检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2008年第10期48卷 1418-1423页

作者：秦成峰秦鄂德病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

RIG-I样受体(RIG-I likereceptors,RLR)是一类新发现的模式识别受体,能够识别细胞质中的病毒RNA,通过RLR级联信号诱导干扰素和促炎症细胞因子的产生,对抗病毒天然免疫的建立起着非常重要的作用。RLR信号通路既受宿主的严格调控,也能够... 详细信息

RIG-I样受体(RIG-I likereceptors,RLR)是一类新发现的模式识别受体,能够识别细胞质中的病毒RNA,通过RLR级联信号诱导干扰素和促炎症细胞因子的产生,对抗病毒天然免疫的建立起着非常重要的作用。RLR信号通路既受宿主的严格调控,也能够作为病毒逃避宿主干扰素反应的靶点。本文重点讨论了RLR及其在RNA病毒识别和抗病毒天然免疫中的作用。

关键词：天然免疫 RNA病毒干扰素 RIG-I MDA5 RLR

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登革2型病毒中国株3′非编码区RNA元件对翻译的影响

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微生物学报 2008年第5期48卷 583-588页

作者：尉雁姜涛李晓峰赵慧刘忠钰邓永强刘然秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】探讨登革病毒(dengue virus,DEN)3′非编码区(untranslated region,UTR)RNA元件(VR、RCS2、CS2、CS1和SL)对基因组翻译的影响。【方法】首先构建登革2型病毒中国株(DEN2-43)UTR与萤火虫荧光素酶基因(LUC)组成的病毒诱导报告基因... 详细信息

【目的】探讨登革病毒(dengue virus,DEN)3′非编码区(untranslated region,UTR)RNA元件(VR、RCS2、CS2、CS1和SL)对基因组翻译的影响。【方法】首先构建登革2型病毒中国株(DEN2-43)UTR与萤火虫荧光素酶基因(LUC)组成的病毒诱导报告基因(virus induced reporter gene,VIRG),在此基础上分别构建包含DEN2-433′UTR不同RNA元件的VIRG,并通过LUC检测、实时RT-PCR和Western blot方法分析含有不同元件VIRG对翻译效率的影响。【结果】发现完整的3′UTR缺失可显著抑制翻译,含有病毒VR元件VIRG的翻译水平与完整3′UTR的VIRG相似,RCS2或CS2元件可提高VIRG的翻译效率,CS1或SL元件可降低VIRG的翻译效率。【结论】DEN2-43病毒基因组3′UTR参与了报告基因的翻译,其不同元件具有可上调和下调报告基因翻译效率的作用。

关键词：登革病毒 3’UTR 翻译调控

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分枝杆菌噬菌体D29气溶胶特性的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第2期28卷 123-126页

作者：温占波王洁赵建军杨文惠于龙李娜鹿建春李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的为了研究噬菌体D29气溶胶吸入治疗结核分枝杆菌的可行性，测试了噬菌体D29耐雾化能力、喷雾量、气溶胶粒径等气溶胶特性参数。方法负压实验室气雾柜内发生噬菌体D29气溶胶，TSI3321气溶胶粒径分析仪测试了气溶胶空气动力学直径。And... 详细信息

目的为了研究噬菌体D29气溶胶吸入治疗结核分枝杆菌的可行性，测试了噬菌体D29耐雾化能力、喷雾量、气溶胶粒径等气溶胶特性参数。方法负压实验室气雾柜内发生噬菌体D29气溶胶，TSI3321气溶胶粒径分析仪测试了气溶胶空气动力学直径。Anderson六级空气微生物采样器测试了生物粒子气溶胶中值直径。据雾化前后噬菌体D29的浓度变化及体积变化得到噬菌体D29的雾化时间存活率和雾化量。结果噬菌体D29气溶胶空气动力学直径为0．872μm，生物粒子气溶胶中值直径为2．21μm。噬菌体D29在雾化5、15、30、45、60min后的存活率分别为89．78％、77．19％、48．86％、33．99％、30．12％。气溶胶的雾化量为232μl／min。结论噬菌体D29气溶胶粒径、耐雾化能力及喷雾量等气溶胶参数可以进一步进行动物气溶胶吸入治疗结核分枝杆菌感染方面的研究。

关键词：结核分枝杆菌噬菌体D29 气溶胶

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艾滋病病毒长期不进展者、缓慢进展者、高危暴露者以及正常人群APOBEC3G mRNA水平的差异

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中华流行病学杂志 2008年第4期29卷 356-359页

作者：刘永健李林鲍作义刘思扬庄道民李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的检测我国中部地区艾滋病病毒（HIV）流行区4类不同人群APOBEC3G（hA3G）mRNA水平的差异并分析其与疾病进程的关系。方法采集研究人群的静脉全血标本，分离外周血单核细胞（PBMCs），冻存于液氮中；复苏PBMCs，提取总RNA，mRNA体外... 详细信息

目的检测我国中部地区艾滋病病毒（HIV）流行区4类不同人群APOBEC3G（hA3G）mRNA水平的差异并分析其与疾病进程的关系。方法采集研究人群的静脉全血标本，分离外周血单核细胞（PBMCs），冻存于液氮中；复苏PBMCs，提取总RNA，mRNA体外逆转录为eDNA，应用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测不同人群血标本APOBEC3GmRNA的水平。结果HIV长期不进展者标本13份，其CD；T淋巴细胞计数平均为（716±169）个／弘1，平均感染时间为（12．5±2．3）年；HIV缓慢进展者标本48份，其CD；T淋巴细胞计数平均为（233±144）个／μ1，平均感染时间为（10．7±2．2）年。HIV长期不进展者APOBEc3GmRNA水平高于正常人群的水平；HIV缓慢进展者APOBEC3GmRNA水平高于高危人群和正常人群的水平。HIV长期不进展者和缓慢进展者的CD；T淋巴细胞数量与APOBEC3GmRNA水平无相关性。结论我国中部地区HIV流行区4类不同人群APOBEC3GmRNA水平存在差异，并且HIV长期不进展者和缓慢进展者CD；T淋巴细胞数量与APOBEC3GmRNA水平无相关性。

关键词：艾滋病病毒 APOBEC蛋白 mRNA水平

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炭疽毒素保护性抗原和LFn介导的增强型绿色荧光蛋白进入HeLa细胞的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2008年第2期28卷 158-161页

作者：易绍琼于少洋于婷任声权刘树玲杨秀旭董大勇陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究炭疽毒素保护性抗原（protective antigen，PA）和致死因子（lethal factor，LF）N端254个氨基酸（LFn）在辅助增强型绿包荧光蛋白（EGFP）进入细胞中的作用。方法分别扩增炭疽毒素的基因片段和EGFP的基因全长，将两片段先后克... 详细信息

目的研究炭疽毒素保护性抗原（protective antigen，PA）和致死因子（lethal factor，LF）N端254个氨基酸（LFn）在辅助增强型绿包荧光蛋白（EGFP）进入细胞中的作用。方法分别扩增炭疽毒素的基因片段和EGFP的基因全长，将两片段先后克隆至pET-21a（＋），构建成重组表达质粒pET-LFn-EGFP，在大肠杆菌中诱导表达，并对融合蛋白LFn-EGFP进行纯化。利用荧光共聚焦显微镜和流式细胞术研究LFn-EGFP融合蛋白进入细胞的情况。结果获得较高纯度的融合蛋白LFn-EG-FP，纯度可达90％以上，体外实验显示该融合蛋白保留了LFn与PA结合的活性，并且能够进入到HeLa细胞中。结论LFn-EGFP蛋白本身电会以未知的机制进入细胞，在PA辅助时，LFn-EGFP进入细胞的效率会有所增加。

关键词：致死因子炭疽毒素保护性抗原增强型绿色荧光蛋白 HeLa细胞炭疽杆菌

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丙型肝炎病毒体外培养细胞模型研究进展

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中华肝脏病杂志 2008年第10期16卷 799-800页

作者：王盘童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所十室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

由于丙型肝炎病毒（HCV）的高度变异性以及缺乏高效率的细胞培养体系，人们对HCV生活史的认识、对相关疫苗和特异性抗病毒药物的研究进展缓慢。寻找高效率的HCV体外细胞培养体系一直是HCV研究的重点，现就近年来在相关领域的研究进展作... 详细信息

由于丙型肝炎病毒（HCV）的高度变异性以及缺乏高效率的细胞培养体系，人们对HCV生活史的认识、对相关疫苗和特异性抗病毒药物的研究进展缓慢。寻找高效率的HCV体外细胞培养体系一直是HCV研究的重点，现就近年来在相关领域的研究进展作一综述。

关键词：肝炎病毒丙型细胞培养模型细胞

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用基因组DNA剪接技术克隆SIgA相关基因

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中国生物工程杂志 2008年第6期28卷 1-6页

作者：张宝中安小平张昕刘大斌单云竹周育森童贻刚军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的:克隆分泌型IgA(SIgA)相关基因——J链基因(IgJ)、多聚免疫球蛋白受体基因(pIgR)和IgA重链恒定区基因(IGHA),为进一步构建SIgA真核表达质粒奠定基础。方法:采用"基因组DNA剪接"技术,根据已发表的IgJ、pIgR和IGHA的核苷酸... 详细信息

目的:克隆分泌型IgA(SIgA)相关基因——J链基因(IgJ)、多聚免疫球蛋白受体基因(pIgR)和IgA重链恒定区基因(IGHA),为进一步构建SIgA真核表达质粒奠定基础。方法:采用"基因组DNA剪接"技术,根据已发表的IgJ、pIgR和IGHA的核苷酸序列,通过计算机软件分别设计各个基因片段外显子的优化引物,从人外周血基因组DNA中直接扩增各基因的外显子序列;然后人工设计融合相邻外显子的融合引物,采用重叠PCR技术,把各基因片段的外显子串联起来形成全长编码序列,完成基因组DNA的体外剪接。扩增的PCR产物纯化后克隆到pGEM-T Easy Vector中,通过DNA测序对阳性克隆进行分析鉴定。结果:PCR扩增的IgJ、pIgR和IGHA基因与预期大小一致;测序结果表明实验获得的上述基因与GenBank中的目标基因序列完全一致。结论:通过基因组DNA剪接技术成功克隆人类SIgA3个相关基因,提示此技术是合成多外显子cDNA的有效手段。

关键词：分泌型IgA 基因组DNA剪接重叠延伸聚合酶链式反应

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SARS-CoV BJ01株S蛋白基因突变对病毒感染性的影响

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军事医学科学院院刊 2008年第2期32卷 106-110,120页

作者：韩剑峰姜涛陈水平李晓峰秦成峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建SARS-CoV BJ01株病毒受体结合位点及七肽重复区的突变病毒,为深入探讨SARS-CoV的致病机制及设计抗病毒策略提供理论依据。方法:采取体外突变、分段克隆及拼接策略构建BJ01株突变病毒基因组全长cDNA,经体外转录获取突变病毒,观... 详细信息

目的:构建SARS-CoV BJ01株病毒受体结合位点及七肽重复区的突变病毒,为深入探讨SARS-CoV的致病机制及设计抗病毒策略提供理论依据。方法:采取体外突变、分段克隆及拼接策略构建BJ01株突变病毒基因组全长cDNA,经体外转录获取突变病毒,观察突变病毒与原型病毒对细胞感染性的差异。结果:获得了S蛋白不同位点的突变病毒,受体结合位点的突变明显降低了BJ01株病毒对Vero E6细胞的感染性,突变病毒的蚀斑滴度比原型病毒降低3个数量级。结论:SARS-CoV BJ01株S蛋白的受体结合位点及七肽重复区与病毒的毒力及致病性密切相关。

关键词： SARS冠状病毒刺突蛋白受体结合域七肽重复区

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西尼罗病毒Chin-01株5′非编码区(UTR)中复制相关元件的功能研究

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解放军医学杂志 2008年第7期33卷 816-822页

作者：李晓峰姜涛陈水平韩剑峰邓永强秦成峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究西尼罗病毒Chin-01株5′非编码区(UTR)中复制相关元件的功能,为探讨该病毒基因组复制的分子机制提供理论依据。方法通过生物信息学分析,初步筛选出Chin-01株5′UTR中可能的复制相关位点,并构建相应的重组亚基因组突变体,然后以... 详细信息

目的研究西尼罗病毒Chin-01株5′非编码区(UTR)中复制相关元件的功能,为探讨该病毒基因组复制的分子机制提供理论依据。方法通过生物信息学分析,初步筛选出Chin-01株5′UTR中可能的复制相关位点,并构建相应的重组亚基因组突变体,然后以上此为模板,经体外RdRp活性分析及凝胶阻滞试验,观察NS5的RdRp活性及与突变体的结合能力,再将突变位点引入该病毒感染性全长cDNA克隆,初步观察突变体恢复病毒的生物学特性。结果5′UTR中第45-60位核苷酸缺失的突变体无法合成子链,与NS5的结合能力也显著降低。第8和9位核苷酸改变的突变体则丧失了合成子代RNA及与NS5的结合能力,第8、9、69和70位核苷酸突变后形成的结构恢复突变体则可以合成子链RNA,并可与NS5特异性结合。同时,第45-60位核苷酸缺失及第8和9位核苷酸突变的恢复病毒的增殖能力也显著降低。结论Chin-01株5′UTR中的第45-60位及第8、9、69和70位核苷酸维持的结构可能是该病毒基因组复制的关键位点。

关键词：西尼罗病毒 5′非翻译区病毒非结构蛋白质类

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登革4型病毒基因组cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用

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军事医学科学院院刊 2008年第3期32卷 201-206页

作者：于学东姜涛陈水平邓永强韩剑峰赵慧李晓峰刘然于曼秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用。方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase,***)报告基因的复制子(***2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6)。将构建... 详细信息

目的:探讨登革4型病毒C基因中保守的cHP发卡结构对病毒复制和翻译的调控作用。方法:首先在获得含有海肾荧光素酶(Renilla luciferase,***)报告基因的复制子(***2A-RP)基础上,利用重叠PCR构建cHP发卡结构系列突变体(cHP1～cHP6)。将构建的突变体(包括相关的阳性和阴性对照复制子)分别线性化并体外转录成RNA后,取等量各转录体RNA,以脂质体法分别转染BHK-21细胞。通过间接免疫荧光(IFA)、RT-PCR、***报告基因检测技术和实时定量RT-PCR对突变体的复制和翻译进行检测。结果:cHP发卡结构系列突变体均可在BHK-21细胞中复制并稳定表达病毒特异蛋白,在该发卡结构中引入缺失或突变对病毒早期翻译并无显著影响,但病毒RNA复制均显著下调。结论:cHP发卡结构在基因组RNA复制过程中可能具有重要的调控作用。

关键词：登革病毒复制子报告基因复制翻译

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