检索结果-内蒙古大学图书馆

中华预防医学杂志 2016年第6期50卷 554-558页

作者：武雅蓉杨瑞馥崔玉军军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

将群体遗传学的理论与方法应用于特定种群多个分离株的全基因组序列中，进行数据挖掘和分析的学科称为群体基因组学（population genomics）。近年来，测序技术的迅猛发展使得低成本、快速获得大量个体全基因组序列成为可能，这推动了... 详细信息

将群体遗传学的理论与方法应用于特定种群多个分离株的全基因组序列中，进行数据挖掘和分析的学科称为群体基因组学（population genomics）。近年来，测序技术的迅猛发展使得低成本、快速获得大量个体全基因组序列成为可能，这推动了群体基因组学在进化领域的广泛应用。本文以经典模式生物大肠埃希菌为例，回顾了大肠埃希菌A、B1、B2、D和E五个基因型之间进化关系的确立历程；总结了基因组突变率、选择信号以及适应性进化模式的分析实例；并对群体基因组学在应对O157：H7和O104：H4菌株所致疫情暴发中的应用进行了综述。这些研究结果说明，尽管发展时间较短，群体基因组学在解析细菌种群结构、探索进化规律以及疾病暴发应对等领域已经发挥了重要作用；加强该学科研究对大肠埃希菌以及其他病原细菌的进化与防控研究工作均有积极意义。

关键词：大肠杆菌基因组遗传学,群体种群结构流行病学

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北京大气PM_(2.5)对A549细胞炎性因子及DNA损伤的毒性

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中国环境科学 2016年第5期36卷 1579-1588页

作者：焦周光付绪磊温占波李劲松李娜张柯王洁胡凌飞军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 渤海大学食品科学与工程学院辽宁锦州121013

为探讨大气PM_(2.5)及其不同组分对人肺上皮细胞A549的毒性作用及其剂量-反应关系,将前期采集的PM_(2.5)颗粒物用不同方法进一步制备PM_(2.5)水溶性组分、PM_(2.5)脂溶性组分和PM_(2.5)单纯颗粒物,将制备的PM_(2.5)颗粒物及其组分以不... 详细信息

为探讨大气PM_(2.5)及其不同组分对人肺上皮细胞A549的毒性作用及其剂量-反应关系,将前期采集的PM_(2.5)颗粒物用不同方法进一步制备PM_(2.5)水溶性组分、PM_(2.5)脂溶性组分和PM_(2.5)单纯颗粒物,将制备的PM_(2.5)颗粒物及其组分以不同浓度(10,50,100,200,400μg/m L)对A549细胞染毒,用MTS法分别在染毒6,10,24,48,72h后测定细胞活力,染毒24h后用ELISA及RT-QPCR法测定炎性因子IL-6和TNF-α表达量,AP位点计数法测定细胞DNA损伤情况.结果表明:除PM_(2.5)水溶性组分外,其余染毒样本高浓度染毒时始终对细胞生长表现出抑制作用,其中低浓度染毒时可在较短时间对细胞生长表现出抑制作用,染毒时间较长时抑制作用减弱或消失,PM_(2.5)水溶性组分对细胞生长抑制作用并不显著;除PM_(2.5)水溶性组分外,其余染毒样本都显著升高了IL-6m RNA的相对表达量和IL-6蛋白的分泌,除PM_(2.5)脂溶性组分外,其余染毒样本都显著升高了TNF-αm RNA的相对表达量;除PM_(2.5)水溶性组分外,其余染毒样本都显著提高了DNA碱基缺失程度.总的来说,PM_(2.5)水溶性组分在抑制细胞活力、造成炎性损伤及DNA损伤方面作用相对较小,而PM_(2.5)所产生的毒性作用并不仅限于其所吸附的复杂成分,其中作为载体的固体核心颗粒对机体可能造成的毒性作用也不容忽视.

关键词： PM2.5 组分 A549 细胞活力炎性因子 DNA损伤

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添加扩增内标的PCR方法快速检测食品中的阪崎克罗诺杆菌

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食品工业科技 2017年第2期38卷 49-52,58页

作者：张德福赵禹宗张明仪淑敏赵文竹汤轶伟李春励建荣渤海大学食品科学与工程学院、辽宁省食品安全重点实验室、生鲜农产品贮藏加工及安全控制技术国家地方联合工程研究中心辽宁锦州121013 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 渤海大学数理学院辽宁锦州121013

为了解决常规PCR方法检测阪崎克罗诺杆菌时因检测过程中环境和食品理化因素的影响而导致的假阴性结果的产生,本研究以细菌16S rRNA基因为扩增内标对照,以阪崎克罗诺杆菌特异性基因grx B为靶基因设计了一对特异性引物,并通过优化PCR反应... 详细信息

为了解决常规PCR方法检测阪崎克罗诺杆菌时因检测过程中环境和食品理化因素的影响而导致的假阴性结果的产生,本研究以细菌16S rRNA基因为扩增内标对照,以阪崎克罗诺杆菌特异性基因grx B为靶基因设计了一对特异性引物,并通过优化PCR反应条件,最终建立了一种添加扩增内标的阪崎克罗诺杆菌PCR检测方法,可以指示PCR过程中因存在DNA聚合酶抑制剂而导致的假阴性结果。通过对20种细菌进行PCR检测显示,该方法对阪崎克罗诺杆菌具有良好的特异性。灵敏度实验结果表明,该检测方法对阪崎克罗诺菌纯DNA模板的检测灵敏度为2.15×102fg/μL,对阪崎克罗诺杆菌纯培养物的检测灵敏度为9.4×103CFU/m L。对人工污染婴幼儿奶粉的检测结果显示,阪崎克罗诺杆菌接种量为0.94 CFU/g的婴幼儿奶粉样品经过8 h增菌培养后,即可检出。食品样品检测结果表明,不添加扩增内标的PCR检测方法中出现的假阴性结果可被本方法检出。该检测方法特异性强、灵敏度较高,能消除阪崎克罗诺杆菌常规PCR检测方法中可能出现的假阴性结果,适用于婴幼儿配方乳粉、乳制品等食品中阪崎克罗诺杆菌的快速检测。

关键词：阪崎克罗诺杆菌扩增内标假阴性 PCR检测

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TEM-1型β内酰胺酶的原核表达纯化及活性验证

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生物技术通讯 2017年第3期28卷 319-323页

作者：李静徐建余宁年智刘传杰黄洁刘雪超李涛王慧华北理工大学河北唐山063009 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:产β-内酰胺酶是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等对β内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一,该酶能水解青霉素、头孢菌素、碳青酶烯类等多种抗生素,其中TEM型是发现最早且种类最多的β内酰胺酶。探讨TEM-1型β内酰胺酶原核表达载体的构建、... 详细信息

目的:产β-内酰胺酶是大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等对β内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一,该酶能水解青霉素、头孢菌素、碳青酶烯类等多种抗生素,其中TEM型是发现最早且种类最多的β内酰胺酶。探讨TEM-1型β内酰胺酶原核表达载体的构建、酶的纯化及活性验证。方法:利用PCR技术,以大肠杆菌全基因组为模板钓取TEM-1基因,构建p ET22b(+)-TEM-1表达质粒,经测序鉴定后,转入大肠杆菌Transetta(DE3),IPTG诱导表达、亲和纯化,并通过抗生素水解实验验证其酶活性。结果:构建了可溶性表达TEM-1的工程菌,通过亲和纯化最终获得纯度达90%以上的TEM-1型β内酰胺酶,该酶可水解氨苄西林。结论:获得了对氨苄西林具有水解活性的TEM-1型β内酰胺酶,并对其进行了酶动力学参数检测,验证其抗生素水解特性,有利于对临床抗生素的合理应用做出指导。

关键词： TEM-1 β内酰胺酶表达纯化酶动力学

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铁硫蛋白形成的关键分子BolA同系物3蛋白抗体制备及鉴定

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广西医科大学学报 2017年第4期34卷 601-606页

作者：陈佳唯方军胡童远寇志华孙世惠李军锋周育森广西医科大学南宁530021 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 蚌埠医学院蚌埠233000

目的:研究参与铁硫蛋白形成的关键分子BolA同系物3(BolA3)在细胞中的功能,通过重组表达BolA3蛋白,进而免疫制备并鉴定针对该分子的抗体。方法:从人肺癌细胞A549细胞中提取RNA,RT-PCR扩增出BolA3基因,构建BolA3基因重组原核表达载体pQE30... 详细信息

目的:研究参与铁硫蛋白形成的关键分子BolA同系物3(BolA3)在细胞中的功能,通过重组表达BolA3蛋白,进而免疫制备并鉴定针对该分子的抗体。方法:从人肺癌细胞A549细胞中提取RNA,RT-PCR扩增出BolA3基因,构建BolA3基因重组原核表达载体pQE30-BolA3,使用IPTG诱导蛋白表达,Western blotting法鉴定表达中带His标签的重组BolA3蛋白,使用镍(Ni)柱纯化该蛋白。程序免疫大耳白兔,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定兔血清中抗体滴度。Western blotting法检测制备的抗体与真核表达的BolA3蛋白结合的特异性,并利用已制备的BolA3蛋白抗体检测多种细胞中BolA3内源性表达。结果:克隆的BolA3基因序列与理论序列相一致,原核表达并纯化了BolA3重组蛋白,程序免疫大耳白兔后,获得了高滴度、高特异性的抗体血清。使用所得纯化的BolA3蛋白抗体检测到多种细胞内源性表达BolA3。结论:成功制备针对BolA3的多克隆抗体,为进一步深入研究BolA3蛋白的生物学功能奠定了基础。

关键词： BolA3 铁硫蛋白多克隆抗体

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基因间长链非编码RNA?524346在肝细胞癌中的?表达及临床意义

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肝胆胰外科杂志 2017年第1期29卷 51-56页

作者：雷光林杨鹏辉程思杰严锦张绍庚王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国人民解放军第三〇二医院肝胆外科中心北京100039

目的检测基因间长链非编码RNA 524346(long intergenic non-coding RNA 524346,LincRNA 524346)在肝细胞癌患者组织(癌、癌旁)及细胞系(正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系SMMC-7721、HepG2和Huh7)中的表达情况,探讨LincRNA 524346与肝细胞癌临床病理特征的关系。方法应用实时荧光定量PCR法(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测LincRNA 524346在61例肝细胞癌患者癌组织、配对癌旁组织以及肝癌细胞系的表达水平,分析其与肝细胞癌患者临床病理特征之间的相关性。用受试者工作曲线(receiver operating characteristics,ROC)评价肝细胞癌组织中LincRNA 524346的表达水平在肝细胞癌早期诊断中的效能。结果 LincRNA 524346在83.6%(51/61)肝细胞癌患者的癌组织中较配对癌旁组织表达下调,差异有统计学意义(P<0.01);LincRNA 524346的表达水平与肝细胞癌患者的病理分期(P=0.021)、肿瘤数目(P=0.013)、是否合并门静脉癌栓(PVTT)(P<0.01)、肝硬化(P=0.005)和微静脉浸润(MVI)(P<0.001)具有显著相关性。结论 LincRNA 524346在肝细胞癌组织中表达降低,其有望作为潜在肝细胞癌早期诊断、转移的分子标志物。

关键词：癌,肝细胞长链非编码RNA 实时荧光定量PCR

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北京城区夏季PM2.5及不同组分化学和生物成分分析

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环境工程学报 2016年第9期10卷 5009-5015页

作者：焦周光李敬云温占波李劲松高健李娜王涵军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国环境科学研究院北京100012

为了解北京城区夏季大气颗粒物PM_(2.5)及其不同组分的化学、生物污染特征,于2014年5月末连续采样一个月,采样后超声洗脱并冷冻干燥得到PM_(2.5)颗粒物,在PM_(2.5)颗粒物的基础上制备PM_(2.5)水溶性组分和PM_(2.5)单纯颗粒物,进而对PM_(... 详细信息

为了解北京城区夏季大气颗粒物PM_(2.5)及其不同组分的化学、生物污染特征,于2014年5月末连续采样一个月,采样后超声洗脱并冷冻干燥得到PM_(2.5)颗粒物,在PM_(2.5)颗粒物的基础上制备PM_(2.5)水溶性组分和PM_(2.5)单纯颗粒物,进而对PM_(2.5)颗粒物及另外两种组分样品中的化学及生物成分进行分析测定。结果表明,8种水溶性离子总质量占PM_(2.5)各样品的质量分数依次为67.71%,33.37%,0.09%(依次为PM_(2.5)水溶性组分、PM_(2.5)颗粒物、PM_(2.5)单纯颗粒物,下述数据也按此顺序描述);16种"酸提"元素总质量占PM_(2.5)各样品的质量分数依次为4.84%,1.86%,0.78%;各样品中内毒素含量分别为0.054 7 EU·mg-1,0.433 3 EU·mg-1,0.041 9 EU·mg-1;PM_(2.5)颗粒物可以检测到细菌16S r DNA、真菌18S r DNA,拷贝量分别为(2.6±1.0)×108个·g-1、(4.3±0.9)×108个·g-1。

关键词： PM2.5 城区采样化学组分生物组分

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伞冠血蜱亚属小志及亨氏血蜱（Ixodoidea，Ixodidae）雌性标本重新描述

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寄生虫与医学昆虫学报 2016年第3期23卷 148-157页

作者：孙毅许荣满军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

伞冠血蜱亚属是血蜱中结构最复杂的类群之一，主要分布在热带非洲，东洋区以及古北区西南部。在我国已记载的46种血蜱中，其中3种属于伞冠血蜱亚属Rhipistoma。亨氏血蜱Haernaphysalis（R．）heinrichi Schulze曾被俄罗斯学者Kolonin... 详细信息

伞冠血蜱亚属是血蜱中结构最复杂的类群之一，主要分布在热带非洲，东洋区以及古北区西南部。在我国已记载的46种血蜱中，其中3种属于伞冠血蜱亚属Rhipistoma。亨氏血蜱Haernaphysalis（R．）heinrichi Schulze曾被俄罗斯学者Kolonin提及于中国分布，但标本及相关信息无从考究。在整理我国蜱类标本的过程中，从广西龙州地区重新发现该蜱种。本文对该蜱种雌性标本进行了重新描述，并在标本检视的基础上编写了该亚属的检索表以便应用。

关键词：血蜱属伞冠血蜱亚属亨氏血蜱分种检索表中国

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我国新疆首次检出西伯利亚型蜱传脑炎病毒

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病毒学报 2016年第1期32卷 26-31页

作者：刘然张桂林刘晓明李裕昌郑重孙响杨银辉新疆军区疾病预防控制中心乌鲁木齐830011 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

对新疆地区蜱传病毒类群进行调查,本研究利用Illumia深度测序技术对新疆全沟硬蜱体内的病毒小RNA分子进行筛查,从提取的蜱小RNA组份中共测得32 631条病毒特异性读序,77条读序与蜱传黄病毒基因组序列匹配,核苷酸数合计约占病毒基因组的3.... 详细信息

对新疆地区蜱传病毒类群进行调查,本研究利用Illumia深度测序技术对新疆全沟硬蜱体内的病毒小RNA分子进行筛查,从提取的蜱小RNA组份中共测得32 631条病毒特异性读序,77条读序与蜱传黄病毒基因组序列匹配,核苷酸数合计约占病毒基因组的3.8%~2.4%,其中32条读序与国内尚未发现的西伯利亚型蜱传脑炎病毒一致。为对上述结果进行确证,利用RT-PCR对此型病毒核酸进行检测,从蜱总RNA中分别扩增获得病毒包膜基因与基因组3′末端片段,测序比对表明上述片段序列与西伯利亚南部检出病毒高度近似,核苷酸与氨基酸似然率分别为97.2%~95.5%与99.4%~98.3%。综上所述,本研究利用基于深度测序的病毒筛查方法,首次从我国新疆蜱传脑炎疫源地检出西伯利亚型病毒,为下一步针对病毒的分离与流行病学调查提供了重要线索。

关键词：蜱传脑炎病毒西伯利亚型深度测序小RNA 新疆

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BSL-2实验活动对室内环境生物污染的定量分析

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中国消毒学杂志 2016年第10期33卷 951-954,957页

作者：胡凌飞温占波李劲松王洁李娜张柯杨文慧殷喆军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的通过一系列生物安全实验室常见操作及发生意外情况产生的生物气溶胶污染进行定量研究,为实验室相关操作的风险评估和人员防护措施提供科学依据。方法用黏质沙雷菌和大肠杆菌(ATCC 13706)的噬菌体phi X-174代替有传染性的细菌、病毒... 详细信息

目的通过一系列生物安全实验室常见操作及发生意外情况产生的生物气溶胶污染进行定量研究,为实验室相关操作的风险评估和人员防护措施提供科学依据。方法用黏质沙雷菌和大肠杆菌(ATCC 13706)的噬菌体phi X-174代替有传染性的细菌、病毒,在生物安全负压室内进行多种实验操作和意外事故的模拟,通过安德森采样器定量采样法对产生的微生物气溶胶进行定量分析。结果各种实验操作中,黏质细菌产生的最大气溶胶风险是冷冻干燥粉掉落,最大浓度是11 696 cfu/m3;噬菌体产生的最大气溶胶风险是高浓度噬菌体液跌落,最大浓度是4 092 PFU/m3,产生的气溶胶粒子大部分都是可入肺即小于5μm的粒子。结论生物安全实验室内的各种实验操作和意外事故产生的气溶胶浓度差异较大,气溶胶颗粒多为可入肺粒子。定量的实验室风险研究可以更好的保障人员安全和对危险发生的应急处理。

关键词：微生物气溶胶气溶胶颗粒风险评估 BSL-2

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