检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学报 2006年第4期46卷 629-634页

作者：高永辉任昶应天翼王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室北京100071 北京朝阳医院北京100043 军事医学科学院生物工程研究所北京100071

在布氏杆菌(Brucella)的感染免疫过程中,单核巨噬细胞的应答起着非常关键的作用,而毒力不同的布氏杆菌引起的宿主反应截然不同。用双向电泳技术对THP-1单核细胞受毒力不同的布氏杆菌株侵袭后的全细胞蛋白谱进行差异比较和分析,共发现了3... 详细信息

在布氏杆菌(Brucella)的感染免疫过程中,单核巨噬细胞的应答起着非常关键的作用,而毒力不同的布氏杆菌引起的宿主反应截然不同。用双向电泳技术对THP-1单核细胞受毒力不同的布氏杆菌株侵袭后的全细胞蛋白谱进行差异比较和分析,共发现了38个差异表达的蛋白质点。这些点经过胶内酶切后进行MALDI-TOF质谱鉴定,每个蛋白质点的肽质量指纹图谱都在人类的蛋白质组数据库中用Mascot进行检索后,发现这些差异表达的蛋白主要集中在结构蛋白,信号传导途径和物质代谢等领域,还有一些功能未知的蛋白。这一结果为研究布氏杆菌的感染与致病机制提供了方向,对深入探讨病原菌-宿主的相互作用模式具有参考价值。

关键词：布氏杆菌 THP-1细胞比较蛋白质组学双向电泳质谱

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荧光定量PCR检测嗜吞噬细胞无形体

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中国人兽共患病学报 2006年第4期22卷 289-293页

作者：张晶波温博海陈梅玲朱丽娜邱玲牛东升军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

目的采用新型TaqMan—MGB探针建立检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）方法。方法依据gltA基因序列设计嗜吞噬细胞无形体特异引物和探针，以克隆的嗜吞噬细胞无形体gltA基因片段作DNA模板。在荧光定量... 详细信息

目的采用新型TaqMan—MGB探针建立检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）方法。方法依据gltA基因序列设计嗜吞噬细胞无形体特异引物和探针，以克隆的嗜吞噬细胞无形体gltA基因片段作DNA模板。在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环闻值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．996）；与套式PCR相比较，荧光定量PCR检测的灵敏度是其100倍。用荧光定量PCR检测其它相关立克次体和细菌DNA样本，检出结果几乎为0；对荧光定量PCR检测重复性进行分析，变异系数（CV）批内和批间误差在0-2．1％之间，证明该荧光定量PCR具有种特异性和良好的重复性。用荧光定量PCR检测体疑染嗜吞噬细胞无形体的10份蜱和30份小鼠脾脏标本，结果与套式PCR检测结果有密切相关性，但是定量PCR检测敏感性和准确率均高于套式PCR。结论本研究建立的检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性，特别适合检出样本中微量嗜吞噬细胞无形体。

关键词：嗜吞噬细胞无形体实时定量PCR gltA基因埃立克体感染

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利用重组工程技术标记鼠疫菌rpoS基因

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中国生物工程杂志 2006年第5期26卷 27-32页

作者：张建山陈泽良宋亚军郭兆彪王津王红霞翟俊辉杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:为便于研究鼠疫菌基因及其产物的功能,利用重组工程技术,建立一种表位标记细菌染色体基因的方法,以分析基因的表达规律。方法:将标签序列合成于引物中,通过融合PCR法将标签序列与抗性筛选基因连接,克隆到pBluescript载体,获得模板... 详细信息

目的:为便于研究鼠疫菌基因及其产物的功能,利用重组工程技术,建立一种表位标记细菌染色体基因的方法,以分析基因的表达规律。方法:将标签序列合成于引物中,通过融合PCR法将标签序列与抗性筛选基因连接,克隆到pBluescript载体,获得模板载体pBSMH。设计与待标记基因末端及其下游同源的引物,从模板载体上扩增标签与抗性基因的融合模块,获得两端带同源区的PCR产物,电击转化鼠疫菌感受态细胞。在λRed重组系统的辅助下,标签和抗性基因重组到目的基因的下游,得到表位标签与目的基因C末端融合的重组子。利用针对表位标签的单克隆抗体进行Westernblot分析,验证C末端标记目的蛋白的表达。结果:成功构建了组氨酸标签与抗性基因融合的质粒,以该质粒作为模板,扩增标记标签盒,对鼠疫菌的rpoS基因进行了标记,利用针对组氨酸标签的抗体能够检测到rpoS基因的表达。结论:基于重组工程的基因标记技术可以为基因功能研究提供一个有价值的研究手段。

关键词：融合PCR λRed重组系统基因标记 Western blot

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中国登革2型病毒反向遗传系统的构建与鉴定

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科学通报 2006年第15期51卷 1764-1770页

作者：朱武洋陈水平秦成峰于曼姜涛邓永强秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的反向遗传系统,根据已测定的DEN2-43全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pWSK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆.将此克隆体外转录后,经电... 详细信息

为构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的反向遗传系统,根据已测定的DEN2-43全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pWSK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆.将此克隆体外转录后,经电穿孔导入宿主细胞获得恢复病毒.结果表明,获得的基因组全长cDNA克隆具有感染性,所获得的恢复病毒具有与原型病毒类似的生物学性质及乳鼠神经毒力,且可稳定传代.该反向遗传系统的构建为深入探讨登革病毒的致病机理及新型疫苗的研制奠定了基础.

关键词：登革病毒反向遗传系统恢复病毒

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登革2型病毒中国分离株感染性全长cDNA克隆的构建与鉴定

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军事医学科学院院刊 2006年第2期30卷 116-121页

作者：朱武洋陈水平秦成峰于曼姜涛邓永强秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的感染性全长cDNA克隆。方法:根据我室测定的DEN2-43株病毒全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR技术扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pW SK29中构建该病毒株的全长cDNA... 详细信息

目的:构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的感染性全长cDNA克隆。方法:根据我室测定的DEN2-43株病毒全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR技术扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pW SK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆。将此克隆体外转录后,通过电穿孔导入宿主细胞获得恢复病毒。结果与结论:构建的DEN2-43基因组全长cDNA克隆具有感染性,所获得的恢复病毒具有与原型病毒类似的生物学性质及小鼠乳鼠神经毒力,且可稳定传代。该感染性克隆的构建为深入探讨登革病毒的致病机制及研制新型登革疫苗奠定了基础。

关键词：登革病毒感染性全长cDNA克隆恢复病毒

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重要呼吸道病毒病原的多重RT-PCR检测

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解放军医学杂志 2006年第9期31卷 890-892页

作者：赵海龙姜涛陈水平赵慧李晓峰秦成峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室

目的建立一种可同时快速检测引起人呼吸道感染的重要病毒病原的检测方法。方法通过对PCR反应条件的优化,建立同时检测甲型流感病毒(IA)、呼吸道合胞病毒(RSV)和SARS冠状病毒(SARS-CoV)的多重RT-PCR方法。结果该法可同时或分别扩增IA258b... 详细信息

目的建立一种可同时快速检测引起人呼吸道感染的重要病毒病原的检测方法。方法通过对PCR反应条件的优化,建立同时检测甲型流感病毒(IA)、呼吸道合胞病毒(RSV)和SARS冠状病毒(SARS-CoV)的多重RT-PCR方法。结果该法可同时或分别扩增IA258bp、RSV348bp和SARS-CoV438bp的基因片段。检测的敏感性分别为101.7TCID50/ml、10TCID50/ml和101·5TCID50/ml。采用相同的反应体系和条件,分别对其他7种呼吸道病毒(包括乙型流感病毒,副流感病毒2型,柯萨奇病毒B3和B5血清型及腺病毒2、3和7血清型)进行扩增,均未检测出扩增产物。结论此种多重RT-PCR法可在6h内完成,适用于三种重要呼吸道病毒的快速甄别。

关键词：多重RT-PCR 流感病毒A型呼吸道合胞病毒 SARS病毒

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HIV-1拉米夫定(3TC)耐药毒株的体外诱导培育和鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第3期26卷 220-223页

作者：李珏鲍作义刘思扬庄道民李韩平刘永健李林杨坤李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所全军艾滋病检测中心病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的通过体外传代培养,将我国HIV1药物敏感毒株诱导为拉米夫定耐药毒株。方法在MT4细胞中国HIV1B′亚型CNHN24毒株培养系统中加入0.008μmolL拉米夫定,逐渐增加药物浓度进行传代和培养,每隔3～5代测定半数抑制浓度(IC50),并用RTPCR法扩... 详细信息

目的通过体外传代培养,将我国HIV1药物敏感毒株诱导为拉米夫定耐药毒株。方法在MT4细胞中国HIV1B′亚型CNHN24毒株培养系统中加入0.008μmolL拉米夫定,逐渐增加药物浓度进行传代和培养,每隔3～5代测定半数抑制浓度(IC50),并用RTPCR法扩增pol区基因,进行基因型耐药性分析。将表型和基因型耐药结果与敏感株进行比较。结果培养6代后,IC50由野生毒株的0.018μmolL逐渐提高到0.15μmolL;第7代时,IC50突然增加到大于2048μmolL;pol区的184位氨基酸由甲硫氨酸(M)突变为异亮氨酸(I)。去除药物继续培养5代,IC50仍维持>2048μmolL,pol区184位氨基酸仍为异亮氨酸,没有发生回复突变。结论在国内首次用中国HIV1毒株诱导培育出可能稳定传代的3TC耐药株,可用于HIV1耐药性的研究和HIV1药物的药效学评价。该耐药株已申请国家专利。

关键词：体外诱导 HIV-1 CNI-IN2A-毒株拉米夫定耐药株

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与HIV-1共感染的HHV-6毒株的分离、传代培养与鉴定

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军事医学科学院院刊 2006年第4期30卷 310-314页

作者：李珏鲍作义董华凰刘思扬庄道民李韩平李豫川李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的：对一株从中国河南省一名艾滋病患者体内分离的、可在MT4细胞上稳定传代的未知病毒29A进行鉴定，确定该病毒种类及型别。方法：用从该患者外周血单核细胞中分离的病毒株感染MT4细胞，获得可在该细胞上稳定传代的病毒株29A。通过细... 详细信息

目的：对一株从中国河南省一名艾滋病患者体内分离的、可在MT4细胞上稳定传代的未知病毒29A进行鉴定，确定该病毒种类及型别。方法：用从该患者外周血单核细胞中分离的病毒株感染MT4细胞，获得可在该细胞上稳定传代的病毒株29A。通过细胞病变特征、电镜观察结果、HIV-1 p24抗原检测以及HIV-1 pol区基因扩增结果，对该毒株是否为HIV-1进行鉴别。在电镜下对病毒感染细胞的超薄切片进行观察，发现该病毒呈现疱疹病毒形态特征，因此设计人类疱疹病毒6型（HHV-6）U69、U16／U17、U60／U66三个不同基因片段的特异性引物并进行巢式PCR扩增，对扩增产物进行序列测定和结果分析。结果：该毒株HIV-1 p24抗原检测为阴性；用HIV-1 pol区特异性引物未扩增出目的片段；细胞病变形态不同于HIV-1引起的病变；电镜观察该病毒直径为160～200nm，明显大于HIV—1，表明该传代株不是HIV-1。用人类疱疹病毒6型（HHV-6）U69、U16／U17、U60／U66等基因的特异性引物均扩增出了目的片段，序列分析的结果表明该毒株为HHV-6病毒B亚型。结论：在国内首次从艾滋病患者的外周血淋巴细胞中分离出HHV-6，为进一步研究HHV-6和HIV-1的相互作用奠定了基础。

关键词： HIV-1 HHV-6 共感染传代鉴定

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一起突发炭疽疫情的诊断和病原的分离鉴定

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军事医学科学院院刊 2006年第1期30卷 98-99页

作者：何君苏裕心王争强朱虹端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

2005年6—7月,我国河北省承德市围场县发生了一起疑似炭疽疫情。6月29日,7名村民屠宰一病死牛(死因不明),其中3人有伤口。7月5日,有伤口的3人出现发热,伤口红肿、中心变黑,腋下淋巴结肿大等症状。我所对患者血清标本及病死牛肉、屠宰现... 详细信息

2005年6—7月,我国河北省承德市围场县发生了一起疑似炭疽疫情。6月29日,7名村民屠宰一病死牛(死因不明),其中3人有伤口。7月5日,有伤口的3人出现发热,伤口红肿、中心变黑,腋下淋巴结肿大等症状。我所对患者血清标本及病死牛肉、屠宰现场带血土壤、患者伤口结痂等标本进行了检测,现将结果报告如下。[第一段]

关键词：炭疽芽孢杆菌免疫荧光试验免疫胶体金聚合酶链反应病原分离鉴定

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炭疽毒素受体及其与保护性抗原结合机制的研究进展

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军事医学科学院院刊 2006年第1期30卷 87-90页

作者：赵剑徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

本文阐述了炭疽毒素的细胞表面受体研究及其与保护性抗原结合分子机制等方面的进展。到目前为止,共发现两种炭疽毒素受体,分别由TEM8和CMG2基因编码。炭疽毒素受体的发现和鉴定对炭疽的病理学研究具有重要的意义,而且体外实验发现的受... 详细信息

本文阐述了炭疽毒素的细胞表面受体研究及其与保护性抗原结合分子机制等方面的进展。到目前为止,共发现两种炭疽毒素受体,分别由TEM8和CMG2基因编码。炭疽毒素受体的发现和鉴定对炭疽的病理学研究具有重要的意义,而且体外实验发现的受体与毒素的高亲和力也为受体本身作为炭疽的治疗剂带来了希望。CMG2和PA结合状态晶体结构的解析使我们能够对毒素进入细胞质过程的分子细节有所推论。所建立的理论模型为研究其他类型穿透细胞膜发挥作用的毒素的作用过程提供了重要的参考。

关键词：炭疽芽孢杆菌炭疽毒素受体保护性抗原 von Willebrand A型因子结构域

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