检索结果-内蒙古大学图书馆

中国预防兽医学报 2009年第10期31卷 785-789页

作者：孙庆歌杨银辉张维军王群康晓平李永强白宇童铁钢杨涛步志高吴东来中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室黑龙江哈尔滨150001 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物/生物安全国家重点实验室北京100071

为建立可同时检测裂谷热病毒(RVFV)、戊型肝炎病毒(HEV)、狂犬病毒(RV)、水泡性口炎病毒(VSV)及口蹄疫病毒(FMDV)5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR快速检测方法,本研究根据GenBank登录的上述5种病毒的全基因组序列,设计了5对多重PCR引物,... 详细信息

为建立可同时检测裂谷热病毒(RVFV)、戊型肝炎病毒(HEV)、狂犬病毒(RV)、水泡性口炎病毒(VSV)及口蹄疫病毒(FMDV)5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR快速检测方法,本研究根据GenBank登录的上述5种病毒的全基因组序列,设计了5对多重PCR引物,通过优化反应条件,建立检测以上5种病毒的多重RT-PCR方法。通过对同一种属的其他病毒及相关病毒的检测,确定方法的特异性;通过对体外转录合成的RNA进行定量检测的方法,确定方法的敏感度。实验结果表明:在同一RT-PCR反应体系中可同时检测以上5种病毒,扩增片段长度分别为499bp、137bp、274bp、224bp、389bp;而对新城疫病毒(NDV)、赤羽病病毒(AKAV)、牛流行热病毒(BEFV)和乙型脑炎病毒(JBEV)的检测均为阴性;5种病毒RNA的最低检测拷贝数分别为2.91×104、3.14×103、1.25×103、6.65×103和2.38×104。利用该方法对11份RV已知阳性样本和7份HEV已知阳性样本检测结果均呈阳性。本研究建立了一种快速、可同时检测5种人兽共患病病毒的多重RT-PCR检测方法,该方法具有良好的特异性和较高的敏感性。

关键词：裂谷热病毒戊型肝炎病毒狂犬病毒水泡性口炎病毒口蹄疫病毒多重RT-PCR

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孳生地治理对控制白纹伊蚊效果的研究

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中国媒介生物学及控制杂志 2009年第1期20卷 3-6页

作者：周毅彬赵彤言冷培恩军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 上海市疾病预防控制中心上海200336

目的观察蚊虫孳生地治理控制白纹伊蚊的效果。方法在试验区共青森林公园游乐区采取各种方法对白纹伊蚊孳生地进行治理;对照区内燃机研究所不采取任何防治措施。实验采用诱蚊诱卵器和CO2诱蚊灯监测白纹伊蚊幼虫和成蚊密度,评价其控制效... 详细信息

目的观察蚊虫孳生地治理控制白纹伊蚊的效果。方法在试验区共青森林公园游乐区采取各种方法对白纹伊蚊孳生地进行治理;对照区内燃机研究所不采取任何防治措施。实验采用诱蚊诱卵器和CO2诱蚊灯监测白纹伊蚊幼虫和成蚊密度,评价其控制效果。结果在孳生地治理后白纹伊蚊幼虫和成蚊密度逐步下降,在2～3周后幼虫和成蚊相关密度指数皆控制在35以下,密度下降率皆>50%。结论孳生地治理可有效控制白纹伊蚊的密度。

关键词：白纹伊蚊孳生地治理诱蚊诱卵器诱蚊灯相关密度指数

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基因免疫制备西尼罗病毒NS5蛋白特异性单抗

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微生物学杂志 2009年第1期29卷 1-6页

作者：夏玉坤刘伯华李靖罗渊张永国杨保安祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

研究了NS5蛋白在西尼罗病毒的特异性检测方面的应用及NS5在黄病毒复制中的作用机理。采用RT-PCR方法扩增了西尼罗病毒株的NS5基因片段,将其克隆至真核表达载体pVAX1,构建真核表达质粒。以重组质粒免疫BALB/c小鼠后取脾脏进行杂交瘤细胞... 详细信息

研究了NS5蛋白在西尼罗病毒的特异性检测方面的应用及NS5在黄病毒复制中的作用机理。采用RT-PCR方法扩增了西尼罗病毒株的NS5基因片段,将其克隆至真核表达载体pVAX1,构建真核表达质粒。以重组质粒免疫BALB/c小鼠后取脾脏进行杂交瘤细胞融合,建立能稳定分泌西尼罗NS5单克隆抗体的杂交瘤细胞株。构建了真核表达质粒pVAX1-WNV-NS5,免疫动物后获得了2B2B9等4株稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,均为IgM型。真核表达质粒免疫后成功地诱导了针对NS5蛋白的体液免疫应答,单抗特异性分析显示4株单抗与其他黄病毒存在一定交叉反应。

关键词：西尼罗病毒 NS5 基因免疫单克隆抗体

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寡核苷酸探针悬浮芯片在病原体检测中的应用

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现代生物医学进展 2009年第8期9卷 1559-1562页

作者：赵金银王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

悬浮芯片与固体芯片、荧光定量PCR并列成为核酸序列鉴定中的重要的分子生物学工具,并在病原菌检测方面显示出不同的应用领域。悬浮芯片能同时检测多种病原菌,具有处理多样本能力、使用灵活、低成本等特点,适合对未知样本检测及环境监控... 详细信息

悬浮芯片与固体芯片、荧光定量PCR并列成为核酸序列鉴定中的重要的分子生物学工具,并在病原菌检测方面显示出不同的应用领域。悬浮芯片能同时检测多种病原菌,具有处理多样本能力、使用灵活、低成本等特点,适合对未知样本检测及环境监控,能够在生物安全、公共卫生、工农业生产中发挥重要作用;而固体芯片能耦联成千上百个探针,但由于在多样本处理、成本方面欠缺,因此适合于对重要的未知病原体的鉴定;荧光定量PCR具较好特异性、灵敏度,以及多样本处理能力,但在高通量方面欠缺,适合有目的地检测已知病原体。目前已建立三种基于悬浮芯片的检测方法:多重PCR扩增、通用引物扩增16S/23SrDNA、直接对实际样本杂交检测。多重PCR具较好特异性,但其多重能力还难以满足悬浮芯片的高通量的需要;通用引物具较好灵敏度及扩增多靶分子能力,但也存在交叉反应等缺陷。同时,采用PCR扩增方法,悬浮芯片检测的是PCR产物,不能客观反应实际样本中存在病原菌数量及是否具生命力。直接杂交环境样本尽管避免了PCR的缺陷,但在灵敏度方面非常欠缺。目前,在环境样本处理上,仍然缺乏有效的、高通量、自动化的方法,不能满足PCR与悬浮芯片多样本检测的需要。

关键词：悬浮芯片病原体基因芯片荧光定量PCR

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酒精对同种骨植入材料中人类免疫缺陷病毒灭活效果的研究

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中国消毒学杂志 2009年第6期26卷 615-617页

作者：刘思扬庄道民董如华白丽鲍作义郭凤武李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究75%酒精浸泡法对骨植入材料中污染的人免疫缺陷病毒灭活效果。方法采用细胞培养法,对75%的酒精浸泡处理骨植入材料中污染的H IV-1ⅢB毒株灭活效果进行检测。结果共对3个单位提供的9批骨植入材料样品进行了检测。用体积分数75%... 详细信息

目的研究75%酒精浸泡法对骨植入材料中污染的人免疫缺陷病毒灭活效果。方法采用细胞培养法,对75%的酒精浸泡处理骨植入材料中污染的H IV-1ⅢB毒株灭活效果进行检测。结果共对3个单位提供的9批骨植入材料样品进行了检测。用体积分数75%酒精浸泡处理30 m in,骨植入材料中H IV-1ⅢB毒株病毒滴度平均降低4.50 TC ID50,对检测标本盲传3代均未出现细胞病变。结论75%酒精浸泡能够完全灭活骨植入材料中污染的人免疫缺陷病毒。

关键词：骨植入材料人免疫缺陷病毒酒精灭活效果

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禽流感病毒宿主范围限制的分子机制研究进展

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微生物学免疫学进展 2009年第3期37卷 45-49页

作者：夏玉坤刘伯华祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

禽流感病毒感染人类已经成为全球性的社会公共问题。病毒通过禽类直接感染人的机制目前尚不清楚。本文主要综述了国内外近年来在禽流感病毒宿主范围限制性方面的研究进展,并藉此来探讨AIV跨种属感染人类的可能机制。

关键词：禽流感病毒宿主范围限制分子机制

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沙眼衣原体多形态膜蛋白D基因的克隆表达及其免疫血清中和作用研究

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微生物学免疫学进展 2009年第1期37卷 11-15页

作者：刘光桥马晓红宋立华左庭婷端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

通过DNA重组技术表达沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)多形态膜蛋白D(polymorphic membrane protein D,PmpD),用Ct-PmpD重组蛋白(rCt-PmpD)制备免疫兔血清,观察该免疫血清在鸡胚攻毒试验中的保护作用。采用PCR技术从Ct L2型基因组中扩增PmpD基因,连接pET32a(+)表达载体,转化宿主细胞***21(DE3),IPTG诱导表达rCt-PmpD,用Ct L2免疫兔血清Western Blot(WB)检测其抗原性。复性后的rCt-PmpD免疫家兔制备免疫血清,免疫荧光法(IF)检测其免疫原性,并用鸡胚攻毒试验检测其中和活性。rCt-PmpD在工程菌中获得高效表达,以包涵体的形式存在胞浆中,WB结果显示rCt-PmpD能被Ct L2免疫兔血清识别。用rCt-PmpD免疫家兔获得的血清在IF中能与Ct L2反应;中和试验表明,rCt-PmpD免疫血清能有效保护鸡胚免于死亡。成功构建重组表达载体rpET32a-PmpD,表达的rCt-PmpD具有良好的免疫原性,rCt-PmpD免疫血清具有中和活性,为进一步研制亚单位疫苗奠定基础。

关键词：沙眼衣原体多形态膜蛋白D 中和试验原核表达

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我国部分地区HIV-1流行株的分离培养

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中国艾滋病性病 2009年第4期15卷 338-340页

作者：苗文泉刘永健李林鲍作义刘思扬庄道民李韩平王铮李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的分离得到能够稳定传代的我国艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)流行毒株,并进行生物学表型鉴定。方法分离、活化正常人的外周血单核细胞(PBMC),分离病人的PBMC,采用PBMC共培养和全血共培养的方法分离病人的HIV-1,通过培养上清内P24抗原含量检... 详细信息

目的分离得到能够稳定传代的我国艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)流行毒株,并进行生物学表型鉴定。方法分离、活化正常人的外周血单核细胞(PBMC),分离病人的PBMC,采用PBMC共培养和全血共培养的方法分离病人的HIV-1,通过培养上清内P24抗原含量检测病毒的复制情况。同时,标本采集后测定CD4+T淋巴细胞计数和病毒载量。结果从270例HIV-1标本中,分离到可稳定传代的强阳性毒株58株,总分离率为21.48%。病毒载量与分离率呈正相关;CD4+T细胞计数对分离率的影响没有显著性差异。病毒载量高的标本比病毒载量低的标本分离株的快高型比例大。提示毒株的生长动力学特征与病人的病毒载量相关。结论从我国5个地区的270份HIV-1感染者样本中,分离出58株原代分离毒株,丰富了我国HIV-1毒种库,为进一步开展相关的艾滋病防治研究提供了重要的材料,奠定了坚实的基础。

关键词：艾滋病病毒Ⅰ型分离毒株

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补体系统介导的促HIV感染增强作用

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中国卫生检验杂志 2009年第7期19卷 1698-1699页

作者：郭彦寇志华周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

补体系统是人体免疫系统的重要组成部分,它主要通过补体经典途径(Classical pathway,CP)和旁路途径(Alternative pathway,LP)或者凝集素途径激活,在机体的自身防御中发挥着重要作用。但是,补体既是生理性的免疫防御物质,又是造成免疫病... 详细信息

补体系统是人体免疫系统的重要组成部分,它主要通过补体经典途径(Classical pathway,CP)和旁路途径(Alternative pathway,LP)或者凝集素途径激活,在机体的自身防御中发挥着重要作用。但是,补体既是生理性的免疫防御物质,又是造成免疫病理性损伤的介质,补体系统的过度激活,会直接或间接地导致机体自身组织的损伤。而机体内的补体水平也与疾病有着密切联系。随着人们对艾滋病发病机制的研究,补体系统在艾滋病发病的各环节中的作用逐渐为人所知。和其它病原体类似,HIV病毒进入机体后能激活补体,补体对HIV病毒有一定的溶解作用,从而发挥抗病毒的功能,但这种溶解作用是有限的,相反在某些情况下,补体系统对HIV病毒的感染和发病的起到了辅助作用,补体受体易化了HIV感染的过程。本文就补体在HIV病毒免疫逃避及病毒的感染机制中的作用作一综述。[第一段]

关键词：补体 HIV 感染增强

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登革2型病毒非结构蛋白NS4B的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

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生物技术通讯 2009年第1期20卷 4-7页

作者：赵慧邓永强刘忠钰李晓峰陈水平姜涛秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:原核表达、纯化登革2型病毒非结构蛋白NS4B,并制备其多克隆抗体,以研究其结构与功能。方法:扩增编码登革2型病毒NS4B的24～238位氨基酸残基的基因序列,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;采... 详细信息

目的:原核表达、纯化登革2型病毒非结构蛋白NS4B,并制备其多克隆抗体,以研究其结构与功能。方法:扩增编码登革2型病毒NS4B的24～238位氨基酸残基的基因序列,并将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;采用蛋白浸提方法从SDS-PAGE胶中回收融合蛋白;用纯化后的融合蛋白免疫BALB/c鼠制备多克隆抗体,采用间接免疫荧光法检测抗体效价。结果:原核表达了NS4B-GST融合蛋白,并获得了其多克隆抗体,抗体效价为1∶800。结论:登革2型病毒NS4B的24～238位氨基酸残基可诱导小鼠产生具有较高效价和特异性的多克隆抗体,这为研究NS4B的结构与功能奠定了基础。

关键词：登革2型病毒非结构蛋白4B 原核表达多克隆抗体

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