检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2009年第5期29卷 424-430页

作者：王铮李敬云鲍作义李韩平庄道民刘思杨李林军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的分析我国HIV-1主要亚型毒株的gp120区域的序列特征，并表达出gp120糖基化蛋白，为研究gp120的致病机制和设计疫苗奠定基础。方法利用巢式PCR从来自于不同省份的5名HIV-1感染者外周血单个核细胞DNA中扩增全长gp120基因并测序，对序... 详细信息

目的分析我国HIV-1主要亚型毒株的gp120区域的序列特征，并表达出gp120糖基化蛋白，为研究gp120的致病机制和设计疫苗奠定基础。方法利用巢式PCR从来自于不同省份的5名HIV-1感染者外周血单个核细胞DNA中扩增全长gp120基因并测序，对序列特征进行分析，并将获得的gp120基因克隆入真核表达载体，体外表达获得gp120糖基化蛋白。结果序列分析显示，此5条gp120序列分属HIV-1 Thai-B、BC重组和AE重组亚型，虽然亚型不同，但这些gp120序列在相同的位置都存在着一些保守的糖基化位点，且都具备相同的Furin蛋白酶第一切割位点，与参考序列比较发现，不同的HIV亚型序列中，除V3序列长度较为保守外，V1、V2、V4、V5各区域都有不同程度的缺失现象，与BC重组和AE重组亚型相比，Thai-B亚型V3的顶端环呈现出多种组合。最终将这5条gp120序列都克隆入真核表达载体并表达出糖基化的gp120蛋白。结论在设计疫苗和检测试剂时应考虑到膜区的高变性，gp120糖蛋白的体外表达有利于进一步开展针对我国主要HIV流行毒株膜蛋白致病机制和疫苗学的研究。

关键词： HIV-1 gp120 糖基化蛋白

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HIV-1拉米夫定(3TC)耐药毒株的体外诱导培育和鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第3期26卷 220-223页

作者：李珏鲍作义刘思扬庄道民李韩平刘永健李林杨坤李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的通过体外传代培养,将我国HIV1药物敏感毒株诱导为拉米夫定耐药毒株。方法在MT4细胞中国HIV1B′亚型CNHN24毒株培养系统中加入0.008μmolL拉米夫定,逐渐增加药物浓度进行传代和培养,每隔3～5代测定半数抑制浓度(IC50),并用RTPCR法扩... 详细信息

目的通过体外传代培养,将我国HIV1药物敏感毒株诱导为拉米夫定耐药毒株。方法在MT4细胞中国HIV1B′亚型CNHN24毒株培养系统中加入0.008μmolL拉米夫定,逐渐增加药物浓度进行传代和培养,每隔3～5代测定半数抑制浓度(IC50),并用RTPCR法扩增pol区基因,进行基因型耐药性分析。将表型和基因型耐药结果与敏感株进行比较。结果培养6代后,IC50由野生毒株的0.018μmolL逐渐提高到0.15μmolL;第7代时,IC50突然增加到大于2048μmolL;pol区的184位氨基酸由甲硫氨酸(M)突变为异亮氨酸(I)。去除药物继续培养5代,IC50仍维持>2048μmolL,pol区184位氨基酸仍为异亮氨酸,没有发生回复突变。结论在国内首次用中国HIV1毒株诱导培育出可能稳定传代的3TC耐药株,可用于HIV1耐药性的研究和HIV1药物的药效学评价。该耐药株已申请国家专利。

关键词：体外诱导 HIV-1 CNI-IN2A-毒株拉米夫定耐药株

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ASPCR检测微量HIV-1 K103N耐药突变方法的建立

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第12期29卷 1130-1134页

作者：郭东星李韩平李林庄道民王铮鲍作义刘思扬刘永健李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立检测微量HIV-1 K103N耐药突变的等位基因特异扩增实时定量PCR（allele-specific real-time PCR，ASPCR）方法，用于微量K103N耐药突变的检测和分析。方法首先建立检测K103N耐药突变的ASPCR方法，然后对方法进行验证，最后采用AS... 详细信息

目的建立检测微量HIV-1 K103N耐药突变的等位基因特异扩增实时定量PCR（allele-specific real-time PCR，ASPCR）方法，用于微量K103N耐药突变的检测和分析。方法首先建立检测K103N耐药突变的ASPCR方法，然后对方法进行验证，最后采用ASPCR方法检测对照样本。构建含K103N突变的质粒作为标准品，然后设计特异性引物用以区分野生型和突变型模板，采用SYBRgreen法进行实时定量PCR，并绘制标准曲线。分别采用特异性和非特异性引物扩增模板，根据二者Ct（cycle threshold）值结合相应的标准曲线判断是否存在K103N突变及突变比例。对ASPCR检测K103N突变位点的特异性、敏感性、准确性、重复性等进行验证。结果特异性和非特异性引物扩增等量野生型模板的Ct值之差（△Ct）可达13．56；当突变比例小于0．1％时仍具有良好的准确性；批内变异系数小于0．7，批间变异系数小于1．6；检测灵敏度可达0．01％。检测阴性对照样本的△Ct显著高于临界值，阳性对照样本检测结果均为阳性。结论ASPCR是一种快速、灵敏、准确的检测HIV-1微量耐药突变的方法，可为临床抗病毒治疗提供理论指导。

关键词： HIV ASPCR 微量耐药

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HIV的起源与SIV的跨种传播

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军事医学科学院院刊 2009年第6期33卷 501-504页

作者：李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室全军艾滋病检测中心北京100071

人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)是在全球广泛流行并导致严重危害的人类病原体,是由非人灵长类动物免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)跨种传播给人类并进化而来的。本文介绍了SIV跨种传播进化为多种HI... 详细信息

人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)是在全球广泛流行并导致严重危害的人类病原体,是由非人灵长类动物免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)跨种传播给人类并进化而来的。本文介绍了SIV跨种传播进化为多种HIV毒株的科学发现及跨种传播病毒在新型宿主中的适应性进化,分析了这些发现的科学和公共卫生意义。

关键词：人免疫缺陷病毒非人灵长类动物免疫缺陷病毒起源进化

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1例早期HIV感染者外周血抗体变化和病毒基因序列分析

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军事医学科学院院刊 2008年第1期32卷 15-18,48页

作者：李林鲍作义苗文泉刘永健隋洪帅刘思扬庄道民李韩平李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:观察HIV早期感染者体内的抗体变化特征,为进一步研究HIV感染早期病毒与宿主的相互作用奠定基础。方法:对一名HIV感染者进行流行病学调查、外周血血清学检测、病毒载量和CD4细胞数检测、体外病毒分离,观察该感染者体内免疫学反应及... 详细信息

目的:观察HIV早期感染者体内的抗体变化特征,为进一步研究HIV感染早期病毒与宿主的相互作用奠定基础。方法:对一名HIV感染者进行流行病学调查、外周血血清学检测、病毒载量和CD4细胞数检测、体外病毒分离,观察该感染者体内免疫学反应及病毒复制特点。使用巢式PCR方法扩增病毒env区C2-V3区基因,通过测序及序列分析观察病毒部分膜区基因特点。结果:该感染者为早期感染,外周血抗体S/CO值呈逐渐增高趋势,外周血中针对HIV抗原的特异性条带呈逐渐增多趋势,感染183 d后出现针对所有HIV抗原的特异性抗体,病毒载量在感染后3个月时最高(18 000 cp/ml),随后下降,从该感染者外周血中分离的病毒毒力较强。基因序列分析显示该病毒为CRF01_AE亚型,与泰国93TH054毒株基因距离最近。结论:该感染者体内病毒可能起源于泰国毒株,对HIV早期感染的鉴定为研究我国HIV早期感染者体内病毒进化奠定了基础。

关键词：人免疫缺陷病毒早期感染血清学检测 CRF01_AE亚型 HIV抗体序列分析

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宁夏回族自治区HIV-1感染者抗病毒治疗前免疫学与病毒学指标调查

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第7期27卷 615-618页

作者：李韩平鲍作义王秀珍庄道民刘永健李林刘思扬李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 宁夏回族自治区疾病预防控制中心

目的了解该地区部分HIV-1感染者抗病毒治疗前CD4^+ T淋巴细胞、病毒载量分布及耐药性毒株存在情况。方法利用流式细胞技术对CD4^+ T淋巴细胞计数,使用NASBA方法测定病毒载量,利用RT-PCR获得目的基因序列,登陆http://***分析耐药突变位... 详细信息

目的了解该地区部分HIV-1感染者抗病毒治疗前CD4^+ T淋巴细胞、病毒载量分布及耐药性毒株存在情况。方法利用流式细胞技术对CD4^+ T淋巴细胞计数,使用NASBA方法测定病毒载量,利用RT-PCR获得目的基因序列,登陆http://***分析耐药突变位点。结果该地区感染人群中66.66%的患者CD4^+ T淋巴细胞数>350个/mm^3,患者病毒载量对数平均值为3.784±1.048,检测样本中有2例出现耐药性。结论该地区HIV-1感染者目前多为无症状期,但病毒拷贝数较高,耐药性毒株流行水平较低。应在该地区加强抗病毒治疗的宣传。

关键词： H1V-1 CD4^+T淋巴细胞病毒载量耐药性

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对in—houseHIV-1基因型耐药性检测方法的评价

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中华检验医学杂志 2011年第9期34卷 849-854页

作者：耿庆茂李韩平辛天义庄道民鲍作义刘永健李林王铮刘思扬李敬云全军艾滋病检测中心军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071 河南省沈丘县卫生局

目的评价in—houseHIV—1基因型耐药检测方法的敏感性与准确性。方法收集2004年4月至2008年10月全军艾滋病检测中心检测的来自河南、广西130份血浆标本。以美国FDA批准的HIV-1基因型耐药性检测系统（ViroSeq^TMv2．0）为参考方法，并与... 详细信息

目的评价in—houseHIV—1基因型耐药检测方法的敏感性与准确性。方法收集2004年4月至2008年10月全军艾滋病检测中心检测的来自河南、广西130份血浆标本。以美国FDA批准的HIV-1基因型耐药性检测系统（ViroSeq^TMv2．0）为参考方法，并与建立起的基因型耐药性检测方法（in—house）平行检测待检样本，比较二者在扩增效率、耐药突变位点检测以及耐药报告等方面的一致性。结果已知的14850个耐药突变位点中，2种方法可同时对99．3％（14752／14850）的耐药突变位点准确检出；在对不同突变位点的检测中，2种方法对蛋白酶抑制剂耐药突变位点、逆转录酶抑制剂耐药突变位点及两类抑制剂耐药突变位点检测一致率分别为99．7％、99．0％和99．3％（Kappa值分别为0．9099、0．9521和0．9488，P值均〈0．01）；2种方法出具的两类药物的耐药结果报告一致率94．6％（Kappa=0．6374，P〈0．01）。本研究共检测到34个ViroSeq“数据库（ViroSeq^TMsoftwarev2．7）未收录位点，其中2个突变位点对耐药的影响较大。结论in—house基因型耐药性检测方法与ViroSeq^TM基因型耐药性检测系统在耐药突变位点检测以及评价上具有高度一致性，是一种快速准确、性价比高的HIV-1基因型耐药检测方法，同时在耐药数据库方面具有一定优势。

关键词： HIV-1 基因型抗药性,病毒微生物敏感性试验

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我国部分地区HIV-1流行毒株亚型分布及gag基因变异特征研究

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军事医学科学院院刊 2009年第6期33卷 505-508页

作者：陈立力刘永健李韩平鲍作义庄道民刘思扬王铮赖章丽李林李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室全军艾滋病检测中心北京100071 兰州军区乌鲁木齐总医院乌鲁木齐830000

目的:分析我国4个地区的人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)主要流行毒株的亚型分布,以及在宿主免疫压力下的基因变异和抗原表位的变化情况,初步探讨这些地区HIV-1gag基因的分子进化特征。方法:从来自河南、广东、四川、北京的HIV-1感染者血浆样... 详细信息

目的:分析我国4个地区的人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)主要流行毒株的亚型分布,以及在宿主免疫压力下的基因变异和抗原表位的变化情况,初步探讨这些地区HIV-1gag基因的分子进化特征。方法:从来自河南、广东、四川、北京的HIV-1感染者血浆样本中提取基因组RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增部分gag基因,用扩增产物直接进行测序;使用Genotyping Tool软件进行亚型分析,使用MEGA4.1软件绘制系统进化树;用Distance工具计算各个亚型序列的基因离散率;用SNAP程序分析同义替换率与非同义替换率的比值(Ks/Ka),并对各亚型中我国人群中较常见的HLA-Ⅰ型限制的CTL抗原表位的突变情况进行分析。结果:这些地区HIV-1主要流行毒株gag基因亚型主要是B′、CRF07_BC、CRF01_AE、B、CRF08_BC和CRF02_AG。各亚型内的基因离散率不同,由大到小排列为CRF01_AE>B>CRF08_BC>CRF07_BC>B′,Ks/Ka为CRF01_AE>B>CRF08_BC>B′>CRF07_BC。p17区段的CTL抗原表位变异远大于p24区段。各个亚型共享序列中存在的突变位点由多到少排列为CRF01_AE>B>B′>CRF07_BC。结论:我国HIV-1流行毒株的gag基因序列中,CRF01_AE亚型受到的选择压力最大,基因离散率也最大,且CTL抗原表位的变异亦最大,其次是B和B′亚型,CRF07_BC亚型变异最小。各亚型间CTL抗原表位变异的差异明显。

关键词：人类免疫缺陷病毒1型 gag基因基因型遗传变异

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两种非核苷类逆转录酶抑制剂与已上市药物联合应用的体外抗HIV活性研究

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军事医学科学院院刊 2009年第6期33卷 509-512页

作者：庄道民刘思扬董如华白丽姜标赵小龙李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室全军艾滋病检测中心北京100071 中国科学院上海有机化学研究所上海200032

目的:评价两种非核苷类逆转录酶抑制剂(JB25、JB26)与3种已上市药物齐多夫定(AZT)、依非韦仑(EFV)、沙奎那韦(SQV)联合应用的体外抗HIV活性。方法:将10个浓度的JB25、JB26分别与AZT、EFV、SQV的7个浓度组成各种浓度的组合,加入384孔细... 详细信息

目的:评价两种非核苷类逆转录酶抑制剂(JB25、JB26)与3种已上市药物齐多夫定(AZT)、依非韦仑(EFV)、沙奎那韦(SQV)联合应用的体外抗HIV活性。方法:将10个浓度的JB25、JB26分别与AZT、EFV、SQV的7个浓度组成各种浓度的组合,加入384孔细胞培养板,与HIV-1ⅢB急性感染的MT-2细胞共培养3d,最后利用TZMbl细胞报告基因检测HIV-1的表达,共重复3次。利用MacSynergyⅡ软件对数据进行分析,得到药物相互作用的情况。结果:JB25与AZT、EFV、SQV的平均协同/拮抗容量分别是244.45/-5.05,119.58/-65.93,145.83/-0.32(nmol/L)2%;JB26与AZT、EFV、SQV的平均协同/拮抗容量分别是398.90/0,103.62/-0.49,138.473/-0.27(nmol/L)2%。结论:两种非核苷类逆转录酶抑制剂与3种已上市的药物在体外联合应用,具有协同抗HIV作用,MacSynergyⅡ软件可以全面评价两种药物的联合作用情况。

关键词：人免疫缺陷病毒非核苷类逆转录酶抑制剂联合用药协同作用齐多夫定依非韦仑沙奎那韦

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广西首例HIV-1G亚型毒株的发现和近似全长基因组序列分析

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军事医学 2012年第3期36卷 192-195页

作者：李天一梁淑家陈立力刘伟李敬云李林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室全军艾滋病检测中心北京100071 广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530028 兰州军区乌鲁木齐总医院乌鲁木齐830000

目的获得广西首例HIV-1 G亚型毒株全长基因组序列并分析其来源。方法采集1例广西HIV感染者血浆,提取病毒RNA,利用逆转录巢式-PCR技术,分两段扩增病毒近似全长基因序列,对PCR产物进行核苷酸序列测定,利用MEGA软件对全长序列进行系统进化... 详细信息

目的获得广西首例HIV-1 G亚型毒株全长基因组序列并分析其来源。方法采集1例广西HIV感染者血浆,提取病毒RNA,利用逆转录巢式-PCR技术,分两段扩增病毒近似全长基因序列,对PCR产物进行核苷酸序列测定,利用MEGA软件对全长序列进行系统进化分析。结果获得了8800 bp长度的近似全长基因组序列,系统发育分析结果显示该毒株与HV-1 G亚型参考株成簇,Bootstrap值为99%,通过与世界上其他地区流行的HIV-1 G亚型毒株进行亲缘分析,该毒株与喀麦隆流行毒株的关系最近。结论在广西发现了首例HIV-1 G亚型感染者,推测该毒株是由境外传入的,应对广西地区流行的HIV-1毒株的来源和变异进行密切监测。

关键词： G亚型,HIV-1 近似全长序列系统进化树分析基因组

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