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中国人兽共患病学报 2024年第3期40卷 208-213页

作者：何志海和仙孙毅蒋宝贵邵宗体张云李玉琼浦恩念姚明国王帆别双双高子厚江佳富杜春红云南省地方病防治所云南省自然疫源性疾病防控重点实验室大理671000 深圳市光明区疾病预防控制中心深圳518106 云南省迪庆州疾病预防控制中心香格里拉674400 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的了解云南省西部地区宿主动物和媒介蜱感染伯氏疏螺旋体的基因多样性,为进一步掌握该地区莱姆病菌株的特性奠定基础。方法对采用伯氏疏螺旋体5S~23S rRNA间隔区基因筛查阳性的云南西部地区采集的家畜、小型兽类、蜱虫样本,进行伯氏... 详细信息

目的了解云南省西部地区宿主动物和媒介蜱感染伯氏疏螺旋体的基因多样性,为进一步掌握该地区莱姆病菌株的特性奠定基础。方法对采用伯氏疏螺旋体5S~23S rRNA间隔区基因筛查阳性的云南西部地区采集的家畜、小型兽类、蜱虫样本,进行伯氏疏螺旋体鞭毛蛋白基因(FLA基因)和16S rRNA基因的检测,综合分析病原体的基因信息,了解当地流行株的生物学特性及流行特征。结果共检测301份样本,共检出7种基因型伯氏疏螺旋体,其中宿主动物共检出5种:***(阿弗西尼疏螺旋体)、***(伽氏疏螺旋体)、*** s.s.(狭义伯氏疏螺旋体)、***(日本疏螺旋体)、***(法雷斯疏螺旋体);媒介蜱检出7种:***(阿弗西尼疏螺旋体)、***(伽氏疏螺旋体)、*** s.s.(狭义伯氏疏螺旋体)、***(日本疏螺旋体)、***(法雷斯疏螺旋体)、***(中华基因型伯氏疏螺旋体)及未定种Borrelia sp.。***、***和*** s.s.为优势流行株,占总阳性的85.04%(256/301)。不同地区、不同来源的相同基因型株基因序列存在种内差异,同一地区的宿主和媒介中检出的相同基因型螺旋体具有较高的同源性和较近的遗传进化关系。结论云南西部地区宿主和媒介感染伯氏疏螺旋体基因型具有较高的多样性特征,存在多种致病基因型,给当地人群的健康造成一定危害,需加强防范。

关键词：云南西部伯氏疏螺旋体宿主动物蜱多样性

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湛江市白纹伊蚊对常用杀虫剂抗药性调查研究

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寄生虫与医学昆虫学报 2023年第2期30卷 80-82页

作者：张恒端麻祖吴群刘钦梅邢丹李春晓郭晓霞赵彤言军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室媒介生物危害和自然疫源性疾病北京市重点实验室北京100071

测定湛江市白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗药性水平,为登革热媒介防制提供科学用药指导。从湛江市霞山区、雷州市乌石镇和企水镇采集白纹伊蚊幼虫,在实验室繁殖1~2代,用WHO推荐的浸渍法测定抗药性指数。结果显示,霞山区白纹伊蚊对残杀威(2.99... 详细信息

测定湛江市白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗药性水平,为登革热媒介防制提供科学用药指导。从湛江市霞山区、雷州市乌石镇和企水镇采集白纹伊蚊幼虫,在实验室繁殖1~2代,用WHO推荐的浸渍法测定抗药性指数。结果显示,霞山区白纹伊蚊对残杀威(2.99)、毒死蜱(2.19)、氯菊酯(8.09)和溴氰菊酯(14.32)产生抗性;雷州市乌石镇白纹伊蚊对残杀威(0.67)、毒死蜱(0.76)较敏感但对氯菊酯(5.53)、溴氰菊酯(5.66)产生抗性;企水镇白纹伊蚊对溴氰菊酯(21.68)达到了高抗水平,对残杀威(2.46)、氯菊酯(5.38)具有一定抗性,对毒死蜱(1.25)较敏感。结果表明,毒死蜱药效较好,雷州市乌石镇和企水镇白纹伊蚊都对其敏感;3个地区白纹伊蚊对溴氰菊酯产生较高抗性,尤其是企水镇达到高抗水平。

关键词：白纹伊蚊杀虫剂抗药性湛江市

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山东省部分地区媒介蜱类携带病原体的分子流行病学调查

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寄生虫与医学昆虫学报 2023年第4期30卷 210-218页

作者：李程张明珠叶润泽王宁王百惠林哲韬王晓阳刘婧徐晴高婉迎崔晓鸣赵琳曹务春山东大学齐鲁医学院公共卫生学院济南250012 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为探究山东省部分地区蜱类及其携带病原体情况,本研究对2021—2022年在山东省7个地区采集的游离和寄生蜱标本进行形态学鉴定;并对5种常见蜱传病原体进行PCR检测,统计其病原体的自然携带情况,并对阳性样本的病原体序列进行系统发育分析... 详细信息

为探究山东省部分地区蜱类及其携带病原体情况,本研究对2021—2022年在山东省7个地区采集的游离和寄生蜱标本进行形态学鉴定;并对5种常见蜱传病原体进行PCR检测,统计其病原体的自然携带情况,并对阳性样本的病原体序列进行系统发育分析。结果显示,采集到的蜱虫样本包括2属4种,分别包括长角血蜱145只、嗜群血蜱2只、铃头血蜱2只和血红扇头蜱5只。PCR检测结果显示携带斑点热群立克次体34份,总阳性率为22.08%;携带无形体样本29份,总感染率为18.83%;泰勒虫和伯氏疏螺旋体总感染率分别为5.84%和0.65%,所有样本均没有检测到回归热螺旋体感染。结果提示,长角血蜱为山东省内优势蜱种,不同蜱种内存在较高病原体感染率,应加强当地对蜱虫监测和防控宣传。

关键词：蜱蜱传病原体分子流行病学山东省

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凝血相关分子在病毒感染方面的研究进展

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病毒学报 2021年第4期37卷 1011-1017页

作者：李佳佳罗德炎王慧安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

从生物进化角度,天然免疫系统、凝血系统、获得性免疫系统依次产生,且三者存在千丝万缕的联系。以病毒为研究对象对凝血系统作为免疫系统的一个独立部分进行研究,分两部分:感染初期,通过对凝血系统的调控来加强天然免疫和获得性免疫的对... 详细信息

从生物进化角度,天然免疫系统、凝血系统、获得性免疫系统依次产生,且三者存在千丝万缕的联系。以病毒为研究对象对凝血系统作为免疫系统的一个独立部分进行研究,分两部分:感染初期,通过对凝血系统的调控来加强天然免疫和获得性免疫的对话,以此"通畅气血""增强免疫力",清除体内病毒;感染末期合并细菌感染,对凝血系统进行快速干预,既调动该系统自身的免疫力,也疏通天然免疫和获得性免疫的交流通道,有效逆转DIC状态挽救生命,为此,首先要了解各凝血相关分子在抗病毒感染中的作用。本综述分别介绍了多种病毒侵入后,所导致机体凝血功能紊乱的特点,以及在感染过程中凝血相关分子与免疫关联性特征,即病毒毒力分子如何通过调节凝血相关分子的表达,来影响免疫细胞的功能。同时,病毒毒力因子导致免疫系统的改变,又是如何间接影响凝血相关反应。将为包括新型冠状病毒在内的所有病毒的防控提供新的思路。

关键词：病毒感染凝血因子炎症免疫

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鼠疫耶尔森菌核酸检测试剂国家参考品的研制

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中国生物制品学杂志 2024年第10期37卷 1185-1189,1199页

作者：张园园闫子恒赵爱华杨瑞馥赵勇魏东中国食品药品检定研究院国家卫生健康委员会生物技术检定方法及其标准化重点实验室北京102629 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研制鼠疫耶尔森菌(以下简称鼠疫菌)核酸检测试剂国家参考品,以期用于鼠疫菌核酸检测试剂的评价和质量控制。方法选择5株鼠疫菌[EV株、0614F株、otten株、Tjiusidej(R)株、田鼠型201株]和10株阴性菌(3株小肠结肠炎耶尔森菌、牛种布鲁... 详细信息

目的研制鼠疫耶尔森菌(以下简称鼠疫菌)核酸检测试剂国家参考品,以期用于鼠疫菌核酸检测试剂的评价和质量控制。方法选择5株鼠疫菌[EV株、0614F株、otten株、Tjiusidej(R)株、田鼠型201株]和10株阴性菌(3株小肠结肠炎耶尔森菌、牛种布鲁菌104M株、炭疽芽孢杆菌、伤寒沙门菌、土拉热弗朗西丝菌LVS株、假结核耶尔森菌、霍乱弧菌和志贺菌),经培养、收获、灭活,获得参考品原液,进行普通PCR扩增法验证后,制备成1套由5支阳性参考品、10支阴性参考品、1支最低检出限参考品(EV株阳性参考品经冻干制备而成)和1支重复性参考品(制备方法同最低检出限参考品)组成的国家参考品。采用荧光定量PCR法检测国家参考品的阴阳性符合率、均匀性和稳定性,并组织4家单位进行协作验证。结果阳性参考品原液经普通PCR扩增,均可见相应目的基因条带;阴性参考品原液未扩增出相应基因条带。荧光定量PCR法检测国家参考品阴阳性符合率均为100%。重复3次检测10支最低检出限参考品的3a基因Ct值差异无统计学意义(F=1.567,P=0.193)。与未经冻融的参考品比较,反复冻融3次的最低检出限参考品及阳性参考品3a基因Ct值差异无统计学意义(t分别为0.416和0.079,P均>0.05)。与未经高温保存的参考品比较,37℃放置5 d的最低检出限参考品Ct值差异有统计学意义(t=7.109,P=0.002),4和25℃条件下差异无统计学意义(t分别为0.341和0.751,P均>0.05);4、25、37℃放置5 d的阳性参考品Ct值差异均无统计学意义(t分别为2.442、0.373和-0.043,P均>0.05)。4家单位检测阳性和阴性参考品的符合率均为100%;2家单位检测最低检出限参考品的最低检出限为1×10^(2)个/mL,另2家为1×10^(3)个/mL;4家单位对重复性参考品检测结果的CV值<10.0%。结论本研究研制的鼠疫菌核酸检测试剂国家参考品具有良好的均匀性和冻融稳定性,于4和25℃下放置具有良好的加速稳定性,可用于鼠疫菌核酸检测试剂的评价和质量控制。

关键词：鼠疫耶尔森菌核酸检测试剂国家参考品

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鲍曼不动杆菌bauA与basD基因缺失株的构建及其生物学功能研究

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军事医学 2022年第3期46卷 179-183,187页

作者：南楠高洁宫赛赛李涛王慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建鲍曼不动杆菌bauA与basD基因缺失株,研究铁载体相关基因对鲍曼不动杆菌生存及致病性的影响。方法构建pMO130-Tel^(R)-bauA(Up/Down)及pMO130-Tel^(R)-basD(Up/Down)质粒,通过同源重组获得基因缺失株;通过基因缺失株生长曲线测... 详细信息

目的构建鲍曼不动杆菌bauA与basD基因缺失株,研究铁载体相关基因对鲍曼不动杆菌生存及致病性的影响。方法构建pMO130-Tel^(R)-bauA(Up/Down)及pMO130-Tel^(R)-basD(Up/Down)质粒,通过同源重组获得基因缺失株;通过基因缺失株生长曲线测定、运动能力比较、生物膜的形成及胞内存活能力测定等方法对缺失株的功能进行了测试。结果通过构建含同源片段的重组pMO130-Tel^(R)质粒,分别成功敲除鲍曼不动杆菌4294中的bauA基因和basD基因,突变株在缺铁条件下生长能力显著下降,运动能力、生物膜形成能力及胞内存活能力也有不同程度的下降。结论bauA基因和basD基因敲除对鲍曼不动杆菌生存有很大影响,提示铁载体相关基因在细菌致病中发挥重要作用。

关键词：鲍曼不动杆菌基因缺失株铁载体

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金黄色葡萄球菌噬菌体vB_Sau_P68的基因组分析和裂解酶

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微生物学通报 2022年第8期49卷 3107-3119页

作者：于诗筠吕金晖文会淇张雅倩喻鑫婷米志强黄海龙吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 安徽医科大学解放军307临床学院北京100071

【背景】金黄色葡萄球菌是常见的人畜共患条件致病菌,随着多耐药菌株分离率的增长,研发与抗生素作用模式不同的抗菌剂迫在眉睫。【目的】分离高效且特异性强的金黄色葡萄球菌噬菌体,对其进行功能注释,并对其编码的裂解酶进行功能验证。... 详细信息

【背景】金黄色葡萄球菌是常见的人畜共患条件致病菌,随着多耐药菌株分离率的增长,研发与抗生素作用模式不同的抗菌剂迫在眉睫。【目的】分离高效且特异性强的金黄色葡萄球菌噬菌体,对其进行功能注释,并对其编码的裂解酶进行功能验证。【方法】通过对噬菌体全基因组序列进行分析找到裂解酶基因,利用原核表达系统对其编码的2个裂解酶蛋白进行克隆,用SDS-PAGE与蛋白免疫印迹法(Western blotting)鉴定目的蛋白是否表达,并采用单斑法验证其裂解活性。【结果】本研究的噬菌体为一株新的金黄色葡萄球菌噬菌体,命名为vB_Sau_P68,该基因组全长为139409 bp,GC含量为31.0%,编码220个开放阅读框(open reading frame,ORF),透射电镜观察具有正二十面体头部和收缩性尾部,形态学分类属于肌尾噬菌体。该噬菌体编码2个裂解酶基因,分别具有CHAP催化结构域与SH3_5结合结构域,SDS-PAGE与Western blotting表明Lys161能够表达且有裂解活性,Lys163则无法外源表达。对Lys161序列进行分析,该裂解酶无信号肽,无跨膜区域,以无规则卷曲为主。【结论】本研究对一株新的金黄色葡萄球菌噬菌体编码的2个裂解酶基因进行了克隆表达,结果提示CHAP催化结构域具有裂解活性,而SH3_5结合结构域则不表达。这一结果可为裂解酶的机制探索及应用提供理论基础。

关键词：全基因组分析 CHAP结构域 SH3_5结构域蛋白结构

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质粒基因注释可视化系统VPA V1.0的研建

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军事医学 2022年第3期46卷 167-172页

作者：穆凯孙岩松周冬生赵月峨杨慧盈殷喆王鹏军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立临床医学研究中便捷易用的质粒基因注释可视化系统,用于直观展示质粒结构与基因分布。方法运用Perl语言编写VPA系统4个主要模块(文件配置模块、颜色系统模块、图形生成模块和出错帮助模块),生成Perl脚本***。结果构建了质粒基... 详细信息

目的建立临床医学研究中便捷易用的质粒基因注释可视化系统,用于直观展示质粒结构与基因分布。方法运用Perl语言编写VPA系统4个主要模块(文件配置模块、颜色系统模块、图形生成模块和出错帮助模块),生成Perl脚本***。结果构建了质粒基因注释可视化系统VPA,该系统可实现多种类别、不同长度质粒的基因注释可视化显示,展示信息丰富全面、操作简单便捷。结论VPA系统可适用于目前细菌研究中常见的大部分质粒基因注释工作,为细菌的比较基因组学和结构基因组学提供了更直观的图像展示,并为其他相关可视化系统的开发提供了参考模型。

关键词： VPA系统质粒基因注释可视化

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下调自噬相关蛋白ATG4B抑制贝氏柯克斯体细胞内增殖

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军事医学 2022年第8期46卷 569-575页

作者：张家宁付梦姣焦俊欧阳譞于永慧赵明亮张珊温博海熊小路孙岩松军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研究宿主细胞自噬相关基因4B(ATG4B)对贝氏柯克斯体胞内生长繁殖的影响。方法用ATG4B特异小干扰RNA(siRNA)处理宿主细胞(THP-1和Vero),以非特异siRNA和无siRNA处理的细胞为对照;逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测抑... 详细信息

目的研究宿主细胞自噬相关基因4B(ATG4B)对贝氏柯克斯体胞内生长繁殖的影响。方法用ATG4B特异小干扰RNA(siRNA)处理宿主细胞(THP-1和Vero),以非特异siRNA和无siRNA处理的细胞为对照;逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹检测抑制效果;Western印迹分析细胞自噬标识蛋白(p62和LC3)的量变;qRT-PCR检测贝氏柯克斯体感染细胞中细菌增殖水平;共聚焦显微镜观察贝氏柯克斯体感染细胞中细菌寄生囊泡发育状况。结果与对照组比较,ATG4B特异siRNA处理组的细胞自噬标识蛋白p62和LC3-Ⅱ明显增多,细菌繁殖量更低,细菌寄生囊泡为散在分布小囊泡而不是单一成熟大囊泡。结论宿主细胞ATG4B表达下调可部分阻断自噬,自噬的部分阻断使贝氏柯克斯体寄生囊泡发育受阻,进而抑制贝氏柯克斯体胞内生长繁殖,为阐明宿主细胞的自噬促进贝氏柯克斯体繁殖的致病机制提供了新的依据。

关键词：贝氏柯克斯体自噬相关基因4B 小干扰RNA 胞内寄生感染细胞增殖

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带荧光标签的产气荚膜梭菌ε毒素融合蛋白纯化及特性鉴定

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军事医学 2022年第10期46卷 744-748页

作者：郭子槊吕若梅黄静柳婷婷陈铭康琳王景林辛文文军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的表达纯化带eGFP和mScarlet标签的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)ε毒素(ETX),鉴定ETX的毒素特性。方法在大肠杆菌中表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,镍柱纯化蛋白;用MTS法测定带不同标签ETX的毒性;用共聚焦显微镜... 详细信息

目的表达纯化带eGFP和mScarlet标签的产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)ε毒素(ETX),鉴定ETX的毒素特性。方法在大肠杆菌中表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,镍柱纯化蛋白;用MTS法测定带不同标签ETX的毒性;用共聚焦显微镜观察mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞和不同物种红细胞的结合情况。结果成功表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,纯化后得到纯度较高的eGFP-ETX和mScarlet-ETX融合蛋白。通过细胞毒实验,证实eGFP-ETX毒素与未加荧光标签的His-ETX相比毒性减弱,mScarlet-ETX毒素与His-ETX毒性基本一致,确定了eGFP-ETX和mScarlet-ETX的最佳荧光值。将mScarlet-ETX应用于HaCaT细胞和HEKa细胞,观察到mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞结合,证实HaCaT细胞、HEKa细胞对ETX敏感。将mScarlet-ETX应用于人、小鼠和兔红细胞,mScarlet-ETX只与人红细胞结合。结论 mScarlet-ETX具有良好的毒素活性,可应用于对ETX毒性研究的多个方面。

关键词：产气荚膜梭菌 ε毒素 eGFP标签 mScarlet标签融合蛋白

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