检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2010年第4期34卷 331-333,344页

作者：林方熊伟康晓平李永强刘洪李辉祝庆余杨银辉军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 71781部队卫生队

目的建立一种可以同时检测人类A型流感病毒,B型流感病毒及A型流感病毒H1,H3,H5亚型的多重RT-PCR方法。方法根据人类流感病毒的特异性基因设计并合成多对特异性引物,建立可同时扩增出人类流感病毒亚型特异性片段的多重PCR的方法。同时,... 详细信息

目的建立一种可以同时检测人类A型流感病毒,B型流感病毒及A型流感病毒H1,H3,H5亚型的多重RT-PCR方法。方法根据人类流感病毒的特异性基因设计并合成多对特异性引物,建立可同时扩增出人类流感病毒亚型特异性片段的多重PCR的方法。同时,对该方法的特异性和敏感性进行了评价,并利用该方法对39份疑似swineH1N1的临床标本进行检测。结果该方法可同时扩增出A型流感病毒M基因203bp,B型流感病毒M基因296bp,A型流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为362bp(H1),112bp(H3),188bp(H5),494bp(swineH1)。该实验最低可检测新甲型H1N1(A/Beijing/501/2009)病毒RNA0.5TCID50。该方法的特异性实验结果显示,在多重PCR检测中未检出非特异扩增的PCR产物。同时,使用该方法从39份疑似新甲型H1N1的临床咽拭子标本中检测出新甲型H1N1阳性的标本4份(10.2%),季节性H1N1亚型2份(5.1%),H3N2亚型12份30.7%,本次实验结果与WHO通过实时PCR方法检测的结果一致。结论本研究建立的多重PT-PCR方法快速、敏感,特异性强,可用于人类流感病毒的分型检测。

关键词：人类流感病毒病毒分型多重PCR

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流感病毒耐药机制研究进展

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解放军医学杂志 2010年第8期35卷 1029-1031页

作者：刘娟秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 空军总医院输血科

流行性感冒一直是世界上高发的传染病之一,每年全球约10%的人口感染流感。仅20世纪,就爆发了3次世界性的流感大流行,导致数亿人感染。2009年甲型H1N1流感全球大流行再一次引起各国对流感的重视。流感病毒是引起人类流感的病原体之一,属... 详细信息

流行性感冒一直是世界上高发的传染病之一,每年全球约10%的人口感染流感。仅20世纪,就爆发了3次世界性的流感大流行,导致数亿人感染。2009年甲型H1N1流感全球大流行再一次引起各国对流感的重视。流感病毒是引起人类流感的病原体之一,属于正黏病毒科,包括甲、乙、丙型流感病毒,其中甲型、乙型流感病毒对人类具有流行病学意义。流感病毒的基因组由8个独立节段组成,分别是。[第一段]

关键词：流感病毒抗药性,病毒突变

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以乙型肝炎病毒核心蛋白颗粒为载体的流感通用疫苗的构建

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中国生物制品学杂志 2010年第10期23卷 1075-1079页

作者：花艳红洪渊东吕进陈中伟张伟张良艳周宇王希良中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建以乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B virus coreprotein,HBc)颗粒为载体的含流感病毒M2基质蛋白胞外功能区(M2 ectodomain,M2e)和核蛋白(Nucleoprotein,NP)保守表位的流感通用疫苗,评价其抗不同亚型流感病毒感染的保护作用。... 详细信息

目的构建以乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B virus coreprotein,HBc)颗粒为载体的含流感病毒M2基质蛋白胞外功能区(M2 ectodomain,M2e)和核蛋白(Nucleoprotein,NP)保守表位的流感通用疫苗,评价其抗不同亚型流感病毒感染的保护作用。方法采用基因工程方法将流感病毒M2e的3拷贝重复片段与NP的CTL表位串联,插入HBc刺突顶端的免疫优势决定区,构建重组表达质粒pET-21a-HBc-3M2e-NP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG16℃低温诱导表达。表达的融合蛋白HBc-3M2e-NP经纯化后,电镜观察病毒样颗粒形成情况。纯化的融合蛋白分别经鼻腔和腹腔免疫小鼠,对照组注射等体积的PBS,间接ELISA法检测小鼠血清IgG抗体水平;流式细胞术检测小鼠脾组织中CD4+、CD8+T淋巴细胞水平;以流感病毒攻毒,检测融合蛋白的保护效果。结果重组表达质粒pET-21a-HBc-3M2e-NP经PCR及双酶切鉴定证明构建正确。表达的融合蛋白相对分子质量约为29000,以包涵体和可溶性两种形式表达,且可与鼠抗M2e单抗发生特异性反应。纯化的融合蛋白纯度大于90%,且能够自动装配成病毒样颗粒。用该病毒样颗粒免疫小鼠,可诱导小鼠产生针对不同流感病毒毒株的特异性抗体;2种途径免疫的小鼠脾组织中CD4+T淋巴细胞含量和CD4+/CD8+T淋巴细胞比例均较对照组明显升高;攻毒试验结果显示,具有交叉保护作用。结论构建的流感通用疫苗能够诱导机体产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答及有效的交叉保护作用,为流感通用疫苗的深入研究奠定了基础。

关键词：流感疫苗乙型肝炎病毒核心蛋白病毒样颗粒 M2基质蛋白胞外功能区核蛋白

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乙型肝炎病毒聚合酶片段的表达及其在血清学检测中的应用

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解放军医学杂志 2010年第2期35卷 163-165页

作者：范公忍陈士华安小平张宝中张昕周育森姚鹏童贻刚北京军区总医院肝病学研究所北京100700 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100850

目的建立乙型肝炎患者血清HBV病毒聚合酶抗体(抗-HBp)的ELISA检测方法。方法构建HBV反转录酶/DNA聚合酶(HBV-Pol)基因原核表达载体pQE30-Pol,表达并纯化目的蛋白,用间接ELISA法检测274例乙型肝炎患者及50例正常人血清中的抗-HBp抗体,并... 详细信息

目的建立乙型肝炎患者血清HBV病毒聚合酶抗体(抗-HBp)的ELISA检测方法。方法构建HBV反转录酶/DNA聚合酶(HBV-Pol)基因原核表达载体pQE30-Pol,表达并纯化目的蛋白,用间接ELISA法检测274例乙型肝炎患者及50例正常人血清中的抗-HBp抗体,并与HBV-DNA实时荧光定量检测结果比较。结果成功将HBV-Pol基因插入原核表达载体pQE30,并在大肠埃希菌M15中获得了高效表达,表达产物以包涵体形式存在。以纯化的重组蛋白建立间接ELISA检测方法,在检测的274例乙型肝炎患者中,HBsAg+/HBeAg+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBe+/抗HBc+,HBsAg+/抗HBc+患者血清中的抗-HBp抗体阳性率分别为97.8%、57.9%和13.2%,平均阳性率58.8%,而正常人血清抗-HBp均为阴性。运用此法测得的血清抗-HBp阳性率和实时定量PCR检测结果无统计学差异(P=0.359)。结论成功表达了HBV-Pol片段并且建立了血清抗-HBp抗体的检测方法,为进一步研究乙型肝炎患者血清HBV-Pol抗体的血清学意义奠定了基础。

关键词：肝炎,乙型,慢性血清学试验基因,pol 酶联免疫吸附测定

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不同采样液对噬菌体活性的影响研究

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军事医学科学院院刊 2010年第1期34卷 21-24页

作者：于龙李劲松温占波杨文慧胡凌飞李娜王洁鹿建春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术研究中心北京100071

目的了解噬菌体在不同采样液中耐冲击能力的强弱,筛选用于液体冲击式采样器采集噬菌体气溶胶的最佳采样液和耐冲击性强的噬菌体。方法使用全玻璃液体冲击采样器(AGI-10)对噬菌体进行耐冲击实验,采样液选用蒸馏水(DW)、磷酸盐缓冲液(PBS)... 详细信息

目的了解噬菌体在不同采样液中耐冲击能力的强弱,筛选用于液体冲击式采样器采集噬菌体气溶胶的最佳采样液和耐冲击性强的噬菌体。方法使用全玻璃液体冲击采样器(AGI-10)对噬菌体进行耐冲击实验,采样液选用蒸馏水(DW)、磷酸盐缓冲液(PBS)和SM液,每种采样液又分为加橄榄油组(50μl)和不加橄榄油组(0μl),在以7L/min的气流冲击30min后测定采样液中噬菌体滴度和终末采样液体积,采用校正存活率评价噬菌体耐冲击性。结果同一种噬菌体在不同采样液中的耐冲击性不同,以SM液作为采样液时,噬菌体存活率较高,SM液中是否加入橄榄油对噬菌体的耐冲击性没有影响。噬菌体SM701、SM702、PhiX174、EcP1和F2在SM液中经7L/min的气流冲击60min后,校正存活率分别约为79%、77%、86%、50%和71%。结论噬菌体在不同采样介质中的耐冲击性不同,其中以SM液保护效果最佳,噬菌体SM701、SM702和PhiX174的耐冲击性较强。

关键词：噬菌体采样器 AGI-10 采样液校正存活率耐冲击性

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高效液相色谱法测定马来酸桂哌齐特注射液有关物质的含量

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中国医院药学杂志 2010年第14期30卷 1244-1246页

作者：李理宇张波张东娜丁建新王洪权军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 北京军区联勤部药品仪器检验所北京100071

目的:建立以HPLC法测定马来酸桂哌齐特注射液有关物质的含量的测定方法。方法:色谱柱为迪马-ODS,流动相为乙腈-0.05mol.L-1磷酸氢二钠溶液(40∶60),检测波长230nm,流速为1.0mL·min-1,进样量为20μL。结果:马来酸桂哌齐特在200～800... 详细信息

目的:建立以HPLC法测定马来酸桂哌齐特注射液有关物质的含量的测定方法。方法:色谱柱为迪马-ODS,流动相为乙腈-0.05mol.L-1磷酸氢二钠溶液(40∶60),检测波长230nm,流速为1.0mL·min-1,进样量为20μL。结果:马来酸桂哌齐特在200～800mg·mL-1(r=0.9999)范围内线性关系良好,有关物质与主峰分离良好,3批样品中有关物质含量均小于1%。结论:本方法简便、快速、准确、重复性好,可用于该制剂的有关物质的含量测定。

关键词：高效液相色谱法马来酸桂哌齐特注射液有关物质

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基孔肯雅病毒WJ0601株基因组全序列测定及分析

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军事医学科学院院刊 2010年第2期34卷 153-155页

作者：谭刚张雨司炳银余蓉祝庆余四川大学华西药学院成都610041 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对保存的基孔肯雅病毒WJ0601株基因组序列进行测定,并阐明该病毒与已报道毒株序列的关系。方法对基孔肯雅病毒基因组编码区分14段进行RT-PCR扩增,对非编码区采用RACE法进行扩增,将扩增产物直接进行测序,应用DNAStar软件将测序结果... 详细信息

目的对保存的基孔肯雅病毒WJ0601株基因组序列进行测定,并阐明该病毒与已报道毒株序列的关系。方法对基孔肯雅病毒基因组编码区分14段进行RT-PCR扩增,对非编码区采用RACE法进行扩增,将扩增产物直接进行测序,应用DNAStar软件将测序结果拼接得到基因组序列。结果与结论基孔肯雅病毒WJ0601株基因组核苷酸共11826nt,编码3722个氨基酸,其中5′端的2/3基因组编码4种非结构蛋白nsP1、nsP2、nsP3和nsP4;3′端的1/3基因组编码5种结构蛋白C、E3、E2、6K和E1蛋白。结构基因和非结构基因之间有68nt的连接区为非翻译区。病毒基因组5′端和3′端分别有76nt、526nt的非编码区。序列同源性分析结果表明,此株病毒与S27-African株的同源性最高,两者核苷酸序列同源性为99.9%,氨基酸序列同源性为99.8%,同属于(ESCA)基因型。

关键词：基孔肯雅病毒基因组逆转录聚合酶链反应 ESCA

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淋球菌LOS 2C7表位筛选及其与HBc融合蛋白的原核表达

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免疫学杂志 2010年第6期26卷 498-501,506页

作者：张伟刘坤姜德玉赵莉群李君丽于三科王希良西北农林科技大学动物医学学院陕西杨陵712100 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:将淋球菌脂寡糖的2C7表位插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的MIR区,通过原核表达系统进行融合蛋白的表达,以期获得高免疫原性的淋球菌亚单位疫苗的候选靶位。方法:通过间接ELISA法,以CMCC29403菌株的LOS为包被抗原,对7个表位进行筛选... 详细信息

目的:将淋球菌脂寡糖的2C7表位插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的MIR区,通过原核表达系统进行融合蛋白的表达,以期获得高免疫原性的淋球菌亚单位疫苗的候选靶位。方法:通过间接ELISA法,以CMCC29403菌株的LOS为包被抗原,对7个表位进行筛选;并通过杀菌试验检测肽段免疫动物产生血清的保护力。对已筛选好的肽段基因进行人工合成,通过重叠PCR将肽段基因嵌入HBc基因中,以增强表位的免疫原性,并进行原核表达。结果:初步研究表明了表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。这3个肽段可能成为候选疫苗亚单位。通过重叠PCR方法:成功地将PEP1,PEP2,PEP7三个表位基因序列插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBc)的刺突(MIR)部位,构建了HBc-PEP1,HBc-PEP2,HBc-PEP7融合基因,通过PET22b(+)载体进行原核表达,为下一步疫苗的研究奠定了基础。结论:2C7表位PEP1,PEP2,PEP7具有较强的脂寡糖(LOS)的免疫原性,能够模拟脂寡糖的抗原性。表位与HBc的融合蛋白可以通过原核表达系统进行可溶性表达,为下一步疫苗的研究奠定基础。

关键词： 2C7表位淋球菌脂寡糖(LOS) 乙型肝炎病毒核心抗原(HBc) 原核表达

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荧光定量PCR快速检测金黄色葡萄球菌方法的建立

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军事医学科学院院刊 2010年第1期34卷 25-29,39页

作者：苏裕心高姗康琳赵耀郑学礼王景林南方医科大学公共卫生与热带医学学院病原生物学系广州510515 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用SmartCycler系统建立一种简便、快速的荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称SAU)的方法。方法根据SAU特异nuc基因设计引物和探针,建立检测体系,并在体系中加入内质控IAC,通过另一个标记不同荧光基团的Taq... 详细信息

目的利用SmartCycler系统建立一种简便、快速的荧光定量PCR检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称SAU)的方法。方法根据SAU特异nuc基因设计引物和探针,建立检测体系,并在体系中加入内质控IAC,通过另一个标记不同荧光基团的TaqMan探针来监测IAC。用SAU6538株污染饮用水和牛奶模拟实际样本,以评价体系的性能。结果以含nuc片段的线性质粒为模板,反应体系的灵敏度为5拷贝/μl;以6538株基因组DNA为模板,最低检测限为10fg/μl;用涂平板法计数并10倍梯度稀释的菌液提取DNA为模板,最低检测限为50cfu/ml。建立的定量标准曲线的循环域值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r2≥0.998),PCR效率E≥96.7%。用SAU6538污染饮用水和牛奶模拟实际样本,灵敏度可达5×102cfu/25ml样本。结论所建立的nuc-IAC荧光定量PCR具有内质控IAC,既能定量检测食物是否被污染,又能监测PCR体系,防止假阴性发生或低估病原菌污染量。

关键词：金黄色葡萄球菌实时定量PCR 病原体检测饮用水牛奶

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虫媒黄病毒亚基因组RNA

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生命的化学 2010年第2期30卷 227-230页

作者：岳磊刘然江振友秦成峰军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 暨南大学医学院微生物与免疫学教研室广州510632

黄病毒是一大科人类致病性的单股正链RNA病毒。黄病毒包括登革病毒、西尼罗脑炎病毒及日本脑炎病毒等成员,主要径通过节肢动物的叮咬进行传播,即为虫媒黄病毒。研究发现,在虫媒黄病毒复制过程中,除病毒基因组正链RNA、互补的负链RNA及... 详细信息

黄病毒是一大科人类致病性的单股正链RNA病毒。黄病毒包括登革病毒、西尼罗脑炎病毒及日本脑炎病毒等成员,主要径通过节肢动物的叮咬进行传播,即为虫媒黄病毒。研究发现,在虫媒黄病毒复制过程中,除病毒基因组正链RNA、互补的负链RNA及两者的杂合RNA分子外,在病毒感染细胞后还能产生一种病毒亚基因组RNA(subgenomic RNA,sgRNA)。近年对这种sgRNA展开了比较多的研究,结果表明,其产生机制与已知的其他病毒sgRNA产生机制并不相同。该sgRNA的产生与虫媒黄病毒基因组3’非编码区所形成的保守二级结构有关,同时宿主核酸酶对其的不完全降解亦有重要作用。虫媒黄病毒基因组3’非编码区中带有多个与病毒复制相关的RNA元件,而sgRNA的发现有助于全面地认识病毒RNA与宿主RNA代谢途径间的相互作用,为最终阐明病毒的致病机制奠定基础。

关键词：虫媒黄病毒非编码区亚基因组RNA

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