检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2014年第7期38卷 510-513页

作者：周振江罗燕萍郭景玉吕瑞辰李艳君杨瑞馥黄新祥宋亚军江苏大学基础医学和医学技术学院江苏镇江212013 解放军总医院北京100853 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 海军总医院北京100048

目的研究鲍氏不动杆菌(ABA)临床分离株对喹诺酮类抗生素耐药机制。方法收集来自6家医院的114株耐环丙沙星ABA临床分离菌株,PCR扩增喹诺酮类抗生素结合靶基因(gyrA、gyrB、parC和parE),并进行序列测定,与参考菌株ATCC17978基因组进行比对... 详细信息

目的研究鲍氏不动杆菌(ABA)临床分离株对喹诺酮类抗生素耐药机制。方法收集来自6家医院的114株耐环丙沙星ABA临床分离菌株,PCR扩增喹诺酮类抗生素结合靶基因(gyrA、gyrB、parC和parE),并进行序列测定,与参考菌株ATCC17978基因组进行比对,确定其喹诺酮耐药决定区是否存在耐药相关突变;PCR扩增9个质粒介导的喹诺酮类耐药基因[qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、aac(6')-Ⅰb-cr、oqxA和oqxB],并对阳性扩增产物进行测序以确定基因亚型。结果绝大部分菌株(113/114,99.1%)的gyrA基因发生了Ser83Leu突变,其中67株菌(67/114,58.8%)同时发生了parC基因的Ser80Leu突变,以上两种突变是常见的喹诺酮耐药相关突变。与标准菌株进行比对,受试菌株gyrB基因Arg393Ser、Arg393Cys、Thr401Ala、Pro406Ser、Val430Phe、Cys440Ser和Gly480Arg突变率分别为95.6%、0.9%、96.5%、96.5%、100%、96.5%和96.5%;parE基因在7个位点发生了同义突变,突变率>96%。83.3%(95/114)的菌株中检出aac(6')-Ⅰb基因,但不存在"cr"突变,其余质粒介导的喹诺酮类耐药基因扩增均为阴性。结论该研究耐环丙沙星ABA中未发现质粒介导的喹诺酮耐药基因,在gyrB和parE基因中发现的突变可能与环丙沙星耐药性无关,实验菌株的环丙沙星耐药性主要与染色体上的喹诺酮耐药决定区GyrASer83Leu和ParC-Ser80Leu两种突变相关。

关键词：环丙沙星鲍氏不动杆菌喹诺酮耐药决定区质粒介导喹诺酮耐药

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肺炎克雷伯菌CRP对kfuABC操纵子的转录调控机制研究

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重庆医科大学学报 2014年第9期39卷 1197-1201页

作者：杨世亚张义全王丽杨瑞馥周冬生李迎丽邱景富重庆医科大学公共卫生与管理学院营养与食品卫生教研室重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的:利用分子生物学实验研究肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白(cAMP receptor protein,CRP)对kfuABC操纵子的转录调控机制。方法:设计相关跨基因引物,用Real-time PCR方法验证kfuABC的转录结构。以肺炎克雷伯菌野生株NTUHK2044(wild typ... 详细信息

目的:利用分子生物学实验研究肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白(cAMP receptor protein,CRP)对kfuABC操纵子的转录调控机制。方法:设计相关跨基因引物,用Real-time PCR方法验证kfuABC的转录结构。以肺炎克雷伯菌野生株NTUHK2044(wild type,WT)的总RNA为模板,利用引物延伸的方法寻找kfuA的转录起始位点,确定其核心启动子区。构建含kfuA启动子区DNA序列的LacZ重组质粒,并将其转入突变株△crp(肺炎克雷伯菌野生株基因组中crp基因敲除)和WT中,通过测定比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来判定CRP调控子对kfuA的调控关系;分别提取△crp和WT的总RNA,进一步采用实时定量Real-time PCR的方法验证CRP对kfuA的调控关系。通过凝胶阻滞实验验证His-CRP是否对kfuA启动子区具有直接的结合作用,进一步采用DNaseⅠ足迹实验确定具体的结合位点。结果:肺炎克雷伯菌kfuA、kfuB和kfuC位于同一个操纵子kfuABC;引物延伸实验结果显示kfuABC只有一个转录起始位点T;CRP能够结合到kfuABC启动子区-204到-171之间的碱基序列上(转录起始位点为+1),抑制其转录表达。结论:CRP能直接结合到kfuABC启动子区抑制其转录表达。

关键词：肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白 kfuABC 转录调控

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盐度和温度对副溶血弧菌运动能力的影响

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军事医学 2014年第12期38卷 962-964页

作者：董新波张义全杨瑞馥谢传晓周冬生安徽农业大学生命科学学院合肥230000 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 江苏大学医学院江苏镇江212013

目的研究盐度和温度调节副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的运动能力。方法将副溶血弧菌接种于不同盐度(0.5%、1.0%、2.0%和4.0%)的爬动和泳动平板上,37℃静置培养4.5 h后,通过比较不同盐度条件菌苔直径的差异来判定盐度对运动能力... 详细信息

目的研究盐度和温度调节副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的运动能力。方法将副溶血弧菌接种于不同盐度(0.5%、1.0%、2.0%和4.0%)的爬动和泳动平板上,37℃静置培养4.5 h后,通过比较不同盐度条件菌苔直径的差异来判定盐度对运动能力的影响。接种副溶血弧菌至含2.0%盐的爬动和泳动平板上,并分别置于37℃和26℃静止培养4.5 h后,通过比较不同温度下菌苔直径的差异来研究温度对运动能力的影响。结果与结论副溶血弧菌爬动不受盐度的影响,而其泳动与盐度呈正相关,2.0%时达到极值,4.0%时稍微下降;与26℃培养的结果相比,37℃培养时爬动和泳动均显著增强。这些结果表明盐度和温度能够调节副溶血弧菌的运动能力。

关键词：副溶血弧菌运动能力盐度温度

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DNA条形码研究进展

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寄生虫与医学昆虫学报 2014年第1期21卷 65-72页

作者：王刚董言德赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

DNA条形码（ DNA Barcoding ）技术是一种新的物种识别方法，它是分子生物学和生物信息学相结合的产物。在最近几年里，该技术已成为生物分类学中引人注目的研究热点。这一概念认为，类似于商店里使用扫描仪读取条形码，对地球上每一种... 详细信息

DNA条形码（ DNA Barcoding ）技术是一种新的物种识别方法，它是分子生物学和生物信息学相结合的产物。在最近几年里，该技术已成为生物分类学中引人注目的研究热点。这一概念认为，类似于商店里使用扫描仪读取条形码，对地球上每一种生物通过快速分析其DNA中的一段基因（线粒体细胞色素c氧化酶Ⅰ亚基， mt COⅠ）加以识别。理论上， DNA条形码已被证明在生物分类鉴定中具有非常重要的作用，并推动了一系列相关学科的发展，但目前不同分类学家对其持的意见也不尽相同。本文综述了DNA条形码技术的产生、发展概况、原理与操作及其在分类中的应用，并概括了DNA条形码在应用于物种分类中可能存在的问题。

关键词： DNA条形码物种鉴定线粒体细胞色素C氧化酶Ⅰ亚基

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中华硬蜱TROSPA的发现与鉴定

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寄生虫与医学昆虫学报 2014年第2期21卷 123-128页

作者：王欣孙毅曹务春蒋宝贵贾娜倪雪冰张圆军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

笔者从我国莱姆病媒介蜱种中华硬蜱中鉴定出莱姆病螺旋体外膜蛋白A受体TROSPA。中华硬蜱幼蜱体内的两个cDNA克隆***-1（258bp）和***-2（462bp）经序列比对和分析属于TROSPA．其中，***-2的氨基酸序列同肩板硬蜱***、篦子硬蜱***和全沟... 详细信息

笔者从我国莱姆病媒介蜱种中华硬蜱中鉴定出莱姆病螺旋体外膜蛋白A受体TROSPA。中华硬蜱幼蜱体内的两个cDNA克隆***-1（258bp）和***-2（462bp）经序列比对和分析属于TROSPA．其中，***-2的氨基酸序列同肩板硬蜱***、篦子硬蜱***和全沟硬蜱***的相似度分别为88．2％、88．5％和88．8％，而***-1则分别存在46％、46．1％和45．6％的相似度。中华硬蜱TROSPA的发现为解释了中华硬蜱传播莱姆病的机制以及研究中华硬蜱与病原体的相互关系奠定了基础。

关键词：中华硬蜱莱姆病螺旋体外膜蛋白 TROSPA

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白纹伊蚊气味受体基因OR21α的克隆及定量分析

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寄生虫与医学昆虫学报 2014年第2期21卷 104-109页

作者：阎婷李海滔赵明慧苏建新董言德李春晓赵彤言军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

本文克隆白蚊伊蚊气味受体基因OR21a分析其是否与搜寻宿主或吸血行为相关。通过设计简并引物，PCR扩增得到白纹伊蚊气味受体基因OR21a段，采用SYBR荧光定量PCR方法，以自纹伊蚊β-肌动蛋白基因作为内参，比较了OR21a因在未吸血雌蚊、雄... 详细信息

本文克隆白蚊伊蚊气味受体基因OR21a分析其是否与搜寻宿主或吸血行为相关。通过设计简并引物，PCR扩增得到白纹伊蚊气味受体基因OR21a段，采用SYBR荧光定量PCR方法，以自纹伊蚊β-肌动蛋白基因作为内参，比较了OR21a因在未吸血雌蚊、雄蚊、打断吸血雌蚊和饱血雌蚊头部表达量的差异。结果显示，白纹伊蚊OR21a因在未吸血雌蚊头部表达量最高，饱血雌蚊头部表达量最低，而在雄蚊头部的表达量介于打断吸血雌蚊和饱血雌蚊之间。本研究发现白蚊伊蚊会依据不同的生理需求改变OR21a因的表达量，推测可能与白纹伊蚊搜寻宿主及吸血行为有一定的相关性。

关键词：白纹伊蚊气味受体基因OR21α 定量PCR 吸血行为

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血管紧张素Ⅱ2型受体重组腺病毒的扩增及其在INS-1细胞中的转染

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军事医学 2014年第12期38卷 927-931,935页

作者：李晓静刘敏王妍户义尹士男母义明解放军总医院第一附属医院内分泌科北京100048 解放军总医院内分泌科北京100853 军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究中心北京100850 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的利用人胚肾(HEK)293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒,并在大鼠胰岛素瘤细胞INS-1细胞株中进行转染,构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad-G-AT2R-EGFP和对照病毒Ad-C... 详细信息

目的利用人胚肾(HEK)293A细胞株扩增含有大鼠血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因的重组腺病毒,并在大鼠胰岛素瘤细胞INS-1细胞株中进行转染,构建AT2R高表达的胰岛β细胞模型。方法利用293A细胞株扩增重组腺病毒Ad-G-AT2R-EGFP和对照病毒Ad-CMV-EGFP,并测定病毒滴度。在INS-1细胞中瞬时转染后利用实时PCR、Western印迹以及免疫荧光和激光共聚焦技术检测细胞中AT2R与AT1R的表达。结果扩增后得到重组腺病毒Ad-G-AT2R-EGFP和Ad-CMV-EGFP的滴度分别为9×109和8×109pfu/ml。在INS-1细胞中转染Ad-GAT2R-EGFP后,AT2R mRNA的表达随病毒感染复数(multiplicity of infection,MOI)值的增加呈剂量依赖性增加。当MOI值为10时,AT2R mRNA的表达达到峰值(P<0.05),同时AT2R蛋白的表达明显高于转染了Ad-CMV-EGFP的细胞和未转染细胞,但AT1R的表达无显著变化。结论成功扩增并得到高滴度且携带有AT2R基因的重组腺病毒载体,并将其转染入INS-1细胞中构建出AT2R高表达的胰岛β细胞模型,为下一步探讨AT2R在胰岛β细胞中的作用奠定了基础。

关键词：受体,血管紧张素,2型腺病毒科人胚胎肾293A细胞大鼠胰岛素瘤INS-1细胞

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具备中和中东呼吸综合征冠状病毒活性的单克隆抗体的制备

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解放军预防医学杂志 2014年第5期32卷 388-390页

作者：于虹邱洪杰潘婷李琳唐健郭彦孙世惠寇志华赵光宇周育森军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的制备并鉴定对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)具有中和活性的单克隆抗体,为进一步开展MERS-CoV感染与免疫保护机制研究,以及发展诊断与治疗手段奠定基础。方法 MERS-CoV S蛋白受体结合区与人IgG Fc片段融合表达的重组蛋白免疫BAL... 详细信息

目的制备并鉴定对中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)具有中和活性的单克隆抗体,为进一步开展MERS-CoV感染与免疫保护机制研究,以及发展诊断与治疗手段奠定基础。方法 MERS-CoV S蛋白受体结合区与人IgG Fc片段融合表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫后小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过ELISA筛选出阳性克隆,随后通过多次亚克隆筛选出稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单抗腹水并进行抗体效价测定及亚类鉴定;通过MERS-CoV假病毒及活病毒中和试验筛选出中和单抗。结果获得了10株能够稳定分泌抗原特异性单抗的杂交瘤细胞株。制备的腹水单抗亚类均为IgG1;其中7株单抗抗体ELISA效价达到10 000以上,并有1株单抗对MERS-CoV具有良好的中和活性。结论本研究获得了1株对MERSCoV具有良好中和活性的单克隆抗体。

关键词：中东呼吸综合征冠状病毒单克隆抗体中和活性受体结合区

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毒素战剂的生防疫苗

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生物技术通讯 2014年第1期25卷 107-111页

作者：张弢王景林军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

毒素战剂是重要的生物战剂之一,其最大的威胁来自它的高毒性和缺乏有效的防治手段。在毒素战剂中,肉毒毒素、志贺毒素、蓖麻毒素、相思子毒素等属于致死性生物战剂,葡萄球菌肠毒素B属于失能性生物战剂。生防疫苗作为毒素战剂的一种重要... 详细信息

毒素战剂是重要的生物战剂之一,其最大的威胁来自它的高毒性和缺乏有效的防治手段。在毒素战剂中,肉毒毒素、志贺毒素、蓖麻毒素、相思子毒素等属于致死性生物战剂,葡萄球菌肠毒素B属于失能性生物战剂。生防疫苗作为毒素战剂的一种重要的有效预防手段,一直备受关注,但目前绝大部分毒素战剂的疫苗都还在研制中,随着分子生物学技术的快速发展,几种重要毒素战剂的重组疫苗研究已获得重要突破。我们重点介绍肉毒毒素、志贺毒素、蓖麻毒素、相思子毒素、葡萄球菌肠毒素B等毒素战剂生防疫苗的研究与发展。

关键词：毒素生物战剂疫苗

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微生物全基因组测序在预防医学领域的应用

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传染病信息 2014年第5期27卷 274-278页

作者：崔玉军杨瑞馥军事医学科学院微生物流行病研究所病原与生物安全国家重点实验室北京100071

病原微生物引起传染病疫情时,预防医学工作者会面临以下几个重要问题:1病原从哪里来,可能的传播途径是什么;2病原有哪些生存能力、毒力和耐药特性;3病原所致疾病有着怎样的流行规律。高通量测序技术以及与之相伴的信息学分析技术的飞速... 详细信息

病原微生物引起传染病疫情时,预防医学工作者会面临以下几个重要问题:1病原从哪里来,可能的传播途径是什么;2病原有哪些生存能力、毒力和耐药特性;3病原所致疾病有着怎样的流行规律。高通量测序技术以及与之相伴的信息学分析技术的飞速发展,为上述问题提供了新的思路和解决方案。本文从流行病学调查溯源、病原体特性的快速判定、疾病流行规律分析以及疫苗变异监测和使用效果评价四个方面,总结归纳了新一代全基因组测序技术在预防医学领域中的应用实例,并对该研究方向存在的问题及未来发展进行了展望。

关键词：基因组微生物学序列分析流行病学研究病原

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