检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2006年第2期26卷 163-168页

作者：赵晓冬王翠娥吴小红李豫川曹军田严格李金凤军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的观察新疆出血热病毒感染乳鼠引起的病理学变化,建立病理学检测方法。方法分别经皮下与腹腔两种途径感染乳鼠,HE染色后观察引起的病理学变化,并分别应用免疫组化、RT-PCR以及透射电子显微镜对病毒抗原、核酸以及病毒粒子进行检测。... 详细信息

目的观察新疆出血热病毒感染乳鼠引起的病理学变化,建立病理学检测方法。方法分别经皮下与腹腔两种途径感染乳鼠,HE染色后观察引起的病理学变化,并分别应用免疫组化、RT-PCR以及透射电子显微镜对病毒抗原、核酸以及病毒粒子进行检测。结果乳鼠经两种不同途径接种病毒后均出现肝细胞的变性、坏死,并随时间延长逐渐加重。免疫组化可在肝细胞胞浆查见病毒抗原分布,透射电子显微镜下可在肝细胞胞浆内查见病毒粒子,RT-PCR可在心、肝、脾、肾以及脑组织内检测到病毒核酸。结论乳鼠对新疆出血热病毒敏感,经皮下与腹腔接种病毒均可致病;肝脏是新疆出血热病毒感染乳鼠的主要靶器官,主要病变为肝实质细胞的变性、坏死。结合免疫组化、透射电子显微镜与RT-PCR技术可对组织中的新疆出血热病毒进行检测与定位。

关键词：新疆出血热病毒乳鼠病理学

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抗炭疽保护性抗原人-鼠嵌合抗体在CHO细胞中的表达和活性研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2009年第12期29卷 1069-1074页

作者：李冰李建民张军徐俊杰刘树玲任军张金龙付玲侯利华陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的在CHO细胞中表达抗炭疽芽孢杆菌保护性抗原（rPA）人-鼠嵌合抗体，并对其活性进行分析。方法RT—PCR克隆具有中和活性鼠源单克隆抗体的轻、重链可变区基因，分别与人Kappa型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建了轻重链嵌合... 详细信息

目的在CHO细胞中表达抗炭疽芽孢杆菌保护性抗原（rPA）人-鼠嵌合抗体，并对其活性进行分析。方法RT—PCR克隆具有中和活性鼠源单克隆抗体的轻、重链可变区基因，分别与人Kappa型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建了轻重链嵌合抗体基因。将轻重链嵌合抗体基因克隆表达载体上，构建了嵌合抗体的双启动子表达载体pSecTag-5E1。将pSecTag-5E1转染CHO—dhfr（DG44）细胞，撤掉胸腺嘧啶和次黄嘌呤并不断提高氨甲蝶呤（MTX）的浓度，筛选表达量高的克隆，扩大培养，收集上清，并纯化，用纯化的嵌合抗体进行SDS—PAGE、Westernblot、抗原结合活性、体外细胞保护试验和动物试验。结果在MTX的浓度为5×10^-8mol／L时，获得稳定表达细胞株，表达量为18mg／L。结论成功在CHO—dhfr（DG44）细胞中表达了具有中和活性的抗rPA人-鼠嵌合抗体，为制备抗炭疽的被动免疫制剂奠定了良好的基础。

关键词：炭疽人-鼠嵌合抗体 CHO细胞

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两种HIV非核苷类逆转录酶抑制剂耐药病毒株的体外选择和鉴定

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药学学报 2010年第2期45卷 241-246页

作者：刘思扬庄道民董如华白丽李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

两种HIV非核苷类逆转录酶抑制剂(nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)JB25和JB26在体外均具有显著的抗HIV活性,为了在临床试验前阐明病毒是否容易对这两种药物产生耐药性及导致耐药性的病毒基因突变,在体外诱导并... 详细信息

两种HIV非核苷类逆转录酶抑制剂(nonnucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)JB25和JB26在体外均具有显著的抗HIV活性,为了在临床试验前阐明病毒是否容易对这两种药物产生耐药性及导致耐药性的病毒基因突变,在体外诱导并鉴定了对这两种化合物耐药的HIV-1毒株。以HIV-1NL4.3作为亲代野生型病毒感染MT-2细胞,从两种化合物2倍的IC50开始,以细胞病变(cytopathic effect,CPE)为指标,将病毒在含有浓度逐渐增加的药物的条件下连续传代,每代均在超过75%的MT-2细胞出现CPE后收集病毒培养上清液,然后取1mL接种新的MT-2细胞同时提高药物浓度为原来的2倍,共计传12代。JB25在第6代出现L100I(TTA→ATA)突变,在第12代又变成100M(ATA→ATG),L100M是不常见的突变形式,其对HIV NNRTIs耐药的影响未见报道,在第10代还同时出现了对NNRTIs高度耐药的Y188C(TAT→TGT)突变。JB26在第10代出现了L100I(TTA→ATA)突变。JB25和JB26在体外容易产生耐药性,而对JB26耐药比JB25要困难,导致耐药的主要基因突变发生在病毒逆转录酶基因的188和100位密码子。

关键词：人免疫缺陷病毒1型非核苷类逆转录酶抑制剂耐药病毒突变

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规律成簇的间隔短回文重复:结构,功能与应用

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微生物学报 2008年第11期48卷 1549-1555页

作者：崔玉军李艳君颜焱锋杨瑞馥病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

规律成簇的间隔短回文重复(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPRs)是一类广泛分布于细菌和古菌基因组中的重复结构.最近研究表明,CRISPR与一系列相关蛋白、前导序列一起,为原核生物提供对噬菌体等外源基... 详细信息

规律成簇的间隔短回文重复(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPRs)是一类广泛分布于细菌和古菌基因组中的重复结构.最近研究表明,CRISPR与一系列相关蛋白、前导序列一起,为原核生物提供对噬菌体等外源基因的获得性免疫能力,其作用机制可能与真核生物的RNA干扰过程类似.作为基因组中高度可变的区域,CRISPR非常适合成为研究细菌种内分型和微进化的分子靶标.本文综述了CRISPR系统的结构、功能及其应用概况,并对CRISPR研究的前景进行了展望.

关键词：规律成簇的间隔短回文重复 CRISPR相关基因/蛋白噬菌体 RNA干扰

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RIG-I样受体与RNA病毒识别

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微生物学报 2008年第10期48卷 1418-1423页

作者：秦成峰秦鄂德病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

RIG-I样受体(RIG-I likereceptors,RLR)是一类新发现的模式识别受体,能够识别细胞质中的病毒RNA,通过RLR级联信号诱导干扰素和促炎症细胞因子的产生,对抗病毒天然免疫的建立起着非常重要的作用。RLR信号通路既受宿主的严格调控,也能够... 详细信息

RIG-I样受体(RIG-I likereceptors,RLR)是一类新发现的模式识别受体,能够识别细胞质中的病毒RNA,通过RLR级联信号诱导干扰素和促炎症细胞因子的产生,对抗病毒天然免疫的建立起着非常重要的作用。RLR信号通路既受宿主的严格调控,也能够作为病毒逃避宿主干扰素反应的靶点。本文重点讨论了RLR及其在RNA病毒识别和抗病毒天然免疫中的作用。

关键词：天然免疫 RNA病毒干扰素 RIG-I MDA5 RLR

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埃博拉病毒病治疗策略和新技术研究进展

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国际药学研究杂志 2015年第1期42卷 69-75,95页

作者：李劲松军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

埃博拉病毒(EBOV)能够引起人类高致死性埃博拉出血热,目前尚无安全有效的治疗策略和药物,但已经提出了一些对EBOV感染有显著疗效的候选治疗方法,包括混合单克隆抗体鸡尾酒疗法、多酶抑制剂和脂质纳米颗粒/小干扰RNA等。本文总结了在非... 详细信息

埃博拉病毒(EBOV)能够引起人类高致死性埃博拉出血热,目前尚无安全有效的治疗策略和药物,但已经提出了一些对EBOV感染有显著疗效的候选治疗方法,包括混合单克隆抗体鸡尾酒疗法、多酶抑制剂和脂质纳米颗粒/小干扰RNA等。本文总结了在非人灵长类等动物模型上针对EBOV感染的治疗新策略和技术研究进展。

关键词：埃博拉病毒单克隆抗体鸡尾酒疗法抗病毒疗法治疗策略

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乙型肝炎病毒核心蛋白作为表位疫苗载体的应用

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生物工程学报 2010年第4期26卷 431-438页

作者：殷瑛徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B viruscore protein,HBc)可以形成二十面体对称的颗粒样结构,由于其N端、C端和主要免疫显性区域(Major immunodominant region,MIR)允许一定程度的缺失和外源插入,并且能够将外源序列重复且高密度地暴... 详细信息

乙型肝炎病毒核心蛋白(Hepatitis B viruscore protein,HBc)可以形成二十面体对称的颗粒样结构,由于其N端、C端和主要免疫显性区域(Major immunodominant region,MIR)允许一定程度的缺失和外源插入,并且能够将外源序列重复且高密度地暴露在颗粒的表面,诱发强烈的外源序列特异的体液和细胞免疫反应,从上世纪80年代中期就开始被运用于表位疫苗的研究。以下主要从影响HBc作为表位疫苗载体的因素,包括HBc长度、外源插入位点和表位序列的性质等来介绍HBc作为表位疫苗载体的应用。

关键词：乙肝核心蛋白表位疫苗疫苗载体基因重组

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体外无药物选择压力条件下HIV-1耐药基因突变的演变

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第5期30卷 431-437页

作者：焦丽燕鲍作义李韩平郭东星王铮庄道民李林耿庆茂刘永健刘思扬李敬云军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的分离培养体外稳定传代的原代HIV-1耐药毒株,观察失去药物压力下,耐药毒株的体外生长以及主要耐药突变的演化趋势.方法采集15例服用拉米夫定＋司他夫定＋萘韦拉平（3TC＋D4T＋NVP）的HIV-1感染者的外周血单个核细胞（PBMC）,用体... 详细信息

目的分离培养体外稳定传代的原代HIV-1耐药毒株,观察失去药物压力下,耐药毒株的体外生长以及主要耐药突变的演化趋势.方法采集15例服用拉米夫定＋司他夫定＋萘韦拉平（3TC＋D4T＋NVP）的HIV-1感染者的外周血单个核细胞（PBMC）,用体外共培养的方法从中分离原代HIV-1毒株;RT-PCR扩增耐药毒株历代培养上清的HIV-1 pol区基因并测序,在Stanford HIV Drug Resistance Database数据库进行耐药性分析.结果 15例患者中病毒载量〉1000拷贝/ml的有8例,均成功分离出稳定传代的原代毒株,其中2株为耐药毒株,所携带的主要耐药突变分别是K103N/K238T和M184V/K103N/Y181C/H221Y,分别对NVP和3TC/NVP高度耐药;无药物压力的体外培养过程中,M184V、K103N、Y181C和H221Y等耐药突变可以稳定传代,但是K238T发生了回复突变.结论分离出2株稳定传代的HIV-1耐药毒株,无药物压力情况下,携带K103N突变的毒株具有较好的复制适应性,可稳定传代;携带M184V和K103N/Y181C/H221Y的毒株也能够稳定复制;本研究中发现K238T耐药突变在失去药物的条件下稳定性差,提示该位点易发生回复突变.

关键词：原代HIV-1耐药毒株耐药突变复制动力学

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结核分枝杆菌分泌蛋白EspB在RAW264.7细胞中的稳定表达

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微生物学报 2011年第7期51卷 984-990页

作者：李浩殷瑛董大勇张军付玲任军徐俊杰陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】建立能够稳定表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白EspB(Rv3881c)的RAW264.7细胞系,为研究EspB蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用提供科学依据。【方法】首先成功构建的重组质粒pEGFP-C1-EspB,然后将重... 详细信息

【目的】建立能够稳定表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白EspB(Rv3881c)的RAW264.7细胞系,为研究EspB蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用提供科学依据。【方法】首先成功构建的重组质粒pEGFP-C1-EspB,然后将重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1以脂质体介导的方法转染至小鼠巨噬细胞RAW264.7中,经过G418筛选后建立稳定表达EGFP-EspB融合蛋白以及EGFP的细胞系,并通过RT-PCR、荧光显微镜及Western blot方法,在基因和蛋白两个水平对所建立的稳转细胞系进行鉴定。【结果】EGFP-ESAT6融合基因成功整合入RAW264.7细胞基因组并能够稳定表达,成功获得了能够稳定表达EGFP-EspB融合蛋白以及EGFP的细胞系。【结论】本试验利用脂质体介导的方法,将构建的重组载体pEGFP-C1-EspB和空载体pEGFP-C1转染至Raw264.7细胞系中,获得了稳定表达EGFP-EspB融合蛋白的巨噬细胞系,为阐明EspB分泌蛋白在调控巨噬细胞功能中所起的作用以及EspB与巨噬细胞蛋白之间的相互作用提供了研究平台。

关键词： EspB EGFP RAW264.7 稳定转染表达

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构象稳定的破伤风毒素Hc片段突变体(HcM)的制备及其免疫原性分析

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生物工程学报 2011年第2期27卷 226-232页

作者：于蕊侯利华刘树玲于长明张晓艳刘颖陈薇军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

破伤风是由破伤风杆菌侵入人体伤口、生长繁殖、产生毒素而引起的一种急性特异性感染,其死亡率高,严重危害人民生命健康。研究证实破伤风毒素重链C端(Hc)具有与毒素受体结合的活性,完全保留了全分子的免疫原性,有望开发成为新的基因工... 详细信息

破伤风是由破伤风杆菌侵入人体伤口、生长繁殖、产生毒素而引起的一种急性特异性感染,其死亡率高,严重危害人民生命健康。研究证实破伤风毒素重链C端(Hc)具有与毒素受体结合的活性,完全保留了全分子的免疫原性,有望开发成为新的基因工程破伤风亚单位疫苗以替换传统的甲醛灭活类毒素疫苗。由于野生型Hc蛋白(HcW)易形成分子间及分子内二硫键,且各构象分子之间易发生不稳定的转换,为疫苗的生产工艺带来困难,因此,通过将破伤风HcW蛋白的869位半胱氨酸突变为丙氨酸,构建构象稳定的破伤风亚单位疫苗突变体HcM,对HcM进行表达、发酵和纯化,研究其在不同条件下的稳定性,比较其与受体GT1b亲和力的变化及免疫原性。实验结果表明HcM在大肠杆菌中获得了高效可溶性表达,通过QXL柱、phenyl-Hs柱和source30Q柱三步纯化,可获得纯度95%以上的HcM蛋白。纯化后的HcM蛋白在不同保存条件下构象稳定且保持了与破伤风毒素受体GT1b结合的活性。免疫小鼠后,HcM能够诱导小鼠产生高滴度抗体并能够保护小鼠抵御1×103 LD50剂量的破伤风毒素攻击。以上结果表明构象稳定的HcM有望成为新的破伤风重组亚单位疫苗候选者,其生产工艺简单、稳定且保持了与野生型相似的免疫原性,不论是针对日常破伤风治疗还是对于国家应对突发事件(战争、地震等灾害)的药品储备均具有重大意义。

关键词：破伤风 HcM 构象稳定亚单位疫苗

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