检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2005年第7期32卷 657-661页

作者：赵剑徐俊杰缪静李冰杨秀旭宋小红陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 烟台师范大学生命科学院烟台264025

使用分泌型表达载体,实现了重组炭疽毒素受体胞外区(rATR(CMG2)-EXCELL)在毕赤酵母KM71H培养物上清中的分泌表达.表达量约占培养物上清总蛋白质的20%.经过螯合柱初步纯化,每升诱导培养物可获得约1mg电泳纯的rATR(CMG2)-EXCELL.体外与配... 详细信息

使用分泌型表达载体,实现了重组炭疽毒素受体胞外区(rATR(CMG2)-EXCELL)在毕赤酵母KM71H培养物上清中的分泌表达.表达量约占培养物上清总蛋白质的20%.经过螯合柱初步纯化,每升诱导培养物可获得约1mg电泳纯的rATR(CMG2)-EXCELL.体外与配基PA结合试验和细胞保护试验显示,rATR(CMG2)-EXCELL具有很好的生物活性.rATR(CMG2)-EXCELL的成功表达为今后研究炭疽毒素受体的作用机理、发展新型炭疽治疗药物打下基础.

关键词：炭疽杆菌炭疽毒素受体蛋白质表达毕赤酵母

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炭疽毒素受体与人IgG1的Fc段融合蛋白ATR-Fc在CHO细胞中的表达

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生物工程学报 2005年第5期21卷 826-831页

作者：高丽华胡显文陈薇徐俊杰赵剑陈惠鹏军事医学科学院生物工程研究所北京100071 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

ATR_Fc是人炭疽毒素受体(ATR)的胞外区与人免疫球蛋白IgG1的铰链区、CH2区和CH3区组成的融合蛋白。表达该蛋白是为了获得结合PA的抗体样分子,通过阻断PA与细胞受体的结合,而阻止炭疽致死毒素和水肿因子进入细胞内,可作为预防和治疗炭疽... 详细信息

ATR_Fc是人炭疽毒素受体(ATR)的胞外区与人免疫球蛋白IgG1的铰链区、CH2区和CH3区组成的融合蛋白。表达该蛋白是为了获得结合PA的抗体样分子,通过阻断PA与细胞受体的结合,而阻止炭疽致死毒素和水肿因子进入细胞内,可作为预防和治疗炭疽感染的生物制品。将编码炭疽毒素受体N端1_227氨基酸的基因和编码Fc段的基因连接,插入到pcDNA3.1的HindⅢ和NotⅠ位点得到表达ATR_Fc融合蛋白的真核表达载体pcDNA3.1ATR_Fc,并用脂质体方法将该载体转染至CHO_K1细胞中,用G418筛选并获得ATR_Fc表达水平为10～15μg(106cells·d)的基因工程CHO细胞系ATR_Fc_1D5。采用蛋白A纯化重组蛋白,并用ELISA法鉴定ATR_Fc与PA的亲和性,表明ATR_Fc可与PA特异性结合。

关键词：炭疽毒素受体 Fc融合蛋白重组CHO细胞抗体类分子抗毒素

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siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第3期21卷 397-402页

作者：赵慧陈水平段鸿元邓永强姜涛赵卓于曼康晓平杨保安李晓萸秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的... 详细信息

为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用.结果表明,针对Pol基因的siRNA(psOe)在Vero细胞中可阻断BJ0 1株SARS病毒RNA的复制及其蛋白的表达.该结果为深入阐明SARS冠状病毒的致病机理及探讨SARS病毒防治新途径奠定了基础.

关键词： SARS冠状病毒,RNAi,siRNA

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病毒基因分型方法的研究进展及应用

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中华检验医学杂志 2005年第10期28卷 1102-1104页

作者：杨银辉军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室 100071

同一种病毒不同分离株(变异株)之间核苷酸序列及抗原性之间的差异造成了各分离株间血清学反应性、致病性、毒力、对治疗的应答、流行区域及分布等的不同.因此，进一步研究病毒分型对流行病学调查、病毒毒力强弱的研究、不同亚型病毒特... 详细信息

同一种病毒不同分离株(变异株)之间核苷酸序列及抗原性之间的差异造成了各分离株间血清学反应性、致病性、毒力、对治疗的应答、流行区域及分布等的不同.因此，进一步研究病毒分型对流行病学调查、病毒毒力强弱的研究、不同亚型病毒特异疫苗的研制、病毒感染的自然历程及其持续感染在发病过程中的作用、病毒的演变过程、病毒与宿主的相互作用及临床治疗效果等有着十分重要的意义。

关键词：病毒分型基因分型方法临床治疗效果流行病学调查病毒毒力核苷酸序列流行区域不同亚型发病过程持续感染

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一株西尼罗病毒基因组cDNA亚克隆的构建与鉴定

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军事医学科学院院刊 2005年第5期29卷 424-428页

作者：李晓峰姜涛陈水平秦成峰于曼秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:构建我室保存的一株西尼罗病毒引进毒株(CH-01)基因组全长cDNA的亚克隆,为进一步构建该毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础。方法:根据CH-01病毒株基因组序列中含有的特异性酶切位点,利用DNAstar及O ligo6软件设计5对引物。以感染... 详细信息

目的:构建我室保存的一株西尼罗病毒引进毒株(CH-01)基因组全长cDNA的亚克隆,为进一步构建该毒株的感染性全长cDNA克隆奠定基础。方法:根据CH-01病毒株基因组序列中含有的特异性酶切位点,利用DNAstar及O ligo6软件设计5对引物。以感染细胞中的病毒RNA为模板,通过RT-PCR扩增出覆盖病毒基因组全长的5个cDNA片段,并分别将其克隆至pGEM-T easy载体,通过片段间共有的酶切位点进行连接,最终获得基因组5′和3′半分子,并分别通过序列测定加以鉴定。结果与结论:已构建出西尼罗病毒CH-01株基因组的5′和3′半分子,经酶切鉴定和序列测定表明所获得的cDNA克隆为该株病毒的特异性序列。

关键词：黄病毒西尼罗病毒 RT-PCR cDNA亚克隆

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普氏立克次体120×10~3表面抗原的N端和C端重组蛋白免疫原性的研究

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军事医学科学院院刊 2005年第5期29卷 429-431,435页

作者：高宁温博海张军陈梅玲邱玲牛东升军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:评价普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白的免疫原性。方法:将纯化的N端和C端重组蛋白分别免疫小鼠,采用酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光试验分析免疫小鼠的体液免疫应答水平;用MTT法评价小鼠脾淋巴细胞的增殖情况... 详细信息

目的:评价普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白的免疫原性。方法:将纯化的N端和C端重组蛋白分别免疫小鼠,采用酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光试验分析免疫小鼠的体液免疫应答水平;用MTT法评价小鼠脾淋巴细胞的增殖情况,分析免疫小鼠的细胞免疫应答水平,并采用RT-PCR方法检测免疫小鼠脾淋巴细胞被重组蛋白刺激后细胞因子的表达。结果:N端和C端重组蛋白均诱导小鼠产生较高水平的特异性IgG抗体,诱导高水平的小鼠脾淋巴细胞增殖;经两种重组蛋白刺激的小鼠脾淋巴细胞均表达了IFN-γ和IL-2。结论:普氏立克次体120×103表面抗原的N端和C端重组蛋白具有良好的免疫原性,能够诱导机体产生高水平的体液免疫和细胞免疫应答,可作为流行性斑疹伤寒亚单位疫苗的候选蛋白。

关键词：普氏立克次体表面抗原重组蛋白免疫原性

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Hendra病毒的实时PCR检测方法的建立

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军事医学科学院院刊 2005年第2期29卷 173-174,177页

作者：邓永强姜涛于曼陈水平秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:建立针对Hendra病毒的敏感、特异和快速的实时PCR法,为Hendra病的早期诊断提供依据。方法:采用常规PCR法和实时PCR法分别对构建的Hendra病毒全长G基因的重组质粒DNA进行扩增,并比较两种方法的敏感性。结果与结论:应用常规PCR方法... 详细信息

目的:建立针对Hendra病毒的敏感、特异和快速的实时PCR法,为Hendra病的早期诊断提供依据。方法:采用常规PCR法和实时PCR法分别对构建的Hendra病毒全长G基因的重组质粒DNA进行扩增,并比较两种方法的敏感性。结果与结论:应用常规PCR方法可检测到100fg/μl的含Hendra病毒特异序列的重组质粒DNA,而实时PCR法则可检测到0.1fg/μl的DNA,后者的敏感性比常规PCR法的提高了1000倍,该方法不但操作上更加简便、快速,还可避免交叉污染,适于对Hendra病毒特异序列的检测。

关键词： Hendra病毒实时PCR 质粒

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HIV-1 B′亚型CNHN24毒株5′端和3′端长末端重复序列的测定及全基因组克隆的构建

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军事医学科学院院刊 2005年第6期29卷 512-515页

作者：王铮李韩平李林董华凰鲍作义刘思扬李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:对我国H IV-1B′亚型CNHN24毒株5′端和3′端长末端重复序列(LTR)进行扩增及测序并构建全基因组克隆。方法:利用PCR扩增出5′LTR和3′LTR片段;并利用高保真DNA聚合酶分别扩增出病毒全基因组的5′半分子和3′半分子DNA,然后依次将... 详细信息

目的:对我国H IV-1B′亚型CNHN24毒株5′端和3′端长末端重复序列(LTR)进行扩增及测序并构建全基因组克隆。方法:利用PCR扩增出5′LTR和3′LTR片段;并利用高保真DNA聚合酶分别扩增出病毒全基因组的5′半分子和3′半分子DNA,然后依次将其克隆入低拷贝载体pLG338。结果与结论:完成CNHN24毒株5′LTR和3′LTR的测序并提交至GenBank,其登录号分别为AY860947和AY894352,使CNHN24株成为具有完整全序列的H IV毒株;获得可以稳定传代的全基因组克隆质粒pCN24,利用此克隆转染293T细胞后可以产生恢复病毒。

关键词：人免疫缺陷病毒长末端重复序列全基因组克隆

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肉毒神经毒素的作用机制及研究进展

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军事医学科学院院刊 2005年第6期29卷 563-566页

作者：孟露露荫俊军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

肉毒神经毒素(botu linum neurotoxins,BoNTs)是目前已知的毒力最强的毒素蛋白,它通过与神经肌肉接头处的神经元上的受体结合,抑制神经递质释放而引起松弛性麻痹,进而导致生物体死亡,是重要的生物恐怖剂之一。研究BoNT的作用机制,获得... 详细信息

肉毒神经毒素(botu linum neurotoxins,BoNTs)是目前已知的毒力最强的毒素蛋白,它通过与神经肌肉接头处的神经元上的受体结合,抑制神经递质释放而引起松弛性麻痹,进而导致生物体死亡,是重要的生物恐怖剂之一。研究BoNT的作用机制,获得具有中和活性的保护性抗体,对肉毒毒素中毒的防治具有重要意义。本文就BoNT的作用机制及近年来的研究进展作一综述。

关键词：肉毒神经毒素神经递质突触小泡

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新分离呼肠病毒BYD株生物学特性的研究

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军事医学科学院院刊 2005年第4期29卷 399-400,F0003页

作者：何君苏裕心朱虹宋立华黄如统端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

呼肠病毒为二十面体对称的双层衣壳结构,无包膜,能抵抗脂溶剂.完整的病毒颗粒直径为60～80 nm;其核酸为RNA,分节,由10个片段组成.目前人呼肠病毒分为3个不同的血清型,这3个血清型都能凝集人O型红细胞.该病毒国外研究较多,国内研究少见.

关键词：呼肠病毒 BYD株细胞敏感性试验抗酸性试验血凝试验病毒形态学

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