检索结果-内蒙古大学图书馆

军事医学 2013年第1期37卷 1-5页

作者：温占波陈咏杜茜杨文慧李劲松胡凌飞王洁李娜张柯殷喆董晓凯军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术中心中国医学科学院医学生物学研究所

目的通过模拟病原微生物实验室实验操作产生的微生物气溶胶,对实验室产生微生物污染风险进行定量研究,为实验操作人员危害评估和防护措施提供科学依据。方法使用黏质沙雷菌作为指示细菌,在实验室内对多种实验操作如吹吸混匀、培养瓶意... 详细信息

目的通过模拟病原微生物实验室实验操作产生的微生物气溶胶,对实验室产生微生物污染风险进行定量研究,为实验操作人员危害评估和防护措施提供科学依据。方法使用黏质沙雷菌作为指示细菌,在实验室内对多种实验操作如吹吸混匀、培养瓶意外跌落、正常离心、离心管破裂、注射攻毒、解剖动物和安全柜泄漏等进行正常操作和意外事故模拟,使用定量空气采样和沉降平皿的方法对各种操作造成的微生物气溶胶风险进行定量分析。结果在本实验条件下,局部环境产生的微生物气溶胶浓度差异较大。吹吸混匀、培养瓶意外跌落、正常离心、离心管破裂、注射攻毒、解剖动物和安全柜泄漏产生的最大源强分别为1409、9346、<10、138、>8232、<4和>801 CFU/m3。结论病原微生物实验室各种实验操作产生的气溶胶源强差异较大,在局部环境中可以产生较高的气溶胶污染,应加强实验技能的培训和一级呼吸道防护装备的应用。

关键词：病原微生物微生物气溶胶源强实验室感染

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猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000的表达、纯化及活性分析

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中国人兽共患病学报 2013年第8期29卷 757-761页

作者：王涛郑玉玲袁媛江华郝淮杰李雪琴姜永强安徽医科大学研究生学院合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室北京100101

目的构建猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000基因的重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并研究其对细胞间紧密连接的调控作用。方法以05ZYH33基因组为模板设计引物,构建pET30a-SSU05_1000重组表达质粒,转化到大肠杆菌中诱导表达,用... 详细信息

目的构建猪链球菌细胞壁蛋白SSU05_1000基因的重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,并研究其对细胞间紧密连接的调控作用。方法以05ZYH33基因组为模板设计引物,构建pET30a-SSU05_1000重组表达质粒,转化到大肠杆菌中诱导表达,用镍亲和层析的方法对目的蛋白进行纯化,Western blot检测其对人脑微血管内皮细胞紧密连接的调控。结果构建的SSU05_1000重组表达质粒能够在大肠杆菌中高效表达,纯化的SSU05_1000蛋白纯度达90%以上,Western blot结果显示其与人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3)相互作用后,可以下调细胞间紧密连接蛋白Claudin-5的表达。结论 SSU05_1000蛋白能够破坏人脑微血管内皮细胞的紧密连接结构,提示其在猪链球菌穿血脑屏障(BBB,bloodbrain barrier)过程中起重要作用。

关键词：猪链球菌 SSU05_1000 紧密连接

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基于NP和M1蛋白的甲型流感通用疫苗的初步研究

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免疫学杂志 2013年第5期29卷 376-381页

作者：王文娟刘坤段跃强高啸邢丽张良艳王希良杨鹏辉安徽医科大学研究生学院合肥230032 军事医学科学院微生物流行病研究所免疫学研究室病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的克隆、表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性,为候选甲型流感通用疫苗抗原提供新靶标。方法合成NP-M1-HSP60融合基因,构建pET28a-NP-M1-HSP60重组质粒,表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,抗原与S... 详细信息

目的克隆、表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性,为候选甲型流感通用疫苗抗原提供新靶标。方法合成NP-M1-HSP60融合基因,构建pET28a-NP-M1-HSP60重组质粒,表达并纯化NP-M1-HSP60融合蛋白,抗原与SP01水包油佐剂混匀,制备候选甲型流感通用疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价其免疫原性及免疫保护性。结果成功构建pET28a-NP-M1-HSP60表达载体,表达并纯化了NP-M1-HSP60融合蛋白;与SP01水包油乳剂佐剂混合免疫小鼠后,小鼠血清IgG抗体效价较对照组显著提升,鼻、肺灌洗液中sIgA水平显著升高,IgG亚型分析及细胞因子分泌细胞实验表明该候选疫苗可诱导相对均衡的Th1和Th2反应。免疫后小鼠分别对100LD50剂量的A/Beijing/501/2009(H1N1)毒株,100LD50剂量的PR8(H1N1)毒株和50LD50剂量的A/ostrich/Suzhou/097/2003(H5N1)毒株的攻击分别具有100%、100%和67%保护效果。结论 NP-M1-HSP60融合蛋白抗原具有一定的效果,为发展甲型流感通用疫苗提供了实验依据。

关键词： NP M1 HSP60 流感病毒通用疫苗

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病原微生物实验室Ⅱ级生物安全柜防护性能评价

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中国消毒学杂志 2013年第8期30卷 703-705,709页

作者：温占波胡凌飞李劲松杨文慧王洁李娜张柯殷喆董晓凯军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室国家生物防护装备工程技术中心北京100071

目的评价病原微生物实验室Ⅱ级生物安全柜的防护性能。方法采用安德森采样器采样方法和通过相关仪器,以粘质沙雷菌气溶胶为防护对象进行Ⅱ级生物安全柜防护性能评价。结果所评价的36台Ⅱ级生物安全柜下降气流的平均合格率为91.7%,流入... 详细信息

目的评价病原微生物实验室Ⅱ级生物安全柜的防护性能。方法采用安德森采样器采样方法和通过相关仪器,以粘质沙雷菌气溶胶为防护对象进行Ⅱ级生物安全柜防护性能评价。结果所评价的36台Ⅱ级生物安全柜下降气流的平均合格率为91.7%,流入气流合格率为43.7%,气流模型合格率为43.9%。人员保护合格率为72.2%,样品保护合格率为88.9%,交叉污染合格率为88.9%。结论所测试的Ⅱ级生物安全柜存在较大的气溶胶泄漏风险,对实验操作人员保护性能较差。

关键词： Ⅱ级生物安全柜气溶胶泄露病原微生物防护性能

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广西壮族自治区2008—2009年HIV-1流行毒株基因型及其分布

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中华流行病学杂志 2013年第1期34卷 53-56页

作者：刘伟梁淑家杨进业李剑军王斌陈立力李林刘永健李敬云广西壮族自治区疾病预防控制中心南宁530028 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室兰州军区乌鲁木齐总医院

目的了解广西地区目前HIV-1流行毒株的基因型及其分布。方法收集广西地区13个市294名2008--2009年新诊断的HIV感染者血浆标本和背景信息，感染途径主要为异性性传播（86．1％）。采用RT-PCR法分别扩增HIV-1gag．100i全长基因（分别为158... 详细信息

目的了解广西地区目前HIV-1流行毒株的基因型及其分布。方法收集广西地区13个市294名2008--2009年新诊断的HIV感染者血浆标本和背景信息，感染途径主要为异性性传播（86．1％）。采用RT-PCR法分别扩增HIV-1gag．100i全长基因（分别为1584bp和3147bp）及enV基因的C2V3片段（558bp），序列编辑后用Genotyping及Mega5．03工具确定病毒的基因型，用Simplot和RecombinantHIV-1DrawingTool软件进行病毒基冈的重组分析。结果获得全长gag基因序列270条、全长poZ基因序列246条、eltv基因C2V3区序列22：3条，确定272例标本的基因型。CRF01AE占的比例最高（77．6％），其次为CRF08BC（10．7％）和CRF07BC（7．4％），有4例B（B’）亚型、1例G亚型，还有7例未知重组型。性别、民族间病毒基因型分布的差异无统计学意义。7株新型重组毒株有6株以CRF01AE为母株，嵌入B和／（或）c的片段，还有1株为CRF07BC和CRF08BC的二代重组。结论广西地区目前流行的HIV-1毒株以CRF01AE为主，并出现以CRF01-AE为母株嵌入其他毒株基因片段的新型重组毒株，呈现基因组结构复杂化趋势。

关键词：艾滋病病毒1型 HIV基因亚型分子流行病学

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肝素结合蛋白的特性及在临床诊断中的应用

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第11期29卷 1226-1228,1231页

作者：吴凯李霖江华郑玉玲陈福生姜永强华中农业大学食品科技学院武汉湖北430070 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

感染性疾病是一类对健康威胁比较严重的疾病,脓毒症和一些严重的感染性疾病已然成为导致发病和死亡的主要原因。测定感染严重程度的指标很多,最常用的指标有:降钙素原、C-反应蛋白、白细胞计数、中性粒细胞比、血沉、体温等,但上述指标... 详细信息

感染性疾病是一类对健康威胁比较严重的疾病,脓毒症和一些严重的感染性疾病已然成为导致发病和死亡的主要原因。测定感染严重程度的指标很多,最常用的指标有:降钙素原、C-反应蛋白、白细胞计数、中性粒细胞比、血沉、体温等,但上述指标都不同程度的存在滞后、敏感度低及特异性不高的缺陷。在感染性疾病的预防和治疗中,如何及早地采取合理的应对措施是成功的关键。因此,目前看来不管是在临床还是实验室研究,都需要一种可以在病人感染早期就能进行鉴定的方法。近几年来HBP被证实可以作为这样一种早期诊断标志。本文简述了肝素结合蛋白(HBP)作为一种感染早期指标的应用。

关键词：肝素结合蛋白临床诊断应用

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携带bla_(NDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌中的适应度代价

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微生物学报 2013年第1期53卷 99-104页

作者：徐丽吕瑞辰王海燕胡红焱赵向娜杨瑞馥赵建宏宋亚军河北医科大学第二医院河北省临床检验中心石家庄050000 病原微生物生物安全国家重点实验室军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071 武警总医院检验科北京100039

【目的】了解编码新德里金属-β-内酰胺酶-1(blaNDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌10621菌株中的适应度代价,进而评估该质粒在鲁氏不动杆菌群体中存续和扩散的潜能。【方法】通过不含亚胺培南的液体培养基连续传代培养,获得抗性质粒... 详细信息

【目的】了解编码新德里金属-β-内酰胺酶-1(blaNDM-1)的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌10621菌株中的适应度代价,进而评估该质粒在鲁氏不动杆菌群体中存续和扩散的潜能。【方法】通过不含亚胺培南的液体培养基连续传代培养,获得抗性质粒丢失的10621衍生菌株,利用生长曲线、生物被膜、无营养生存时间等体外适应度测量实验,分析10621NDM-1(+)及质粒缺失的10621NDM-1(-)之间的适应度差异。【结果】pNDM-BJ01在10621菌株中不稳定,连续传代11次即在群体中完全丢失。在26℃和37℃下,10621NDM-1(-)与10621NDM-1(+)菌株的生长曲线无显著性差异。在26℃条件下,10621NDM-1(-)菌株形成生物被膜的能力明显强于10621NDM-1(+),而在37℃条件下,10621NDM-1(+)强于10621NDM-1(-)。在无营养的PBS缓冲液中,10621NDM-1(-)菌株生存能力明显高于10621NDM-1(+)。【结论】编码blaNDM-1的质粒pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌中具有较大的适应度代价,缺失这一质粒的菌株在外界环境中的生存能力强于抗性菌株,pNDM-BJ01在鲁氏不动杆菌存续与扩散的能力有限。

关键词：鲁氏不动杆菌新德里金属-β-内酰胺酶-1 生物被膜适应度代价

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2型猪链球菌双组分调控系统SalK/SalR抗吞噬机制的初步研究

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第6期29卷 570-573页

作者：付忠琳骈亚亚李雪琴郑玉玲马世良袁媛霍春月沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁沈阳110866 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 首都医科大学燕京医学院北京101300

目的确定双组分调控系统SalK/SalR在2型猪链球菌抵抗THP-1单核细胞来源的巨噬细胞(THP-MΦ)吞噬中的作用。方法透射电子显微镜观察野生株05ZYH33和突变株ΔsalKR荚膜的变化,革兰氏染色及免疫荧光方法观察猪链球菌与THP-MΦ细胞的相互作... 详细信息

目的确定双组分调控系统SalK/SalR在2型猪链球菌抵抗THP-1单核细胞来源的巨噬细胞(THP-MΦ)吞噬中的作用。方法透射电子显微镜观察野生株05ZYH33和突变株ΔsalKR荚膜的变化,革兰氏染色及免疫荧光方法观察猪链球菌与THP-MΦ细胞的相互作用,通过THP-MΦ细胞吞噬模型评价猪链球菌的抗吞噬能力。结果透射电子显微镜观察发现突变株ΔsalKR荚膜消失,革兰氏染色结果和免疫荧光标记实验显示salKR缺失导致更多的猪链球菌被THP-MΦ细胞吞噬,THP-MΦ细胞吞噬模型进一步证实突变株ΔsalKR比野生株更容易被THP-1细胞吞噬。结论双组分调控系统SalK/SalR通过调控荚膜的形成来抵抗THP-MΦ细胞的吞噬。

关键词： 2型猪链球菌双组分调控系统荚膜抗吞噬

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肺炎克雷伯菌基因无痕敲除方法的建立

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军事医学 2013年第6期37卷 431-434页

作者：高钰双冯甜邱景富杨瑞馥周冬生李迎丽重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的建立可行的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)基因无痕敲除方法。方法 PCR扩增得到目的基因上下游同源臂融合片段,将其克隆到自杀载体pKO3-km,构建重组质粒。提取重组质粒,通过电转化转入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,在43℃条件下... 详细信息

目的建立可行的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)基因无痕敲除方法。方法 PCR扩增得到目的基因上下游同源臂融合片段,将其克隆到自杀载体pKO3-km,构建重组质粒。提取重组质粒,通过电转化转入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,在43℃条件下培养筛选得到重组质粒整合到细菌基因组上的重组子,再利用质粒pKO3-km上的sacB基因在含蔗糖的平板上反向筛选得到突变株。结果与结论成功构建突变株,且突变株基因组上没有任何抗性筛选标记残留。该研究为肺炎克雷伯菌基因功能研究提供了基因敲除技术。

关键词：克雷伯菌,肺炎 cAMP受体蛋白基因敲除自杀载体同源重组

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肺炎克雷伯菌全基因组DNA芯片的研制和质量评价

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军事医学 2013年第2期37卷 122-125页

作者：刘梦颖张义全王丽闫小娟杨世亚周冬生杨瑞馥邱景富重庆医科大学公共卫生与管理学院重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

目的研制肺炎克雷伯菌(KP)全基因组DNA芯片并对芯片质量进行评价。方法根据KP的NTUH-K2044全基因组序列,挑选出5075条基因,PCR扩增各基因并纯化产物,点样制备芯片。设计了3个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价。结... 详细信息

目的研制肺炎克雷伯菌(KP)全基因组DNA芯片并对芯片质量进行评价。方法根据KP的NTUH-K2044全基因组序列,挑选出5075条基因,PCR扩增各基因并纯化产物,点样制备芯片。设计了3个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价。结果与结论芯片杂交结果与理论预期结果一致。本研究成功研制了KP全基因组DNA芯片,并建立了基于全基因组DNA芯片的KP比较基因组学技术平台。

关键词：克雷伯菌肺炎 DNA芯片比较基因组学

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