检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学科学院院刊 2005年第6期29卷 506-508,511页

作者：秦成峰赵慧姜涛陈水平邓永强秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:观察登革2型病毒衣壳蛋白(D2C)与葡萄球菌核酸酶(SN)融合蛋白在哺乳动物细胞中对登革2型病毒增殖的影响.方法:通过基因重组构建可在哺乳动物细胞中表达融合蛋白D2C-SN的重组质粒pc/D2C-SN,同步构建pc/D2C-SN*用作对照.病毒感染BHK2... 详细信息

目的:观察登革2型病毒衣壳蛋白(D2C)与葡萄球菌核酸酶(SN)融合蛋白在哺乳动物细胞中对登革2型病毒增殖的影响.方法:通过基因重组构建可在哺乳动物细胞中表达融合蛋白D2C-SN的重组质粒pc/D2C-SN,同步构建pc/D2C-SN*用作对照.病毒感染BHK21细胞后,通过阳离子转染试剂将重组质粒导入感染细胞,在此基础上评价融合蛋白D2C-SN抗登革病毒感染的治疗效果.结果: 融合蛋白D2C-SN能够在哺乳动物细胞中表达,对宿主细胞没有明显的毒性;与正常BHK21细胞相比较,可导致病毒感染性滴度降到原来的1/60～1/12.结论:融合蛋白D2C-SN在细胞水平能够有效抑制登革病毒的增殖,有可能成为潜在的抗登革病毒感染的治疗性药物.

关键词：登革病毒衣壳蛋白葡萄球菌核酸酶抗病毒作用

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感染乳鼠组织中克里米亚-刚果出血热病毒的RT-PCR检测与形态学鉴定

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军事医学科学院院刊 2005年第5期29卷 421-423,428页

作者：赵晓冬王翠娥李豫川吴小红曹军田严格李金凤军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:检测并鉴定感染组织中的克里米亚-刚果出血热病毒。方法:分别经皮下与腹腔两种途径感染乳小鼠;应用RT-PCR技术对病毒核酸进行检测;利用透射电镜超薄切片技术对病毒进行形态学鉴定。结果:RT-PCR可在心脏、肝脏、脾脏、肾脏以及脑组... 详细信息

目的:检测并鉴定感染组织中的克里米亚-刚果出血热病毒。方法:分别经皮下与腹腔两种途径感染乳小鼠;应用RT-PCR技术对病毒核酸进行检测;利用透射电镜超薄切片技术对病毒进行形态学鉴定。结果:RT-PCR可在心脏、肝脏、脾脏、肾脏以及脑组织内检测到病毒核酸,透射电镜下可在肝细胞胞浆内观察到形态典型的病毒粒子。结论:应用RT-PCR技术可以对感染组织中的克里米亚-刚果出血热病毒进行检测,利用透射电镜可以对病毒的形态进行观察与鉴定。

关键词：克里米亚-刚果出血热病毒逆转录-聚合酶链反应形态学

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新分离呼肠病毒的空斑试验及病毒纯化

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军事医学科学院院刊 2005年第5期29卷 418-420页

作者：苏裕心何君朱虹宋立华黄如统端青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:建立新分离呼肠病毒(reovirus)的空斑技术,进行病毒纯化,为呼肠病毒生物学和分子生物学的研究奠定基础.方法: 4株新分离呼肠病毒的早代毒种经L929细胞连续传代,当产生细胞病变后进行空斑试验,加营养琼脂培养6 d后加中性红,24 h内... 详细信息

目的:建立新分离呼肠病毒(reovirus)的空斑技术,进行病毒纯化,为呼肠病毒生物学和分子生物学的研究奠定基础.方法: 4株新分离呼肠病毒的早代毒种经L929细胞连续传代,当产生细胞病变后进行空斑试验,加营养琼脂培养6 d后加中性红,24 h内挑取空斑,扩增一次后做PCR鉴定.取呼肠病毒PCR阳性病毒进行第2次克隆纯化.结果:4株新分离呼肠病毒经L929细胞连续传2～4代,均能观察到明显的细胞病变.用10-3和10-4接种L929单层细胞,第6～7天均能产生空斑,空斑呈圆形,直径为0.2～1.0 mm,并分别测定其空斑滴度(PFU/ml).两次纯化后进行PCR检测,呼肠病毒基因扩增阳性、脊髓灰质炎病毒基因扩增阴性.结论:4株呼肠病毒的空斑出斑规律,通过两次克隆,获得纯化的病毒.

关键词：呼肠病毒空斑试验 RT-PCR 病毒纯化

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痘苗病毒检测方法的建立

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军事医学科学院院刊 2005年第3期29卷 272-274页

作者：段鸿元邓永强赵慧于曼李豫川严格秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:建立痘苗病毒的检测方法。方法:采用细胞病变法观察痘苗病毒感染的HeLa细胞,通过电镜直接观察病毒颗粒的形态特征,观察鸡胚绒毛尿囊膜上形成的痘斑并用分子生物学方法分析痘苗病毒HA基因片段。结果与结论:痘苗病毒感染HeLa细胞34h... 详细信息

目的:建立痘苗病毒的检测方法。方法:采用细胞病变法观察痘苗病毒感染的HeLa细胞,通过电镜直接观察病毒颗粒的形态特征,观察鸡胚绒毛尿囊膜上形成的痘斑并用分子生物学方法分析痘苗病毒HA基因片段。结果与结论:痘苗病毒感染HeLa细胞34h后出现典型细胞病变。在病毒感染细胞47h后的培养上清和胞浆中均可通过电镜观察到病毒颗粒。感染的鸡胚绒毛尿囊膜上出现痘斑。进一步采用PCR法扩增病毒的HA基因,RFLP限制性内切酶片段多态性分析和序列测定证明该序列与已知序列一致。所建立的痘苗病毒系列检测方法,为天花相关病毒的实验室诊断奠定了基础。

关键词：痘苗病毒诊断天花病毒

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美军化生防御战场管理现状

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军事医学科学院院刊 2005年第6期29卷 587-590页

作者：崔玉军马静田青军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

化生防御领域战场管理已经成为美军战场指挥管理的重要组成部分,在应对化生恐怖袭击行动的指挥决策中也起到重要作用。本文介绍了美军化生防御领域战场管理的理念、内容和相关的科研项目,并简要分析了其演变和发展趋势。

关键词：化生防御战场管理警报和报告模型和模拟

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贝氏柯克斯体被单核细胞吞噬及其在单核细胞内生长的初步研究

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中国人兽共患病杂志 2005年第11期21卷 940-944页

作者：李丽莉温博海张晶波邱玲陈梅玲牛东升军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的探讨贝氏柯克斯体被单核细胞吞噬及其在单核细胞内生长的规律。方法将泛影葡胺梯度超速离心纯化的I相贝氏柯克斯体(强毒株)与体外培养人单核细胞(THP-1)相互作用,用免疫荧光染色和显微镜检查单核细胞内贝氏柯克斯体。用Gamma射线灭... 详细信息

目的探讨贝氏柯克斯体被单核细胞吞噬及其在单核细胞内生长的规律。方法将泛影葡胺梯度超速离心纯化的I相贝氏柯克斯体(强毒株)与体外培养人单核细胞(THP-1)相互作用,用免疫荧光染色和显微镜检查单核细胞内贝氏柯克斯体。用Gamma射线灭活贝氏柯克斯体作平行实验。结果在4 h内分析单核细胞的吞噬作用,发现单核细胞内灭活贝氏柯克斯体的数量迅速增加,而活立克次体的数量无明显变化。在第1-6d的实验周期内,单核细胞内灭活贝氏柯克斯体数逐渐减少,第5d近于完全消失;而活贝氏柯克斯体的数量从第4d开始逐渐增加。结论单核细胞吞噬活贝氏柯克斯体的效率明显低于对灭活贝氏柯克斯体的吞噬;活贝氏柯克斯体可以在人单核细胞内缓慢生长繁殖,而灭活贝氏柯克斯体则在单核细胞内逐渐被清除。

关键词：贝氏柯克斯体单核细胞吞噬感染

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PCR和DNA斑点杂交分析贝氏柯克斯体的核酸标识

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中国人兽共患病杂志 2005年第5期21卷 375-378页

作者：张军朱丽娜张晶波温博海陈梅玲邱玲牛东升军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 病原微生物生物安全国家重点实验室

目的确认贝氏柯克斯体特异的核酸标识。方法用PCR法特异扩增贝氏柯克斯体24kDa,27kDa、30kDa、34kDa、热休克蛋白B等表面蛋白基因,以及23SrRNA插入序列和16S23SrRNA间区序列等基因片段,从DNA电泳凝胶中回收纯化PCR扩增的目的DNA片段,用... 详细信息

目的确认贝氏柯克斯体特异的核酸标识。方法用PCR法特异扩增贝氏柯克斯体24kDa,27kDa、30kDa、34kDa、热休克蛋白B等表面蛋白基因,以及23SrRNA插入序列和16S23SrRNA间区序列等基因片段,从DNA电泳凝胶中回收纯化PCR扩增的目的DNA片段,用地高辛随机引物标记法标记目的DNA片段作探针,行DNA斑点杂交。结果PCR扩得的7个贝氏柯克斯体DNA片段探针只能与贝氏柯克斯体基因组DNA杂交而不能与其他种属的立克次体的基因组杂交,每种探针检测同源目的基因的灵敏度可达到10pg。结论这7种贝氏柯克斯体DNA片段是贝氏柯克斯体特异的DNA片段,可作为贝氏柯克斯体的核酸标识,基于它们的序列设计的引物和探针具有极高的贝氏柯克斯体种特异性。

关键词：贝氏柯克斯体 PCR DNA探针斑点杂交

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应用AFLP方法对我国土拉弗菌基因分型的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第7期25卷 606-607页

作者：张芳刘玮何君端青张泮河杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071

土拉菌病又称"野兔热",是由土拉弗菌经患病野生动物、吸血昆虫或遭受污染的水或食物传播的一种自然疫源性疾病,呈世界性分布.其致病菌是革兰阴性胞内寄生菌,包括4种基因型.由于不同基因型在地理分布、毒性等方面存在较大差异... 详细信息

土拉菌病又称"野兔热",是由土拉弗菌经患病野生动物、吸血昆虫或遭受污染的水或食物传播的一种自然疫源性疾病,呈世界性分布.其致病菌是革兰阴性胞内寄生菌,包括4种基因型.由于不同基因型在地理分布、毒性等方面存在较大差异,基因分型研究一直是该领域的研究热点,而近年来随着16S rRNA的序列分析、随机引物扩增多态性(RAPD)、限制性片段长度多态性(RFLP)、扩增片段长度多态性(AFLP)等分子生物学方法在细菌分型中的应用,世界范围内许多地区的土拉弗菌株得到了很好的基因型鉴别,也对一些传统认识提出了新的质疑,如欧亚地区是否也存在致病性较强的A型菌株?事实上在1998年科学家们证实了这一疑问[1]。

关键词：基因分型土拉弗菌 AFLP 限制性片段长度多态性随机引物扩增多态性自然疫源性疾病不同基因型世界性分布土拉菌病

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重组肉毒神经毒素A轻链(BoNT/ALC)蛋白的表达、纯化与鉴定

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军事医学科学院院刊 2005年第1期29卷 30-33页

作者：贾宏丽王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071

　目的:克隆、表达并纯化肉毒神经毒素A轻链(BoNT/ALC)片段,为BoNT/A的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法:以PCR方法自肉毒梭菌中扩增BoNT/A轻链基因,直接插入pGEM T载体,测序正确后再与表达载体pET21a构建重组表达载体pET21a 轻... 详细信息

　目的:克隆、表达并纯化肉毒神经毒素A轻链(BoNT/ALC)片段,为BoNT/A的抗体制备和检测方法的建立奠定基础。方法:以PCR方法自肉毒梭菌中扩增BoNT/A轻链基因,直接插入pGEM T载体,测序正确后再与表达载体pET21a构建重组表达载体pET21a 轻链,转化***21(pLys)感受态细胞获得表达工程菌株并进行诱导表达,用Western印迹鉴定重组BoNT/A轻链。结果:经PCR获得的BoNT/A轻链序列与GenBank中的BoNT/A轻链基因序列的一致性达 99. 9%以上。表达工程菌BL21 /pET21a ALC于 37℃经 0. 7mmol/LIPTG诱导 6h,目的蛋白获得高表达,约占菌体总蛋白的 23%。经过镍离子螯合次氨基三乙酸 (Ni NTA)亲和层析一步纯化,重组BoNT/A轻链的纯度可达 97%以上。Western印迹结果表明,重组BoNT/A轻链与抗天然BoNT/A的马血清发生特异性的抗原抗体结合反应。结论:成功克隆、表达并纯化了BoNT/A轻链片段,其抗原性良好。

关键词：肉毒神经毒素A(BoNT/A) 轻链克隆表达 Ni—NTA亲和层析

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禽流感病毒跨种属感染人的机制研究进展

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微生物学通报 2005年第3期32卷 121-124页

作者：李靖刘伯华祝庆余军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071

禽流感病毒(avian influenza virus,简称AIV)不仅引起禽类感染和流行,而且可以打破种属屏障(spec ies barrier)、引起人或其他哺乳动物感染和传播。近年来对人呼吸道抗禽流感病毒感染的非特异屏障机制、禽流感病毒对人感染的机制研究不... 详细信息

禽流感病毒(avian influenza virus,简称AIV)不仅引起禽类感染和流行,而且可以打破种属屏障(spec ies barrier)、引起人或其他哺乳动物感染和传播。近年来对人呼吸道抗禽流感病毒感染的非特异屏障机制、禽流感病毒对人感染的机制研究不断取得新的进展。

关键词：禽流感病毒,种属屏障,跨种属感染机制

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