检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2011年第6期27卷 494-498页

作者：刘鑫段长松李仲王校伟赵忠鹏王希良中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对5株EV71分离株(LCH01、LCH02、BJ01、BJ02、AH01)进行毒力、免疫原性和基因组的比较分析。方法分别用5株EV71分离株攻击Balb/c乳鼠,比较毒力差异;免疫6～8周龄Balb/c小鼠后收集血清,ELISA检测抗体效价,微量中和实验检测中和抗体效... 详细信息

目的对5株EV71分离株(LCH01、LCH02、BJ01、BJ02、AH01)进行毒力、免疫原性和基因组的比较分析。方法分别用5株EV71分离株攻击Balb/c乳鼠,比较毒力差异;免疫6～8周龄Balb/c小鼠后收集血清,ELISA检测抗体效价,微量中和实验检测中和抗体效价;反转录获得5株EV71的全长cDNA进行全基因组测序;最后,用CLC Main Workbench 5.5软件对序列进行比较分析。结果通过对VP1基因的比较分析发现,这5株EV71分离株均为C4a亚型。1周龄Balb/c小鼠经脑部注射LCH01株,表现出后肢瘫痪和后继死亡;而注射其它4株EV71的小鼠在观察了14 d之后仍然存活。5株EV71血清抗体效价为210～211,中和抗体效价为27～28,无显著差异。LCH01毒株与其它几株序列相比,在5′-NTR、3′-NTR、3D等处均有明显差异。结论这5株EV71分离株为近几年流行的C4a亚型,具有较高的免疫原性;LCH01毒株的毒力高于其它几株,从基因组水平上找到了差异序列,这为EV71疫苗评价和致病机制研究提供了实验数据和实验材料。

关键词：手足口病 EV71病毒毒力免疫原性序列分析

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志贺菌检测用抗原研究进展

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军事医学 2011年第11期35卷 877-879页

作者：刘慧莹端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 解放军307医院呼吸科北京100071

志贺菌是细菌性痢疾的病原体,目前检测手段主要为常规生化法、免疫学及分子生物学方法,其中免疫学方法快速、便捷,实用性较强。本文综述了志贺菌免疫学检测用抗原的研究进展。

关键词：志贺菌快速检测抗原

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气溶胶沉降模拟方法研究进展

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军事医学 2011年第8期35卷 627-630页

作者：刘克洋李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术研究中心北京100071

对吸入颗粒物致病作用的评估,需要了解气溶胶颗粒在呼吸道中的沉积特征。由于气溶胶进入呼吸道引发的呼吸道疾病致病机制研究和临床药物气溶胶吸入治疗的需要,人们越发关注如气溶胶颗粒在呼吸道特定区域滞留率,研究气溶胶粒子在呼吸道... 详细信息

对吸入颗粒物致病作用的评估,需要了解气溶胶颗粒在呼吸道中的沉积特征。由于气溶胶进入呼吸道引发的呼吸道疾病致病机制研究和临床药物气溶胶吸入治疗的需要,人们越发关注如气溶胶颗粒在呼吸道特定区域滞留率,研究气溶胶粒子在呼吸道中分布和沉降比例的关系。这些都需要借助沉降模型来模拟颗粒的区域沉积特征。沉降模型经过半个多世纪的发展,已经形成了成熟的分析模型。计算机流体动力学(CFD)模拟技术的出现,让沉降模拟进入了一个崭新的时代。该文综述了目前研究气溶胶沉降的主要方法和肺模型的发展趋势。

关键词：沉降模拟气溶胶计算机流体动力学肺模型支气管树

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气溶胶粒子在呼吸道沉降的计算机流体动力学模拟方法研究进展

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军事医学 2011年第2期35卷 153-157页

作者：刘克洋李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术研究中心北京100071

不论是吸入危害评估还是药物气溶胶的靶向治疗,都需要了解气溶胶颗粒在呼吸道中的区域沉积特征。随着科技的进步,已经可以利用计算机流体动力学模拟技术(CFD)生成逼真的呼吸道模型,并在其中模拟复杂的气流传输特征,产生相对准确的沉降... 详细信息

不论是吸入危害评估还是药物气溶胶的靶向治疗,都需要了解气溶胶颗粒在呼吸道中的区域沉积特征。随着科技的进步,已经可以利用计算机流体动力学模拟技术(CFD)生成逼真的呼吸道模型,并在其中模拟复杂的气流传输特征,产生相对准确的沉降结果。该文综述了CFD模拟技术的研究进展,阐述了微米或纳米级颗粒沉降的主要公式和目前运用该方法的一般步骤。

关键词： CFD模拟肺模型气溶胶沉降

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布鲁杆菌M16株pgm基因突变活菌苗株的构建和鉴定

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中国地方病学杂志 2011年第3期30卷 289-293页

作者：李鹏朱嘉婧罗德炎王希良空军航空医学研究所附属医院检验科北京100089 吉林大学中日联谊医院耳鼻咽喉头颈外科军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室

目的构建自杀性质粒载体,对布鲁杆菌M16株pgm基因进行精确突变,并对得到的pgm基因突变活菌苗株进行鉴定.方法在puc19质粒载体上构建正向筛选标记--蔗糖敏感基因和反向筛选标记--卡那霉素抗性基因融合序列;用卡那霉素抗性基因融合序列... 详细信息

目的构建自杀性质粒载体,对布鲁杆菌M16株pgm基因进行精确突变,并对得到的pgm基因突变活菌苗株进行鉴定.方法在puc19质粒载体上构建正向筛选标记--蔗糖敏感基因和反向筛选标记--卡那霉素抗性基因融合序列;用卡那霉素抗性基因融合序列对布鲁杆菌pgm基因进行修饰（插入突变）,完成pucS1.6K自杀性质粒载体的构建;通过电转化获得布鲁杆菌M16株pgm基因突变菌株;应用PCR方法对pgm基因突变菌株进行鉴定.结果鉴定结果显示,布鲁杆菌M16株pgm基因在卡那霉素抗性基因插入后失活,突变后的布鲁杆菌M16株pgm基因DNA片段长度约为3525 bp,与预期的相符,布鲁杆菌M16株pgm基因突变菌株构建成功.结论构建的自杀性质粒载体能成功对布鲁杆菌进行精确毒力基因突变,为获得布鲁杆菌突变株提供了一个有效的技术平台,也为新型减毒活疫苗的研制奠定了基础.

关键词：布鲁杆菌菌苗 pgm基因基因融合诱变插入

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吗啡对拉米夫定抗HIV-1药效影响的体外MT2细胞实验研究

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中华流行病学杂志 2011年第7期32卷 705-708页

作者：梁冰玉庄道民蒋俊俊刘思扬苏齐鉴李敬云梁浩广西艾滋病防治研究重点实验室培育基地广西医科大学公共卫生学院南宁530021 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的探讨吗啡是否影响拉米夫定（3TC）抗H1V-1的抗病毒效果。方法MT2细胞随机分为吗啡＋3TC、吗啡＋纳洛酮＋3TC、纳洛酮＋3TC处理组及3TC对照组和病毒对照组；用纳洛酮处理相应组的MT2细胞0．5h后，加入吗啡处理细胞24h，然后每组细胞... 详细信息

目的探讨吗啡是否影响拉米夫定（3TC）抗H1V-1的抗病毒效果。方法MT2细胞随机分为吗啡＋3TC、吗啡＋纳洛酮＋3TC、纳洛酮＋3TC处理组及3TC对照组和病毒对照组；用纳洛酮处理相应组的MT2细胞0．5h后，加入吗啡处理细胞24h，然后每组细胞加入等量的HIV-1ⅢB病毒和3TC溶液；病毒感染细胞第3、4、5和6天，取培养上清，用ELISA法检测培养上清的HIU-1 p24抗原，根据p24抗原表达量，计算各个处理组的3TC抗HIV-1p24抗原抑制率。结果HIV-1感染细胞第3和第4天，吗啡＋3TC处理组的3TC抗HIV-1p24抗原抑制率最低，与3TC对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；吗啡＋纳洛酮＋3TC处理组和纳洛酮＋3TC处理组的3TC抗HIV-1p24抗原抑制率相当，两组差异无统计学意义（P〉0．05），这两组分别与3TC对照组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）；病毒感染细胞第5和第6天，各处理组的3TC抗HIV-1p24抗原抑制率与3TC对照组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）；各个处理组的3TC抗HIV-1p24抗原抑制率随感染时间延长而降低，呈现时间一效应关系。结论吗啡在病毒感染初期能降低3TC的抗HIV-1药效；纳洛酮能够阻滞吗啡降低3TC的抗HIV-1药效作用。

关键词：艾滋病1型病毒吗啡拉米夫定抑制率

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结核分枝杆菌ESAT-6蛋白的重组表达及膜定位研究

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中国生物工程杂志 2011年第5期31卷 55-59页

作者：李浩殷瑛毛亚丽董大勇张军付玲郭继红徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京10007 空军总医院药学部北京1OO142

从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因,克隆入pET21a(+)载体。将成功构建的pET21a(+)-ESAT-6重组质粒转化入感受态BL21(DE3)中,经诱导表达后,使用SDS-PAGE和Western blot鉴定。超声破碎后发现目的蛋白以可溶性表达形式存在,经过... 详细信息

从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因,克隆入pET21a(+)载体。将成功构建的pET21a(+)-ESAT-6重组质粒转化入感受态BL21(DE3)中,经诱导表达后,使用SDS-PAGE和Western blot鉴定。超声破碎后发现目的蛋白以可溶性表达形式存在,经过Ni-NTA柱和DEAE-SepharoseTMFast Flow柱纯化,获得纯度约为95%的重组ESAT-6蛋白。将目的蛋白和RAW264.7细胞共孵育后,使用免疫荧光技术发现ESAT-6蛋白能够直接和RAW264.7的细胞膜结合。

关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 纯化免疫荧光

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沙门菌属pad蛋白的原核表达及抗原性的鉴定

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军事医学 2011年第8期35卷 593-595页

作者：陈超卢永峰刘慧莹宋立华左庭婷何君檀华朱虹端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京10007l 解放军307医院呼吸科北京100071

目的在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体。方法利用PCR方法从肠炎沙门菌中扩增出pad基因,构建pET-32a(+)-pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导... 详细信息

目的在大肠杆菌中表达沙门菌属pad蛋白,纯化后制备兔抗pad抗体。方法利用PCR方法从肠炎沙门菌中扩增出pad基因,构建pET-32a(+)-pad重组表达质粒;将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,筛选阳性克隆,测序鉴定后,优化IPTG浓度、诱导温度和诱导时间以诱导重组蛋白的表达;以纯化的pad蛋白免疫家兔,制备抗pad多克隆抗体并进行鉴定。结果与结论成功扩增得到pad基因,经双酶切和测序证实重组表达质粒构建成功,经过诱导条件的优化,在大肠杆菌中表达出相对分子质量为41×103的目的蛋白;纯化的重组蛋白免疫家兔后,能够有效地刺激家兔产生特异性抗体,经琼脂糖双向扩散测定抗血清效价达到1:32以上。为进一步研制沙门菌属体外快速检测试剂打下了基础。

关键词：沙门菌属 pad蛋白原核表达抗原性

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酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5相互作用的蛋白

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解放军医学杂志 2011年第4期36卷 382-384页

作者：周希珍赵慧李晓峰邓永强秦成峰秦鄂德高岚兰州大学生命科学学院兰州730000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生... 详细信息

目的应用酵母双杂交技术筛选与乙型脑炎病毒NS5蛋白相互作用的宿主蛋白。方法构建表达乙型脑炎病毒NS5蛋白的诱饵质粒pSos-NS5,经自激活和毒性实验后对人脐静脉内皮细胞cDNA文库进行筛选,挑取37℃条件下在缺失亮氨酸和尿嘧啶培养基上生长的克隆,利用一对一酵母回复性杂交实验进行验证,然后测定阳性克隆插入片段序列,通过Blast分析确定可能与NS5相互作用的蛋白。结果构建的诱饵载体pSos-NS5对酵母宿主无毒性,且无自激活活性。经过筛选得到3个阳性克隆(10,11,4′6号克隆),经测序和Blast分析,初步确定4′6号克隆编码的TC21蛋白可能与NS5发生相互作用。结论经酵母双杂交技术筛选到一种可能与NS5蛋白具有相互作用的人类蛋白,为深入探讨乙型脑炎病毒NS5蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词：酵母双杂交乙型脑炎病毒 NS5蛋白

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鼠疫菌H-NS蛋白的表达与纯化及其DNA结合活性分析

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微生物学报 2011年第5期51卷 615-621页

作者：张义全高鹤王丽罗张谭亚芳郭兆彪杨瑞馥周冬生军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3的表达系统,表达出有活性的鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)调控子蛋白H-NS,为进一步研究H-NS的转录调控奠定基础。【方法】PCR扩增鼠疫菌201株hns基因的编码区,将其直接克隆入pET28a质粒中,再将pET28a-hn... 详细信息

【目的】利用大肠杆菌BL21λDE3的表达系统,表达出有活性的鼠疫耶尔森氏菌(以下简称鼠疫菌)调控子蛋白H-NS,为进一步研究H-NS的转录调控奠定基础。【方法】PCR扩增鼠疫菌201株hns基因的编码区,将其直接克隆入pET28a质粒中,再将pET28a-hns重组质粒转入大肠杆菌BL21λDE3菌株中,所得菌株经IPTG诱导后能表达出鼠疫菌His-H-NS蛋白;通过体外的凝胶迁移实验(EMSA)和DNaseⅠ足迹实验对His-H-NS蛋白与DNA的结合活性进行分析。【结果】成功表达出有活性的鼠疫菌His-H-NS蛋白,该蛋白对鼠疫菌pH6抗原基因(psaA、psaE)及rovA基因均有结合活性。【结论】鼠疫菌His-H-NS具有DNA结合活性,说明H-NS能调控鼠疫菌基因的转录。

关键词：鼠疫耶尔森氏菌 H-NS DNA结合活性

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