的液相芯片检测技术平台。该平台对于病原体的检测具有较好的应用前景。

关键词：芯片分析技术虫媒病毒敏感性与特异性

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猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_0272的表达、纯化及生物活性分析

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中国人兽共患病学报 2012年第5期28卷 457-460页

作者：陈哲郑玉玲郝淮杰律清宇任志强王涛姜永强吕淑霞沈阳农业大学生物科学技术学院沈阳110866 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室北京100101

目的制备获得高纯度的重组SSU05_0272蛋白,并研究其对细胞因子的调控。方法以05ZYH33基因组为模版,PCR扩增SSU05_0272基因,构建表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达。上清表达蛋白先后经过镍亲和层析和离子交换层析方法进行... 详细信息

目的制备获得高纯度的重组SSU05_0272蛋白,并研究其对细胞因子的调控。方法以05ZYH33基因组为模版,PCR扩增SSU05_0272基因,构建表达质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并诱导表达。上清表达蛋白先后经过镍亲和层析和离子交换层析方法进行纯化。实时定量PCR方法检测纯化后的SSU05_0272蛋白与人脑微血管内皮细胞作用后其细胞因子的转录水平变化。结果制备的SSU05_0272蛋白具有较高的纯度,RT-PCR结果显示,SSU05_0272蛋白与人脑微血管内皮细胞作用后能上调IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β的表达,下调IL-12P40的表达。结论 SSU05_0272蛋白能够调控促炎症细胞因子和趋化因子转录水平变化,提示其在猪链球菌致炎症反应中起重要作用。

关键词：猪链球菌 SSU05_0272 细胞因子

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从大容量噬菌体抗体库中筛选抗Acr蛋白人源单链抗体

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中国生物工程杂志 2012年第9期32卷 22-27页

作者：王晓娜米志强安小平李建彬范华昊张文慧张博黄勇周丽君童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军海军总医院中心研究室北京100037

目的:从天然的大容量噬菌体抗体库中筛选特异的抗结核分枝杆菌晶体蛋白(alpha-crystallin Acr)的人源抗体。方法:以结核分枝杆菌Acr蛋白包被免疫管,通过对噬菌体抗体库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的过程从大容量抗体库中筛选特... 详细信息

目的:从天然的大容量噬菌体抗体库中筛选特异的抗结核分枝杆菌晶体蛋白(alpha-crystallin Acr)的人源抗体。方法:以结核分枝杆菌Acr蛋白包被免疫管,通过对噬菌体抗体库进行4轮"吸附-洗脱-扩增"的过程从大容量抗体库中筛选特异性抗结核分枝杆菌Acr蛋白的抗体,并对可变区序列进行了测序分析。将特异性的噬菌体抗体感染HB2151菌,经IPTG诱导表达,制备了抗结核分枝杆菌Acr蛋白的可溶性单链抗体;对其序列和抗原结合活性进行分析鉴定。结果:经过4轮筛选,获得了43个与结核分枝杆菌Acr蛋白结合的阳性克隆,其中29个特异结合的克隆;测序分析有26不同的可变区片段;通过可溶性单链抗体(scFv)表达筛选到14株特异性结合Acr蛋白的可溶性单链抗体克隆;经过基因测序,分析了可变区基因的亚群。成功制备了可溶性单链抗体。Westren blotting分析证实筛选的人源单链抗体能与天然蛋白结合。结论:利用单链大容量抗体库获得抗结核分枝杆菌Acr蛋白的噬菌体抗体并且成功制备抗结核分枝杆菌Acr天然蛋白的可溶性单链抗体,为今后的研究和应用奠定基础。

关键词：结核分枝杆菌 Acr 蛋白噬菌体抗体库单链抗体

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大流行甲型H1N1流感病毒变异株的小鼠感染实验研究

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军事医学 2012年第7期36卷 508-511页

作者：刘志辉姜涛刘娟年庆功秦鄂德冉多良秦成峰新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对甲型H1N1流感病毒变异株的小鼠感染特征进行观察。方法经过体外鸡胚/MDCK细胞传代和筛选,获得1株甲型H1N1流感病毒变异株(vCA07);使用不同剂量流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠后,计算半数致死量和半数感染量,观察小鼠感染后的体质量... 详细信息

目的对甲型H1N1流感病毒变异株的小鼠感染特征进行观察。方法经过体外鸡胚/MDCK细胞传代和筛选,获得1株甲型H1N1流感病毒变异株(vCA07);使用不同剂量流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠后,计算半数致死量和半数感染量,观察小鼠感染后的体质量变化、肺部病毒增殖、肺部组织病理变化等。结果与野生型毒株相比,甲型H1N1流感病毒变异株对BALB/c小鼠的致病性显著提高,其可在小鼠肺组织中高效增殖,并导致显著的病理损伤。结论甲型H1N1流感病毒变异株感染特征得以明确,为进一步建立高致病性甲型H1N1流感病毒的小鼠感染模型以及大流行甲型H1N1流感病毒致病机制的研究奠定了基础。

关键词：甲型H1N1流感病毒动物模型突变

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鼠疫耶尔森菌Ⅲ型分泌系统相关蛋白β-内酰胺酶报告系统的建立

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军事医学 2012年第9期36卷 658-661,672页

作者：韩伟谭亚芳杨慧盈郭兆彪杨瑞馥伏小平杜宗敏甘肃农业大学动物医学院兰州730070 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)Ⅲ型分泌系统(T3SS)相关蛋白β-内酰胺酶(TEM-1β-lactamases,Bla)报告基因载体,旨在运用本系统检测鼠疫菌待测蛋白能否转运至宿主细胞内。方法将TEM基因克隆入pA-CYC184载体中,构建用于鼠疫菌研究的TEM报... 详细信息

目的构建鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)Ⅲ型分泌系统(T3SS)相关蛋白β-内酰胺酶(TEM-1β-lactamases,Bla)报告基因载体,旨在运用本系统检测鼠疫菌待测蛋白能否转运至宿主细胞内。方法将TEM基因克隆入pA-CYC184载体中,构建用于鼠疫菌研究的TEM报告基因载体。把待分析的鼠疫菌基因及启动子区克隆入TEM基因上游,使鼠疫菌蛋白与TEM蛋白融合表达。将鼠疫菌基因-TEM融合表达载体电转化到鼠疫菌中,并感染HeLa细胞2 h后,加入CCF2-AM底物,在激光共聚焦显微镜下观察结果。结果与结论应用本系统检测了YopK-Bla、YscK-Bla、YscL-Bla和YscX-Bla进入宿主细胞的情况,YopK-Bla和YscX-Bla菌株感染的HeLa细胞呈蓝色,YscK-Bla和YscL-Bla菌株感染的HeLa细胞呈绿色,表明YopK及YscX可以进入宿主细胞,而YscK和YscL则不能。本研究成功地构建了适于鼠疫菌的TEM报告基因系统,该系统可作为分析其他鼠疫菌蛋白能否在感染的过程中进入宿主细胞的工具,为鼠疫菌T3SS相关蛋白致病机制研究奠定了基础。

关键词：鼠疫耶尔森菌 T3SS β-内酰胺酶报告基因质粒聚合酶链反应

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虫媒黄病毒NS5蛋白的生物学功能研究进展

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军事医学 2012年第1期36卷 70-72页

作者：周希珍赵慧高岚秦成峰兰州大学生命科学学院兰州730000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

虫媒黄病毒包括一大类对人类致病的病原体,基因组为单股正链RNA,依次编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。其中,非结构蛋白NS5具有RNA依赖性RNA聚合酶、甲基转移酶等多种酶活性,在病毒基因组的复制过程中发挥关键作用。最近的研究发现,NS5... 详细信息

虫媒黄病毒包括一大类对人类致病的病原体,基因组为单股正链RNA,依次编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。其中,非结构蛋白NS5具有RNA依赖性RNA聚合酶、甲基转移酶等多种酶活性,在病毒基因组的复制过程中发挥关键作用。最近的研究发现,NS5能够通过多种机制调控宿主的抗病毒反应。NS5的多功能特点使其成为潜在的抗病毒药物靶点并受到广泛关注。本文综述了虫媒黄病毒NS5蛋白生物学功能的主要进展。

关键词：虫媒黄病毒 NS5 RNA依赖的RNA聚合酶甲基转移酶干扰素反应

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