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第十届中国生物毒素学术研讨会

作者：韩艳辉高姗康琳王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京 100071

虽然美国“9.11”事件发生距今已有十年之久，但是恐怖袭击的阴影依然没有散去，在世界各地时常有或大或小的恐怖袭击事件发生，关于生物恐怖战剂的研究，更是引起了人们的广泛关注.在《禁止生物武器公约》中，蓖麻毒素(RIC)和相思子毒... 详细信息

虽然美国“9.11”事件发生距今已有十年之久，但是恐怖袭击的阴影依然没有散去，在世界各地时常有或大或小的恐怖袭击事件发生，关于生物恐怖战剂的研究，更是引起了人们的广泛关注.在《禁止生物武器公约》中，蓖麻毒素(RIC)和相思子毒素(ABR)已被列为致死性的重要毒素战剂和生物恐怖剂，对有可能受到RIC和ABR威胁的人员接种疫苗进行主动免疫保护，是目前认为唯一有效的医学对策.RIC和.ABR的A链有107个同源性氨基酸，二者的三级结构也很相似，本实验就是以Vi~tta，研究小组的思路为基础，构建了ABR A链突变体mABRA，同时利用实验室前期构建好的RIC A链突变体mRICA，进而构建了mRICA和mABRA的嵌合体***／mABRA.，目的是得到保留良好的免疫原性，并且降低毒性的蛋白作为免疫原.用于制备新型的RIC和ABRA链突变体疫苗，进而研究其是否可作为制备用于动物乃至人体的疫苗的候选抗原.

关键词：重组蓖麻相思子毒素嵌合表达免疫效果

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重组相思子毒素A链突变体的构建、表达纯化和免疫效果评价

重组相思子毒素A链突变体的构建、表达纯化和免疫效果评价

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第十届中国生物毒素学术研讨会

作者：韩艳辉高姍康琳王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京 100071

相思子毒素(abrED，ABR)是一种剧毒性高分子糖蛋白，属于Ⅱ型核糖体失活蛋白，由A链和B链两条多肽链通过二硫键组成异二聚体.文献报道ABR小鼠腹腔LD50为0.04μg／Kg体重.成年人摄入的致死剂量为5.0$tg-7.0 pg／kg.由于ABR.的高毒性和易... 详细信息

相思子毒素(abrED，ABR)是一种剧毒性高分子糖蛋白，属于Ⅱ型核糖体失活蛋白，由A链和B链两条多肽链通过二硫键组成异二聚体.文献报道ABR小鼠腹腔LD50为0.04μg／Kg体重.成年人摄入的致死剂量为5.0$tg-7.0 pg／kg.由于ABR.的高毒性和易于获取性，ABR被列为是致死性的生物毒素战剂和生物恐怖剂之一，其对社会公共安全的潜在威胁不容忽视,然而目前关于ABR中毒免疫预防方面的研究较少，相关报道有将ABR经甲醛化处理形成类毒素，注射于动物可产生免疫，免疫血清能有效保护动物而对抗相应引起的中毒。但由于ABR毒性很强，经甲醛脱毒的类毒素仍存在残留毒性，使用.ABR类毒素制备疫苗仍有许多缺陷.因此，本研究的目的就是构建一种既降低毒性，同时又保留了良好的免疫原性的抗原基因，为发展适用于人和动物的无毒性ABR疫苗奠定基础。

关键词：相思子毒素基因重组表达纯化免疫效果

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单克隆抗体-2A10在蛋白芯片技术检测黄病毒属病毒中的应用

单克隆抗体-2A10在蛋白芯片技术检测黄病毒属病毒中的应用

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：康晓平李裕昌刘洪林方祝庆余杨银辉军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：本研究拟探讨一株黄病毒属特异的单克隆抗体2A10作为检测抗体在同时检测五种黄病毒属病毒的蛋白芯片中的应用价值.方法：将病毒的特异性单抗作为捕获抗体进行点样,制备用于检测五种黄病毒属病毒的抗体芯片,然后分别加入拟检测的... 详细信息

目的：本研究拟探讨一株黄病毒属特异的单克隆抗体2A10作为检测抗体在同时检测五种黄病毒属病毒的蛋白芯片中的应用价值.方法：将病毒的特异性单抗作为捕获抗体进行点样,制备用于检测五种黄病毒属病毒的抗体芯片,然后分别加入拟检测的病毒灭活抗原,捕获病毒颗粒后,加入荧光染料CY3标记的2A10检测抗体进行孵育,通过扫描并分析芯片上不同抗体的荧光强度,确定2A10检测抗体的效价和可检测的病毒滴度,并对2A10的检测效果进行评价.结果：蛋白芯片检测结果表明,2A10可作为检测抗体用于对5种黄病毒属病毒的检测,CY3标记的2A10效价为1∶160,以TBE病毒为例,可检测的病毒滴度为1250pfu.结论：单克隆抗体2A10作为一株黄病毒属特异的单抗,可以用于蛋白芯片技术检测黄病毒属病毒.

关键词：蛋白芯片高通量黄病毒属单克隆抗体

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利用SILAC技术研究H5N1病毒致病性相关的宿主蛋白分子

利用SILAC技术研究H5N1病毒致病性相关的宿主蛋白分子

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第九届全国病毒学学术研讨会

作者：李靖王继峰杨银辉孙伟康小平户义韩鹏飞钱晓红祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京 100071

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生物毒素战剂:检测识别分子与防治药物

生物毒素战剂:检测识别分子与防治药物

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第十届中国生物毒素学术研讨会

作者：王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京 1000071

虽然毒素种类繁多，但最有可能用作战剂的是那些获取方便、制备容易、毒性强、施放后可导致人死亡或失能的毒素。毒素战剂既不同于传统的细菌、病毒战剂，也不同于化学毒剂，其最大的威胁来自它的高毒性和缺乏有效的治疗手段。因此，发... 详细信息

虽然毒素种类繁多，但最有可能用作战剂的是那些获取方便、制备容易、毒性强、施放后可导致人死亡或失能的毒素。毒素战剂既不同于传统的细菌、病毒战剂，也不同于化学毒剂，其最大的威胁来自它的高毒性和缺乏有效的治疗手段。因此，发展毒素战剂的检测识别分子与防治药物就显得尤为重要。本文在综述生物毒素战剂相关概念，特征等基础上。重点介绍毒素战剂的检测识别分子与防治药物研究进展。

关键词：生物毒素战剂检测识别分子治疗药物预防疫苗

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ⅡA2型生物安全柜对病毒气溶胶的防护效果

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解放军预防医学杂志 2011年第5期29卷 316-319页

作者：杜茜温占波刘克洋杨文慧王洁李娜李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术中心北京100071

目的测试与评价二级生物安全柜对病毒气溶胶的防护效果,为该生物安全柜的安全使用提供依据。方法发生噬菌体phiX 174气溶胶,按照标准中规定的测试方法就安全柜的物理学评价指标及3种生物学评价指标即人员保护、交叉污染和产品保护进行测... 详细信息

目的测试与评价二级生物安全柜对病毒气溶胶的防护效果,为该生物安全柜的安全使用提供依据。方法发生噬菌体phiX 174气溶胶,按照标准中规定的测试方法就安全柜的物理学评价指标及3种生物学评价指标即人员保护、交叉污染和产品保护进行测试,3种测试分别重复3次。结果 3次测试中,人员保护每次6个液体撞击式采样器的培养噬菌斑数之和不大于10 pfu,2个裂隙采样器的培养噬菌斑数之和不超过5 pfu。产品保护每次所有培养皿上的phiX174噬菌斑数不超过5 pfu。每次交叉污染测试中被检测侧壁36 cm外的所有培养皿上的噬菌斑数不超过2 pfu。结论该生物安全柜对病毒气溶胶的防护效果符合标准的要求。

关键词：生物安全柜防护性能病毒气溶胶

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微生物气溶胶污染监测检测技术研究进展

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解放军预防医学杂志 2011年第6期29卷 455-458页

作者：杜茜李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所国家生物防护装备工程技术研究中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

微生物气溶胶对空气的污染问题越来越受到社会的关注。微生物气溶胶能引起人类多种呼吸道疾病,因此,检测微生物气溶胶对于改善人们的生活环境具有重要意义。通过文献调研,对微生物气溶胶污染的现状做了简要介绍,概述了污染物气溶胶的多... 详细信息

微生物气溶胶对空气的污染问题越来越受到社会的关注。微生物气溶胶能引起人类多种呼吸道疾病,因此,检测微生物气溶胶对于改善人们的生活环境具有重要意义。通过文献调研,对微生物气溶胶污染的现状做了简要介绍,概述了污染物气溶胶的多种监测检测方法,并对需要解决的难题及相关领域的研究进行了展望。

关键词：微生物气溶胶检测与监测技术进展

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副溶血性弧菌基因敲除方法的建立及应用

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中国实验动物学报 2011年第3期19卷 188-192,276页

作者：刘霞高鹤杨琳张义全谭亚芳郭兆彪黄新祥杨瑞馥周冬生江苏大学医学技术学院江苏镇江212013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的摸索出一套副溶血性弧菌基因敲除的可靠方案,副溶血性弧菌致病相关基因的敲除对深入研究其致病机制有重要意义。方法通过融合PCR技术将目的基因上下游同源臂融合并克隆到自杀载体pDS132上,将重组质粒转化大肠杆菌S17λpir中,再接合... 详细信息

目的摸索出一套副溶血性弧菌基因敲除的可靠方案,副溶血性弧菌致病相关基因的敲除对深入研究其致病机制有重要意义。方法通过融合PCR技术将目的基因上下游同源臂融合并克隆到自杀载体pDS132上,将重组质粒转化大肠杆菌S17λpir中,再接合转移到副溶血性弧菌菌株内,经pDS132质粒上sacB基因的反向筛选得到突变株。结果成功构建了副溶血性弧菌RIMD2210633菌株ΔopaR,ΔtoxR和ΔaphA三个基因突变株。结论通过自杀载体同源重组成功获得精确敲除的无痕突变株更有利于基因功能的研究,使后续副溶血性弧菌突变株与野生株的对比研究成为可能。

关键词：自杀载体同源重组无痕突变

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鼠疫菌、副溶血性弧菌及肺炎克雷伯菌CRP蛋白的表达及其DNA结合活性分析

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中国媒介生物学及控制杂志 2011年第3期22卷 251-256页

作者：杨琳高鹤张义全刘霞谭亚芳郭兆彪黄新祥杨瑞馥周冬生江苏大学生命科学研究院江苏镇江212013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的表达有活性的鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)、副溶血性弧菌以及肺炎克雷伯菌的cAMP受体蛋白(CRP)并进行DNA体外结合活性分析,为深入研究3种CRP蛋白间的交互转录调控作用奠定基础。方法应用大肠埃希菌pET系统体外表达鼠疫菌201株、副溶血性弧... 详细信息

目的表达有活性的鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)、副溶血性弧菌以及肺炎克雷伯菌的cAMP受体蛋白(CRP)并进行DNA体外结合活性分析,为深入研究3种CRP蛋白间的交互转录调控作用奠定基础。方法应用大肠埃希菌pET系统体外表达鼠疫菌201株、副溶血性弧菌5421株以及肺炎克雷伯菌tw518株的CRP蛋白;应用生物信息学对3种CRP蛋白进行同源性比较,并对CRP与靶DNA的结合基序(CRP consensus)进行分析预测;通过体外凝胶阻滞实验(EMSA)和DNaseⅠ足迹实验验证His?CRP与DNA的结合活性。结果成功表达出3种菌有活性的His?CRP融合蛋白,3种CRP蛋白对鼠疫菌pla、副溶血性弧菌toxR及肺炎克雷伯菌kfuA基因均有结合活性。结论 3种CRP蛋白都能直接结合到鼠疫菌pla、副溶血性弧菌toxR及肺炎克雷伯菌kfuA基因的启动子区,说明上述3种CRP蛋白对3种病原菌的重要毒力基因的转录可能具有交互调控作用。

关键词：鼠疫菌副溶血性弧菌肺炎克雷伯菌 cAMP受体蛋白交互调控

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基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成中多位点缺失突变的校正方法

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生物技术通讯 2011年第3期22卷 366-369页

作者：范华昊王娟安小平王晓娜李建彬陈斌李存米志强童贻刚中南大学基础医学院湖南长沙410013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:建立一种PCR方法,以快速校正基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成过程中发生的多位点缺失突变。方法:用PCR方法合成基孔肯雅病毒非结构蛋白基因;对测序的克隆进行序列比对,分析不同克隆上缺失突变发生的位置,以保守区域互相重叠的寡核... 详细信息

目的:建立一种PCR方法,以快速校正基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成过程中发生的多位点缺失突变。方法:用PCR方法合成基孔肯雅病毒非结构蛋白基因;对测序的克隆进行序列比对,分析不同克隆上缺失突变发生的位置,以保守区域互相重叠的寡核苷酸为上下游引物、以该区域测序正确的克隆为模板进行PCR扩增,得到所需片段,再将这些片段用PCR方法进一步组装成完整的基因序列并进行测序。结果:测序结果表明,经过2次PCR扩增,校正了基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成过程中发生的5个位点缺失突变。结论:得到序列正确的基孔肯雅病毒非结构蛋白基因。在进行基因合成过程中如发生多位点缺失突变,可利用该方法同时对以上突变进行校正,无须再合成引物,降低了实验操作难度,并提高了实验效率。

关键词：基孔肯雅病毒非结构蛋白基因基因合成多位点缺失突变的校正

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