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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：杨银辉康晓平李永强刘洪孙庆歌林方祝庆余病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

本研究目的是建立能够在属水平对医学RNA病毒进行快速筛查的基因芯片技术，在出现新(突)发传染病疫情或公共卫生事件时，能利用该芯片，快速将病毒性病原体筛查到属水平，为进一步进行病原体的分离培养、鉴定及传染病疫情的防控提供有... 详细信息

本研究目的是建立能够在属水平对医学RNA病毒进行快速筛查的基因芯片技术，在出现新(突)发传染病疫情或公共卫生事件时，能利用该芯片，快速将病毒性病原体筛查到属水平，为进一步进行病原体的分离培养、鉴定及传染病疫情的防控提供有意义的参考。

关键词： RNA病毒病毒筛查免疫学检验基因芯片

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立氏立克次体蛋白抗原基因表达和重组蛋白抗原免疫印迹分析

立氏立克次体蛋白抗原基因表达和重组蛋白抗原免疫印迹分析

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：吴德平王颖王锡乐陈梅玲温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：表达立氏立克次体主要抗原基因，免疫印迹初步分析重组蛋白抗原的抗原性。方法：根据立氏立克次体全基因组序列选出主要抗原相关基因，采用PCR从全基因组中扩增抗原相关基因，将扩得的基因片段插入原核表达质粒构建抗原基因... 详细信息

目的：表达立氏立克次体主要抗原基因，免疫印迹初步分析重组蛋白抗原的抗原性。方法：根据立氏立克次体全基因组序列选出主要抗原相关基因，采用PCR从全基因组中扩增抗原相关基因，将扩得的基因片段插入原核表达质粒构建抗原基因重组表达质粒，将重组质粒转化大肠杆菌并诱导转化菌表达重组蛋白抗原。采用立氏立克次体感染的豚鼠血清和斑点热患者血清分别与纯化的重组蛋白抗原做免疫印迹分析。结果：经PCR扩增后获得43个目的基因片段，其中36个基因片段在大肠杆菌中高效表达重组蛋白抗原，其中5个蛋白抗原在免疫印迹中与感染豚鼠血清和斑点热患者血清反应均为阳性。结论：免疫印迹筛选出5种立氏立克次体重组蛋白抗原，结果提示它们是能够诱导机体产生特异性免疫应答的主要抗原，可作研制斑点热诊断试剂或亚单位疫苗的新候选蛋白抗原。

关键词：立氏立克次体蛋白基因表达免疫印迹重组蛋白抗原

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一种血液HBV/HCV/HIV-1病毒核酸检测试剂盒pooling法检测不同人群病毒核酸的效果评价

一种血液HBV/HCV/HIV-1病毒核酸检测试剂盒pooling法检测不同人群...

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：鲍作义刘永健李韩平刘思扬庄道民李林李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：评价一种血液HBV/HCV/HIV-1病毒核酸检测试剂盒，对来源于不同人群标本的HBV DNA、HCV RNA、HIV-1 RNA的检测能力。方法：对不同来源的样本。分别使用参比试剂和考核试剂进行检测，检测结果不一致的样本用考核试剂或其它国外... 详细信息

目的：评价一种血液HBV/HCV/HIV-1病毒核酸检测试剂盒，对来源于不同人群标本的HBV DNA、HCV RNA、HIV-1 RNA的检测能力。方法：对不同来源的样本。分别使用参比试剂和考核试剂进行检测，检测结果不一致的样本用考核试剂或其它国外进口病毒核酸定量检测试剂单检进行复核，并对结果进行对比分析。结果：用考核试剂pooling法与参比试剂检测不同人群的HBV DNA、HCV RNA、HIV-1 RNA的符合率分别为96.7％、98.2％、96.3％。考核试剂检测HBV DNA、HCV RNA、HIV-1 RNA的灵敏度分别为95.0％、97.1％、95.7％，特异性均为100％。病毒载量病毒载量>LDL并且<95％检出限的样本，则参比试剂与考核试剂检测HBV DNA、HCURNA、HIV-1 RNA的符合率较低。结论：考核试剂检测不同人群的样本具有较好的效果，表明试剂盒以48倍poo-ling检的方式对血源HBV DNA、HCV RNA、HIV-1 RNA病毒进行筛查，该方法操作简便、经济、敏感、特异。

关键词：艾滋病免疫学检验血液筛查病毒核酸

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激活树突状细胞增强小鼠抗柯克斯体感染力

激活树突状细胞增强小鼠抗柯克斯体感染力

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全军免疫学第七届学术交流会暨免疫学新进展主题论坛

作者：尉雁王锡乐王颖温博海军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的意义：贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)为专性吞噬细胞内寄生菌和重要人兽共患病Q热病原体,本研究分析贝氏柯克斯体抗原对树突状细胞的激活能力和抗原激活树突细胞提供的抗贝氏柯克斯体感染免疫保护效能,以便发现新的保护性抗原。... 详细信息

目的意义：贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)为专性吞噬细胞内寄生菌和重要人兽共患病Q热病原体,本研究分析贝氏柯克斯体抗原对树突状细胞的激活能力和抗原激活树突细胞提供的抗贝氏柯克斯体感染免疫保护效能,以便发现新的保护性抗原。方法：采用多种贝氏柯克斯体抗原分别刺激体外培养BALB/c小鼠树突状细胞和用流式细胞仪分析不同抗原刺激后树突状细胞的免疫分子表达。另外,将不同抗原激活树突状细胞经腹腔注入BALB/c小鼠体内,24小时后再以贝氏柯克斯体毒株攻击小鼠。

关键词：贝氏柯克斯体树突状细胞细胞免疫流式细胞分析

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一种基于荧光素酶的HIV药物筛选细胞模型

一种基于荧光素酶的HIV药物筛选细胞模型

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第七次全国医学分子微生物学及生物技术研讨会

作者：张昕张宝中安小平刘大斌王盛李敬云周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：构建基于荧光素酶的单次感染HIV药物筛选细胞模型用于抗HIV药物筛选。方法:构建含荧光素酶报告基因luc的假型慢病毒质粒，将VSV—G外膜糖蛋白的表达质粒，HIV-1 Rev蛋白表达质粒，HIV Gag—pol蛋白表达质粒和含荧光素酶报告... 详细信息

目的：构建基于荧光素酶的单次感染HIV药物筛选细胞模型用于抗HIV药物筛选。方法:构建含荧光素酶报告基因luc的假型慢病毒质粒，将VSV—G外膜糖蛋白的表达质粒，HIV-1 Rev蛋白表达质粒，HIV Gag—pol蛋白表达质粒和含荧光素酶报告基因的重组慢病毒质粒共转染293FT细胞，制备假型慢病毒。在假型慢病毒生产和再感染新鲜293FT细胞的过程中加入逆转录酶和蛋白酶抑制剂(如AZT，Zidovudine)，检测再感染新鲜293FT细胞中荧光素酶的表达水平，从而判断药物对HIV的抑制作用，进行模型的建立及条件的优化。结果：成功地构建了含荧光素酶报告基因的重组慢病毒质粒pLenti—Luc。利用已知的抗HIV药物进行测试，发现HIV药物处理组细胞中荧光素酶活性低于对照组。结论：成功地建立了基于荧光素酶的HIV药物筛选细胞模型，该系统使用单次感染的报告病毒，具有良好的安全性，而荧光素酶报告基因使该系统具备极高的敏感性。

关键词：荧光素酶基因假型慢病毒 HIV感染药物筛选细胞模型

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人淋巴细胞H9体外感染HIV-1后APOBEC3G mRNA水平的监测

人淋巴细胞H9体外感染HIV-1后APOBEC3G mRNA水平的监测

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：刘永健李林鲍作义刘思扬庄道民李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：观察人淋巴细胞H9体外感染HIV-1后，在其细胞内APOBEC3G蛋白水平降低的同时，APOBEC3GmRNA的水平是否也下降，阐明HIV-1抵抗APOBEC3G蛋白抗病毒作用的机制。方法：H9细胞感染HIV-1后，在不同时间点收集细胞和培养上清，提取... 详细信息

目的：观察人淋巴细胞H9体外感染HIV-1后，在其细胞内APOBEC3G蛋白水平降低的同时，APOBEC3GmRNA的水平是否也下降，阐明HIV-1抵抗APOBEC3G蛋白抗病毒作用的机制。方法：H9细胞感染HIV-1后，在不同时间点收集细胞和培养上清，提取细胞总RNA，应用实时定量PCR检测APOBEC3GmRNA的水平。检测上清液的HIV-1p24抗原含量验证H9细胞是否感染了HIV-1。结果：①采用⊿⊿CT相对定量PCR方法检测APOBEC3GmRNA水平，其准确性高于94％。②在体外水平，H9细胞在感染HIV后，APOBEC3GmRNA水平没有显著变化(P>0.05)。结论：HIU-1可能主要通过降低APO-BEC3G蛋白的水平而抵抗其抗病毒作用的，这比通过降低mRNA水平来抵抗APOBEC3G的抗病毒作用更为快速、有效。

关键词：人类免疫缺陷病毒免疫学检验淋巴细胞 APOBEC3G mRNA水平

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乙型肝炎病毒核心蛋白作为表位疫苗载体的应用

乙型肝炎病毒核心蛋白作为表位疫苗载体的应用

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第七次全国医学分子微生物学及生物技术研讨会

作者：殷瑛徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitits B virus core protein，HBc)可以形成二十面体对称的颗粒样结构，由于其N端，C端和主要免疫显性区域(major immunodominant region，MIR)允许一定程度的缺失和外源插入，并且能够将外源序列重复且高密... 详细信息

乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitits B virus core protein，HBc)可以形成二十面体对称的颗粒样结构，由于其N端，C端和主要免疫显性区域(major immunodominant region，MIR)允许一定程度的缺失和外源插入，并且能够将外源序列重复且高密度地暴露在颗粒的表面，诱发强烈的外源序列特异的体液和细胞免疫反应，从八十年代中期就开始被运用于表位疫苗的研究。主要从影响HBc作为表位疫苗载体的因素，包括HBc长度，外源插入位点和表位序列的性质等来介绍HBc作为表位疫苗载体的应用。

关键词：乙型肝炎病毒核心蛋白表位疫苗载体基因重组免疫显性区域外源插入位点表位序列

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HIV-1的基因重组：分子机制及生物学特征

HIV-1的基因重组：分子机制及生物学特征

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第四届全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：陈立力李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 兰州军区乌鲁木齐总医院新疆乌鲁木齐830000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

基因重组是HIV-1分子进化的一种重要机制，也是导致其多态性不断增加的重要原因。重组发生在病毒基因组的逆转录过程中，通过模板选择来实现。新的重组病毒可能具有传播优势，从而成为流行重组病毒((CRFs)。到目前为止，全世界共发现了4... 详细信息

基因重组是HIV-1分子进化的一种重要机制，也是导致其多态性不断增加的重要原因。重组发生在病毒基因组的逆转录过程中，通过模板选择来实现。新的重组病毒可能具有传播优势，从而成为流行重组病毒((CRFs)。到目前为止，全世界共发现了43种CRFs，其数量还会不断增加。HIV-1基因重组将有利于病毒复制和传播的突变联合起来，使病毒能更快地逃避宿主免疫和药物选择压力。因此，基因重组是HIV-1进化过程中不可或缺的一部分。本文对HIV-1基因重组的分子机制及其对传播及致病特征的影响进行了阐述。

关键词：艾滋病病毒传播分子进化基因重组生物学特征

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应用气溶胶发生法评价空气微生物采样器采样效率

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中国消毒学杂志 2009年第3期26卷 245-248页

作者：杨文慧温占波于龙赵建军王洁李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室生物防护装备工程技术研究中心北京100071

目的建立可控性强的实验室微生物气溶胶发生系统,用以科学评价空气微生物采样器的采样效率。方法规范气溶胶发生系统参数,采用粘质沙雷菌气溶胶,以六级安德森采样器为标准,对5种空气微生物采样器进行平行采样并比较采样效率。结果采用... 详细信息

目的建立可控性强的实验室微生物气溶胶发生系统,用以科学评价空气微生物采样器的采样效率。方法规范气溶胶发生系统参数,采用粘质沙雷菌气溶胶,以六级安德森采样器为标准,对5种空气微生物采样器进行平行采样并比较采样效率。结果采用本研究微生物气溶胶发生系统产生的粘质沙雷菌气溶胶颗粒的中值直径为1.60±0.08μm。在所试验的6种微生物采样器中,以二级安德森空气微生物采样器采样效率最高,其次是六级安德森采样器,另外4种空气微生物采样器采样效率明显偏低。结论本实验所建立的实验室气溶胶发生法可以有效控制指示菌粒径分布,在相同气溶胶环境下不同采样器的采样效率有明显差异;二级安德森采样器的采样效率高于六级安德森采样器,其他4种采样器的采样效率均明显低于六级安德森采样器。

关键词：空气微生物采样器采样效率粘质沙雷菌气溶胶

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安徽黄山地区中华硬蜱及其宿主感染莱姆病Borrelia afzelii的检测

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寄生虫与医学昆虫学报 2009年第3期16卷 141-146页

作者：孙毅许荣满葛学峰曹务春病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 安徽省黄山市532医院防疫所安徽黄山245041

利用PCR和病原体分离技术对安徽黄山地区中华硬蜱及其宿主感染莱姆病螺旋体的状况进行了检测，结果从40只黄山林区的中华硬蜱中获得了一株莱姆病螺旋体分离株，寄主动物及其他中华硬蜱均未获得阳性分离结果。以16srRNA为靶标进行PCR检测... 详细信息

利用PCR和病原体分离技术对安徽黄山地区中华硬蜱及其宿主感染莱姆病螺旋体的状况进行了检测，结果从40只黄山林区的中华硬蜱中获得了一株莱姆病螺旋体分离株，寄主动物及其他中华硬蜱均未获得阳性分离结果。以16srRNA为靶标进行PCR检测，6．78％雌性和5％雄性中华硬蜱发现有阳性感染，2只草兔（92只）和1只麂子（16只）也发现有阳性感染；若蜱和其余宿主动物未发现阳性感染。阳性分离株和扩增获得的16srRNA序列结果一致，同GenBank中的***的系统发育关系最近，提示该分离株螺旋体属于***。该结果与前期的实验传播结果提示中华硬蜱是我国南方莱姆病的传播媒介。

关键词：中华硬蜱 Borrelia afzelii 寄主动物系统发育

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