检索结果-内蒙古大学图书馆

炭疽毒素受体ATRcDNA的合成和克隆及ATR-Fc融合蛋白的真核表达载体的构建

中国生物工程杂志 2005年第12期25卷 1-8页

作者：胡显文高丽华陈薇徐俊杰赵剑陈惠鹏军事医学科学院生物工程研究所北京100071 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

可溶性炭疽毒素受体(sATR)可以特异性结合炭疽毒素保护抗原(PA),为获得用于中和炭疽毒素以防治炭疽感染的候选抗毒素药物,构建了表达ATRFc抗体样分子融合蛋白的真核表达载体。将全长为681bp的编码炭疽毒素受体N端1～227氨基酸的基因分... 详细信息

可溶性炭疽毒素受体(sATR)可以特异性结合炭疽毒素保护抗原(PA),为获得用于中和炭疽毒素以防治炭疽感染的候选抗毒素药物,构建了表达ATRFc抗体样分子融合蛋白的真核表达载体。将全长为681bp的编码炭疽毒素受体N端1～227氨基酸的基因分成长约50～60碱基的18个寡核苷酸片段,相邻片段重叠部分为20～22个碱基,利用重叠延伸PCR和引物PCR法,将合成的片段组装与扩增,得到了含有ATR1～227的全部编码区和HindIII、BamHI位点在内的DNA片段。回收的基因片段经BamHI/HindIII双酶切连接到pUC19质粒中,挑选阳性克隆进行酶切鉴定和双向序列测定,获得了全序列正确的克隆。将ATR基因与Fc基因连接后插入pcDNA3.1载体多克隆位点HindIII和NotI之间,得到表达ATRFc融合蛋白的真核表达载体pcDNA3.1/ATRFc,为利用CHO哺乳动物细胞表达ATRFc并研究其生物学性质奠定了基础。

关键词：炭疽毒素受体 Fc融合蛋白基因合成抗毒素

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从噬菌体表面展示肽库中筛选葡萄球菌B型肠毒素抑制剂

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第3期21卷 352-356页

作者：李韩平郑玉玲邓小红马茹姜永强军事医学科学院微生物与流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

通过生物淘选,从噬菌体表面展示12肽肽库中筛选能与葡萄球菌B型肠毒素(staphylococcalenterotoxinB ,SEB)结合且能抑制其肠毒活性的特异性短肽.采用Phage ELISA和MTT鉴定所得目的肽的亲和性;根据优势噬菌体阳性克隆序列合成相应多肽.利... 详细信息

通过生物淘选,从噬菌体表面展示12肽肽库中筛选能与葡萄球菌B型肠毒素(staphylococcalenterotoxinB ,SEB)结合且能抑制其肠毒活性的特异性短肽.采用Phage ELISA和MTT鉴定所得目的肽的亲和性;根据优势噬菌体阳性克隆序列合成相应多肽.利用竞争ELISA研究合成肽与SEB单克隆抗体竞争结合SEB的情况;通过动物实验考察其抑制SEB的超抗原特性和肠毒活性情况.筛选所得短肽在一定浓度范围内可以抑制SEB对鼠脾淋巴细胞的激活;合成肽与SEB质量比为16 0∶1时,合成肽可较好地抑制SEB对乳猫的肠毒活性,并对SEB引起的小鼠致死具有明显保护作用.结果表明,初步得到了能与SEB特异结合并能抑制SEB超抗原特性和肠毒活性的短肽,为进一步研制SEB高效抑制剂奠定了基础.

关键词：葡萄球菌B型肠毒素(SEB),随机肽库,筛选,SEB抑制剂

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低出血倾向、低免疫原性葡激酶mSAK(K130T,K135R)的表达、纯化与活性测定

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第5期21卷 610-615页

作者：郑玉玲宁保安马茹高志贤姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院卫生学环境医学研究所天津300050

为了有效降低葡激酶应用的副作用,构建低出血倾向、低免疫原性葡激酶突变体,高效表达纯化后进行活性鉴定,以野生型重组葡激酶基因为模板,PCR法引入突变位点(K130T,K135R),并将该片段克隆测序鉴定后,克隆至表达载体pBV220,构建低免疫原... 详细信息

为了有效降低葡激酶应用的副作用,构建低出血倾向、低免疫原性葡激酶突变体,高效表达纯化后进行活性鉴定,以野生型重组葡激酶基因为模板,PCR法引入突变位点(K130T,K135R),并将该片段克隆测序鉴定后,克隆至表达载体pBV220,构建低免疫原性葡激酶突变体.表达后的蛋白用Q-Sepharose FF柱与Sephacryl S-200进行纯化,纤维蛋白溶圈法进行活性测定,体外抗体中和试验与豚鼠免疫试验测定突变体蛋白的免疫原性,同时进行动物体内出血倾向观察.测序结果表明,相应位点获得突变,无非特异性突变,将突变后的片段连接pBV220导入大肠杆菌热激诱导获得了高效表达,表达产物占菌体总蛋白的40%～50%.产物主要以可溶性形式存在,经两步纯化后的蛋白的纯度可达98%以上.活性测定试验表明,该突变体的活性较野生型葡激酶稍低,体外中和抗体试验和豚鼠免疫试验证明免疫原性大为下降,豚鼠的皮肤出血以及肺部病理切片均显示该突变体蛋白引起的出血倾向明显降低.

关键词：葡激酶免疫原性低出血倾向

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三级生物安全实验室对环境潜在影响及对策研究

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军事医学科学院院刊 2005年第3期29卷 263-267页

作者：王壮李劲松军事医学科学院科技部北京100850 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

三级生物实验室(BSL3实验室)的研究对象都是对个人和环境有高度危险性的致病微生物,如何避免其对环境的影响,成为各国政府、环境保护和相关科研人员高度关注的一个问题。本文将重点阐述三级生物实验室对环境危害的重要因素和防范对策。... 详细信息

三级生物实验室(BSL3实验室)的研究对象都是对个人和环境有高度危险性的致病微生物,如何避免其对环境的影响,成为各国政府、环境保护和相关科研人员高度关注的一个问题。本文将重点阐述三级生物实验室对环境危害的重要因素和防范对策。主要研究了其对环境潜在危害的影响因素和造成危害的基本要素,对实验室的设施建设、安全设备要求、防护性能检测验证以及管理软件建设进行了探讨,以最终实现BSL3实验室的感染性三废(固体、液体和气体)“零排放”的目标。

关键词：三级生物安全实验室实验室感染潜在影响设备安全性对策

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北京昌平鼠间汉坦病毒感染时间动态变化的调查

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中国人兽共患病杂志 2005年第8期21卷 693-698页

作者：江佳富汤芳左曙青曾凡新吴晓明徐伟才郭天宇曹务春 CAO Wu-chun 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物安全国家重点实验室北京100071 66459部队卫生队

目的了解鼠类自然感染汉坦病毒(HV)时间动态变化。方法选取北京昌平南口镇某部驻地,从2002年8月至2004年5月采用夹夜法捕获鼠形动物,针对汉坦病毒M基因部分片段设计SEOV和HTNV型特异性引物,应用RT-PCR法检测宿主肺组织中携带HV-RNA及其... 详细信息

目的了解鼠类自然感染汉坦病毒(HV)时间动态变化。方法选取北京昌平南口镇某部驻地,从2002年8月至2004年5月采用夹夜法捕获鼠形动物,针对汉坦病毒M基因部分片段设计SEOV和HTNV型特异性引物,应用RT-PCR法检测宿主肺组织中携带HV-RNA及其型别情况;应用ELISA法和间接IFAT检测IgG抗体。利用SPSS软件分析宿主动物HV感染的时间动态特征。结果共捕获啮齿动物296只,平均感染率11%。整个调查周期总体宿主种群密度波动不大,局部小生境(养殖场)种群波动明显。优势宿主褐家鼠平均种群密度与其感染率变化之间具相关性(r=0.594,P=0.023),养殖场褐家鼠密度与HV感染率之间相关性极显著(r=0.746,P=0.008)。褐家鼠性比和阳性率变化之间不具统计学意义相关性(r=0.541,P=0.086)。成幼比和阳性率变化之间则具显著相关性(r=0.697,P=0.046)。结论北京昌平鼠间汉坦病毒感染长期持续存在,其感染率与种群密度随时间呈现动态变化,两者之间具有相关性,并因生境而异。优势宿主种群结构特征及其动态变化与HV感染也存在较为复杂的关系。

关键词：汉坦病毒啮齿动物时间动态北京

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一种抗菌复合材料对SARS冠状病毒灭活效果评价

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中国消毒学杂志 2005年第3期22卷 277-279页

作者：詹琳张泮河左曙青杨红曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

为评价含有抗菌添加剂的复合材料脲醛树脂对SARS冠状病毒的灭活作用,采用细胞培养法,对污染在该抗菌材料表面的SARS冠状病毒灭活效果进行了试验观察,同时,以不含抗菌剂的相同材料作对照。结果,在室温下,含有抗菌剂的脲醛树脂材料对涂抹... 详细信息

为评价含有抗菌添加剂的复合材料脲醛树脂对SARS冠状病毒的灭活作用,采用细胞培养法,对污染在该抗菌材料表面的SARS冠状病毒灭活效果进行了试验观察,同时,以不含抗菌剂的相同材料作对照。结果,在室温下,含有抗菌剂的脲醛树脂材料对涂抹在其表面的SARS冠状病毒作用4h和8h,病毒滴度均有显著降低(P<0.05)。作用48h后病毒滴度降低4个log以上,经传代未见典型细胞病变,说明作用48h后已无存活病毒。而对照组至72h仍有较高的病毒滴度。结论,含有抗菌添加剂的复合材料脲醛树脂对SARS冠状病毒有明显灭活作用。

关键词：重症急性呼吸综合征冠状病毒抗菌剂脲醛树脂抗病毒作用

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多重PCR及其在病毒性疾病诊断中的应用

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生命的化学 2005年第5期25卷 402-404页

作者：秦成峰秦鄂德军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

多重PCR(multiplexPCR)是在常规PCR基础上改进并发展起来的一种新型PCR技术。该技术可利用多对引物在同一个反应体系中同时扩增多段靶序列,目前广泛应用于科研及临床领域。该文简要介绍多重PCR反应条件的优化及其在病毒感染性疾病诊断... 详细信息

多重PCR(multiplexPCR)是在常规PCR基础上改进并发展起来的一种新型PCR技术。该技术可利用多对引物在同一个反应体系中同时扩增多段靶序列,目前广泛应用于科研及临床领域。该文简要介绍多重PCR反应条件的优化及其在病毒感染性疾病诊断中的应用。

关键词：多重PCR 病毒诊断

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用噬菌体表面展示技术筛选与肝癌细胞系结合的抗体模拟肽

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第4期21卷 452-455页

作者：李韩平郑玉玲周宏熊正英姜永强军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物与生物安全国家重点实验室北京100071 军事医学科学院生物工程研究所北京100071 陕西师范大学运动生物学研究所陕西西安710062

目的:从噬菌体展示肽库中,筛选可与肝癌细胞特异性结合的抗体模拟肽。方法:通过生物淘选使噬菌体富集。利用ELISA法,鉴定噬菌体单克隆原种的亲和性,并进行统计学分析。通过竞争ELISA,分析筛选所得抗体模拟肽的结合位点,并进一步分析抗... 详细信息

目的:从噬菌体展示肽库中,筛选可与肝癌细胞特异性结合的抗体模拟肽。方法:通过生物淘选使噬菌体富集。利用ELISA法,鉴定噬菌体单克隆原种的亲和性,并进行统计学分析。通过竞争ELISA,分析筛选所得抗体模拟肽的结合位点,并进一步分析抗体模拟肽的序列组成。结果:随着淘选次数的增加,出现噬菌体的富集。ELISA的结果显示,相对于正常肝细胞,筛选所得环状7肽对肝癌细胞系SMMC7721和BEL7402均有良好的结合活性(P<0.05),且与SMMC7721细胞的结合活性明显优于与BEL7402细胞的亲和性(P<0.05)。在α=0.01的水平上,7肽单克隆噬菌体原种可明显与scFv竞争结合SMMC7721细胞(0.005所挑选的7肽阳性克隆的测序结果均相同。结论:通过淘选获得的抗体模拟肽(CLPRQSSFC)是有效的,为导向治疗提供了新的实验依据。

关键词：噬菌体肽库淘选肝细胞癌

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地理信息系统应用于中国大陆高致病性禽流感的空间分布及环境因素分析

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中华流行病学杂志 2005年第11期26卷 839-842页

作者：方立群曹春香陈国胜雷富民刘亚岚李承毅杨红韩晓娜闫磊闫磊李小文曹务春军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院遥感应用研究所国家农业部兽医局中国科学院动物研究所

目的应用地理信息系统(GIS)技术分析中国大陆高致病性禽流感的空间分布特征和探讨疫情发生的相关环境因素。方法收集中国2004年1、2月份高致病性禽流感疫情资料建立数据库,在ArcGIS 8.3软件中与省级、县级行政区划数字地图建立关联,对... 详细信息

目的应用地理信息系统(GIS)技术分析中国大陆高致病性禽流感的空间分布特征和探讨疫情发生的相关环境因素。方法收集中国2004年1、2月份高致病性禽流感疫情资料建立数据库,在ArcGIS 8.3软件中与省级、县级行政区划数字地图建立关联,对禽流感疫情的分布进行空间聚类分析、空间统计分析和追踪分析;收集中国气象资料、植被遥感影像及候鸟迁移数据,分析禽流感疫情发生的相关环境因素。结果空间聚类分析显示中国大陆2004年1、2月份禽流感高发区聚集在圆心为东经113.261°、北纬23.119°、半径为1090.52 km的区域内(RR=2.646,P=0.001);空间统计分析显示中国大陆禽流感疫情大都发生在各省(自治区、直辖市)的省会城市及周边地区,并主要分布于一级河流、湖泊周边及沿海区域;环境因素分析显示禽流感疫情发生的当天气温较低、相对湿度和平均气压较高,疫区与中国东、中部候鸟迁徙区的联系密切,疫区1—2月份平均归一化差值植被指数(NDVI)为0 36±0.11。结论中国大陆高致病性禽流感的空间分布为非随机分布,且具有明显的地域聚集性。

关键词：高致病性禽流感地理信息系统空间分析环境因素

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单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第3期21卷 269-272页

作者：郝淮杰郑玉玲余多慰马茹姜永强南京师范大学生命科学学院分子生物学实验室江苏南京210097 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hip... 详细信息

目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hiprep26/60SephacrylS-200HR纯化。纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性。结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。通过复性及QSepharoseHP离子交换柱和Hiprep26/60SephacrylS-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg。活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高。结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法。

关键词：单链二硫键稳定抗体产量超抗原 SEA(D227A) 稳定性

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