检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病原生物学杂志 2016年第10期11卷 865-870页

作者：程实范航孙强裴广倩安小平米志强张湘莉兰黄勇童贻刚安徽医科大学军事医学科学院微生物流行病研究所安徽合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的分析我国人群感染指环病毒的多样性,为研究指环病毒科的感染与不同疾病发生以及宿主免疫状态之间的关系提供基础资料。方法从33份血液标本中提取病毒核酸,使用多重置换扩增技术富集指环病毒核酸,然后使用Ion Torrent PGM平台进行高... 详细信息

目的分析我国人群感染指环病毒的多样性,为研究指环病毒科的感染与不同疾病发生以及宿主免疫状态之间的关系提供基础资料。方法从33份血液标本中提取病毒核酸,使用多重置换扩增技术富集指环病毒核酸,然后使用Ion Torrent PGM平台进行高通量测序,并进行生物信息学分析。结果共得到226个新的指环病毒序列,包括130条全序和96个ORF1。受检血液标本均检出包括TTV,TTMDV和TTMV等指环病毒;测序显示指环病毒中81.9%为TTV,48.5%的标本感染两个属以上的指环病毒。指环病毒ORF1至少81.13%发生变异,其中TTV属内也存在75.66%的变异,13.27%的序列在NCBI的核酸数据库中同源比对未成功。进化分析显示TTV基因3型又可分为3.1、3.2、3.3等3个亚型,以往命名的基因2型是基因3.3型的一个子分枝。新型TTV中51.9%属于基因3型。结论我国人群普遍感染指环病毒,以基因3型感染居多且基因组多样性高。

关键词：指环病毒多重置换扩增(MDA) 输血传播病毒(TTV) 进化

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新型佐剂蛋白TFPR1在毕赤酵母系统中的表达及鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第4期36卷 294-299页

作者：宁秀哲寇志华孙维来朱青杨裔邱洪杰郭晶晶郭彦于虹周育森生命科学学院、温州医科大学检验医学院 325035 军事医学科学院微生物流行病研究所、病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：利用毕赤酵母系统表达一种基于蛇毒蛋白triflin的致病相关蛋白1（ PR-1）功能区蛋白 TFPR1。方法从质粒 pUC57-TFPR1中 PCR 扩增目的基因,插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-TFPR1,转染入巴斯德毕赤酵母野生... 详细信息

目的：利用毕赤酵母系统表达一种基于蛇毒蛋白triflin的致病相关蛋白1（ PR-1）功能区蛋白 TFPR1。方法从质粒 pUC57-TFPR1中 PCR 扩增目的基因,插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,构建重组表达质粒pPICZαA-TFPR1,转染入巴斯德毕赤酵母野生型X33菌株,经甲醇诱导表达重组蛋白TFPR1,采用ELISA法筛选阳性菌株后,SDS-PAGE及Western blot对表达产物进行鉴定。结果重组表达质粒pPICZαA-TFPR1经双酶切和测序鉴定证明构建正确；重组蛋白以分泌形式表达,相对分子质量约16＆#215;103。结论利用巴斯德毕赤酵母表达系统成功表达TFPR1蛋白,为进一步研究其功能和作为佐剂的应用提供参考资料。

关键词：佐剂致病相关蛋白毕赤酵母系统分泌表达 Pathogenesis related protein 1 (PR-1)

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猪链球菌溶血素(SLY)引起血小板聚集活性分析

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军事医学 2016年第1期40卷 40-44页

作者：张省委刘鹏徐茂凯尚学义郑玉玲袁媛姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院附属医院重症医学科北京100071

目的研究重组表达的2型猪链球菌溶血素(SLY)与血小板的相互作用,为临床猪链球菌感染的救治提供理论基础。方法镍柱亲和层析法纯化重组SLY蛋白,光密度法检测其溶血活性,再通过血小板聚集仪和扫描电子显微镜观察SLY蛋白与血小板的相互作用... 详细信息

目的研究重组表达的2型猪链球菌溶血素(SLY)与血小板的相互作用,为临床猪链球菌感染的救治提供理论基础。方法镍柱亲和层析法纯化重组SLY蛋白,光密度法检测其溶血活性,再通过血小板聚集仪和扫描电子显微镜观察SLY蛋白与血小板的相互作用,并研究抗血小板药物阿司匹林对SLY引起的血小板聚集的影响,通过比较野生株05ZYH33和sly基因突变株Δsly对小鼠体内血小板体积和数量的影响,推测SLY蛋白对体内血小板的影响。结果与结论重组SLY蛋白溶血活性为2000 HU,1μg/ml SLY蛋白可引起血小板高度聚集,5 mmol/L阿司匹林可显著抑制聚集,SLY蛋白可引起小鼠体内单个血小板体积增大和血小板数量减少。

关键词： 2型猪链球菌猪链球菌溶血素血小板聚集阿司匹林血小板减少

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阴沟肠杆菌质粒pB557-NDM全序分析及耐药机制研究

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军事医学 2016年第12期40卷 964-968,973页

作者：李萍冯娇康琳辛文文高珊杨浩周冬生殷喆王景林安徽医科大学合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的对阴沟肠杆菌质粒pB557-NDM全序进行分析并研究其耐药机制。方法 PCR方法检测相关菌株耐药基因,改良Carba NP法检测碳青霉烯酶类型及其活性,接合转移实验验证质粒pB557-NDM是否具有可转移性,抗生素敏感实验检测相关菌株耐药谱,质粒... 详细信息

目的对阴沟肠杆菌质粒pB557-NDM全序进行分析并研究其耐药机制。方法 PCR方法检测相关菌株耐药基因,改良Carba NP法检测碳青霉烯酶类型及其活性,接合转移实验验证质粒pB557-NDM是否具有可转移性,抗生素敏感实验检测相关菌株耐药谱,质粒全基因组测序分析其遗传结构、移动元件,对其耐药机制进行研究。结果阴沟肠杆菌B557产B类碳青霉烯酶,编码NDM的基因blaNDM位于质粒pB557-NDM上。pB557-NDM可通过接合转移方式进入受体菌EC600并表达相应的耐药谱。质粒pB557-NDM为大小141.65 kb的Inc A/C2型质粒,Gen Bank登录号为KX786648。该质粒共有2个外源插入区,分别为ISEcp1-blaCMY转座单元形成的blaCMY-6耐药区和ΔTn1696-In46-rmt C-ISKpn14-ΔTn125组成的blaNDM-1耐药区。结论质粒pB557-NDM介导阴沟肠杆菌B557多药耐药,blaNDM位于转座子ΔTn125中。

关键词：阴沟肠杆菌 pB557-NDM 碳青霉烯酶

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副溶血弧菌calR的基因敲除株与回补株构建

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军事医学 2016年第5期40卷 374-378页

作者：侯书宁孟彦言朱文君张凌宇周冬生张义全黄新祥江苏大学医学院江苏镇江212013 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的构建副溶血弧菌calR的基因突变株和回补株,为研究CalR的功能奠定基础。方法 PCR扩增calR基因的同源臂融合片段,并直接克隆入自杀质粒p DS132中。通过接合转移的方式将重组自杀质粒转入副溶血弧菌RIMD2210633株(WT)中,利用同源重组... 详细信息

目的构建副溶血弧菌calR的基因突变株和回补株,为研究CalR的功能奠定基础。方法 PCR扩增calR基因的同源臂融合片段,并直接克隆入自杀质粒p DS132中。通过接合转移的方式将重组自杀质粒转入副溶血弧菌RIMD2210633株(WT)中,利用同源重组的方法替换原始calR基因以构建calR无痕突变株(ΔcalR)。PCR扩增calR的基因序列,并将其直接克隆入p BAD33质粒中,构建回补质粒。将回补质粒转入到ΔcalR中,即得回补株(ΔcalR/calR∷p BAD33)。将vop N的启动子区克隆入p HRP309质粒的β-半乳糖苷酶基因上游,构建Lac Z重组质粒,并将该重组质粒分别转入WT/p BAD33、ΔcalR/p BAD33和ΔcalR/calR∷p BAD33中,通过测定并比较3株菌中β-半乳糖苷酶活性的差异来判定CalR对vop N的调控关系。结果与结论 Lac Z结果表明,CalR负调控vop N的转录,且回补株的回补效果良好,表明成功构建了副溶血弧菌calR基因的突变株和回补株,为后续对CalR的功能研究打下了基础。

关键词：副溶血弧菌 calR 突变株回补株

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肠出血性大肠杆菌z4832基因缺失突变株的构建

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安徽医科大学学报 2016年第8期51卷 1111-1115页

作者：谭林林王建新李涛王慧安徽医科大学军事医学科学院微生物流行病研究所合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用Red重组系统的同源重组功能,敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)的乙酰转移酶基因z4832,构建z4832基因缺失突变株。方法EHEC O157∶H7的基因组作为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列;将上下游同源臂连接于p UC19-... 详细信息

目的利用Red重组系统的同源重组功能,敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7(EHEC O157∶H7)的乙酰转移酶基因z4832,构建z4832基因缺失突变株。方法EHEC O157∶H7的基因组作为模板,PCR扩增目的基因两侧的同源臂序列;将上下游同源臂连接于p UC19-kana质粒上卡那霉素(kana)抗性基因的两端;PCR扩增获得中间嵌合卡那霉素抗性基因的同源臂线性片段,利用质粒p KD46介导的重组技术敲除z4832基因,利用p CP20质粒介导的重组技术去除抗性标记。PCR扩增及DNA测序验证目的基因缺失后,测定突变株及野生株的生长曲线,检测在抗菌药物氧氟沙星中的存活率。结果成功构建EHEC O157∶H7 z4832基因缺失突变株。z4832缺失突变株生长速度与野生株差异无统计学意义,但在含氧氟沙星的LB培养基中突变株存活率升高(P<0.05),在含氧氟沙星的M9培养基中存活率下降(P<0.05)。结论构建z4832缺失突变株,研究z4832与肠出血性大肠杆菌耐药性之间的关系,为进一步研究乙酰转移酶在EHEC O157∶H7中的作用机制奠定了基础。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Red重组系统乙酰转移酶抗生素

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IL-10基因T-819C多态性位点与自发性早产遗传易感性的病例对照研究

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武警后勤学院学报（医学版） 2017年第3期26卷 202-207页

作者：杨晓彭薇朱丽娜张小爱王艳陆军总医院附属八一儿童医院发育生物学实验室北京100700 出生缺陷防控关键技术国家工程实验室北京100700 儿童器官功能衰竭北京市重点实验室北京100700 军事医学科学院微生物和流行病学研究所病原微生物生物安全重点实验室北京100071

【目的】探讨IL-10基因T-819G位点与自发性早产遗传易感性的关联性。【方法】病例组样本包括569例SPTB新生儿,对照组包括673例足月新生儿。采用最新的Sequenom Mass ARRAY?SNP检测技术对IL-10基因T-819C位点进行单核苷酸多态性分型。【... 详细信息

【目的】探讨IL-10基因T-819G位点与自发性早产遗传易感性的关联性。【方法】病例组样本包括569例SPTB新生儿,对照组包括673例足月新生儿。采用最新的Sequenom Mass ARRAY?SNP检测技术对IL-10基因T-819C位点进行单核苷酸多态性分型。【结果】与携带IL-10基因T-819C位点的TT基因型的个体相比,携带至少一个C等位基因型(TC+CC基因型)的个体发生极早产的风险显著升高。【结论】在中国人群中,IL-10基因T-819G位点与极早产患病风险的增加存在显著的遗传学关联。

关键词：白介素10 自发性早产胎膜早破单核苷酸多态性

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流感疫苗株为载体的重组HAdV疫苗候选株构建及免疫效果

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免疫学杂志 2016年第12期32卷 1073-1077页

作者：高雅倩高雅倩段跃强邢丽杨鹏辉王希良安徽医科大学 230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 100071

目的以冷适应、减毒流感活疫苗株为载体,构建并拯救喷鼻重组HAd V疫苗候选株,并评价其免疫效果,为腺病毒候选疫苗研制提供实验数据。方法应用反向遗传学技术,以冷适应、减毒流感活疫苗A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)株为骨架,与季节性流感病... 详细信息

目的以冷适应、减毒流感活疫苗株为载体,构建并拯救喷鼻重组HAd V疫苗候选株,并评价其免疫效果,为腺病毒候选疫苗研制提供实验数据。方法应用反向遗传学技术,以冷适应、减毒流感活疫苗A/Ann Arbor/6/60ca(H2N2)株为骨架,与季节性流感病毒A/California/07/209疫苗株的血凝素(haemagglutination,HA)及插入HAd V六邻体蛋白抗优势原表位的2个重复序列经改造的神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因构建流感病毒八质粒系统,转染COS-1/MDCK细胞筛选疫苗候选株并鉴定;制备的候选疫苗株滴鼻免疫Balb/c小鼠,通过中和抗体、s Ig A黏膜抗体及细胞因子的测定评价其免疫原性,并用野生HAd V-7病毒株攻击评价免疫保护效果。结果成功拯救获得重组HAd V疫苗候选株,命名为rg Flu/HAd V-Ca,其形态符合流感病毒典型特征,可有效表达HAd V病毒Hexon优势表位,且具有冷适应、减毒表型。小鼠免疫后可产生针对HAd V-7及H1N1流感病毒的特异性中和抗体,肺鼻灌洗液中可检测到针对HAd V-7中和抗体s Ig A抗体,并可检测到脾淋巴细胞分泌HAd V-7特异性细胞因子IFN-γ、IL-4;攻毒实验显示,rg Flu/HAd V-Ca疫苗候选株可有效降低小鼠肺病毒载量。结论重组冷适应、减毒HAd V活疫苗株rg Flu/HAd V-Ca具有良好的免疫效果,为腺病毒候选疫苗的研制提供了新思路。

关键词：腺病毒冷适应、减毒活疫苗六邻体抗原表位免疫效果

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广西1例HIV-1G亚型毒株全长基因序列的测定和分析

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军事医学 2017年第2期41卷 101-105页

作者：张敏梁冰玉李天一沈平苏齐鉴李敬云李林安徽医科大学合肥230000 广西医科大学公共卫生学院广西艾滋病防治研究重点实验室南宁530021 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室全军艾滋病检测中心北京100071 钦州市钦南区疾病预防控制中心广西钦州535000 广西中医药大学附属瑞康医院南宁530021

目的对广西1例HIV-1 G亚型毒株感染者体内病毒近似全长基因组进行序列测定并进行系统进化分析。方法对前期鉴定的1例HIV-1G亚型毒株感染者进行背景信息收集,并采集其外周血,提取病毒RNA,利用逆转录巢式-PCR技术分两段扩增并测定病毒近... 详细信息

目的对广西1例HIV-1 G亚型毒株感染者体内病毒近似全长基因组进行序列测定并进行系统进化分析。方法对前期鉴定的1例HIV-1G亚型毒株感染者进行背景信息收集,并采集其外周血,提取病毒RNA,利用逆转录巢式-PCR技术分两段扩增并测定病毒近似全长基因序列。利用MEGA6软件对全长序列进行系统进化分析。结果获得了病毒近似全长基因组序列,长度为8847 bp。在系统进化树中,该毒株与G亚型参考株成簇,Bootstrap值为100%。系统溯源分析显示,该毒株与广西首次报道的G亚型JN106043毒株关系最近(Bootstrap值为100%,基因离散率为5%)。结论该毒株可能是由广西毒株传播所致,提示G亚型毒株在广西地区可能存在一定的局部流行,需进一步监测。该毒株序列的测定和分析对于广西地区HIV流行状况分析具有重要意义。

关键词： HIV-1 G亚型近似全长序列系统进化树分析

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一株弗氏柠檬酸杆菌噬菌体IME-CF2的分离、测序及全基因组分析

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安徽医科大学学报 2016年第3期51卷 315-319页

作者：刘小东王伟黄勇张湘莉兰孙强安小平米志强童贻刚安徽医科大学军事医学科学院微生物流行病研究所合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的从医院污水中分离一株能裂解弗氏柠檬酸杆菌的噬菌体,观察其形态,并进行全基因组测序和全基因组分析,为治疗和控制弗氏柠檬酸杆菌感染提供基础。方法以弗氏柠檬酸杆菌为宿主,从医院污水分离噬菌体,用透射电镜观察其形态;使用Ion Tor... 详细信息

目的从医院污水中分离一株能裂解弗氏柠檬酸杆菌的噬菌体,观察其形态,并进行全基因组测序和全基因组分析,为治疗和控制弗氏柠檬酸杆菌感染提供基础。方法以弗氏柠檬酸杆菌为宿主,从医院污水分离噬菌体,用透射电镜观察其形态;使用Ion Torrent测序平台进行噬菌体全基因组测序,测序后进行噬菌体全基因组序列组装、注释、进化分析和比较分析。结果成功分离一株弗氏柠檬酸杆菌噬菌体,命名为IME-CF2;电镜观察显示,该噬菌体具有二十面体的头部,形态类似肌尾噬菌体科;IME-CF2核酸类型为DNA,基因组全长为177 685 bp,GC含量为43.2%;编码267个编码区(CDS),2个tRNA;进化分析表明,IME-CF2属于T4类噬菌体,全基因组比较分析表明,IME-CF2与柠檬酸杆菌噬菌体Miller同源性最高。结论分离鉴定了一株弗氏柠檬酸杆菌噬菌体,进行了全基因组测序和分析,为噬菌体治疗多重耐药细菌奠定了基础。

关键词：弗氏柠檬酸杆菌噬菌体全基因组测序基因组分析

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